肺积宁方影响Lewis肺癌细胞增殖和自噬的作用机制研究

目的:研究肺积宁方对Lewis肺癌细胞增殖和自噬的影响及相关信号通路的探讨。方法:选用不同浓度的肺积宁方(FJND)提取物作用于体外培养的Lewis肺癌细胞,MTT法检测FJND对Lewis细胞增殖的抑制作用;通过GFP-LC3自噬定位观察细胞自噬情况;蛋白免疫印迹法检测不同浓度FJND作用Lewis细胞后,Beclin-1蛋白、LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ、Atg5蛋白表达;和m TOR,AKT,p-AKT相关蛋白表达情况。结果:FJND在3.12 mg/m L抑制Lewis细胞增殖作用最强,Beclin-1蛋白、Atg5蛋白表达及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显高于对照组;对m TOR,AKT,p-AKT蛋白抑制作用强于对照组。结论:肺积宁方抑制细胞增殖和诱导自噬,可能通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路发挥作用。     

基于PI3K/AKT/mTOR通路探讨沙参麦冬汤调控自噬干预BEAS-2B细胞恶性转化

目的:研究沙参麦冬汤对苯并芘(Bap)诱导的BEAS-2B细胞恶性转化的干预作用,及其与PI3K/AKT/mTOR通路和自噬的关系.方法:提取沙参麦冬汤,MTT法筛选各药物浓度,持续作用30次,检测细胞克隆能力、自噬小体、细胞周期改变;检测通路及自噬相关蛋白AKT、mTOR、p-mTOR、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Bec...     

半枝莲总黄酮通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导肿瘤细胞自噬的体内实验研究

该研究拟从体内角度研究半枝莲总黄酮(TF-SB)的抗肿瘤作用,并探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的影响及其对PI3K/AKT/mTOR通路的调控作用,为TF-SB的抗肿瘤作用提供实验依据。实验以黑色素瘤荷瘤小鼠模型为研究对象,分为空白对照组、雷帕霉素组(Rap,1.5 mg·kg~(-1))、TF-SB高、中、低剂量组(200,100,50 mg·kg~(-1)),每天给药1次,连续用药11 d,通过测量肿瘤的体积及抑瘤率,来观察TF-SB对黑色素瘤生长的抑制效果;通过TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,来进一步验证TF-SB的抗肿瘤活性;通过Western blot法检测LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ的蛋白表达,计算LC3-Ⅱ对LC3-Ⅰ的相对表达量,探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的诱导作用;通过检测PI3K/AKT/mTOR通路标志蛋白的磷酸化水平,研究TF-SB诱导细胞自噬的分子机制。结果表明,TF-SB可有效抑制荷瘤小鼠体内黑色素瘤的生长,减小肿瘤体积、提高抑瘤率,并且可以显著增加肿瘤细胞凋亡指数,增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,抑制p-PI3K,p-AKT及p-mTOR的蛋白表达水平,与对照组比较有显著性差异(P0.05,P0.01或P0.001)。由此可见,半枝莲总黄酮具有抑制体内黑色素瘤生长的作用,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路,诱导肿瘤细胞自噬及凋亡有关。     

