miR-143在卵泡刺激素介导的卵巢颗粒细胞孕酮生成中的作用

目的探讨miR-143在卵泡刺激素(FSH)介导的卵巢颗粒细胞孕酮生成中的作用。方法实时定量RT-PCR检测FSH诱导原代颗粒细胞后miR-143的表达;重组腺病毒感染颗粒细胞进行miR-143的过表达;放射免疫法(RIA)测定孕酮的水平。结果 50ng/ml的FSH处理原代颗粒细胞24h后颗粒细胞分泌孕酮显著增加(P0.001),建立了FSH刺激原代颗粒细胞分泌孕酮模型。miR-143在FSH处理颗粒细胞6、12h后表达没有显著变化,在24h后表达显著增加(P0.01),在48h时表达量最高(P0.001)。与感染对照病毒Ad-miRNC组相比,感染Ad-miR143组的细胞miR-143表达水平显著增加(P0.01)。感染Ad-miR143后颗粒细胞与空白对照组和感染对照病毒组相比,孕酮分泌水平显著升高(P0.01)。结论 miR-143可以促进FSH介导的卵巢颗粒细胞孕酮生成。     

NIMA相关蛋白激酶7、Nod样受体蛋白3与多囊卵巢综合征炎症指标相关性研究

目的探讨卵巢颗粒细胞中NIMA相关蛋白激酶7(NEK7)和Nod样受体蛋白3(NLRP3) mRNA表达量与多囊卵巢综合征(PCOS)患者炎症指标的相关性及其预测价值。方法选取2018年8月至2019年3月来山西省儿童医院/山西省妇幼保健院生殖中心就诊的30例PCOS患者为研究组和同期由于男方因素或输卵管因素就诊的34例非PCOS不孕症患者为对照组。取卵日收集行IVF/ICSI-ET患者的卵泡液和颗粒细胞,检测卵泡液中炎症因子白介素(IL)-1β、IL-18的表达以及颗粒细胞中NEK7、NLRP3 mRNA的表达,并将NEK7、NLRP3的mRNA表达量与各指标进行相关性分析。最后应用受试者工作特征曲线(ROC)分析NEK7、NLRP3 mRNA对PCOS的预测价值。结果研究组体重指数(BMI)和获卵数显著高于对照组,且LH、LH/FSH、睾酮(T)水平亦显著高于对照组(P均<0.05)。研究组卵泡液中炎症因子IL-1β、IL-18的表达显著高于对照组,卵巢颗粒细胞中NEK7、NLRP3 mRNA的表达亦显著高于对照组(P均<0.05)。相关性分析结果显示,研究组患者卵巢颗粒细胞中NEK7和NLRP3 mRNA水平与血清基础LH、LH/FSH、炎症因子IL-1β、IL-18均呈显著正相关(P均<0.05)。ROC分析结果显示,NEK7是PCOS的有效预测因子,预测炎症的曲线下面积为0.741,临界值为1.154。结论 NEK7、NLRP3可能通过促进IL-1β、IL-18的释放影响PCOS炎症的发生及发展,且NEK7是PCOS的有效预测因子,可能为PCOS的临床治疗提供新思路。     

卵巢颗粒细胞中胰岛素和雄激素对芳香化酶和5α-还原酶1影响的研究

目的研究卵巢颗粒细胞中胰岛素对睾酮激素转化过程的影响。方法选用人卵巢颗粒细胞瘤样细胞系(KGN)作为研究对象。应用RT-PCR分析KGN细胞在梯度睾酮(1.25、2.5、5、10、20ng/ml)及胰岛素(1、10、100ng/ml)处理4h后CYP19a1和5RD5A1mRNA水平;Western-blot检测高浓度睾酮(10、20ng/ml)及梯度胰岛素处理KGN细胞24h后芳香化酶和5α-还原酶1蛋白水平;同步收集上清,应用放射性免疫法及酶联免疫法检测培养液上清睾酮、雌二醇及双氢睾酮的浓度。结果胰岛素剂量依赖性地上调CYP19a1的表达和活性,增加睾酮向雌二醇的转化;同时抑制5RD5A1的表达和活性,抑制睾酮向双氢睾酮的转化;转化比例改变但消耗水平不变,导致睾酮的异常累积。结论高雄激素环境下,胰岛素可通过影响睾酮转化酶促使睾酮转化异常。本实验为高胰岛素及高雄激素水平在卵巢微环境相互作用加剧PCOS病程提出了可能的机制。     

