基于IRS-1/PI3K/AKT通路探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响＊

目的 探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响及可能机制。方法 SD雄性大鼠100只随机分为5组，正常组（蒸馏水）、模型组（52%老白干）、枳葛口服液高、中、低剂量组（52%老白干 + 不同剂量枳葛口服液）灌胃。各组大鼠每四周取尾静脉血测定FBG、FINS，持续16周后处死大鼠，取肝组织行HE染色、免疫组化，取肝脏总蛋白Western blotting检测IRS-1、PI3K、AKT、GLUT-2等IRS-1/PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组FBG、FINS明显升高（P < 0.05），IRS-1/PI3K/AKT通路相关蛋白水平均显著降低（P < 0.01），HE染色及免疫组化可见细胞内较多的脂肪空泡；与模型组比较，枳葛口服液高、中剂量组以上指标均有所改善（P < 0.05），低剂量组以上指标无明显改善（P > 0.05）。结论 乙醇诱导的酒精性肝损伤大鼠存在着胰岛素抵抗及IRS-1/PI3K/AKT通路的改变，一定剂量的枳葛口服液可能通过IRS-1/PI3K/AKT信号通路改善胰岛素抵抗状态。     

黄芪散有效部位群对Ⅱ型糖尿病大鼠肝脏AMPK/SREBP-1c通路的影响

目的观察黄芪散有效部位群(HQS)对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏单磷酸腺苷活化蛋白激酶/固醇调控元件结合蛋白-1c(AMPK/SREBP-1c)通路的影响。方法采用低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射联合高脂饲料喂养建立T2DM大鼠模型,造模同时给予HQS(2.4 g·kg~(-1))灌胃给药,连续16周。测定大鼠血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)及肝脏TC、TG含量;HE、油红O染色法观察肝脏病理变化;Western Blot法检测肝组织中AMPK(Thr172)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)(Ser79)、SREBP-1c(Ser372)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)(Ser731)、蛋白激酶B(Akt)(Ser473)磷酸化蛋白以及AMPKα、SREBP-1c核蛋白(nSREBP-1c)、ACC1、脂肪酸合成酶(FAS)、IRS-2、Akt蛋白的表达;qPCR法检测肝组织中SREBP-1c、ACC1、FAS、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)、IRS-2、Akt mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平均显著升高(P 0.05);肝组织存在明显的脂肪变性;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白的表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著降低(P 0.05,P 0.01),AMPKα、n SREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著升高(P 0.05,P 0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显上调(P 0.05,P 0.01),IRS-2、Akt mRNA表达下降(P 0.05)。与模型组比较,HQS组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平显著降低(P 0.05);肝组织脂肪变性明显减轻;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著升高(P 0.05,P 0.01),nSREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著降低(P 0.05,P 0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显下调(P 0.05),IRS-2 mRNA表达显著上调(P 0.05)。结论 HQS可能通过调节AMPK/SREBP-1c通路,减少脂质合成,改善T2DM大鼠肝脏胰岛素抵抗。     

白子菜对胰岛素抵抗大鼠AMPK/Akt信号通路的影响

目的:观察白子菜对胰岛素抵抗大鼠血糖、血脂、AMPK和Akt信号通路的影响,探讨其干预胰岛素抵抗的分子机制。方法:采用高糖高脂饲料喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法建立胰岛素抵抗大鼠模型,并随机分为模型组、二甲双胍(100 mg/kg)阳性对照组及白子菜高(8 g/kg)、低(4 g/kg)剂量组,另选取10只健康大鼠作为正常对照组。灌胃给药6 w,测定空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)水平;采用RT-PCR检测肝脏组织AMPKα1、AMPKα2 mRNA表达;采用Western blot法检测肝脏组织AMPK、Akt蛋白表达。结果:与模型组比较,白子菜高剂量组大鼠FINS显著降低,白子菜高、低剂量组大鼠FBG、TC、TG、LDL-c显著降低,肝组织AMPKα1、AMPKα2 mRNA及AMPK、Akt蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01)。结论:白子菜对大鼠胰岛素抵抗有显著的改善作用,其作用机制可能与上调肝组织AMPKα1、AMPKα2 mRNA和AMPK、Akt蛋白表达有关。     

