Nrf2蛋白在中波紫外线照射HaCaT细胞中的光保护作用

目的探讨Nrf2对中波紫外线(UVB)致HaCaT细胞光损伤的保护作用及其作用机制。方法将培养的HaCaT细胞分为对照组、UVB组、Nrf2组、Nrf2 + UVB组, Nrf2组、Nrf2 + UVB细胞感染Nrf2基因过表达慢病毒, UVB组、Nrf2 + UVB组细胞以30 mJ/cm2的UVB照射30 s, 继续培养24 h, 观察UVB照射后HaCaT细胞形态的变化, Western印迹检测各组Nrf2蛋白水平, CCK8法检测各组细胞生存率, 流式细胞仪检测各组细胞活性氧(ROS)水平, 生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平。多组间均数比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用LSD-t检验。结果对照组HaCaT细胞形态为多角形、呈簇集状生长, UVB照射后细胞出现皱缩、变圆, 漂浮细胞数增多, 贴壁数量明显减少。对照组、UVB组、Nrf2组、Nrf2 + UVB组Nrf2蛋白相对表达水平分别为1.84 ± 0.047、0.63 ± 0.082、2.19 ± 0.168、1.43 ± 0.069, 差异有统计学意义(F = 64.81, P < 0.05), Nrf...     

维生素B_2修饰的纳米酶对紫外线诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的作用及机制

目的探讨维生素B_2修饰的纳米酶(VB_2-IONzymes)对中波紫外线(UVB)照射后HaCaT细胞氧化应激损伤的作用及可能的机制。方法 UVB照射诱导HaCaT细胞光损伤模型,将培养的HaCaT细胞分为空白组、UVB照射组、VB_2-IONzymes组、UVB+VB_2-IONzymes组。CCK-8检测HaCaT细胞增殖活性,酶生化法检测细胞醛缩酶(MDA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,ELISA法检测细胞中Nrf2及HO-1蛋白水平。结果 UVB照射组HaCaT细胞增殖活性显著降低,细胞MDA水平升高,SOD水平降低,Nrf2及HO-1蛋白表达下降,与空白组相比,差异均有统计学意义(P0.01);加入VB_2-IONzymes后,与UVB照射组相比,细胞活力明显提高(P0.05),细胞MDA水平显著降低,细胞内SOD水平、Nrf2及HO-1蛋白表达均显著上升(P均0.01)。结论 VB_2-IONzymes有抗氧化应激作用,其机制可能与促进Nrf2和HO-1表达相关。     

Nrf2蛋白在中波紫外线照射HaCaT细胞中的光保护作用

【摘要】 目的 探讨Nrf2对中波紫外线（UVB）致HaCaT细胞光损伤的保护作用及其作用机制。方法 将培养的HaCaT细胞分为对照组、UVB组、Nrf2组、Nrf2 + UVB组，Nrf2组、Nrf2 + UVB细胞感染Nrf2基因过表达慢病毒，UVB组、Nrf2 + UVB组细胞以30 mJ/cm2的UVB照射30 s，继续培养24 h，观察UVB照射后HaCaT细胞形态的变化，Western印迹检测各组Nrf2蛋白水平，CCK8法检测各组细胞生存率，流式细胞仪检测各组细胞活性氧（ROS）水平，生化法检测超氧化物歧化酶（SOD）水平。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果 对照组 HaCaT 细胞形态为多角形、呈簇集状生长，UVB照射后细胞出现皱缩、变圆，漂浮细胞数增多，贴壁数量明显减少。对照组、UVB 组、Nrf2组、Nrf2 + UVB组Nrf2蛋白相对表达水平分别为1.84 ± 0.047、0.63 ± 0.082、2.19 ± 0.168、1.43 ± 0.069，差异有统计学意义（F = 64.81，P < 0.05），Nrf2组水平高于对照组（t = 14.82，P < 0.05）；4组细胞生存率分别为98.00% ± 2.39%、24.40% ± 2.98%、71.63% ± 3.39%、43.38% ± 3.39%，差异有统计学意义（F = 236.66，P < 0.05），UVB 组细胞活力低于对照组（t = 33.34，P < 0.05）和Nrf2 + UVB组（t = 10.07，P < 0.05）；4组细胞的相对ROS含量分别为1.27 ± 0.10、5.65 ± 0.19、2.10 ± 0.73、3.67 ± 0.19，差异有统计学意义（F = 481.39，P < 0.05），UVB组高于对照组（t = 33.68，P < 0.05）和Nrf2 + UVB组（t = 12.47，P < 0.05）。4组细胞SOD水平差异有统计学意义（F = 170.76，P < 0.05），UVB组低于对照组（t = 11.25，P < 0.05）和Nrf2 + UVB组（t = 17.52，P < 0.05）。4组细胞IL-6水平差异有统计学意义（F = 532.34，P < 0.05），UVB 组高于对照组（t = 28.48，P < 0.05），Nrf2 + UVB组低于UVB 组（t = 27.82，P < 0.05）。4组细胞TNF-α水平差异无统计学意义（F = 2.02，P = 0.19）。结论 Nrf2可以通过降低细胞内ROS水平，提高内源性抗氧化酶SOD的活性，保护细胞免受UVB照射引起的氧化损伤。     

