卵巢储备功能减退患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 探讨卵巢储备功能减退(DOR)患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以期为女性因DOR导致的生育功能降低和不孕症的发生提供新的科学实验数据。方法 选取SPF级4～6周龄C57BL/6J未孕雌性小鼠,收集未成熟卵母细胞并进行体外成熟培养;同时收集DOR患者卵泡液,并提取外泌体。利用Dio荧光标记外泌体后与小鼠未成熟卵丘-卵母细胞复合物(COCs)共孵育培养,观察外泌体摄入情况;通过添加不同浓度0、50、100和150μg/ml外泌体处理小鼠未成熟COCs 16 h观察卵丘扩展和第一极体排出情况,分析其对卵母细胞成熟的影响并筛选出最佳处理浓度;设置分组为体内成熟组(control)、外泌体添加组(exo+)和未添加组(exo-),各组成熟后的COCs利用qPCR检测卵丘扩展相关基因Has2、Tnfaip6和Ptgs2以及凋亡相关基因Bax、Bcl2的mRNA相对表达水平,分析各组间的差异。结果 (1)Dio标记的外泌体与小鼠COCs共孵育,卵丘颗粒细胞上能观察到明显的Dio荧光信号,证实COCs能够摄入外泌体;(2)不同浓度外泌体处理组的GV期卵母细胞百分比均显著高于0μg/...     

γ-氨基丁酸及其A型受体α5亚单位在小鼠不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中的表达

目的探讨γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)及其A型受体α5亚单位(GABRA5)在小鼠不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中的表达情况。方法在性成熟前小鼠给予孕马血清促性腺激素(PMSG)以刺激卵泡生长,并予以人绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导排卵,于给药后不同时间取出卵巢和输卵管,并收集不同时期的颗粒细胞。釆用实时荧光定量聚合酶链反应检测GABRA5mRNA在生发泡期(GV)和减数第2次分裂中期(MⅡ)卵母细胞周围卵丘颗粒细胞中的表达;用Western blotting和免疫荧光技术检测GABRA5蛋白在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞中的表达;用免疫组织化学方法检测GABA在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞中的分布。结果 (1)GABRA5mRNA在GV期和MⅡ期卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中均有表达,且MⅡ期卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞上的表达水平高于其在GV期卵母细胞时卵丘颗粒细胞中表达水平(P<0.05)。(2)GABRA5蛋白在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞的细胞膜和细胞质中均有表达,且其表达量随卵泡发育呈上升趋势(P<0.05)。(3)免疫组化染色结果显示,GABA均定位于在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞的胞质中。结论 GABA及其A型受体α5亚单位均表达于小鼠不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中,其中A型受体α5亚单位的表达与卵母细胞的成熟度相关,其表达量随卵母细胞成熟而升高,提示其可能参与小鼠卵泡发育和成熟的过程。     

小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞上细胞周期蛋白D2的表达

目的检测在小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞(CCs)上细胞周期蛋白D2(CCND2)表达水平的变化,探讨其在卵母细胞成熟中的作用。方法从3周龄雌性ICR小鼠获取GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(MⅡ-COCs)。收集对应的CCs,分成GV-CCs和MⅡ-CCs二组,实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹方法检测CCND2mRNA和蛋白水平的表达;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs成熟前后CCND2的亚细胞定位。结果 GV-CCs的CCND2mRNA相对表达量(7.03±1.11),显著高于MⅡ-CCs组(1.40±0.11)(P0.01);同样,GVCCs组CCND2蛋白相对表达水平(1.98±0.16)也显著高于MⅡ-CCs组(1.16±0.14)(P0.01)。免疫荧光显示,COCs中CCND2定位于CCs,卵母细胞亦有表达;CCs中CCND2主要定位于胞核,胞质中少量表达,且GV-CCs主要表达在内层CCs,而MⅡ-CCs则失去这种表达极性,同时MⅡ-CCs的表达强度较GV-CCs减弱。结论卵母细胞体外成熟培养过程中,其周围的CCs上CCND2表达水平下降,且伴随细胞定位的改变,提示CCs上CCND2与卵母细胞成熟密切相关,可能参与了卵母细胞成熟过程。     