裂果薯皂苷对人肝癌BEL-7402细胞自噬的影响

目的:探讨裂果薯皂苷中化合物Ⅰ(SPHSⅠ)和化合物Ⅱ(SPHSⅡ)对人肝癌BEL-7402细胞自噬的影响,并对其分子机制进行初步探究。方法:采用MTT、Western blotting、Lyso-Tracker Red染色、Magic Red Cathepsin B染色、流式细胞仪分析分别检测SPHSⅠ和SPHSⅡ对人肝癌BEL-7402细胞增殖、自噬和凋亡的影响。结果:SPHSⅠ和SPHSⅡ可抑制BEL-7402细胞增殖并诱导细胞凋亡,同时可抑制细胞自噬,引起自噬标志性蛋白LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ,p62蛋白表达无明显变化;加入溶酶体抑制剂氯喹后,SPHSⅠ和SPHSⅡ未能进一步提高用氯喹处理的细胞中的LC3-Ⅱ水平。Lyso-Tracker Red染色、Magic Red Cathepsin B染色及Western blotting检测结果表明,SPHSⅠ和SPHSⅡ可阻断自噬体-溶酶体融合,并通过改变溶酶体酸化和下调溶酶体组织蛋白酶的表达来抑制溶酶体蛋白水解活性。利用Earle′s平衡盐溶液(EBSS)饥饿处理细胞后,SPHSⅠ和SPHSⅡ诱导的细胞凋亡进一步增加。结论:SPHSⅠ和SPHSⅡ可抑制自噬并诱导细胞凋亡,饥饿显著增加人肝癌BEL-7402细胞对SPHSⅠ和SPHSⅡ诱导的细胞凋亡的敏感性。     

山楂酸通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌CNE2细胞自噬研究

目的研究山楂酸对鼻咽癌CNE2细胞增殖和自噬的影响,探讨PI3K/Akt/mTOR通路在该过程中的调控作用。方法采用CCK-8法检测不同浓度的山楂酸作用不同时间对CNE2细胞增殖的影响;MDC染色法检测不同浓度山楂酸处理CNE2细胞24 h后自噬小体的形成情况;Western blotting法检测山楂酸对CNE2细胞自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达的影响。结果与溶剂对照组相比,山楂酸可以抑制CNE2细胞的增殖,而且随药物处理时间和浓度的增加,抑制效果增强(P<0.05);山楂酸能够诱导细胞自噬小体的形成,且可显著提高Atg5和LC3-II/LC3-I的表达,降低p62的表达;此外,山楂酸可抑制PI3K-p110α、p-Akt和p-mTOR的蛋白表达。结论山楂酸可抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导鼻咽癌细胞发生自噬,其机制与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关,可作为治疗鼻咽癌的潜在药物研究。     

熊果酸对肺癌细胞A549自噬相关蛋白的影响

目的研究自噬在熊果酸抑制人肺癌A549细胞增殖中的作用及机制。方法应用CCK8法检测熊果酸对A549细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR法检测自噬相关基因LC3、 Beclin-1及p62的表达情况;Western Blot检测自噬相关蛋白LC3、 Beclin-1及p62的表达情况。采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌(3-MA)观察熊果酸对A549细胞增殖的抑制作用。结果熊果酸可以显著抑制人肺癌A549细胞的活力(P0.01)且随着熊果酸剂量增加,对细胞的生长抑制率显著上升。熊果酸可诱导A549细胞自噬发生,诱导自噬相关基因、蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1表达的增加;p62表达降低(P0.01);3MA使得自噬相关基因、蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1表达明显降低;p62表达明显增加(P0.01)。自噬抑制剂3-MA提高了熊果酸对A549细胞的抑制作用(P0.01)。结论熊果酸抑制A549细胞的增殖,可能通过调节LC3Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1及p62蛋白表达诱导细胞发生自噬。自噬抑制剂3-MA能够增强熊果酸抑制A549细胞的增殖抑制作用,有望为肺癌的临床治疗提供新的联合治疗方案。     

白藜芦醇联合顺铂对肺癌A549/DDP细胞的作用机制研究

目的基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,以人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP为研究对象,探讨白藜芦醇联合顺铂对A549/DDP细胞增殖、凋亡、自噬的影响。方法以CCK-8法检测白藜芦醇、顺铂以及两药联用对A549/DDP细胞增殖的影响,并通过Isobologram分析两药联用的协同作用;将A549/DDP细胞分为空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组、白藜芦醇+顺铂组;以Hoechst 33342染色和Annexin V/PI双染实验检测细胞凋亡率;免疫荧光实验检测自噬标志物LC3的表达;Western Blot实验检测各组细胞中凋亡相关蛋白、自噬标志物蛋白、PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达。结果与顺铂组比较,白藜芦醇与顺铂两药联用可以明显降低顺铂对A549/DDP细胞的IC50,Isobologram分析结果也表明二者联用对A549/DDP细胞具有协同抑制作用;与空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组3组比较,白藜芦醇和顺铂联用可以明显增加A549/DDP细胞凋亡率(P0.01),降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平(P0.01),上调凋亡蛋白Bax、Caspase 3表达水平(P0.01),及增加自噬标志物蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平(P0.01),降低p62表达水平(P0.01);此外Western Bolt实验结果表明两药联用可以明显下调p-PI3K、p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平(P0.01)。结论白藜芦醇与顺铂联用可通过PI3K/AKT/mTOR通路,促进A549/DDP细胞自噬诱导细胞凋亡。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的三七总皂苷调控自噬抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制研究