外源性胆绿素对中波紫外线诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用

目的 探讨外源性胆绿素对中波紫外线（UVB）照射的HaCaT细胞的保护作用及其机制。方法 将培养的HaCaT细胞分为对照组（不加胆绿素,不照射UVB）、UVB组（30 mJ/cm2 UVB照射）和100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组（分别于30 mJ/cm2 UVB照射前1 h加入相应浓度胆绿素）,处理完成后继续培养24 h,观察HaCaT细胞形态变化,CCK8法检测各实验组细胞生存率。Western 印迹检测抗氧化信号分子Nrf?2蛋白及光损伤信号分子基质金属蛋白酶1（MMP?1）和MMP?3蛋白表达。结果 CCK8法结果显示,UVB组HaCaT细胞活力低于对照组（P < 0.05）,在加入100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L 胆绿素预处理后,细胞生存率逐渐升高,与UVB组比较,差异有统计学意义（均P < 0.05）。Western印迹显示,UVB组MMP?1（1.150 ± 0.187）、MMP?3（0.979 ± 0.054）蛋白表达较对照组（0.116 ± 0.018、0.636 ± 0.035）升高（均P < 0.01）,而100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组MMP?1（0.825 ± 0.139、0.313 ± 0.047和0.286 ± 0.036）、MMP?3（0.888 ± 0.017、0.672 ± 0.042和0.569 ± 0.037）蛋白表达较UVB组降低（均P < 0.05）。UVB组Nrf?2蛋白（0.906 ± 0.034）较对照组（1.242 ± 0.141）表达降低（P < 0.05）,100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组Nrf?2蛋白表达（1.556 ± 0.112、1.897 ± 0.234和2.035 ± 0.274）较UVB组升高（均P < 0.01）。结论 外源性胆绿素对UVB诱导的HaCaT细胞损伤起保护作用,该作用可能与Nrf?2抗氧化信号通路有关。     

miRNA-7在中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨微小RNA-7(microRNA-7,miRNA-7)对中波紫外线(UVB)照射诱导的皮肤氧化应激损伤的保护性作用及其作用机制。方法建立UVB照射诱导的人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT)氧化应激损伤模型,脂质体转染法过表达miR-7,并设立阴性对照组(miR-NC)和空白对照组。CKK-8法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,荧光法检测细胞内活性氧自由基(ROS)的含量,Real-time PCR和Western blot检测细胞中miR-7、Keap1及Nrf2 mRNA表达。结果与空白对照组相比,UVB模型组HaCaT细胞活性、SOD和GSH-Px活性显著下降(P均0.05),ROS含量显著上升(P0.05)。miR-7过表达能显著增加HaCaT细胞活性、SOD和GSH-Px活性,同时抑制Keap1蛋白的表达,增加Nrf2蛋白表达(P均0.05),siRNA-Nrf2转染后能显著抑制Nrf2表达(P0.05),进而逆转miR-7对细胞的保护作用。结论 miR-7能削弱UVB作用下HaCaT细胞的氧化应激损伤,其机制可能与Keap1-Nrf2信号通路的活化有关。     

