Aurora激酶抑制剂VX-680对慢性髓系白血病细胞增殖及凋亡的影响

本研究探讨Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对白血病细胞系K562、KCL22和慢性髓系白血病（CML）患者骨髓CD34^＋细胞的增殖和凋亡的影响。利用CCK-8法观察VX-680对K562和KCL22细胞的增殖作用,细胞计数方法测定VX-680对CML的CD34^＋细胞增殖影响,Annexin V-PI凋亡检测试剂盒、流式细胞术分析VX-680对K562、KCL22细胞凋亡效应,集落形成试验检测VX-680对CML及正常供者（donor）的骨髓CD34^＋细胞集落形成能力影响。结果表明,Aurora激酶抑制剂VX-680（20-100 nmol/L）在处理细胞第3天时能明显抑制K562和KCL22细胞增殖（P〈0.01）,并能抑制CML患者骨髓CD34^＋细胞增殖,而且随着剂量增加,抑制作用增强;VX-680（20nmol/L）作用K562和KCL22细胞3天时可诱导细胞凋亡（P〈0.01）;集落形成试验表明,CML患者骨髓CD34^＋细胞在VX-680的体外处理下集落形成能力较正常骨髓CD34^＋细胞明显下降（P〈0.01）。结论：Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对慢性髓系白血病细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

不同粒径ContourSe微球栓塞肝动脉治疗兔VX-2移植性肝癌的实验研究

目的:研究不同粒径ContourSe微球对兔VX-2移植性肝癌的栓塞作用及对正常肝组织的影响,初步确定ContourSe微球肝动脉栓塞治疗肝癌的最佳粒径范围.方法:经剖腹途径将VX-2瘤粒悬液直接注入兔肝实质内建立兔VX-2移植性肝癌模型,共30只兔.用不同粒径的ContourSe微球对兔VX-2移植性肝癌模型行肝动脉栓塞治疗,根据使用ContourSe微球粒径的不同分为5组,第1组(n=6):注入1mL 0.9%氯化钠液,作为对照组;第2组(n=6):用ContourSe微球(100～300μm)栓塞;第3组(n=6):用ContourSe微球(300～500 μm)栓塞;第4组(n=6):用ContourSe微球(500～700 μm)栓塞;第5组(n=6):用ContourSe微球(700～900μm)栓塞.栓塞术前行CT扫描了解免肝肿瘤大小,栓塞术后定期处死作肝脏大体标本观察和组织学检查,了解肿瘤大小及坏死程度、正常肝组织损害情况和腹腔胜器并发症.结果:兔肝肿瘤种植成功率达100%.各组兔肝肿瘤生长率的平均值分别为,第1组:2.5450;第2组:1.3711;第3组:1.5263;第4组:1.9431;第5组:2.1699.第2组与第3组比较无明显差异(P=0.195),此2组与其余3组比较均有显著差异(P＜0.001).第2组及第3组肿瘤坏死均以重度坏死为主,尤其第2组坏死率最高.第2组免肝可见多发灶状坏死.汇管区可见胆管壁坏死,肝纤维结缔组织间隔亦可见坏死溶解改变.结论:(1)小于500μm的ContourSe微球能较有效地阻断肿瘤血供,抑制肿瘤生长;(2)100～300μmContourSe微球组虽然肿瘤坏死最明显.但可以引起正常肝组织胆道及肝内结缔组织坏死,临床使用须在超选择插管的前提下谨慎使用;(3)300 500 μmContourSe微球最适于临床肝肿瘤的栓塞治疗.     

胡椒碱对人肝癌HepG2细胞抗肿瘤活性的体外实验研究

目的 探讨胡椒碱(piperine)对人HpeG2肝癌细胞株的增殖、杀伤和细胞凋亡的影响,为肝癌的治疗提供理论依据.方法 体外培养的HpeG2细胞,采用MTT比色法检测不同浓度胡椒碱对体外培养的HepG2细胞和新分离的外周血白细胞的增殖抑制作用.Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,采用流式细胞术测定胡椒碱对HepG2细胞的凋亡.结果 胡椒碱对HepG2细胞增殖的抑制率随着浓度的升高而增加,半量抑制浓度(IC50)为15.13±3.21 μmol/L,低于其对外周血白细胞的抑制率(64.52±5.32 μmol/L).Hoechst 33258染色后,胡椒碱处理癌细胞组表现出典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测20 μmol/L的胡椒碱处理HepG2细胞24 h后,细胞凋亡率由对照组的2.89%上升到了21.76%.结论 胡椒碱具有抑制HepG2细胞增殖和诱导凋亡的抗肿瘤活性,有应用于肝癌治疗的潜在价值.     