目的探讨三七总皂苷(PNS)能否通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬从而减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制。方法将H9c2细胞分为正常组、缺氧/复氧(A/R)组、A/R+PNS组、A/R+PNS+雷帕霉素(Rapa)组、A/R+Rapa组、A/R+羟氯喹(HCQ)组、A/R+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。通过缺氧6 h、复氧2 h建立H9c2细胞A/R模型。CCK-8法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞损伤,Western blot检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白PI3K、Akt、m TOR的表达,荧光法观察细胞自噬流。结果与正常组比较,A/R组H9c2细胞存活率明显下降,细胞损伤率明显升高(P0.05),自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P0.05),自噬体和自噬溶酶体数量显著增加,自噬流显著增强(P0.05);与A/R组比较,用PNS预处理后,H9c2细胞存活率明显上升,细胞损伤率明显降低(P0.05),自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低(P0.05),p62蛋白表达明显升高,与自噬抑制剂HCQ、3-MA作用相似,荧光结果显示,PNS对自噬流有明显抑制作用(P0.05);PNS预处理后p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显升高(P0.05)。结论 PNS能有效减轻H9c2细胞A/R损伤,其机制与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路从而抑制自噬流相关。     

白头翁皂苷D对乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用研究

目的探讨白头翁皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用及其机制。方法采用MTT法和吉姆萨染色,考察白头翁皂苷D对人MCF-7细胞体外增殖抑制的影响;建立MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,考察白头翁皂苷D体内抗肿瘤作用;HE染色和透射电镜实验考察肿瘤组织形态学和超微结构的变化;采用Western Blot法检测MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3及PI3K/AKT/mTOR途径相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K的表达。结果白头翁皂苷D可抑制MCF-7细胞的增殖,且呈剂量依赖关系;裸鼠体内实验结果显示白头翁皂苷D可抑制肿瘤的生长,30.0 mg·kg~(-1)剂量组瘤体质量明显降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01);形态学观察结果也显示白头翁皂苷D对MCF-7细胞具有凋亡作用,且随着给药剂量的增加变化越明显;白头翁皂苷D(15.0,20.0,25.0μmol·L~(-1))不同剂量组均可抑制MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.01);白头翁皂苷D还可下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达,20.0,25.0μmol·L~(-1)剂量组与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论白头翁皂苷D对MCF-7细胞有显著的体内外抗肿瘤作用,其机制可能是通过下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路诱导细胞凋亡。     

槲皮素对5-FU诱导的结直肠癌SW480细胞耐药及自噬调控机制研究

目的:探讨槲皮素(Que)调控5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的结直肠癌SW480细胞耐药及自噬的作用及机制。方法:采用浓度递增诱导法建立5-FU耐药细胞株SW480/5-FU,MTT法设置Que高、中、低剂量组(10、20、40 μmol/L)和对照组。MTT法检测各组细胞的5-FU耐药性,TUNEL染色法检测细胞凋亡,免疫荧光检测细胞自噬活性,Western blot检测细胞p糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体(ABCG2)、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、丝/苏氨酸激酶(AKT)、p-AKT、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p-mTOR蛋白表达。结果:5-FU抑制SW480/5-FU细胞的半抑制浓度(IC₅₀)明显高于SW480细胞(P<0.05),耐药指数(RI)=13.74。与对照组相比,Que中、高剂量组5-FU抑制SW480/5-FU细胞的IC₅₀明显下降(P<0.05),耐药逆转倍数分别为2.27和4.03。与对照组相比,Que中、高剂量组细胞抑制率、凋亡率和自噬活性明显升高(均P<0.05),蛋白的表达均明显升高(均P<0.05),P-gp、MRP1、ABCG2、p62、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR蛋白表达明显下降(均P<0.05)。结论:Que可以以剂量依赖性的方式逆转SW480/5-FU细胞的5-FU耐药性,诱导细胞自噬,其作用机制可能与抑制AKT/mTOR的磷酸化有关。     

薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响

目的 探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响。方法 MTT法检测薯蓣皂苷元对人骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖的影响,透射电镜技术观察细胞超微结构,免疫荧光法观察细胞自噬蛋白Beclin1表达,Western blot法检测细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。薯蓣皂苷元联合PI3K通路抑制剂LY294002处理MG63和U2OS细胞,RT-qPCR法检测细胞Beclin1 mRNA表达;联合自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)处理MG63和U2OS细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞cleaved-caspase3蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞caspase3 mRNA表达。结果 薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖,促使自噬体生成,增加LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低LC3 I蛋白表达(P<0.01),可抑制PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);联合自噬抑制剂干预后...     

氧化槐定碱体内体外通过AKT/mTOR通路调控自噬抑制HBV诱发肝纤维化＊

目的 观察氧化槐定碱抑制HBV诱发肝纤维化的机制。方法 采用细胞间非接触式的共培养体系进行培养，同时建立HBV诱发肝纤维化的动物模型，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测LX-2细胞抑制率，qRT-PCR法检测α-SMA、collagen I mRNA水平，Western blot检测细胞纤维化、自噬、AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平，运用AKT-siRNA、雷帕霉素、自噬抑制剂（3-MA）探讨自噬对肝纤维化的影响。结果 体外实验显示：0.5-32 mg·L^-1氧化槐定碱抑制LX-2细胞的增殖（P<0.05）；与对照组比较，氧化槐定碱4、8、16、32 mg·L^-1组α-SMA、collagen I mRNA表达水平降低，Beclin-1、LC3 II/LC3 I水平上调，p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平下调（P<0.05）；与氧化槐定碱16 mg·L^-1组比较，氧化槐定碱16 mg·L^-1+AKT-siRNA组抑制率、LC3 II/LC3 I明显增加，p-AKT/AKT、collagen I明显降低（P<0.05）；与氧化槐定碱16 mg·L^-1组比较，氧化槐定碱16 mg·L^-1+3-MA组抑制率、LC3 II/LC3 I明显降低，p-AKT/AKT、collagen I明显增加（P<0.05）。体内实验显示：与氧化槐定碱组比较，氧化槐定碱+雷帕霉素组ALT、AST、collagen I、p-mTOR/mTOR水平明显下调，LC3 II/LC3 I水平明显上调；氧化槐定碱+3-MA组LC3 II/LC3 I水平明显下调，collagen I、p-mTOR/mTOR明显上调（均P<0.05）。结论 氧化槐定碱能调控肝细胞自噬，上调细胞纤维化水平，其机制可能与调控AKT/mTOR信号通路有关。     

人参皂苷CK诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的探讨人参皂苷CK对人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及机制。方法采用MTT法测定不同浓度(30,60,90μmol/L)人参皂苷CK对人肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用;通过HE染色、AO/EB染色观察人参皂苷CK诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的形态学变化;WesternBlotting检测凋亡相关蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达情况。结果人参皂苷CK可明显抑制人肝癌HepG-2细胞的增殖,且呈剂量依赖性和时间依赖性。随着人参皂苷CK给药浓度的增加,出现典型凋亡形态特征的细胞逐渐增多,抗凋亡蛋白Bcl-2和P53表达量逐渐下降,而促凋亡蛋白Bax的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax比例明显降低。结论人参皂苷CK可诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡,其作用机制可能与下调P53蛋白表达和降低Bcl-2/Bax比例有关。     