双氢青蒿素对UVB诱导的人皮肤HaCaT细胞凋亡的保护作用

目的:明确双氢青蒿素(DHA)对UVB诱导人皮肤HaCaT细胞凋亡的保护作用。方法:将体外培养的HaCaT细胞分为空白对照组,UVB照射组和UVB+DHA(20、40、60、80μmol/L)组,采用MTT法检测细胞系的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR法检测抗凋亡基因survivin和促凋亡基因caspease-3(激活型)mRNA水平,Western检测相关蛋白表达水平。结果:30 mJ/cm~2 UVB照射24 h后,UVB组和UVB+DHA(20、40、60、80μmol/L)组细胞的增殖率分别为空白对照组的(50.13±2.42)%,(60.23±2.30)%,(69.24±3.19)%,(79.37±2.47)%和(70.41±2.24)%。UVB组和UVB+60μmol/L DHA组中HaCaT细胞凋亡率分别为(46.7±3.2)%和(23.71±1.2)%。与UVB组比较,UVB+60μmol/L DHA组中HaCaT细胞caspase-3 mRNA及蛋白表达降低、survivin mRNA及蛋白表达升高。结论:DHA可抑制UVB所致HaCaT细胞的凋亡,其机制可能与survivin和caspase-3有关。     

曲克芦丁对UVB诱导HaCaT细胞损伤的保护作用

目的研究曲克芦丁对中波紫外线(UVB)诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用及机制。方法将培养的HaCaT细胞分为空白对照组、UVB组、曲克芦丁组、曲克芦丁+UVB组。其中UVB组、曲克芦丁+UVB组予50m J/cm~2的UVB照射,曲克芦丁组、曲克芦丁+UVB组分别加入不同浓度的曲克芦丁干预。用CCK-8法检测细胞增殖能力。Hoechst染色法检测细胞凋亡。Western blot法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白p-P38,p-JNK,p-ERK,以及激活蛋白-1(AP-1)的组件c-Fos,c-Jun的表达情况。结果 CCK-8法提示,5~10μmol/L的曲克芦丁对UVB诱导的HaCaT细胞光损伤有较好的保护作用(P0.05)。Hoechst染色显示,UVB组凋亡细胞较空白对照组增多,曲克芦丁+UVB组凋亡细胞较UVB组减少。Western blot法提示UVB照射后HaCaT细胞p-P38,p-ERK,p-JNK,p-c-Jun及c-Fos水平升高,曲克芦丁+UVB组有不同程度下降。结论曲克芦丁对UVB诱导的HaCaT细胞光损伤有一定的保护作用。     

枸杞多糖对中波紫外线照射HaCaT细胞低氧诱导因子1α、血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的 探讨枸杞多糖对中波紫外线(UVB)照射HaCaT细胞低氧诱导因子1cα(HIF-1cα)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达.方法 将常规培养的HaCaT细胞,分为对照组和枸杞多糖给药组(12.5、25.0、50.0、100.0 μg/ml浓度),各组在给药4h后同时进行不同强度UVB(0、20、40、60 mJ/cm2)照射,培养24 h.用CCK-8法检测细胞生存率.酶生化法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性;RT-PCR及Western印迹检测HIF-1α、VEGF基因及蛋白的表达.结果 对照组同照射剂量比,枸杞多糖(12.5、25.0、100.0 μg/ml浓度)各组不同程度提高UVB照射损伤细胞的生存率(P＜0.05),以50.0.μg/ml枸杞多糖组升高最明显,差异有统计意义(P＜ 0.01).枸杞多糖各给药组SOD活性以50.0 μg/ml SOD活性升高最明显,差异有统计学意义(P＜0.01).随着UVB照射剂量(20、40、60 mJ/cm2)增加,HIF-1α、VEGF基因、蛋白的表达也逐渐增高,与对照组相比,50.0 μg/ml枸杞多糖给药组能够有效降低细胞内HIF-1cα、VEGF基因及蛋白的表达,差异有统计意义(P＜0.05).结论 枸杞多糖通过对HaCaT细胞内HIF-1α、VEGF基因及蛋白表达的影响,可能参与预防UVB照射损伤的过程.     