小鼠卵巢不同发育时期SDF-1/CXCR4轴的动态变化

目的分析基质细胞衍生因子1(SDF-1)及其受体(CXCR4)在不同发育时期雌性ICR小鼠卵巢组织中的表达及意义。方法选择4周龄、7周龄和10周龄雌性ICR小鼠共30只,根据典型发育时期分为3组:性成熟前期(4周龄)组、性成熟期(7周龄)组及适龄繁殖期(10周龄)组,每组各10只。每组取5只收集卵巢组织,一侧卵巢提取RNA后利用qPCR检测SDF-1和CXCR4 mRNA表达水平;一侧卵巢固定包埋后切片,采用HE染色观察卵巢组织形态并进行各级卵泡计数,采用免疫组化方法观察SDF-1及CXCR4蛋白在小鼠卵巢组织的表达。余下每组5只促排卵后获取卵丘卵母细胞复合物(COCs),分离卵丘颗粒细胞与卵母细胞并提取RNA,利用qPCR分别检测两种细胞中SDF-1和CXCR4的mRNA表达水平。结果 3组小鼠中性成熟前期组卵巢SDF-1 mRNA表达量显著高于其他两组(P0.05),而CXCR4 mRNA表达量显著低于其他两组(P0.01)。HE染色显示3个发育阶段小鼠卵巢均可见发育正常的各级卵泡;适龄繁殖期组的卵巢总卵泡数目及初级卵泡数量显著高于其余两组(P0.01),次级卵泡数显著多于性成熟期组(P0.01)。免疫组化结果表明:SDF-1及CXCR4蛋白在卵巢各级卵泡的颗粒细胞和卵母细胞中都有表达,而在卵泡膜细胞中几乎不表达。COCs的qPCR结果显示:卵母细胞中,性成熟期组SDF-1 mRNA表达水平显著高于性成熟前期组(P0.05);卵丘颗粒细胞中,适龄繁殖期组SDF-1 mRNA表达水平显著高于其余两组(P0.01),性成熟前期组CXCR4 mRNA表达水平显著低于其余两组(P0.05)。结论 SDF-1及其受体CXCR4在不同发育阶段小鼠卵巢卵泡中均有表达且表达水平存在显著差异,提示其可能参与调控小鼠卵泡发育和性腺成熟的过程。     

不同促排卵方案对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的研究不同促排卵方案对小鼠卵巢颗粒细胞Fas凋亡通路的影响。方法将雌性KM小鼠随机分为4组:孕马血清促排卵组(PMSG组)、促性腺激素释放激素激动剂组(GnRH-a组)、促性腺激素释放激素拮抗剂组(GnRH-ant组)、自然排卵组(空白对照组),每组10只。取排卵期卵巢组织,采用免疫组化检测卵巢组织凋亡因子Fas、FasL、Caspase8、Caspase3的表达情况。结果 4组小鼠卵巢颗粒细胞均有Fas、FasL、Caspase8、Caspase3的表达;经不同促排卵方案干预后,小鼠卵巢颗粒细胞免疫组化Fas、FasL、Caspase8、Caspase3表达水平总体趋势为:GnRH-a组/GnRH-ant组空白对照组PMSG组。其中,PMSG组小鼠卵巢颗粒细胞Fas、FasL、Caspase8、Caspase3表达低于空白对照组,但差异无统计学意义(P0.05);GnRH-a组与GnRH-ant组小鼠卵巢颗粒细胞Fas、FasL、Caspase8、Caspase3表达显著高于空白对照组(P0.05)。结论不同促排卵方案对小鼠卵巢颗粒细胞Fas凋亡通路的影响不同,PMSG方案可能抑制颗粒细胞凋亡,GnRH-a方案与GnRH-ant方案可能促进颗粒细胞凋亡。     

黄体生成素对多囊卵巢综合征患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物1和2 mRNAs及蛋白质表达的影响