人参皂苷Rb_1减轻阿霉素诱导心肌细胞自噬的保护作用

该研究以H9c2细胞为研究对象,采用阿霉素诱导心肌细胞自噬活化,探讨人参皂苷Rb_1对阿霉素诱导心肌细胞自噬的作用。应用CCK-8法、透射电镜观察、荧光染色观察、Western blot等方法分别检测药物作用后H9c2细胞的增殖以及自噬变化。结果显示,阿霉素引起H9c2细胞活力下降,导致H9c2细胞的自噬相关结构增加、自噬标志性蛋白LC3由LC3-I转变为LC3-Ⅱ增加及p62蛋白表达降低;人参皂苷Rb_1可以减弱阿霉素引起的心肌细胞活力下降并抑制阿霉素诱导的自噬相关结构增加、LC3-I转变为LC3-Ⅱ的增加以及p62蛋白表达的降低。以上结果提示,阿霉素可引起H9c2细胞死亡并诱导细胞自噬的活化,而人参皂苷Rb_1对阿霉素诱导心肌细胞死亡具有保护作用,这种作用可能是通过调节自噬产生的。     

白头翁皂苷D对乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用研究北大核心CSCD

目的探讨白头翁皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用及其机制。方法采用MTT法和吉姆萨染色,考察白头翁皂苷D对人MCF-7细胞体外增殖抑制的影响;建立MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,考察白头翁皂苷D体内抗肿瘤作用;HE染色和透射电镜实验考察肿瘤组织形态学和超微结构的变化;采用Western Blot法检测MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3及PI3K/AKT/mTOR途径相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K的表达。结果白头翁皂苷D可抑制MCF-7细胞的增殖,且呈剂量依赖关系;裸鼠体内实验结果显示白头翁皂苷D可抑制肿瘤的生长,30.0 mg·kg^(-1)剂量组瘤体质量明显降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01);形态学观察结果也显示白头翁皂苷D对MCF-7细胞具有凋亡作用,且随着给药剂量的增加变化越明显;白头翁皂苷D(15.0,20.0,25.0μmol·L^(-1))不同剂量组均可抑制MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);白头翁皂苷D还可下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达,20.0,25.0μmol·L^(-1)剂量组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论白头翁皂苷D对MCF-7细胞有显著的体内外抗肿瘤作用,其机制可能是通过下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路诱导细胞凋亡。     

淫羊藿、女贞子含药血清联合糖皮质激素影响雷帕霉素诱导ASMCs自噬激活的机制研究

目的 研究淫羊藿女贞子含药血清合用地塞米松对自噬激活剂雷帕霉素（Rap）诱导的气道平滑肌细胞（ASMCs）自噬、凋亡及增殖活性的影响。方法 培养大鼠原代ASMCs,随机分为5组,即正常组（正常大鼠血清）、Rap组（正常大鼠血清+Rap）、激素组（正常大鼠血清+地塞米松+Rap）、中药组（Rap+淫羊藿、女贞子含药血清）、合用组（Rap+淫羊藿、女贞子含药血清+地塞米松）。根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清;除正常组外,其余各组同时加入Rap刺激ASMCs,48 h后进行检测。电镜观察细胞超微结构;MTT法检测细胞活力;免疫细胞化学法检测增殖蛋白Ki-67蛋白表达并评价细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡活性;Western blotting检测LC3蛋白相对表达;细胞免疫荧光法检测Bax、Bcl-2、Beclin-1、P53、Caspase-3、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 激素可协同Rap诱导ASMCs自噬活性增加,使LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值进一步增加,下调p-mTOR表达,但对Beclin-1及m TOR表达无影响,抑制ASMCs细胞活力及增殖...     