紫檀芪对中波紫外线照射的HaCaT细胞抗氧化物酶表达及活性的影响

目的 探讨紫檀芪对HaCaT细胞急性中波紫外线（UVB）损伤的防御作用及相关机制。方法 MTS法和流式细胞仪检测不同浓度紫檀芪作用后HaCaT细胞增殖活性及凋亡与坏死率,筛选无毒性紫檀芪浓度。HaCaT细胞随机分为对照组（不做任何处理）、UVB组和2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪组及2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪 + UVB组。Western印迹法检测紫檀芪和UVB处理前后HaCaT细胞内Nrf2核转位情况,定量PCR检测过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）的表达,ELISA检测CAT和SOD活性。结果 MTS法和流式细胞仪检测结果显示,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪对HaCaT细胞无毒性作用。对照组Nrf2胞质蛋白1.03 ± 0.08、胞核蛋白1.04 ± 0.11;与对照组比较,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪组Nrf2胞质蛋白和胞核蛋白均无明显变化,UVB组Nrf2胞质蛋白无明显变化,但Nrf2胞核蛋白显著增加（1.77 ± 0.08,q = 17.24,P < 0.01）。与对照组及UVB组比较,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪 + UVB组Nrf2胞质蛋白浓度均显著下降（0.86 ± 0.10、0.87 ± 0.11、0.46 ± 0.11,均P < 0.05）,胞核蛋白浓度则显著升高（2.38 ± 0.11、2.57 ± 0.11、2.07 ± 0.13,均P < 0.01）。qPCR显示,与对照组相比,UVB照射对CAT mRNA表达有明显的抑制作用（P < 0.05）,对SOD mRNA表达则无明显影响（P > 0.05）,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪组CAT和SOD的表达亦均无明显变化（P > 0.05）。然而,2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪可减轻UVB对CAT表达的抑制（P < 0.05）,并上调SOD的表达（P < 0.05）。ELISA显示,UVB照射可显著降低HaCaT细胞内CAT和SOD活性（均P < 0.001）,2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪可减轻UVB对CAT和SOD活性的抑制作用（P < 0.05）,但其活性仍明显低于对照组（P < 0.05）。结论 紫檀芪可通过激活Nrf2通路,上调其下游抗氧化物酶CAT、SOD表达,防御HaCaT细胞急性UVB损伤。     

柴达木枸杞多糖对UVB诱导人HaCaT细胞氧化损伤及凋亡相关蛋白的影响

目的观察枸杞多糖对中波紫外线(UVB)辐射后人角质形成(HaCaT)细胞的氧化损伤及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)表达的影响。方法超声辅助水提法制备枸杞多糖(LBP)粉末,体外培养HaCaT细胞,随机分为空白对照组、UVB照射组(UVB 30m J/cm~2辐射40min)、UVB+LBP组(UVB 30m J/cm~2辐射40min+LBP 1mg/m L),照射前12h加入LBP,照射结束后继续培养20h,倒置显微镜观察细胞形态;MTS法检测各组细胞吸光度值(A值);酶生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化氢酶(CAT)活力和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量和丙二醛(MDA)含量;Western blot法测定各组细胞p38MAPK,caspase-8,caspase-3和Bcl-2的表达水平。结果与对照组相比,UVB照射组细胞形态明显异常,漂浮的死细胞明显增多;与UVB照射组相比,UVB+LBP组细胞的形态趋于正常,漂浮的死细胞明显减少。UVB照射组较对照组细胞吸光度(A值)明显降低(P0.05);UVB+LBP组细胞吸光度较UVB照射组明显升高(P0.05)。UVB照射组SOD活力、CAT活力、GSH-Px含量较对照组降低,MDA含量较对照组升高(P0.05);UVB+LBP组细胞SOD活力、CAT活力、GSH-Px含量较UVB照射组升高,MDA含量较UVB照射组降低(P0.05)。UVB照射组p38MAPK,caspase-8,caspase-3蛋白表达量明显高于对照组,Bcl-2表达量明显低于对照组(P0.05);与UVB照射组相比,UVB+LBP组HaCaT细胞p38MAPK,caspase-8,caspase-3表达水平降低,Bcl-2表达水平升高(P0.05)。结论枸杞多糖可抑制UVB辐射后HaCaT细胞的氧化损伤,并下调p38MAPK,caspase-8,caspase-3及上调Bcl-2的表达水平。     

黑果枸杞水提取物抑制UVB辐射后HaCaT细胞的凋亡及p16、p53蛋白表达

目的：明确黑果枸杞水提取物对中波紫外线(UVB)辐射引起的HaCaT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达的影响。方法： 体外培养HaCaT细胞,分为对照组、UVB组、UVB+黑果枸杞水提取物组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2 UVB,黑果枸杞水提取物浓度为2 mg/mL。流式细胞仪检测各组UVB照射后24 h细胞凋亡率,Western blot检测各组HaCaT细胞p16、p53蛋白的表达水平。结果：与对照组（6.12±1.19）%比较,UVB组HaCaT细胞凋亡率为(74.89±3.90)%、UVB+黑枸杞水提取物组为（57.52±2.93）%,差异有统计学意义（P<0.05）。对照组p16和p53蛋白水平为0.1±0.03和0.21±0.07,UVB组为0.28±0.06和0.5±0.04、UVB+黑枸杞水提取物组为0.15±0.025和0.25±0.01,差异均有统计学意义（Ps<0.05）。结论：黑果枸杞水提物可抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡以及p16、p53蛋白表达。     