槲皮素抑制肝癌HepG2细胞的增殖及促凋亡机制的研究

目的观察槲皮素对HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法人肝癌HepG2细胞系,分为6组,A～E组加入终浓度分别为12.5,25.0,50.0,100.0,200.0μmol/L槲皮素,F组为空白对照组,加入等量营养液。采用MTT法及流式细胞检测技术检测各组人肝癌HepG2细胞对槲皮素的敏感性,应用免疫细胞化学技术检测细胞中Bcl-2及Bax蛋白的表达情况。结果槲皮素对肝癌HepG2细胞的增殖呈浓度依赖性的抑制作用,作用48h后,A～E组抑制率与凋亡率高于F组,差异均有统计学意义(P<0.05);槲皮素作用HepG2细胞24h后,D组G1期细胞比率高于F组,差异有统计学意义(P<0.05),S和M期细胞比率差异无统计学意义(P>0.05);作用48h后,D组Bcl-2和Bax表达灰度值与F组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素对肝癌HepG2细胞具有生长抑制作用,并通过激活线粒体凋亡途径来促进细胞凋亡。     

肝癌细胞HepG2外泌体对其自身生长行为的影响及其机制研

目的探讨肝癌细胞HepG2外泌体对细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响及其机制.方法培养肝癌细胞HepG2并用差速离心法提取其外泌体,采用粒径分析、透射电镜、蛋白质印迹法(Western blot)等方法对其进行鉴定.将外泌体与肝癌细胞HepG2共培养,采用细胞划痕实验比较其对细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验...     

肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞对肝癌HepG2细胞杀伤的体外研究

目的：探讨肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞（DC）作为佐剂对肝癌HepG2细胞系的杀伤作用。方法：反复冻融法裂解培养的肝癌HepG2细胞提取细胞抗原,然后致敏Dc,观察后者对自身T淋巴细胞增殖的影响以及T细胞对HepG2细胞的杀伤作用。结果：肝癌HepG2细胞裂解物致敏的DC能显著促进T细胞的增殖。后者对细胞有明显的杀伤效应。结论：肿瘤细胞裂解物提取方法简单,其作为细胞抗原致敏DC制备的肿瘤疫苗能保证抗肿瘤免疫反应的全面性和有效性,并降低可能出现的肿瘤免疫耐受,将有很好的临床应用前景。     

青蒿琥酯诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其机制

目的探讨青蒿琥酯作用人肝癌细胞株HepG2后,对细胞凋亡的影响。方法常规培养人肝癌细胞株HepG2,设立空白对照组、青蒿琥酯不同浓度组(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml),对HepG2作用48h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡率,同时采用瑞氏染色法观察细胞凋亡;用RT-PCR检测caspase-3mRNA的表达,采用灰度分析比较表达的变化。结果青蒿琥酯(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml)处理HepG2细胞48h,呈浓度依赖性诱导细胞凋亡,且当青蒿琥酯浓度在6.25μg/ml以上时,各组凋亡率与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01),瑞氏染色后光镜下可见处理组细胞发生凋亡形态学改变。与对照组比较,各实验组caspase-3的表达显著增加(P<0.01)。结论青蒿琥酯能显著诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与增强凋亡相关基因caspase-3的表达有关。     