糖脂平颗粒对糖尿病胰岛素抵抗大鼠胰岛素样生长因子1和内皮素的影响

目的探讨糖脂平颗粒对糖尿病胰岛素抵抗大鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)和内皮素(ET)的影响。方法 Wistar大鼠90只随机选取8只为正常对照组,其余大鼠采用高脂高糖饲料联合注射链脲佐菌素诱导糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型。选取造模成功大鼠32只,随机分为模型组、糖脉康颗粒组、糖脂平大剂量组、糖脂平小剂量组,每组8只。正常对照组和模型组给予等体积生理盐水,各给药组每日分别给予糖脉康颗粒(1.35g/kg)、糖脂平颗粒大剂量(2.7g/kg)、糖脂平颗粒小剂量(1.35g/kg),每天灌胃1次,连续4周。检测各组大鼠体重、血糖、血清胰岛素(INS)、IGF-1及ET,并计算胰岛素敏感性指数(ISI)。结果各给药组与模型组比较,体重、血糖、INS及ET均降低,ISI和IGF-1均升高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论糖脂平颗粒可降低糖尿病胰岛素抵抗大鼠体重、血糖、INS和ET,同时升高ISI值和IGF-1,从而改善了糖尿病模型大鼠的胰岛素抵抗。     

化浊解毒方对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠糖脂代谢及肝脏脂素-2表达水平的影响

目的探讨化浊解毒方对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠糖脂代谢及肝脏中脂素-2(Lipin-2)表达水平的影响。方法选择健康雄性SD大鼠40只,自适应喂养1周后,随机选择正常喂养的8只SD大鼠作为空白对照组,其余SD大鼠以高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病胰岛素抵抗模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、化浊解毒方低剂量组、化浊解毒方中剂量组、化浊解毒方高剂量组,每组8只。化浊解毒方低、中、高剂量组分别给予化浊解毒颗粒生药1.5 g/(kg·d)、3.0 g/(kg·d)、6.0 g/(kg·d)灌胃,空白对照组和模型组给予同体积的生理盐水灌胃,均持续4周。灌胃结束后,取各组大鼠空腹血检测血糖(FPG)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感性指数(HOMA-ISI);处死大鼠,采用Western blot法检测各组大鼠肝脏组织中Lipin-2蛋白相对表达量,采用HE染色法观察肝脏组织形态学变化。结果模型组FPG、TG、TC、FINS、HOMA-IR及肝脏组织中Lipin-2蛋白相对表达量均明显高于空白对照组(P均0.05),HOMA-ISI明显低于空白对照组(P0.05);化浊解毒方各组FPG、TG、TC、FINS、HOMA-IR及肝脏组织中Lipin-2蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均0.05),HOMA-ISI均明显高于模型组(P均0.05)。化浊解毒方各组肝组织病理改变较模型组改善明显,且中、高剂量组改善更明显。结论化浊解毒方能显著改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗状态和糖脂代谢异常,机制可能与降低肝脏中Lipin-2表达有关。     

枳葛口服液治疗酒精性肝病患者的临床疗效观察

目的:观察枳葛口服液治疗酒精性肝病(ALD)的临床疗效,探索其可能的作用机制。方法:收集120例ALD男性患者随机分为对照组(单纯戒酒)和观察组(戒酒+枳葛口服液)各60例,4周1疗程,共3个疗程。观察各组在治疗前后的临床症状、肝功能、血脂、肝脏脂肪含量,并动态分析血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、瘦素(LEP)、乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)等指标变化。结果:观察组总有效率显著高于对照组,血清ALT、ALP、TG、TC、ADH、ALDH、SOD、MDA、LEP水平改善显著优于对照组(P0.01或P0.05)。结论:枳葛口服液可通过增强乙醇代谢酶活性、减轻胰岛素抵抗、改善机体氧化应激反应等机制来实现ALD患者肝功能的改善。     

祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠PPARα/CPT-1通路及胰岛素抵抗的影响

目的观察祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠PPARα/CPT-1通路及胰岛素抵抗的影响,探讨其治疗NAFLD的作用机制。方法 SPF雄性SD大鼠32只,随机分为正常组(6只)、造模组(26只),造模结束后随机抽取2只大鼠验证造模成功后,将24只NAFLD大鼠模型随机分为模型组,祛痰活血方低、中、高剂量组,每组6只按6,12,16g/(kg·d)灌胃。干预结束后,检测相关生化指标,行肝组织HE、油红O染色,检测肝脏组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)、胰岛素受体-1(IRS-1)蛋白及mRNA表达水平。结果与正常组相比,模型组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低,葡萄糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显升高,肝脏组织中PPARα、CPT-1、IRS-1 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组相比,祛痰活血方各组大鼠ALT、AST、TC、TG、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高,FBG、FINS及HOMA-IR显著降低(P0.01),以高剂量组效果最好(P0.01);中、高剂量组PPARα、CPT-1、IRS-1 m RNA及蛋白表达明显升高(P0.01),以高剂量组效果最好(P0.05)。结论祛痰活血方能改善NAFLD大鼠肝脏的脂肪变性程度及炎症反应,其作用机制可能与其激活PPARα /CPT-1通路,改善胰岛素抵抗进而改善NAFLD的脂质代谢有关。     

枳葛口服液对酒精性肝病大鼠脂质代谢的影响

目的：观察枳葛口服液对酒精性肝病大鼠脂质代谢的影响。方法：以酒精灌胃加普通饲料造模酒精性肝病大鼠,干预组酒精灌胃同时给予不同剂量枳葛口服液,对照组酒精灌胃同时给予解酒灵口服液。12周后处死大鼠,检测血清ALT、AST、TC、TG及肝组织TC、TG含量。结果：相比正常组,除高剂量组外各组肝脏指数、血清ALT、AST、TC、TG及肝组织TC、TG含量均显著升高（P < 0.01或0.05）,其中模型组和低剂量组升高最为明显（P < 0.01）。相比模型组,以上检测指标在高、中、低剂量组及对照组均有所下降,且下降趋势均相同, 即枳葛口服液高剂量组下降最为明显（P < 0.01）,其次是中剂量组及对照组（P < 0.05）,低剂量组降低最不显著。相比对照组,各指标仅高剂量组有显著性差异（P < 0.05）。结论：一定剂量枳葛口服液可通过改善脂代谢紊乱而抑制或降低酒精性肝病的发生。     