猪体外成熟卵母细胞的卵丘扩散与胚胎发育能力的相关性

目的　探讨卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩散与其体外受精后胚胎发育能力的关系。　方法　取猪卵丘 卵母细胞复合体 (COCs)在体外进行成熟、受精和培养 ,在体外成熟培养液中添加不同直径卵泡 (<2 ,2～ 5和 >5mm)的不同浓度 (15%、5% )卵泡液。　结果　在含卵泡液的成熟培养液中培养 48h ,卵泡液明显抑制了COCs的卵丘扩散 (P <0 .0 5) ,但不影响第一极体的排出 ;COCs成熟培养 2 4h后 ,移入不含卵泡液的成熟培养液中继续培养 2 4h ,卵丘扩散显著高于对应的 48h培养组 (P <0 .0 5) ,但第一极体的排出率无显著差异 ;体外成熟过程中COCs扩散的卵丘面积与其受精后的胚胎发育能力 (发育到 2～ 4细胞、>4细胞和桑葚胚 /囊胚的百分率 )呈显著正相关 (P =0 .0 0 58,0 .0 0 0 1和 0 .0 3 4 8)。　结论　卵泡液对COCs的卵丘扩散有抑制作用 ,这种抑制作用与卵泡液的作用时间相关 ;在体外成熟过程中扩散的卵丘团面积可以作为预测卵母细胞受精后胚胎发育能力的参数     

分泌型卷曲相关蛋白家族成员在多囊卵巢患者不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中的基因表达

目的探讨在多囊卵巢综合征(PCOS)患者与非PCOS患者中,分泌型卷曲相关蛋白(sFRPs)家族成员基因在不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞上的表达差异。方法收集27例接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗的不育女性患者(其中11例PCOS患者,16例非PCOS患者),通过控制性促排卵治疗后,采用标准长方案促排卵,经阴道超声引导下穿刺取卵后,获得共198枚卵丘-卵母细胞复合体(PCOS患者98枚,非PCOS患者100枚);采用机械剥离法获取卵丘颗粒细胞,根据卵母细胞成熟度不同,将对应的卵丘颗粒细胞分为4组:非PCOS患者成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCN-MII),非PCOS患者非成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCN-MI+GV),PCOS患者成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCP-MII)和PCOS患者非成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCP-MI+GV)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测部分sFRPs家族基因成员(sFRP1、sFRP2、sFRP3、sFRP4、sFRP5)在PCOS及非PCOS患者不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞上的表达情况。结果 (1)PCOS患者中,在未成熟卵母细胞周围的颗粒细胞中sFRP4的表达显著高于在成熟卵母细胞周围的颗粒细胞中的表达,即sFRP4在CCP-MⅠ+GV组表达高于CCP-MⅡ组[(7.80±1.21)vs.(1.00±0.00)](P0.05);(2)在非PCOS患者中,sFRPs家族成员sFRP4和sFRP5在不同成熟度卵泡母细胞周围的卵丘颗粒细胞中表达变化显著,CCN-MⅠ+GV组中的表达量均显著高于CCN-MⅡ组[sFRP4(7.04±1.30)vs.(1.00±0.00)](P0.05)和[sFRP5(2.84±0.73)vs.(1.00±0.00)](P0.05);(3)sFRP4的表达在PCOS及非PCOS患者间成熟卵母细胞对应的颗粒细胞组间均无显著性差异。结论在PCOS患者中,仅sFRP4在卵丘颗粒细胞上的表达与卵母细胞的成熟度相关;而在非PCOS患者中,sFRP4和sFRP5的表达均与卵母细胞的成熟度相关,其表达量随卵母细胞成熟而降低。     