兔VX-2肝肿瘤MRI表现和病理对照研究

目的:评价MRI对兔VX-2肝癌存活肿瘤、肿瘤坏死和出血的显示能力。方法:10只兔肝内接种VX-2肝癌后14 d行MRI扫描。检查后处死动物行病理检查。MRI表现与病理结果对照。结果:(1)MRI表现:10只兔共有病灶18个。病灶在SE T1WI上为低信号,T2WI上为不均匀高信号。动态增强早期病灶有不均匀强化,以环状强化为主,增强晚期仍见强化。(2)病理:所有标本均有不同程度的凝固性坏死。6个直径大于1．5 cm的病灶内见凝固性坏死伴出血。(3)MRI与病理对照,T1WI低信号为肿瘤组织、坏死; T2WI高信号为肿瘤组织、坏死伴出血,低信号为凝固性坏死。动态增强有强化区为肿瘤组织,无强化为坏死、出血。结论:(1)兔VX- 2肝癌可发生自发性凝固性坏死和出血等改变。(2)MRI,尤其是动态增强能准确显示兔VX-2肝癌的肿瘤组织、坏死和出血。     

辐射诱导多药耐药肝癌细胞HepG2/ADM凋亡的实验研究

目的研究联合应用放、化疗对多药耐药肝癌细胞HepG2/ADM凋亡的影响并探讨诱导凋的机制。方法比较放化疗、单纯放疗、单纯化疗的诱导凋亡作用,将HepG2/ADM分为6组,比较各组凋亡率;应用RT-PCR法检测各组HepG2/ADM细胞p53、bcl-2和bax的表达。结果经处理因素作用后,组1~6HepG2/ADM细胞凋亡率分别为2.8±0·3%,5·2±0·5%,10·9±2·3%,31·7±4·1%,11·7±2·8%,35·2±4·5%。放化疗与单纯化疗相比诱导HepG2/ADM凋亡率明显增高(P<0·05)。RT-PCR检测组1~6p53表达分别为:0·22±0·04、0·23±0·02、0·31±0·04、0·55±0·02、0·35±0·04、0·57±0·05;bcl-2表达分别为:0·34±0·03、0·31±0·04、0·25±0·02、0·14±0·02、0·26±0·03、0·10±0·03;bax表达分别为:0·21±0·02、0·25±0·02、0·29±0·03、0·38±0·03、0·29±0·03、0·41±0·06。结论放化疗联合应用能够显著增加耐药细胞HepG2/ADM凋亡率,这种作用与p53、bax、bcl-2表达调节有关。     

肉桂酰胺诱导宫颈鳞状细胞癌siha细胞凋亡并抑制其增殖及血管生成的机制研究

目的 观察肉桂酰胺对宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞增殖、凋亡及血管生成的影响,并探讨其对PI3K/AKT信号通路的调控作用。方法 体外培养SiHa细胞,采用不同浓度肉桂酰胺(0、5、10、20μmol/L)处理;分别采用MTT实验、克隆形成实验、流式细胞术检测肉桂酰胺体外对SiHa细胞活力、增殖能力、凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p-AKT、AKT、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达。使用不同浓度(0、5、10、20μmol/L)肉桂酰胺处理斑马鱼胚胎72 h,并采用定量碱性磷酸酶染色法检测其对斑马鱼胚胎肠下静脉(SIV)数量的影响。结果 MTT检测显示,肉桂酰胺呈时间和剂量依赖性抑制SiHa细胞活力,差异有统计学意义(P<0.05)。克隆形成实验显示,与对照组比较,10、20μmol/L肉桂酰胺组处理24、48、72 h后SiHa细胞克隆形成率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果提示,与对照组比较,5、10、20μmol/L肉桂酰胺组处理24、48、72 h后SiHa细胞凋亡率显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。蛋白质印迹法检测显...     

氩氦刀冷冻治疗肝肿瘤对兔肾功能的影响

目的探讨冷冻治疗肝肿瘤对肾脏功能的影响。方法24只荷瘤兔随机分成3组:A组(氩氮刀手术治疗单次组n=8),B组(氩氮刀手术治疗二次组,n=8),C组为假手术对照组(n=8)。分别于术前,术后3、7、14天观察血中的尿素氮(BUN),肌酐(Cr)和肾脏的病理变化。结果A、B组术后第三天血尿素氮升高,肌酐升高,肾小管上皮细胞发生颗粒样变性。术后第7天A组肌酐恢复正常,14天后A、B两组各项指标均恢复正常。C组无明显变化。结论氩氦刀冷冻治疗肝肿瘤对肾脏有影响,但是影响为可逆性的,暂时性的损害。     

塞来昔布联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移与侵袭能力的影响

目的 评价塞来昔布联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移与侵袭能力的影响.方法 采用MTT法检测药物对HepG2细胞增殖的抑制率;通过划痕实验、Transwell实验评价药物对HepG2细胞迁移与侵袭作用的影响;采用Western blot法检测相关蛋白E-cadherin、COX-2、Notch1、Snail的表达....     