祛湿化瘀方通过调节AMPK活性改善高脂饮食诱导的实验性脂肪肝肝脏脂肪代谢

目的:研究祛湿化瘀方对高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝AMPK蛋白活性及其相关脂肪代谢靶蛋白活性的影响,以探讨该方防治实验性脂肪肝的作用机制。方法:采用高脂饲料饮食诱导大鼠脂肪肝模型,造模大鼠给予高脂饮食4周后,按随机数字表随机分为模型组及祛湿化瘀方组,分别灌胃给予饮用水及中药祛湿化瘀方4周。实验8周末取材后观察:1)肝组织三酰甘油(Triglyceride,TG)、游离脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)含量,2)肝组织病理变化(HE染色、油红染色),3)肝组织腺苷酸活化的蛋白激酶(AMP-Activated K inase,AMPK)及磷酸化AMPK、肝组织总蛋白及核蛋白固醇调节元件结合蛋白-1c(Sterol Regulatory Element Binding Protein-1c、SREBP-1c)、肝组织总蛋白及核蛋白碳水化合物反应元件结合蛋白(Carbohydrate Response Element Binding Protein、ChREBP)含量、肝组织乙酰辅酶A羧化酶(Acety1 Co A Carboxylase,ACCase)及磷酸化ACC蛋白含量,4)肝组织AMPKα1、AMPKα2、SREBP-1、ACCα、SREBP-1c及ChREBP基因表达水平。结果:1)模型组肝组织TG、FFA含量显著升高,肝组织出现明显大泡样脂肪变性;模型组肝组织AMPK蛋白磷酸化水平降低、核蛋白SREBP-1与ChREBP表达增加、ACC蛋白磷酸化水平降低蛋白活性升高。2)祛湿化瘀方组肝组织TG、FFA含量较模型组显著降低,肝组织炎症及脂肪变性程度减轻;祛湿化瘀方能显著升高肝组织AMPK、ACC蛋白磷酸化水平、降低核蛋白SREBP-1及ChREBP含量。结论:祛湿化瘀方通过调节AMPK活性及其相关靶蛋白活性改善高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝肝脂肪代谢,这可能是该方有效防治实验性脂肪肝的重要作用机制之一。     

补肾降浊饮对非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗的影响

目的:研究补肾降浊饮对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠胰岛素抵抗(IR)的干预作用,探讨其对胰岛素信号通路中细胞因子及激酶等的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、补肾降浊饮低、中、高剂量组(10,15,20 g·kg~(-1))及水飞蓟宾葡甲胺组(19 g·kg~(-1)),正常组予普通饲料喂养,其余各组予高脂饲料喂养并同时灌胃生理盐水或相应剂量药物干预。12周后检测各组大鼠血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转氨酶(AST),空腹血糖(FBG),胰岛素(INS)水平,胰岛素抵抗指数(IRI),胰岛素敏感指数(ISI)及肝组织中脂联素(ADP),游离脂肪酸(FFA),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)含量;苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色检测肝组织脂肪变性程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织中c-Jun氨基端激酶1(JNK1),磷酸化c-Jun氨基端激酶(p-JNK)及胰岛素受体α(IRα),磷酸化胰岛素受体底物1丝氨酸307位点(p-IRS-1)表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠TG,TC,ALT,AST,FBG,INS,IRI,TNF-α,FFA,MDA水平及JNK1,p-JNK及p-IRS-1蛋白表达显著升高,ISI,ADP,SOD水平显著降低(P0.01);与模型组比较,补肾降浊饮低、中、高剂量组可不同程度降低大鼠血清中TG,TC,ALT,AST,FBG,INS,IRI,TNF-α,FFA,MDA水平及JNK1,p-JNK及p-IRS-1蛋白表达(P0.05,P0.01),升高ISI,ADP,SOD水平(P0.05,P0.01);相较于水飞蓟宾葡甲胺组,补肾降浊饮高剂量组疗效显著(P0.01)。结论:补肾降浊饮可改善非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗,其机制可能与提高ADP含量,减轻氧化应激,抑制JNK信号通路进而增强胰岛素受体底物活性有关。     