目的探讨黄体生成素(LH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2 mRNAs及蛋白质表达的影响,其及在卵巢局部胰岛素抵抗中的作用。方法收集行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不育患者(对照组)促排卵后黄素化颗粒细胞行体外培养,分别用不同浓度LH(0、20、200、2,000 mIU/ml)处理细胞48 h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western-blot)检测黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2 mRNAs及蛋白质的表达。结果(1)与对照组比较,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA及蛋白质表达显著增加(P<0.05),IRS-2 mRNA及蛋白质表达显著降低(P<0.05);(2)不同浓度LH作用后,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA及蛋白质的表达显著增加,IRS-2 mRNA及蛋白质的表达变化不明显;对照组则均无显著变化。结论PCOS异常增高的LH可能通过增加黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA及蛋白质的表达参与了患者卵巢局部选择性胰岛素抵抗的发生。     

自拟中药方治疗自身免疫性卵巢功能早衰小鼠的实验研究

目的:探讨自拟中药方对自身免疫性卵巢功能早衰的治疗作用.方法:将40只小鼠随机分为:实验组、对照组、模型组和正常组,10只/组.除正常组外均制成自身免疫性卵巢功能早衰模型,造模成功后第7天开始各组分别给予中药、戊酸雌二醇、生理盐水、生理盐水灌胃给药.连续灌胃4周后处死小鼠,取卵巢组织观察形态变化,采用放免法测定小鼠血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)的含量.结果:造模后小鼠卵巢萎缩,卵泡数目减少,颗粒细胞排列紊乱,模型组最严重,其次为实验组和对照组.模型组小鼠血清中FSH和LH的含量显著高于其他各组(P<0.05),E2的含量显著低于其他各组(P<0.05).实验组和对照组小鼠血清中FSH和LH的含量显著高于正常组(P<0.05),实验组小鼠血清中E2的含量显著低于对照组和正常(P<0.05).结论:自拟中药方剂对自身免疫性卵巢早衰小鼠有一定的治疗作用.     

脂多糖、TNFα、IL-6、地塞米松和胰岛素对人乳腺癌MCF7细胞GPR54表达的影响

目的:GPR54是下丘脑神经元调控下丘脑-垂体-性腺轴功能的门控,本文研究不同浓度脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素6(IL-6)、地塞米松和胰岛素对人乳腺癌MCF7细胞GPR54 mRNA及蛋白表达的影响。方法:培养MCF7细胞,用LPS(10μg/ml和20μg/ml)、TNFα(20 ng/ml和100 ng/ml)、IL-6(10 ng/ml和20 ng/ml)、地塞米松(10-6mol/L和10-7mol/L)和胰岛素(0.01 IU/L和0.1 IU/L)干预72 h,评价干预6、24、48、72 h后GPR54 mRNA(实时荧光定量PCR)和蛋白表达量(Western印迹)的变化。结果:和对照组相比,LPS(10μg/ml和20μg/ml)、TNFα(20 ng/ml和100 ng/ml)、IL-6(10 ng/ml和20 ng/ml)、地塞米松(10-6mol/L和10-7mol/L)和胰岛素(0.01 IU/L和0.1 IU/L)均显著增加GPR54 mRNA(P均0.05)和蛋白表达。结论:LPS、TNFα、IL-6、地塞米松和胰岛素显著增加MCF7细胞GPR54的表达,提示这些炎症因子和激素可能通过调节GPR54水平变化进而影响性腺轴功能。     

GnRH拮抗剂联合来曲唑和米非司酮对体外培养的人颗粒细胞功能的影响

目的探讨促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)联合来曲唑和米非司酮对体外培养的人卵巢颗粒细胞功能及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养人原代卵巢颗粒细胞及人卵巢颗粒细胞系KGN,根据所用药物不同分为GnRH-ant、来曲唑、米非司酮以及上述三种药物联合用药组,药物干预后检测细胞活力、细胞凋亡、培养液中雌二醇(E 2)及孕酮(P)水平及VEGF的表达。结果(1)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞的活力、促进颗粒细胞凋亡,其中联合用药组的作用最强(P<0.05);(2)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞E 2、P分泌水平,其中联合用药组E 2、P水平最低且差异有统计学意义(P<0.05);(3)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞VEGF表达,其中联合用药组VEGF mRNA及蛋白表达水平最低(P<0.05)。结论GnRH-ant联合来曲唑和米非司酮可以有效地抑制颗粒细胞活力、减少类固醇激素分泌及降低VEGF的表达水平。     