GTF2H2的核苷酸切除修复功能对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨通用转录因子ⅡH亚基2(GTF2H2)在肝癌细胞中的核苷酸切除修复(NER)功能及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法使用siRNA构建GTF2H2敲低的肝癌细胞模型,采用细胞计数试剂盒(CCK8)实验检测肝癌细胞的增殖能力;流式细胞术检测肝癌细胞株的凋亡情况。定量实时聚合酶链式反应(q-RT-PCR)检测增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡蛋白半胱天冬酶(Caspase-3)的表达情况。进一步构建肝癌细胞的紫外线(UV)照射模型,分析GTF2H2敲低后UV照射引起的NER的标志物环丁烷嘧啶二聚体(CPD)和嘧啶(6-4)嘧啶酮光产物(6-4PP)的变化。结果GTF2H2敲低的肝癌细胞增殖能力相对明显增强增殖蛋白PCNA的表达相对增多。相反,凋亡能力相对减弱凋亡蛋白Caspase-3的表达相对降低。而GTF2H2敲低后,UV照射所致的NER标志物CPD和6-4PP含量相对增加。结论GTF2H2在肝癌细胞中发挥了NER功能,抑制了肝癌细胞的增殖,促进其凋亡,是肝癌发生的一个潜在抑制因子。     

FH535抑制人肝癌细胞HepG2增殖及cyclin D表达

目的 探讨β-catenin抑制剂FH535对人肝癌细胞系HepG2增殖的影响及可能机制.方法 HepG2细胞分为对照组和FH535用药组,使用改良3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法(MTS)检测FH535对HepG2细胞增殖的影响,以Western blot法检测HepG2细胞β-catenin以及cyclin D蛋白表达水平,用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测HepG2细胞cyclin D mRNA水平.结果 FH535能够显著抑制HepG2细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性.与对照组相比,FH535给药组HepG2细胞内β-catenin蛋白表达无差异.FH535给药组细胞wnt/β-catenin信号通路的靶基因cyclin D的mRNA和蛋白的表达显著下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.0001).结论 FH535通过抑制cyclin D mRNA及cyclin D蛋白表达而抑制HepG2细胞增殖.     

5-氟尿嘧啶-纳米金复合体抑制HepG2细胞的增殖

目的:5-氟尿嘧啶-纳米金复合体(5-fluorouraeil-gold nanoeonjugate,5-FU-GNP)的合成及其时HepG2细胞增殖抑制作用的观察.方法:采用化学合成法制备5-FU-GNP,并通过荧光淬灭实验和动态激光散射仪对其进行鉴定.细胞实验分为5-Fu处理组、5-FU-GNP处理组和空白对照组.将HepG2细胞种于放有盖玻片的6孔板.培养24 h后各组分别加入1.25 ms/mL的5-FU溶液、1.25 mg/mL的5-FU-GNP溶液和无血清培养液2 mL,继续培养24 h后固定,原子力显微镜(AFM)观察药物对HepG2细胞的增殖抑制作用;MTT比色法检测各组HepG2细胞增殖抑制率.结果:5-FU(2.5 ms/mL)的荧光强度为23 620.7±752.9,5-FU-GNP(2.5 mg/mL)荧光强度为1 909.0±283.9(P<0.01);GNP粒径为(13.20 ±1.15)nm,5-FU-GNP粒径为(21.67 ±3.64)nm(P<0.05).AFM观察到药物处理后HepG2细胞膜内陷,粗糙度增加,表面孔径增大,出现较大的孔洞,以5-FU-GNP处理组变化更为明显.MTT比色法结果显示5-FU-GNP处理组HepG2细胞增殖抑制率为(52.07±1.07)%,明显高于5-FU处理组:(36.78±3.24)%(P<0.01).结论:本实验成功合成了5-FU-GNP,原子力显微镜及MTT检测结果证实其较单纯5-FU对HepG2细胞有更强的增殖抑制作用.     