Caspase-3、Survivin在UVB诱导HaCaT凋亡细胞中的表达

目的探讨Caspase-3、Survivin在UVB诱导HaCaT凋亡细胞中的作用。方法研究对象为人角质形成细胞HaCaT细胞,实验分为正常对照组、10、20、40、80 m J/cm^2中波紫外线组(UVB)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察增殖能力;流式细胞仅(FCM)实验检测细胞凋亡;实时定量PCR、Western-blot检测细胞内的Survivin、Caspase-3表达水平。结果与正常对照组相比,NB-UVB照射组细胞增殖抑制作用及凋亡明显增强(P<0.05),并随着照射剂量的增加,其细胞凋亡作用增加。同时与正常对照组相比,不同UVB照射剂量组Caspase-3表达均增强,其表达增强程度随着照射剂量的增加而增加,与正常对照组相比,10 m J/cm^2照射组,细胞表达Survivin水平最高(P<0.05),20 m J/cm^2组Survivin表达水平下降,稍低于对照组水平,40、80 m J/cm^2组Survivin进一步下降,较对照组下降明显(P<0.05)。结论 Survivin、Caspase-3参与了UVB诱导HaCaT凋亡细胞。Survivin表达水平与UVB辐射剂量有关。     

姜黄素对紫外线照射后HaCaT细胞内Nrf2核转位的激活作用

目的:明确姜黄素对急性紫外线损伤的HaCaT细胞内Nrf2核转位的影响。方法:1μM、2.5μM、5μM姜黄素与细胞共培养,UVA、UVB照射后Western blot法检测各实验组HaCaT细胞内Nrf2核转位情况。结果:姜黄素预处理后照射UVA和UVB,Nrf2胞质蛋白的浓度随姜黄素的浓度升高而下降,胞核蛋白浓度则随其升高而升高(P0.05)。结论:姜黄素对急性紫外线损伤的HaCaT细胞内Nrf2核转位有激活作用。     

紫檀芪对不同波长紫外线照射后HaCaT细胞内Nrf2与Bach1的平衡关系影响研究

目的:探讨紫檀芪是否影响不同波长紫外线照射后HaCaT细胞内Nrf2与Bach1的平衡关系。方法:用不同浓度紫檀芪(0、2.44、4.88、9.75、19.5、39、78、156μmol/L)处理HaCaT细胞后,采用MTS法检测不同浓度紫檀芪对细胞增殖的影响,从而筛选出适宜的浓度进行后续实验;Western-blot检测紫檀芪对Nrf2和Bach1表达的调控;紫外比色法检测细胞内蛋白羰基含量;TBA法检测细胞内MDA含量。结果:MTS结果显示,当紫檀芪浓度为4.88μmol/L时对细胞增殖无影响;Western-blot结果显示UVA可引起Nrf2胞质蛋白减少(q=5.64,P0.05),胞核蛋白增多(q=16.38,P0.01),UVB不引起Nrf2胞质蛋白减少(q=1.86,P0.05),可引起胞核蛋白的含量升高(q=17.24,P0.01),添加紫檀芪再进行UVA/UVB照射,Nrf2胞质蛋白明显减少(q_(UVA)=8.27,qUVB=6.90,P0.05),胞核蛋白明显增加(q_(UVA)=17.07,qUVB=36.30,P0.01)。同时,UVA、UVB均可引起Bach1胞质蛋白增多(q_(UVA)=34.81,qUVB=29.25,P0.01),胞核蛋白减少(q_(UVA)=27.48,qUVB=20.68,P0.01),添加紫檀芪再进行UVA/UVB照射,Bach1胞质蛋白明显增多(q_(UVA)=66.48,qUVB=210.20,P0.01),胞核蛋白明显减少(q_(UVA)=88.52,qUVB=22.25,P0.01)。紫外比色法结果显示,与UVA组相比,UVA+紫檀芪组蛋白羰基的含量显著减少(q=10.44,P0.01);与UVB组相比,UVB+紫檀芪组蛋白羰基的含量显著减少(q=7.03,P0.01)。TBA法结果显示,与UVA组相比,UVA+紫檀芪组MDA的含量显著减少(q=11.22,P0.01);与UVB组相比,UVB+紫檀芪组MDA的含量显著减少(q=17.49,P0.01)。结论:紫檀芪通过影响核内Nrf2与Bach1的平衡关系发挥抗氧化作用。     