MMP-2,-9及其抑制物TIMP-1在多囊卵巢综合征患者黄素化颗粒细胞上的表达

目的分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者黄素化颗粒细胞上基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2,-9)及其组织抑制物TIMP-1的蛋白及mRNA在不同培养时间的表达水平,了解与细胞外基质合成、降解相关的MMPs/TIMPs系统参与PCOS的病理生理机制。方法收集2011年9月到2012年1月行体外受精(IVF)或卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的PCOS患者30例,对照组为同期行IVF或ICSI治疗的不孕症患者30例。密度梯度法获得卵巢黄素化颗粒细胞,细胞贴壁培养,分别在培养24、48和72h收集颗粒细胞。采用Western blotting方法检测颗粒细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1的蛋白表达;RT-PCR检测颗粒细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1mRNA的表达。结果 (1)PCOS组黄素化颗粒细胞MMP-2,-9蛋白表达在各培养时间点(24、48、72h)均显著高于对照组(P均0.05);且MMP-2蛋白表达水平在48、72h相对于24h的比值,以及MMP-9蛋白表达水平在72h相对于24h的比值,PCOS组均显著高于对照组(P均0.01)。(2)PCOS组MMP-2mRNA在24、48、72h的表达,MMP-9mRNA在48、72h的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05);MMP-2,-9mRNA表达水平在48、72h相对于24h的比值,PCOS组高于对照组,差异均有统计学意义(P均0.05)。(3)PCOS组TIMP-1蛋白及mRNA表达在24、48、72h与对照组比较无统计学差异(P0.05)。结论 PCOS患者黄素化颗粒细胞中MMP-2和MMP-9的表达升高,其MMPs/TIMPs的平衡状态向蛋白酶的活性增强方向移动,可能与PCOS患者黄体功能不足有关。     

高雄激素通过诱导细胞焦亡影响卵巢颗粒细胞增殖

目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)中高雄激素对卵巢颗粒细胞焦亡、增殖的影响。方法 3周龄的ICR小鼠随机分为对照组(5只)和PCOS组(5只),PCOS组小鼠连续注射脱氢表雄酮(DHEA,6 mg/100 g体重) 21 d,对照组小鼠则注射等体积不含DHEA的芝麻油。通过HE染色观察两组小鼠卵巢形态的变化；运用实时定量PCR和蛋白免疫印迹(WB)观察炎症及焦亡相关基因和蛋白在小鼠卵巢中的表达情况。通过睾酮(10μmol/L)诱导KGN细胞建立高雄诱导的PCOS体外细胞模型，对照组为不添加睾酮的培养基处理的KGN细胞，PCR法检测对照组和睾酮组细胞中炎症(NLRP3、NF-κB、IL-1β)及焦亡(ASC、Caspase-1)相关基因的表达情况，运用WB和免疫荧光技术观察焦亡相关蛋白(Caspase-1、N-GSDMD/GSDMD)的表达情况，CCK8实验和LDH释放实验观察睾酮对KGN细胞生长的影响。结果 HE染色显示PCOS组小鼠卵巢未成熟小卵泡及闭锁卵泡明显增多，提示PCOS模型构建成功。实时定量PCR结果显示，PCOS小鼠卵巢组织中NLRP3、NF-κB、IL-1β、ASC和...     

卵巢早衰小鼠中抗苗勒管激素与卵泡刺激素受体相关性的研究

目的探讨卵巢早衰(POF)小鼠中抗苗勒管激素(AMH)与卵泡刺激素受体(FSHR)的关系。方法以小鼠透明带3(ZP3)的第330～342个氨基酸序列所合成的透明带多肽为免疫原,免疫SPF级Balb/c雌性小鼠,皮下多点注射建立POF模型。放射免疫法测定模型组及对照组小鼠外周血FSH、雌二醇(E_2)的水平,酶联免疫法测定外周血AMH、抗透明带抗体(AzpAb)的水平,HE染色观察卵巢组织的变化,并用免疫组化方法分析卵巢颗粒细胞中FSHR的表达。结果 POF小鼠较正常小鼠外周血的FSH升高,E_2值降低,AMH值降低,AzpAb值升高。POF小鼠卵巢的HE染色病理切片见卵泡闭锁,正常发育的卵泡甚少。免疫组化分析,FSHR仅在颗粒细胞上表达,且POF小鼠卵巢上FSHR的表达明显少于正常组。结论 FSHR仅在颗粒细胞上表达,POF小鼠中各级卵泡的FSHR表达均降低,POF小鼠伴低浓度AMH,且FSHR的表达随AMH降低亦降低。     