加味温胆汤对雄性营养性肥胖大鼠INS/AMPK-ACC通路的影响

目的观察加味温胆汤对雄性营养性肥胖大鼠INS(胰岛素)及AMPK(腺苷酸激活蛋白激酶)-ACC(乙酰辅酶A羧化酶)信号通路的影响,探讨其抗大鼠营养性肥胖的机制。方法 SPF级SD雄性大鼠按体重随机分为正常对照组、模型对照组、加味温胆汤高、中、低剂量组,每组20只。除正常对照组外其余各组给予高脂乳剂构建大鼠营养性肥胖模型。喂养高脂乳剂两周后,口服给予相应的药物,连续5周。各组动物末次给药后,禁食不禁水12 h,称体重测体长用于计算大鼠Lee's指数及BMI,自腹主动脉采血,并分离血清后,取相同部位腓肠肌、肝组织,用酶联免疫法(Elisa)分别检测血清INS和腓肠肌、肝组织AMPKβ及ACC含量。结果与模型对照组比较,加味温胆汤高剂量组可显著降低肥胖大鼠Lee's指数及BMI(P0.05);高、中、低剂量组均可抑制长期高脂饮食所致大鼠INS含量的增高(P0.05,P0.01);各给药组均有降低肥胖大鼠腓肠肌AMPKβ、ACC含量的趋势,其中加味温胆汤低剂量组的作用尤为显著(P0.01)。结论加味温胆汤抗雄性大鼠营养性肥胖的机制与调节大鼠腓肠肌组织AMPK-ACC信号通路改善肥胖大鼠胰岛素抵抗有关。     

电针对高脂诱导胰岛素抵抗大鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c、脂肪酸合成酶的影响

目的:观察电针对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝组织固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)的影响,探讨电针治疗IR的作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机选取8只作为空白组,其余通过高脂饮食诱导IR模型,选取24只造模成功的大鼠按随机区组原则分为模型组(8只)、西药组(8只)和电针组(8只)。西药组以吡格列酮(10mg/kg)灌胃,电针组取双侧"丰隆""三阴交"穴电针治疗,1次/日,连续2周。观察各组大鼠葡萄糖输注率(GIR)、空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL),蛋白免疫印迹法检测肝组织SREBP-1c、FAS蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠GIR显著降低(P0.01),HOMA-IR显著升高(P0.01),FBG、FINS、FFA、TG、TC、LDL含量显著升高(P0.01),HDL含量显著降低(P0.01),SREBP-1c、FAS蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,电针组、西药组大鼠GIR显著升高(P0.01),HOMA-IR显著降低(P0.01),FBG、FINS、FFA、TG、TC、LDL含量显著降低(P0.05,P0.01),HDL含量显著升高(P0.01),SREBP-1c、FAS蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:电针可明显改善IR大鼠的脂质代谢紊乱,其作用机制可能与电针降低肝组织SREBP-1c、FAS的表达,由此下调脂肪酸合成相关酶的活性,使肝组织内合成TG、TC减少,改善肝组织IR有关。     

从SCAP/SREBP-1c通路探究味连及雅连对2型糖尿病大鼠的降脂作用

该研究采用高糖高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导的方法复制2型糖尿病(T2DM)大鼠模型。考察了给药后30 d各组动物胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及血清甘油三酯(TG)含量,并采用Western blot,RT-PCR法检测肝组织中固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)及其裂解激活蛋白(SCAP)表达情况,从而探讨中药黄连在改善T2DM机体胰岛素抵抗的同时,改善脂质代谢紊乱的分子机制。研究结果表明,2种黄连均能有效缓解机体胰岛素抵抗现象,降低血清TG含量,并下调肝组织SREBP-1c,SCAP的表达,其中,雅连组与模型组相比,相关蛋白及基因表达有显著性差异(P0.05,P0.01)。该结果提示,尽管雅连改善机体胰岛素抵抗作用不及味连,但降脂药效却优于味连;抑制SCAP/SREBP通路蛋白表达可能是中药黄连减少糖尿病机体脂质沉积的途径之一。     

菖蒲郁金汤化裁方对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠SREBP-1c表达和胰岛素抵抗的影响