蒿甲醚对紫外线照射后HaCaT细胞表达Fas和Bcl-2的影响

目的:为探讨蒿甲醚治疗光敏性皮肤病的机制,观察一定剂量的中波紫外线(UVB)照射HaCaT细胞后,不同浓度蒿甲醚对HaCaT细胞活性的影响及其表达凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2的影响.方法:采用45.00 mJ/cm2剂量UVB照射培养的永生化HaCaT角质形成细胞,以羟氯喹及不同浓度的蒿甲醚进行干预处理,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及免疫组化检测紫外线照射及经羟氯喹和篙甲醚处理后HacaT细胞活性变化及其Fas和Bcl-2蛋白水平的变化.结果:①羟氯喹及小剂量(≤50mg/L)蒿甲醚对细胞活性影响不明显,而≥100mg/L蒿甲醚增加细胞活性.但浓度超过200mg/L,可见大量细胞悬浮于培养液上;②与未照射组相比UVB照射可使HaCaT细胞表达Fas增加;③与UVB组相比,UVB 羟氨喹(Q)组、UVB 25 mg/L蒿甲醚(H1)组、UVB 50mg/L蒿甲醚(H2)组、UVB 100mg/L蒿甲醚(H3)组使HaCaT细胞表达Fas减少;④与未照射组相比,UVB照射可使HaCaT细胞表达Bcl-2减少;⑤与UVB组相比,UVB Q组、UVB H1组、UVB H2组、UVB H3组可以使HaCaT细胞表达Bcl-2增加.结论:小剂量(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)蒿甲醚可以抑制HaCaT细胞凋亡,具有一定的保护作用.蒿甲醚可能通过影响与凋亡相关的Fas和Bcl-2表达,减少紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡.     

姜黄素对紫外线诱导损伤的HaCaT细胞的保护作用

目的比较姜黄素对UVA、UVB急性损伤的HaCaT细胞的保护作用。方法体外培养人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞,UVA、UVB照射建立HaCaT细胞急性光损伤模型。姜黄素与HaCaT细胞共培养24 h后,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,确定无毒性姜黄素浓度。通过MTT法、流式细胞术分别检测添加姜黄素前后,UVA、UVB照射引起的HaCaT细胞损伤情况及胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平变化。结果姜黄素浓度在5μmol/L以下时,正常细胞的增殖和凋亡不受影响。添加姜黄素前,UVA照射引起细胞增殖抑制、凋亡增加(P0.05),ROS增高67.9%;UVB照射引起细胞增殖抑制、凋亡增加(P0.05),ROS增高67.2%。添加姜黄素后,UVA、UVB组细胞损伤均减轻(P0.05),ROS水平升幅均下降,呈浓度依赖型。结论对于不同波长的紫外线诱导损伤的HaCaT细胞,姜黄素均可降低急性光损伤引起ROS水平升幅,具有抗氧化保护作用,其保护强度无差异,并且呈浓度依耐性。     

EGCG对中波紫外线诱导HaCaT细胞p53基因和蛋白表达的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)照射诱导永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p53 mRNA和p53蛋白表达的影响。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,并以200μg/mL EGCG处理照射后的HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测各处理条件下p53 mRNA和/或p53蛋白的表达水平。结果:30 mJ/cm2的UVB照射后HaCaT细胞的p53 mR-NA和p53蛋白表达逐渐增加,4 h达到峰值,4 h后随照射剂量增加而增加,24 h后有所恢复;加入EGCG可下调UVB诱导的表达作用。结论:UVB照射对HaCaT细胞p53 mRNA和p53蛋白的诱导表达有时效性与量效性,EGCG可下调UVB照射的这种诱导作用。     