黄芩苷对Hela细胞凋亡的影响

目的探讨黄芩苷诱导Hela细胞的凋亡作用及对PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法培养Hela细胞后分为空白组、卡铂组(40μg/mL)及黄芩苷低、高剂量组(40、80μmol/L),处理24 h。MTT法检测细胞增殖,Annexinv-FITC/PI双染色和hoechst 33342染色检测细胞凋亡,Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果与空白组比较,黄芩苷(40、80μmol/L)能抑制细胞增殖(P<0.01),增加细胞凋亡率(P<0.01),抑制p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达(P<0.01),且细胞出现明显的染色质凝集、核萎缩、凋亡小体增多现象。结论黄芩苷可能通过下调PI3K/AKT/mTOR通路,从而具有抑制HeLa细胞增殖、促进凋亡的作用。     

姜黄素调控STAT3诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡的内质网应激作用机制

目的探讨姜黄素通过抑制STAT3诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡的内质网应激作用机制。方法采用MTT法检测姜黄素对人肝癌BEL-7404细胞增殖的影响。流式细胞术检测细胞凋亡、CRISPR/Cas9技术敲除STAT3基因、Western blot技术检测STAT3、p-STAT3、内质网应激及凋亡相关蛋白的表达水平。结果姜黄素能够抑制人肝癌BEL-7404细胞的增殖,诱导细胞凋亡,上调GRP78、p-elF2α、p-JNK、CHOP、caspase4的表达,下调p-STAT3的表达。敲除STAT3后,细胞凋亡率上升,GRP78、CHOP表达同时上调。结论姜黄素可以通过抑制STAT3诱导人肝癌BEL-7404细胞发生凋亡,其作用机制与内质网应激相关。     

柴胡皂甙d对特发性肺纤维化肺泡上皮细胞自噬作用机制研究北大核心CSCD

目的研究柴胡皂甙d(SSd)对特发性肺纤维化(IPF)中Ⅱ型肺泡上皮细胞(AT-Ⅱ)自噬的调控作用及其对纤维化程度的干预作用。方法转化生长因子β1(TGF-β1,5 ng/mL)诱导A549细胞48 h建立肺纤维化细胞模型,分别联合SSd低、中、高浓度(2.5、5、10μg/mL)、雷帕霉素(100 ng/mL)处理细胞。CCK8法检测各组细胞存活率,Western Blot法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)/LC3B-Ⅰ、p62、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路活化蛋白表达水平,单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测细胞内自噬泡形成。结果与正常组比较,模型组细胞存活率下降(P<0.05),E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平亦降低(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62、mTOR通路活性蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),胞质内荧光标记的自噬泡较少。与模型组比较,SSd高浓度组细胞存活率升高(P<0.05),SSd组及雷帕霉素组E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),SSd高浓度组及雷帕霉素组p-mTOR/mTOR、p-AKT1/AKT1、p-S6K1/S6K1表达水平降低(P<0.05,P<0.01),SSd高浓度组及雷帕霉素组细胞质内荧光标记的自噬泡增多。与SSd低、中低浓度组比较,SSd高浓度组及雷帕霉素组Ecadherin、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论SSd可改善TGF-β1诱导的ATⅡ纤维化改变,可能通过抑制mTOR通路激活诱导细胞自噬发挥作用。     

人参皂苷Rg1对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞自噬性死亡的保护作用

目的:观察人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白(beta-Amyliod,Aβ1-42)诱导PC12细胞自噬性死亡的作用,试探究其神经保护机制。方法:将PC12细胞分为对照组、Aβ组和Aβ+Rg1组。Aβ组细胞用Aβ1-42(10μmol/L)处理24 h;Aβ+Rg1组细胞分别用12.5、25、50μmol/L Rg1预处理24 h后,加入Aβ1-42(10μmol/L)继续培养24 h。采用MTT法测定各组细胞活力,免疫荧光染色法检测细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达变化,Western blot法检测LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达变化。结果:对照组比较,Aβ组细胞活力显著下降(P0.01);与模型组比较,Rg1各剂量组细胞活力显著高于Aβ组(P0.01)。与对照组比较,Aβ组LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达显著上升(P0.01);与模型组比较,Rg1各剂量组LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达显著低于Aβ组(P0.01)。结论:人参皂苷Rg1可能通过抑制Aβ诱导的细胞自噬性死亡发挥神经保护作用。