CTRP6在小鼠卵巢中的定位、表达以及FSH对CTRP6的调控作用

目的探究C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)在小鼠卵巢中的定位、表达以及FSH对其调控作用。方法免疫组化对56日龄小鼠卵巢中的CTRP6蛋白进行定位,实时定量PCR检测3 d、10 d、21 d和56 d小鼠、21日龄小鼠注射了孕马血清促性腺激素(PMSG)0 h、12 h、36 h、48 h及注射HCG 4 h、8 h、12 h卵巢中CTRP6 mRNA的表达水平。分别向人卵巢颗粒细胞(KGN)中加入0 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml和100 ng/ml的FSH和LH,培养24 h后检测CTRP6 mRNA水平。结果小鼠卵巢免疫组化结果显示CTRP6可以在颗粒细胞和卵母细胞中表达,尤其在窦卵泡颗粒细胞中表达水平较高。另外,小鼠CTRP6 mRNA的表达水平随着年龄增加而升高(P0.05),且经PMSG处理不同时长后,CTRP6 mRNA相对表达量较PMSG处理前显著增加(P0.05),而与PMSG处理48 h比较,HCG处理后CTRP6 mRNA的相对表达水平显著降低(P0.05),且随着处理时间的延长呈降低趋势。不同浓度梯度(1、10、100 ng/ml)的FSH处理KGN细胞24 h后均使CTRP6 mRNA表达水平显著增高(P0.05),浓度为10 ng/ml时CTRP6 mRNA水平达峰值。选择10 ng/ml FSH于不同时间梯度(6、12和24 h)处理KGN细胞后,CTRP6 mRNA相对表达量均较未处理前显著增加(P0.05),且随着时间延长呈升高趋势。不同浓度梯度(1、10、100 ng/ml)的LH处理KGN细胞24 h后,CTRP6 mRNA的表达均较LH处理前无显著差异(P0.05)。结论 CTRP6可能参与了卵泡生长发育的调控,是卵泡形成的重要因子。     

卵丘细胞上AIFM2和FDX1的表达及其与小鼠卵母细胞成熟的关系

目的检测小鼠卵母细胞体外、体内成熟过程中卵丘细胞(CCs)上线粒体相关凋亡因子2(AIFM2)和铁氧化还原蛋白1(FDX1)的表达,探讨其在卵母细胞成熟中的作用。方法从3周龄ICR雌性小鼠获取体内成熟卵丘-卵母细胞复合体(IVV-COCs)以及GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),并将GV期体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(IVMCOCs)。收集对应的CCs,分成GV-CCs、IVM-CCs和IVV-CCs 3组。实时定量逆转录聚合酶链反应检测AIFM2和FDX1mRNA水平的表达,以GAPDH为参照;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs的AIFM2和FDX1的亚细胞定位。结果IVM-CCs和IVV-CCs的AIFM2mRNA相对表达量[分别为(0.72±0.01)和(0.67±0.02)]显著高于GV-CCs组[(0.10±0.06)](P0.01);同样,IVM-CCs和IVV-CCs的FDX1mRNA相对表达量[分别为(1.58±0.35)和(1.82±0.34)]也显著高于GV-CCs组[(0.10±0.03)](P0.01);而IVM-CCs和IVV-CCs的AIFM2和FDX1表达水平均无显著性差异(P0.05)。免疫荧光显示,AIFM2和FDX1主要定位于CCs胞质中,在GV-COCs中各层均有表达,且GV期卵母细胞中也有表达;IVMCOCs和IVV-COCs中表达阳性的细胞数目较GV期增加。结论卵母细胞成熟后,其CCs上AIFM2和FDX1的表达升高,表明AIFM2和FDX1参与了卵母细胞成熟过程,有望作为预测卵母细胞成熟的生物标记物。     

肛周脓肿局部组织中SDF-1和CXCR4的表达及其临床意义

目的探讨肛周脓肿局部组织中基质细胞衍生因子1(SDF-1)和趋化因子受体4(CXCR4)的表达情况及其与患者临床病理学特征及预后的关系。方法回顾性收集2017年1月至2018年2月期间在北京市第一中西医结合医院进行手术治疗的47例肛周脓肿患者(肛周脓肿组)及58例混合痔患者(混合痔组)的临床资料。术中采集组织,采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测2组局部组织中SDF-1 mRNA和CXCR4mRNA的表达水平,采用免疫组织化学染色法检测局部组织中SDF-1蛋白和CXCR4蛋白的表达,分析SDF-1蛋白和CXCR4蛋白的表达与肛周脓肿患者临床病理学特征以及复发的关系。结果肛周脓肿组组织中SDF-1mRNA和CXCR4 mRNA的表达水平均相应高于混合痔组,且肛周脓肿组组织中SDF-1蛋白和CXCR4蛋白的表达阳性率也均相应高于混合痔组,差异均有统计学意义(P0.05)。肛周脓肿患者组织中SDF-1蛋白和CXCR4蛋白的表达与患者的性别、年龄、脓肿位置及病程均无关(P0.05),但均与脓肿直径、愈合时间及肛瘘有关(P0.05)。SDF-1蛋白阴性组和CXCR4蛋白阴性组的术后未复发率均相应低于SDF-1蛋白阳性组及CXCR4蛋白阳性组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 SDF-1和CXCR4分子在肛周脓肿局部组织中的表达上调,且SDF-1蛋白和CXCR4蛋白的表达与脓肿直径、愈合时间、肛瘘形成以及复发有关。     