目的观察菖蒲郁金汤化裁方对2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脏组织病理、胰岛素抵抗(IR)和固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)表达的影响。方法将32只SD大鼠分成正常组8只和模型组24只,采用高脂饮食结合链脲佐菌素(STZ)建立T2DM合并NAFLD大鼠模型。造模成功后,再将成模大鼠随机分成中药组、阳性药组、模型组各8只。中药组灌服菖蒲郁金汤化裁方药液,阳性药组灌服二甲双胍粉末混悬液,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,8周后麻醉处死取材。HE染色观察各组大鼠肝脏病理变化,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、胰岛素(INS)含量,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),RT-PCR法测定大鼠肝脏SREBP-1c的表达水平。结果与模型组相比,中药组肝脏脂肪变现象明显改善,INS和HOMA-IR水平明显降低(P0.05或P0.01),SREBP-1c在肝脏内的表达水平明显降低。结论菖蒲郁金汤化裁方对T2DM合并NAFLD大鼠有较明显的治疗作用,其作用机制可能与降低SREBP-1c的表达水平,从而减少肝脏脂肪沉积和细胞变性,并改善IR有关。     

石斛合剂对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠AMPK/TFEB信号通路自噬蛋白的影响

目的:观察石斛合剂干预后,2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/转录因子EB(TFEB)自噬信号通路蛋白表达。方法:40只雄性SD大鼠,根据体质量随机选择10只作为正常组。其余30只大鼠高脂高糖饮食喂养6周,然后腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝模型。分为正常组(10 mL·kg~(-1)·d~(-1)),模型组(10 mL·kg~(-1)·d~(-1)),二甲双胍组(100 mg·kg~(-1)·d~(-1)),石斛合剂组(11.3 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组大鼠灌胃4周。灌胃结束后,对大鼠实施安乐死。取腹主动脉血、肝组织,检测各组大鼠空腹血糖(FBG),血清中糖化血清蛋白(GSP),胰岛素(INS),甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织形态变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测AMPK/TFEB信号通路相关蛋白的表达。结果:与模型组比较,石斛合剂组与二甲双胍组大鼠的FBG,GSP下降(P0.05),INS升高(P0.05);与模型组比较,石斛合剂组与二甲双胍组大鼠HDL升高(P0.05),TC,TG,LDL含量明显降低(P0.05)。石斛合剂与二甲双胍均能一定程度上改善T2DM合并NAFLD大鼠肝脏形态。石斛合剂与二甲双胍p-AMPK/AMPK升高(P0.05),TFEB,LC3Ⅱ表达升高(P0.05)。结论:石斛合剂可通过激活AMPK/TFEB自噬信号通路来改善糖脂代谢,改善肝脏病理形态。     

橙皮苷改善肥胖小鼠糖脂代谢的机制研究

该研究阐明橙皮苷对高脂饮食诱导的肥胖小鼠糖脂代谢紊乱的干预机制。40只雄性C57小鼠,根据饮食随机分为对照组、肥胖组、橙皮苷低剂量组及高剂量组,每组各10只。喂养16周后检测各组小鼠体重、肝指数、内脏脂肪指数,评价糖代谢状况(葡萄糖糖耐量、血糖、胰岛素水平及HOMA-IR)及血脂情况;Real-time PCR法检测肝脏胰岛素信号通路(IR,IRS1,Glut2,Glut4)、脂代谢途径(SREBP-1c,FAS,ACC,PPARα)关键基因及AMPK表达水平。经过16周喂养,肥胖组小鼠明显肥胖,体脂沉积显著(P0.01),葡萄糖耐量降低(P0.05)。血糖、血脂、胰岛素水平及HOMA-IR指数均高于对照组(P0.05)。橙皮苷干预后,无论低剂量组还是高剂量组小鼠体重、血糖、血脂均较肥胖组明显降低(P0.05),血清胰岛素水平及HOMA-IR亦显著下降(P0.05)。其中大剂量组获益明显(P0.05)。橙皮苷能够上调AMPK mRNA(P0.05),继而影响胰岛素信号通路中IR,IRS1,Glut2/4的mRNA表达(P0.05),同时降低脂代谢相关基因(SREBP-1c,FAS,ACC)的表达(P0.05),并升高PPARαmRNA水平(P0.05)。大剂量组变化尤为明显(P0.05)。橙皮苷降低了肥胖、高血糖、高血脂,缓解了胰岛素抵抗,这一作用可能与其活化AMPK继而调控胰岛素信号通路及脂质代谢信号通路等密切相关。     