雷公藤甲素对PAN致足细胞损伤中mTOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响

目的:探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法:氨基核苷嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)刺激体外培养的足细胞24 h建立模型。细胞增殖检测试剂盒(CCK-8法)检测不同浓度雷公藤作用下PAN损伤足细胞的细胞存活率。后将足细胞随机分组:(1)对照组;(2)PAN组(PAN组,PAN 50μg/ml);(3)TP组(PAN 50μg/ml+TP 10 ng/ml),予以相应刺激24 h。采用实时荧光定量PCR检测足细胞m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt、synaptopodin mRNA表达量,western blot检测足细胞p-mTOR、p-4EBP1、p-p70S6K、p-Akt、synaptopodin蛋白表达量。结果:(1)CCK-8结果显示,PAN造成足细胞损伤时加入浓度为3、10 ng/ml雷公藤甲素浓度均使足细胞活性上升,10 ng/ml时作用最明显(均P0.05)。(2)PAN增加m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达量,减少synaptopodin mRNA及蛋白表达水平(均P0.05)。(3)雷公藤甲素共处理细胞后,m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达水平明显下降,而synaptopodin mRNA及蛋白表达水平明显升高(均P0.05)。结论:雷公藤甲素可能通过抑制m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路,减轻足细胞损伤。     

高迁移率蛋白族B1通过调控p53表达抑制T细胞增殖

目的:探讨高迁移率蛋白族B1 (HMGB1)对T细胞的增殖抑制作用及其分子机制.方法:将培养的Jurkat细胞分为对照组、HMGB1 (100 ng/ml) 12、24、48 h组,HMGB1组加入HMGB1培养相应时间;将细胞分为对照组、HMGB1 10、100、1 000 ng/ml组,予不同浓度HMGB1培养24 h;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖率,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组细胞中p53mRNA、磷酸化p53及p53总蛋白的表达水平.将载有p53 shRNA、p53 mRNA表达序列及空白质料的病毒转染入Jurkat细胞中,并选择100 ng/ml HMGB1刺激24 h,采用同样方法检测细胞增殖率.最后,将细胞分为正常组、HMGB1组、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂]+HMGB1组进行相应处理.收集各组细胞,RT-PCR和Western blot法检测p53 mRNA、磷酸化p53及p53总蛋白的表达水平.结果:HMGBl (100ng/ml)刺激细胞24、48 h后细胞增殖率降低,较正常组差异有显著性(P＜0.05);100、l 000 ng/ml HMGB1刺激细胞24 h后,增殖率明显下降,与正常组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).HMGB1 (100 ng/ml)刺激细胞后,p53 mRNA、磷酸化及总蛋白表达水平在24、48 h逐步上升,且有明显统计学意义(P＜0.05);HMGB1刺激24 h,10、100 ng/ml HMGB1刺激组细胞p53 mRNA、p53磷酸化及总蛋白表达水平较正常组显著上升,但1 000 ng/mlHMGB1没有明显变化;在不同转染组中,予HMGB1刺激细胞,空载组增殖率降低,而p53 shRNA表达组细胞增殖趋于正常,p53 mRNA过表达组增殖率较空载组下降更为明显.Jurkat细胞在p38 MAPK阻断剂和HMGB1共同作用后,p53 mRNA、磷酸化及总蛋白表达水平比HMGB1刺激组明显下降(P＜0.05).结论:胞外HMGB1可通过诱导p38 MAPK信号通路激活p53蛋白,抑制T细胞增殖.     