不同日龄小鼠卵丘颗粒细胞对卵泡刺激素/缺氧诱导因子-1信号通路的影响

目的研究不同日龄小鼠颗粒细胞对卵泡刺激素(FSH)诱导的缺氧诱导因子-1/血管内皮细胞生长因子(HIF-1/VEGF)信号通路的影响。方法超排卵方法取出卵母细胞和颗粒细胞,进行体外受精;荧光素酶报告基因实验检测常氧和低氧培养条件下,不同日龄小鼠卵丘颗粒细胞对FSH诱导的HIF-1/VEGF信号通路的应答;蛋白质免疫印迹技术检测FSH受体的表达水平。结果雌性小鼠超排卵数和卵母细胞体外受精能力与小鼠日龄数呈负相关;FSH上调小鼠卵丘颗粒细胞HIF-1α的转录活性;免疫印迹结果显示小鼠颗粒细胞中FSH受体的表达水平随着日龄数的增加呈下降趋势。结论小鼠卵丘颗粒细胞对FSH诱导的HIF-1/VEGF信号通路的应答反应随小鼠天日龄数增加而下降,与颗粒细胞表面FSH受体的表达下降相一致。雌性小鼠随着年龄增加引起的生殖能力下降可能与颗粒细胞表面FSH受体表达减少有关。     

晚期糖基化终末产物对卵巢原始卵泡的影响

目的探究晚期糖基化终末产物(AGEs)对原始卵泡激活的影响。方法取4日龄ICR小鼠卵巢,将其分别置于基础培养液(空白对照组)、包含200μg/ml牛血清白蛋白(BSA)培养液(溶剂对照组)以及包含200μg/ml AGE-BSA培养液(AGE-BSA组)中进行体外培养,4d后取材检测。HE染色观察各组卵巢卵泡构成比;免疫蛋白印迹法检测AGEs受体(RAGE)和卵泡激活相关指标细胞增殖核抗原(PCNA);免疫组织化学法检测PCNA定位表达。结果与溶剂对照组相比,AGE-BSA组中生长卵泡构成比增加(P0.001),同时伴随着卵巢髓质部原始卵泡的出现;AGE-BSA组RAGE、PCNA的蛋白表达较溶剂对照组显著增加(P0.05),而空白对照组与溶剂对照组间卵泡构成比以及RAGE、PCNA的蛋白表达均无显著差异(P0.05);免疫组织化学结果显示PCNA表达在卵巢各级卵泡卵母细胞和颗粒细胞中。结论 AGEs可能通过AGEs-RAGE轴激活卵巢内的原始卵泡,促进卵泡池耗竭。     

卵母细胞发育停滞

大多数哺乳动物的卵原细胞在胎儿期进入减数分裂,如小鼠卵原细胞在妊娠第13．5天,人卵原细胞在胚胎第8周即开始减数分裂。经过减数分裂Ⅰ（MeiosisI,MI）前期的细线期、偶线期和粗线期后,双线期的卵母细胞被颗粒细胞前体细胞包裹,形成原始卵泡。性成熟后,原始卵泡启动生长发育,单层扁平颗粒细胞变成立方形,形成初级卵泡。初级卵泡发育过程中,颗粒细胞通过增殖由一层变成多层,     