幽门螺杆菌内毒素分子对肝细胞Toll样受体2表达的影响

目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)内毒素分子对肝细胞Toll样受体2表达的影响.方法:Hp培养及提取内毒素,应用体外培养技术培养肝癌细胞株HepG2,将内毒素和HepG2混合孵育,采用免疫组化法检测Toll样受体2在细胞上表达的水平.结果:不同浓度的内毒素作用于HepG2细胞24 h后均有Toll样受体2表达,不同浓度内毒素实验组肝组织上的Toll样受体2表达均比对照组明显增强.结论:脂多糖可能与肝细胞Toll样受体2结合,促使肝细胞Toll样受体2表达上调,参与肝脏疾病的发病机制.     

负载抗原的DC与CIK共培养对多药耐药肝癌细胞HepG2/ADM的杀伤作用及其机制研究

目的观察负载抗原的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对高表达P-糖蛋白(Pgp)的多药耐药(MDR)的肝癌细胞株HepG2/ADM细胞的杀伤作用和机制研究。方法用常规方法诱导健康志愿者外周血中单个核细胞产生DC和CIK细胞,制备HepG2/ADM细胞冻融抗原后冲击DC,并与CIK细胞分别共培养24、48、72、96h,并将未负载抗原的DC和CIK细胞共培养作为对照。采用流式细胞术鉴定DC、CIK细胞的表型,采用CCK-8试剂检测HepG2/ADM细胞的增殖活力。用RT-PCR检测各组细胞内mdr-1mRNA的水平变化,Western blot检测细胞内P-gp蛋白水平的变化。结果与未负载抗原的DC-CIK相比,负载抗原的DC-CIK表面分子表达明显增高(P0.05),对HepG2/ADM细胞增殖活力抑制作用更加明显(P0.05)。RT-PCR和Western blot结果分别显示,随着作用时间的延长,未负载抗原的DC-CIK和负载抗原DC-CIK的HepG2/ADM细胞内的mdr-1mRNA和P-gp蛋白水平分别都有明显的降低(P0.05),而且后者的抑制作用更明显(P0.05)。结论经抗原冲击的DC和CIK共培养可以明显提高对多药耐药HepG2/ADM细胞株的杀伤活性,其机制可能与抑制与MDR密切相关的mdr-1基因和及其编码的P-gp蛋白水平有关。     

小白菊内酯增强肝癌HepG2细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的:评价小白菊内酯联合顺铂对肝癌HepG2细胞的协同作用.方法:HepG2细胞经小白菊内酯和(或)顺铂处理后,以CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测Caspase-3,8,9和PARP的变化.结果:小白菊内酯联合顺铂能够明显抑制HepG2细胞的增殖,与单独用药组相比有明显的协同作用.小白菊内酯可以增强顺铂诱导的HepG2细胞凋亡.小白菊内酯和顺铂联合能够活化Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9,引起PARP的切割.结论:小白菊内酯和顺铂联用具有协同作用,能抑制HepG2细胞增殖并且诱导细胞凋亡,其作用机制可能与caspase系统活化有关.     

三氧化二砷抑制大肠癌SW620细胞增殖和转移的实验研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）抑制大肠癌SW620细胞增殖和转移的机制。方法将不同浓度的As2O3（0,1,2,4,8μmol/L）作用于人的大肠癌SW620细胞,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组大肠癌细胞NOTCH1mRNA表达,免疫细胞化学（SP法）检测各组CD133,KI67,血管内皮生长因子-C（VEGF-C）蛋白的表达。结果随着As2O3浓度的增加,NOTCH1mRNA、KI67、VEGF-C、CD133的表达逐渐减少,CD133与Notch1呈正相关,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 As2O3具有抑制大肠癌SW620细胞株细胞增殖和转移的作用,其机制可能与下调Notch1,以及对CD133、KI67、VEGF-C的抑制有关。