抗苗勒管激素与卵巢反应性及妊娠结局的相关研究

目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期控制性卵巢刺激过程中不同时间点的抗苗勒管激素(AMH)水平对预测卵巢反应性及妊娠结局的意义。方法选择60例行IVF-ET治疗的患者,于月经第2~4天测定血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平,同时应用超声行卵巢窦卵泡计数(AFC);于控制性卵巢刺激的月经第2~4天(基础日)、促性腺激素(Gn)刺激卵巢第5日、注射HCG日三个时间点测定血清AMH水平;根据卵巢反应性(低反应、正常反应、OHSS)和妊娠结局分组比较各观察指标。结果 (1)血清AMH水平在各检测点随卵巢反应性的升高而呈递增趋势:低反应、正常反应、OHSS组基础日AMH水平分别为0.76±0.77、3.45±2.51、8.30±4.29ng/ml,在Gn第5日分别为0.42±0.41、2.69±1.93、6.83±2.56ng/ml,在HCG日分别为0.15±0.13、1.29±1.09、2.64±1.20ng/ml,组间比较均有统计学差异(P0.05);(2)妊娠组与未妊娠组AMH水平在各检测点(基础日3.69±2.37vs.3.49±3.50ng/ml,Gn第5日3.18±1.98vs.2.51±2.58ng/ml,HCG日1.54±1.14vs.1.09±1.15ng/ml)均无统计学差异(P0.05);(3)三个检测点AMH值与获卵数、成熟卵数、受精卵数、卵裂数均有显著相关性(P0.05),而与优质胚胎数无显著相关性(P0.05);(4)三个检测点AMH值比AFC、FSH、E2更能预测卵巢反应性,其中以HCG日的预测价值最高。结论 (1)在IVF控制性卵巢刺激过程中各时间点的血清AMH水平对卵巢反应性有较高的预测价值;(2)IVF控制性卵巢刺激过程中各时间点的血清AMH水平均无法预测妊娠结局。     

胰岛素对卵巢颗粒细胞黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体表达的影响

目的 :研究胰岛素 ( INS)对猪卵巢颗粒细胞黄体生成素 /绒毛膜促性腺激素( L H/ CG)受体表达的影响 ,探讨高胰岛素血症可能在多囊卵巢综合征 ( PCOS)卵泡发育停滞中的作用。方法 :采用逆转录聚合酶链反应 ( RT-PCR)及其蛋白免疫印迹 ( Westernblot)法分别对加药处理的 4组猪卵巢颗粒细胞检测 LH/ CG受体的 m RNA及其蛋白表达。结果 :RT-PCR结果表明卵泡刺激素 ( FSH) +INS组 ( 0 .2 47± 0 .0 44)与 FSH组( 0 .1 61± 0 .0 2 3 )相比 L H/ CG受体 m RNA表达明显增强 ( P<0 .0 5) ;FSH+L H+INS组( 0 .2 40± 0 .0 3 0 )与 FSH+L H组 ( 0 .1 2 1± 0 .0 1 3 )相比 ,L H/ CG受体 m RNA表达明显增强 ( P <0 .0 1 )。 Western blot结果表明 FSH +INS组 ( 570 2 .3± 81 5.9)、与 FSH组( 3 81 3 .0± 3 48.5)相比 L H/ CG受体蛋白表达明显增强 ( P<0 .0 5) ;FSH+L H+INS组( 5898.8± 93 3 .8)与 FSH+L H组 ( 2 42 1 .0± 3 41 .5)相比 L H/ CG受体蛋白表达明显增强 ( P<0 .0 1 )。结论 :INS可以协同 FSH及 L H增强卵巢颗粒细胞 L H/ CG受体的表达 ,推测高胰岛素可能通过增强 L H+CG受体表达使 PCOS患者发育至窦状卵泡阶段的卵泡颗粒细胞过早黄素化 ,导致卵泡发育停滞。     

血小板源性生长因子-BB对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化影响的初步研究

目的:研究血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)表型转化的影响。方法:改良组织块法原代培养大鼠CCSMC,并进行细胞免疫荧光鉴定。实验分为空白对照组和不同浓度(5、10、20、40 ng/ml)PDGF-BB组,处理24 h;以及空白对照组和20 ng/ml PDGF-BB作用细胞不同时间(24、48、72 h)组,利用qRT-PCR检测各组细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)、碱性调宁蛋白和骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达。结果:原代培养CCSMCα-SMA阳性细胞率达95%以上。与空白对照组比较,不同浓度PDGF-BB作用大鼠CCSMC后α-SMA、SMMHC、碱性调宁蛋白的mRNA表达显著减少(P均0.05);OPN mRNA表达水平显著上调(P0.05)。与空白对照组比较,随20 ng/ml PDGF-BB作用细胞时间的延长,α-SMA、SMMHC、碱性调宁蛋白的mRNA表达显著减少,OPN mRNA表达水平上调,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论:PDGF-BB可促使SD大鼠CCSMC表型从收缩型向合成型转化。     