ADAMTS-1在人卵泡颗粒细胞和卵泡液中的表达研究

目的探讨Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)mRNA和蛋白在人卵泡壁颗粒细胞(GCs)和卵丘颗粒细胞(CCs)中的表达水平及变化。方法收集2014年3月至2016年6月期间在华中科技大学同济医学院生殖医学中心接受ICSI治疗的患者卵泡液,其中大卵泡(直径≥18 mm)和小卵泡(≤10 mm)各86份,离心后上清用于Western Blot和ELISA实验,沉淀用密度梯度离心法分离纯化得到GCs;收集脱颗粒细胞的培养液直接离心法获得CCs。GCs和CCs均分别提取mRNA和蛋白,荧光定量PCR检测GCs和CCs中ADAMTS-1 mRNA水平,Western Blot检测ADAMTS-1蛋白水平,比较ADAMTS-1 mRNA和蛋白在不同颗粒细胞中的表达差异。结果 ADAMTS-1 mRNA在大卵泡GCs、小卵泡GCs、CCs中均有表达,且其在小卵泡GCs中表达量最高,显著高于CCs(P0.05)。ADAMTS-1蛋白在大卵泡GCs、小卵泡GCs、CCs及卵泡液中均有表达,且存在成熟ADAMTS-1蛋白(85 KDa)及前体(110 KDa)两种形式;其在CCs中的表达量最高,显著高于大、小卵泡的GCs(P0.05),在小卵泡液中的含量显著高于大卵泡液(P0.01)。结论 ADAMTS-1 mRNA在人卵泡GCs和CCs中均有表达,ADAMTS-1蛋白在人卵泡GCs、CCs和卵泡液中均存在前体和成熟形式,且以成熟形式为主。ADAMTS-1在人卵泡GCs、CCs和卵泡液中的表达特点及变化可能与其在卵泡发育过程中的功能相关。     

人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2的表达与卵巢功能及反应性的相关性研究

目的探讨人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2（cyclin D2）的表达与卵巢功能及超排卵过程中卵巢反应性的相关性。方法收集48例行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）患者的卵巢黄素化颗粒细胞,根据取卵时卵泡发育数不同将卵巢反应性分为高反应组（12例）、中反应组（30例）及低反应组（6例）。采用免疫细胞化学方法检测颗粒细胞膜上eyclin D2及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测颗粒细胞cyclin D2 mRNA的表达水平;化学发光法测定基础血清卵泡刺激素（FSH）,人绒毛膜促性腺激素（hCG）日E2水平。分析颗粒细胞eyelin D2 mRNA及蛋白的表达与IVF临床各项参数、卵巢反应性的关系以及和颗粒细胞增殖活性PCNA标记指数（PCNA-LI）的相关性。结果（1）黄素化颗粒细胞cyclinD2蛋白表达与年龄、基础FSH水平及促性腺激素（Gn）支数呈负相关（r=-0．547,P〈0．01;r=-0．456,P〈0．05;r=-0．451,P〈0．05）;cyclinD2蛋白表达与获卵数和hCG日E2水平呈正相关（r=0．592,P〈0．01;r=0．626,P〈0．01）;高、中和低反应三组cyclinD2蛋白表达有显著统计学差异（F=4．995,P〈0．05）。（2）黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA表达与年龄、基础FSH水平呈负相关（r=-0．510,P〈0．05;r=-0．891,P〈O．01）;与获卵数和hCG日E2水平呈正相关（r=0．629,P〈0．01;r=0．524,P〈0．05）;高、中和低反应三组cyclin D2 mRNA的表达有显著统计学差异CF=8．843,P〈0．01）。（3）黄素化颗粒细胞cyclin D2蛋白及mRNA表达与PCNA-LI均呈显著正相关（r=0．696,P〈0．01;r=0．498,P〈0．0S）。结论黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA及蛋白的表达可反映卵巢储备功能并与卵巢反应性正相关。cyclin D2可能通过调节颗粒细胞的增殖分化参与卵泡的发育。     

生长激素改善多囊卵巢综合症患者卵母细胞成熟度的研究

目的探讨生长激素(GH)在控制性超排卵(COH)过程中改善PCOS患者卵母细胞成熟度的应用价值及其初步机制。方法选择2016年9月至2019年1月在深圳市妇幼保健院生殖医学中心利用卵胞浆内单精子注射(ICSI)技术进行不孕治疗的PCOS患者75例。根据患者促排卵过程中是否使用外源GH将其分成两组,使用GH组(44例)和未使用GH组(31例)。取卵后离体卵母细胞经体外培养3～4h后,对成熟的MⅡ卵行ICSI授精,余下的未成熟卵继续体外培养16h,培养成熟的MⅡ卵再行ICSI授精。比较两组患者继续培养前后卵母细胞成熟情况及其MⅡ卵授精与胚胎培养结局。检测两组患者血液与卵泡液GH、E2及IGF-I含量的差异,以及卵巢颗粒细胞上相应受体基因表达的不同,并分析卵泡液GH含量与其它指标的相关性。结果离体卵母细胞经体外培养3～4h后,与未使用GH组相比,使用GH组患者MⅡ卵数和总MⅡ卵率均显著升高(P<0.05),而MⅠ卵数和GV卵数显著减少(P<0.05)。ICSI授精后,使用GH组患者的正常受精率、卵裂率和优胚率均显著高于未使用GH组(P<0.05),而周期取消率显著低于后者(P<0.05)。授精后余下的未成熟卵继续培养16h后,两组间各指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。进一步比较,发现使用GH组患者血清和卵泡液GH与IGF-1含量及卵泡液E2浓度和卵巢颗粒细胞上GHR mRNA、IGF-1RmRNA和StAR mRNA的表达水平均显著高于未使用GH组(P<0.05),且卵泡液中GH含量与卵泡液IGF-1和E2水平、MⅡ卵数以及颗粒细胞上GHR mRNA、IGF-1RmRNA和StAR mRNA相对表达量均显著正相关(P<0.05)。结论超排卵过程中添加外源GH对改善PCOS患者的卵母细胞成熟度具有临床应用价值。其改善卵母细胞成熟度的作用可能依赖于配体-受体途径及IGF-1介导的途径所建立的激素和细胞因子微环境。     