蜕皮甾酮对UVB诱导HaCaT细胞损伤的保护作用

目的探讨蜕皮甾酮(ecdysterone,EDS)对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞损伤的保护作用及机制。方法将培养的HaCaT细胞分为正常对照组、UVB组、2.0μmol/L蜕皮甾酮剂量组(UVB+2.0μmol/L蜕皮甾酮),1.5μmol/L蜕皮甾酮剂量组(UVB+1.5μmol/L蜕皮甾酮),1.0μmol/L蜕皮甾酮剂量组(UVB+1.0μmol/L蜕皮甾酮);CCK-8法检测蜕皮甾酮对HaCaT细胞增殖能力的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;采用PI单染和Annexin V-FITC/PI染色法,流式细胞仪检测HaCaT细胞凋亡率;比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)水平。Western印迹检测MMP-1,MMP-9,TIMP-1蛋白表达水平变化。结果在所选浓度范围内,蜕皮甾酮对HaCaT细胞的增殖无明显影响(P0.05)。与正常对照组比较,UVB组HaCaT细胞出现明显的凋亡形态,凋亡率明显增高;1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L蜕皮甾酮剂量组较UVB组凋亡细胞逐渐减少,差异有统计学意义(均P0.01)。与正常对照组相比,UVB组HaCaT细胞SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P0.01);1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L蜕皮甾酮剂量组与UVB组比较,SOD和GSH-Px活性增高,MDA含量下降(P0.01)。Western印迹显示:UVB组HaCaT细胞MMP-l,MMP-9蛋白表达量明显高于正常对照组(P0.01),而TIMP-l蛋白表达量低于正常对照组(P0.01);1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L蜕皮甾酮剂量组MMP-l,MMP-9表达量明显低于UVB组(P0.01),而TIMP-l表达量明显高于UVB组(P0.01)。结论蜕皮甾酮对中波紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡,氧化损伤和光老化均具有一定的保护作用。     

橙皮素对小鼠皮肤急性光损伤的保护作用

目的 探讨橙皮素对中波紫外线(UVB)导致的小鼠皮肤光损伤的抑制作用及可能机制。方法 不同剂量UVB照射小鼠背部皮肤,构建UVB致小鼠皮肤急性光损伤的动物模型。将40只小鼠随机分为4组,即空白组、UVB组、基质+UVB组、橙皮素+UVB组,每组各10只。除空白组外,其余每组小鼠每天以相同剂量照射UVB,连续3 d,末次照射后24 h取照射区皮肤组织。肉眼观察皮肤外观变化,光学显微镜观察组织病理学改变,免疫荧光检测皮肤组织活性氧(ROS)水平,水溶性四唑盐(WST-1)法测定总超氧化物歧化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)蛋白表达量。实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、血红素氧合酶-1(HO-1)的信使核糖核酸(mRNA)表达量,免疫组化检测Nrf2蛋白表达水平,蛋白质印迹法(WB)检测Keap1、HO-1蛋白表达水平。结果 选择辐照度3.6 mJ/(cm²·s)照射UVB 200 s,连续3 d建立小鼠皮肤急性光损伤模型。预先外用橙皮素乳膏后,受照射...     

枸杞多糖粗提物对紫外线诱导HaCaT细胞清除活性氧的影响

目的 探讨枸杞多糖粗提物对紫外线诱导的HaCaT细胞清除活性氧(ROS)的影响及可能机制.方法 将HaCaT细胞分为空白组、枸杞多糖组、UVA组、UVB组、UVA+枸杞多糖组、UVB+枸杞多糖组.用噻唑蓝法检测细胞增殖活性;分光光度计检测枸杞多糖粗提物对UVA和UVB吸收情况;用DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平;酶生化法测定胞质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及乳酸脱氢酶(LDH)漏出量.结果 0、100、200、300、400、500、600、1 500、2 000 mg/L枸杞多糖粗提物对HaCaT细胞增殖活性无明显影响.枸杞多糖粗提物对280 ～400 nm紫外线透光率较大;与空白组比较,UVA和UVB组LDH漏出量、ROS水平显著升高,胞内SOD及GSH-Px活力降低,差异均有统计学意义(P＜0.001或0.05).照射前加枸杞多糖粗提物(UVA+枸杞多糖组、UVB+枸杞多糖组)可明显升高细胞内SOD、GSH-Px活性,减少LDH释放,降低ROS水平,与UVA或UVB组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 枸杞多糖粗提物不具有遮光剂的作用,但可有效清除ROS,降低LDH漏出率,抑制紫外线致HaCaT细胞光损伤,可能与其增强抗氧化酶活性有关.