荞麦花叶黄酮对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及肝组织PTP1B的影响

目的:探讨荞麦花叶黄酮(FBFL)对2型糖尿病大鼠降血糖、改善胰岛素抵抗的作用及其机制.方法:雄性健康Wistar大鼠70只,随机抽取10只作为正常对照组,其余60只大鼠每天灌胃脂肪乳,第14天开始腹腔注射小剂量四氧嘧啶,隔日1次,共3次,同时继续灌胃脂肪乳.末次腹腔注射四氧嘧啶72 h后,用血糖仪测定空腹血糖和用K_(IPT)值判定胰岛素抵抗性.K_(IPT)＜正常组的60%作为2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠.将成模大鼠随机分为模型组,阳性药物组,FBFL低、中、高剂量组,连续4周.末次给药后禁食,用血糖仪测空腹血糖(FBG),用正糖钳技术判定胰岛素抵抗性,用生化分析仪测定游离脂肪酸(FFA),放免法测定血浆胰岛素(INS),免疫组织化学法检测肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,INS,FFA含量明显升高(P＜0.135,P＜0.01);大鼠葡萄糖输注速率(GIR)明显下降;肝组织PTP1B表达增加.各剂量FBFL能不同程度的改善上述指标的变化,明显改善胰岛素抵抗性,增加胰岛素敏感性,使肝组织PTP1B表达下调,并呈一定剂量依赖性.结论:FBFL对四氧嘧啶加脂肪乳所致2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗具有明显的改善作用,并呈一定剂量依赖性.     

补肾化痰法对肥胖型PCOS雌鼠AdipoR1、AMPK的影响及其调控胰岛素抵抗的作用

目的:观察补肾化痰法经APN/AMPK通路调节肥胖型PCOS大鼠胰岛素抵抗的作用及机制。方法:选取7~8周龄SD雌性大鼠,来曲唑联合高脂灌服制备肥胖型PCOS模型,以补肾化痰法治疗,放射免疫法检测大鼠血清FSH、LH、E、P、T,免疫组织化学染色法检测AdipoR1、InR,Western blotting检测p-AMPK蛋白表达水平。结果:(1)与模型对照组比较,各治疗组排卵率显著升高;中药高剂量组、中剂量组大鼠体质量增长率显著低于模型组(P0.05);(2)与模型对照组比较,中药高、中剂量组血清FSH、P、E2含量显著增高(P0.05或P0.01),中药中剂量组血清LH显著降低(P0.01),中药高、中剂量组血清T含量降低(P0.05);(3)模型对照组卵巢颗粒细胞AdipoR1、p-AMPK表达显著低于空白对照组(P0.01),而中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞AdipoR1表达明显高于模型对照组(P0.05或P0.01),中药各剂量组p-AMPK均高于模型对照组(P0.01);(4)与模型对照组比较,中药高、中剂量组FBG、Fins、HOMA-IR、INR显著下降(P0.05或P0.01),中药高、中剂量组卵巢组织胰岛素受体表达显著增高(P0.05)。结论:肥胖型PCOS雌鼠出现排卵障碍,生殖内分泌紊乱的表现,并伴随全身的糖代谢异常及胰岛素抵抗。补肾化痰法可能经APN/AMPK通路改善肥胖型PCOS的肥胖状态、生殖内分泌紊乱及胰岛素抵抗。     