自发性肥胖症雌性ob/ob小鼠糖脂代谢和卵泡超微结构的研究

目的研究自发性肥胖症雌性ob/ob小鼠糖脂代谢和卵泡超微结构的变化。方法将4周龄C57BL/6J和ob/ob雌性小鼠正常饲料喂养120 d,每组各15只,比较两组小鼠体重、糖和脂代谢指标以及血清性激素水平;应用电镜技术观察两组雌性小鼠卵泡超微结构变化。结果与对照组C57BL/6J小鼠比较,ob/ob雌性小鼠喂养期间的体重全程超重(P0.01),空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均显著升高(P0.05),葡萄糖耐受试验曲线下面积(AUC)和胰岛素释放试验AUC均显著升高(P0.001),血脂水平亦均显著升高(P0.05),血清睾酮(T)水平显著下降(P0.05)。ob/ob小鼠卵泡内细胞器受损,颗粒细胞凋亡,部分卵母细胞核染色质排列紊乱;透明带形态或厚度异常;卵母细胞微绒毛明显减少。结论自发性肥胖症ob/ob雌性小鼠出现显著的糖和脂代谢紊乱,卵泡超微结构严重受损。     

中药内异方对子宫内膜异位症小鼠卵母细胞的影响及其机制研究

目的从改善卵母细胞质量方面探讨中药内异方治疗子宫内膜异位症(EMs)相关性不孕症的作用机制。方法实验小鼠随机分为空白对照组(n=22)和模型组(n=102)。模型组小鼠构建EMs模型后,随机分为模型对照组(n=34)、孕三烯酮组(n=34)和内异方组(n=34)。各组小鼠分别予生理盐水(空白对照组)、生理盐水(模型对照组)、孕三烯酮混悬液(孕三烯酮组)和中药内异方水煎剂(内异方组)灌胃。对小鼠进行交配实验、模型验证、促排卵后卵巢固定病理切片染色及卵母细胞体外成熟(IVM)培养。排除未成功造模小鼠,观察并比较4组自然妊娠率和平均产仔数、卵巢平均有腔卵泡数和各阶段卵泡的比例、卵母细胞体外成熟率。结果内异方组平均产仔数(15.5±2.7),显著高于其余3组(P均0.05);内异方组小鼠卵巢各阶段卵泡所占比例与模型对照组相比存在统计学差异(P=0.019),内异方组有腔卵泡(后期)比例显著升高(12.3%vs. 1.9%,P=0.006);内异方组卵母细胞体外成熟率显著高于模型对照组(68.3%vs. 48.0%,P=0.005)。结论中药内异方提高EMs小鼠自然生殖力,促进卵泡发育,提高卵母细胞体外成熟率,改善EMs小鼠卵母细胞质量。     

卵巢早衰小鼠中抗苗勒管激素与卵泡刺激素受体相关性的研究

目的探讨卵巢早衰(POF)小鼠中抗苗勒管激素(AMH)与卵泡刺激素受体(FSHR)的关系。方法以小鼠透明带3(ZP3)的第330～342个氨基酸序列所合成的透明带多肽为免疫原,免疫SPF级Balb/c雌性小鼠,皮下多点注射建立POF模型。放射免疫法测定模型组及对照组小鼠外周血FSH、雌二醇(E_2)的水平,酶联免疫法测定外周血AMH、抗透明带抗体(AzpAb)的水平,HE染色观察卵巢组织的变化,并用免疫组化方法分析卵巢颗粒细胞中FSHR的表达。结果 POF小鼠较正常小鼠外周血的FSH升高,E_2值降低,AMH值降低,AzpAb值升高。POF小鼠卵巢的HE染色病理切片见卵泡闭锁,正常发育的卵泡甚少。免疫组化分析,FSHR仅在颗粒细胞上表达,且POF小鼠卵巢上FSHR的表达明显少于正常组。结论 FSHR仅在颗粒细胞上表达,POF小鼠中各级卵泡的FSHR表达均降低,POF小鼠伴低浓度AMH,且FSHR的表达随AMH降低亦降低。     