月经周期中内源性大麻素与性激素和促性腺激素的相关性研究分析

目的分析月经周期中不同时期正常女性血浆中N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)的水平变化及其与性激素和促性腺激素的相关性。方法选择2015年5~10月因输卵管梗阻或男方因素到本院生殖医学科就诊并欲行IVF助孕、月经周期和排卵正常的育龄妇女为研究对象。根据实验目的分为横断面研究组(79例)和纵向研究组(10例),检测AEA在两组女性月经周期中不同时期的变化,以及AEA与FSH、LH、E2、P之间的相关性。结果横断面研究组中早卵泡期、晚卵泡期、排卵期和黄体期AEA水平分别为(9.71±0.86)ng/ml、(10.61±1.05)ng/ml、(12.24±0.73)ng/ml和(7.46±0.71)ng/ml。排卵期AEA水平最高,黄体期最低(P0.05)。纵向研究组4个时期AEA水平分别(8.76±0.91)ng/ml、(11.61±1.28)ng/ml、(13.85±1.18)ng/ml、(8.50±1.08)ng/ml,排卵期AEA水平最高,黄体期最低(P0.05)。横断面研究组和纵向研究组各个时期的AEA水平比较均无显著性差异(P0.05)。AEA与FSH、LH、E2之间存在显著的正相关(P0.05),与P水平则无显著相关性(P=0.067)。结论正常女性血浆内AEA的浓度随月经周期的变化而变化,且与性激素和促性腺激素呈明显相关。但AEA与FSH、LH、E2、P之间的具体作用机制,有待进一步研究。     

前列腺素E1对高糖诱导足细胞肾素受体表达的影响

目的:观察前列腺素E1(prostaglandin E1,PGE1)对高糖培养小鼠肾脏足细胞肾素受体(renin receptor,RR)表达的影响。方法:体外培养和分化小鼠足细胞,随机分为4组分别以0 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml浓度的PGE1进行干预24 h,以Western印迹法、实时定量PCR(quantitative PCR,q-PCR)法检测RR表达的情况。结果:各组分别加不同浓度的PGE1后对照组、高渗组和高糖1组RR mRNA表达总的趋势先上升后下降,高糖2组RR mRNA表达随PGE1浓度升高逐渐下降,10 ng/ml、20 ng/ml组下降有显著意义(P=0.002,P=0.003)。结论:在不同葡萄糖浓度环境中足细胞RR表达不同,对PGE1的干预反应不同,总的趋势为在PGE1低浓度时表达上调,在PGE1高浓度时表达下调,且有显著意义。     

晚期糖基化终末产物对卵巢原始卵泡的影响

目的探究晚期糖基化终末产物(AGEs)对原始卵泡激活的影响。方法取4日龄ICR小鼠卵巢,将其分别置于基础培养液(空白对照组)、包含200μg/ml牛血清白蛋白(BSA)培养液(溶剂对照组)以及包含200μg/ml AGE-BSA培养液(AGE-BSA组)中进行体外培养,4d后取材检测。HE染色观察各组卵巢卵泡构成比;免疫蛋白印迹法检测AGEs受体(RAGE)和卵泡激活相关指标细胞增殖核抗原(PCNA);免疫组织化学法检测PCNA定位表达。结果与溶剂对照组相比,AGE-BSA组中生长卵泡构成比增加(P0.001),同时伴随着卵巢髓质部原始卵泡的出现;AGE-BSA组RAGE、PCNA的蛋白表达较溶剂对照组显著增加(P0.05),而空白对照组与溶剂对照组间卵泡构成比以及RAGE、PCNA的蛋白表达均无显著差异(P0.05);免疫组织化学结果显示PCNA表达在卵巢各级卵泡卵母细胞和颗粒细胞中。结论 AGEs可能通过AGEs-RAGE轴激活卵巢内的原始卵泡,促进卵泡池耗竭。