昆仑雪菊提取物对糖尿病大鼠胰岛素抵抗IRS-1/PI3K/GLUT4信号通路的影响

目的:观察昆仑雪菊提取物对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠血糖、胰岛素分泌水平及胰岛素受体底物-1/磷脂酰肌醇(-3)激酶/葡萄糖转运蛋白4(IRS-1/PI3K/GLUT4)信号传导通路的影响。方法:将35只雄性STZ诱导的糖尿病Wistar大鼠随机分为5组,模型组、昆仑雪菊提取物低、中、高剂量组、吡咯列酮组,每组7只;另选7只SPF级雄性Wistar大鼠为正常组。正常组和模型组灌服生理盐水,昆仑雪菊低、中、高剂量组,分别按100,200,400 mg·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃,吡咯列酮组灌服吡咯列酮10 mg·kg~(-1)·d~(-1)。连续4周。4周后,心包外抽血,离心取血清;取胰腺组织。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠胰岛素(INS)分泌水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测骨骼肌IRS-1,PI3K,GLUT4的蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨骼肌GLUT4的mRNA表达。结果:灌胃4周后,经检测发现昆仑雪菊提取物对降低糖尿病大鼠体重作用不明显,但对空腹血糖、餐后2 h血糖具有降低作用,并在一定程度上能够促进胰岛素分泌,促进调节因子IRS-1,PI3K,GLUT4的表达,与模型组比较有显著性差异(P0.05)。结论:昆仑雪菊提取物可降低2型糖尿病大鼠血糖,促进胰岛素分泌,提高大鼠骨骼肌IRS-1,PI3K,GLUT4的表达,改善胰岛素抵抗。     

丹苘软胶囊对非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c蛋白表达的影响

目的观察丹苘软胶囊对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1c蛋白表达的影响。方法将63只SD大鼠随机选取10只为空白组,予基础饲料喂养,其余53只大鼠予高脂饲料喂养,于第8周末随机选取3只大鼠处死,验证NAFLD模型成功后,将其余50只大鼠随机分为模型组、丹苘软胶囊高剂量组、丹苘软胶囊中剂量组、丹苘软胶囊低剂量组及西药组,每组各10只。空白组及模型组予蒸馏水灌胃,丹苘软胶囊高、中、低剂量组分别予丹苘软胶囊乳化液0.456、0.228、0.114 g/m L灌胃,西药组予多烯磷脂酰胆碱胶囊乳化液132.4 mg/m L灌胃,各组大鼠灌胃容积均为0.12 m L/100 g(成人等效剂量),每日1次,连续给药4周。处死所有大鼠后取样,采用蛋白质印迹法(Western Blot)及免疫组化链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法检测各组大鼠肝脏SREBP-1c蛋白的表达。结果 Western Blot法检测,模型组SREBP-1c蛋白相对含量高于空白组(P0.05),说明造模成功;丹苘软胶囊高、中、低剂量组及西药组SREBP-1c蛋白相对含量均低于模型组(P0.05),说明丹苘软胶囊、西药治疗均有效;丹苘软胶囊中、高剂量组及西药组SREBP-1c蛋白相对含量均低于丹苘软胶囊低剂量组(P0.05);丹苘软胶囊中、高剂量组及西药组3组组间SREBP-1c蛋白相对含量比较差异均无统计学意义(P0.05)。SABC法检测,模型组大鼠SREBP-1c蛋白表达灰度值低于空白组(P0.05),说明造模成功。与模型组比较,丹苘软胶囊高、中、低剂量组和西药组大鼠SREBP-1c蛋白表达灰度值均升高(P0.05),说明丹苘软胶囊、西药治疗均有效。丹苘软胶囊高、中、低剂量组随着给药剂量的增加,SREBP-1c蛋白表达灰度值有逐步升高趋势,但组间比较差异无统计学意义(P0.05)。丹苘软胶囊高、中、低剂量组和西药组大鼠SREBP-1c蛋白表达灰度值比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论丹苘软胶囊干预NAFLD模型大鼠后可明显下调大鼠肝脏SREBP-1c蛋白表达水平,可能是丹苘软胶囊治疗NAFLD的重要机制之一。