趋化因子受体CXCR4在肝细胞癌表达及肺转移中作用的研究

目的 以人肝细胞癌高、低肺转移潜能细胞株MHCC97-H、MHCC97-L为研究对象,研究趋化因子受体CXCR4在肝细胞癌肺转移过程中的作用和意义.方法 RT-PCR和Western blotting比较MHCC97-H、MHCC97-L细胞株CXCR4 mRNA及蛋白质水平的表达.CXCR4配体SDF-1α及肺提取物趋化实验和抗体抑制实验观察SDF-1α和裸鼠肺组织匀浆液对MHCC97-H的趋化迁移作用.结果 趋化因子受体CXCR4在MHCC97-H细胞株表达低于低肺转移潜能细胞株MHCC97-L,蛋白质水平与mRNA水平一致.SDF-1α对MHCC97-H趋化实验表明在1～100 ng/ml浓度范围内均有趋化作用,在浓度为50 ng/L时趋化作用最显著(P＜0.05).肺提取物亦发现对MHCC97-H有趋化作用,作用强于MHCC97-L及DMEM组(P＜0.05).但加入CXCR4抗体后其趋化作用并未明显下调.结论 CXCR4在肝癌组织及细胞表达并可能参与肝癌肺转移,但并非肝癌细胞趋化转移的主要受体分子.     

生长分化因子-9在卵巢反应不良患者颗粒细胞中的表达

目的探讨生长分化因子-9(GDF-9)在卵巢反应不良患者颗粒细胞的表达及其在超促排卵中卵泡发育的作用。方法对49例接受体外受精-胚胎移植/卵胞浆内单精子注射(IVF-ET/ICSI)治疗的患者,给予相同的改良短方案超促排卵,采用免疫组织化学方法测定颗粒细胞中GDF-9水平,比较卵巢反应不良组(实验组,n=30)与正常对照组(对照组,n=19)GDF-9表达的差异。结果两组颗粒细胞中均测及GDF-9的表达,实验组颗粒细胞中GDF-9的表达显著低于对照组(P0.05)。结论颗粒细胞中GDF-9对控制性超排卵中卵泡的生长发育可能具有调节作用,且卵巢反应不良患者颗粒细胞中GDF-9表达降低,可能参与卵巢反应不良的发病机制。     

不同促排卵方案对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的研究不同促排卵方案对小鼠卵巢颗粒细胞Fas凋亡通路的影响。方法将雌性KM小鼠随机分为4组:孕马血清促排卵组(PMSG组)、促性腺激素释放激素激动剂组(GnRH-a组)、促性腺激素释放激素拮抗剂组(GnRH-ant组)、自然排卵组(空白对照组),每组10只。取排卵期卵巢组织,采用免疫组化检测卵巢组织凋亡因子Fas、FasL、Caspase8、Caspase3的表达情况。结果 4组小鼠卵巢颗粒细胞均有Fas、FasL、Caspase8、Caspase3的表达;经不同促排卵方案干预后,小鼠卵巢颗粒细胞免疫组化Fas、FasL、Caspase8、Caspase3表达水平总体趋势为:GnRH-a组/GnRH-ant组空白对照组PMSG组。其中,PMSG组小鼠卵巢颗粒细胞Fas、FasL、Caspase8、Caspase3表达低于空白对照组,但差异无统计学意义(P0.05);GnRH-a组与GnRH-ant组小鼠卵巢颗粒细胞Fas、FasL、Caspase8、Caspase3表达显著高于空白对照组(P0.05)。结论不同促排卵方案对小鼠卵巢颗粒细胞Fas凋亡通路的影响不同,PMSG方案可能抑制颗粒细胞凋亡,GnRH-a方案与GnRH-ant方案可能促进颗粒细胞凋亡。