miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡。方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-3p在黑色素瘤和正常皮肤组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-3p的靶基因,黑色素瘤A375细胞转入miR-34a-3p模拟剂(miR-34a-3p mimics组),转入对照物miR-NC(对照组miR-NC),miR-34a-3p mimics组转染YAP1表达载体(miR-34a-3p mimics+YAP1组)。通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a-3p和YAP1对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a-3p对YAP1蛋白表达的影响。结果黑色素瘤组中的miR-34a-3p的表达量(0. 67±0. 21)低于正常皮肤组织(1. 35±0. 47),差异具有统计学意义(P 0. 05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR WT载体共转染组荧光强度(0. 39±0. 11)明显低于对照miR-NC与WT载体共转染组(0. 98±0. 35),差异具有统计学意义(P 0. 05)。而miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR MUT载体共转染组(1. 31±0. 23)与其对照miR-NC与MUT载体共转染组(1. 22±0. 21)之间的荧光强度无显著差异(P 0. 05)。在培养24 h、48 h和72 h后,miR-34a-3p mimics组细胞细胞活力低于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05); miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞活力高于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics组细胞的凋亡率高于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋亡率低于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与对照组miR-NC比,miR-34a-3p mimics组细胞的YAP1蛋白表达量显著降低,cleaved caspase 9表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。而与miR-34a-3p mimics组比较,miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋YAP1蛋白表达量显著增加,cleaved caspase 9表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论miR-34a-3p能够通过调控靶基因YAP1的表达,抑制黑色素瘤A375细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

miR-181a-5p在宫颈癌组织及患者血清中的表达及临床意义

目的 探讨miR-181a-5p在宫颈癌组织及患者血清中的表达及临床意义.方法 选取2018年6月至2020年10月该院收治的宫颈癌患者110例为宫颈癌组,另选取该院体检健康女性100例为对照组.收集宫颈癌患者癌组织、对应癌旁组织及血清标本,采用PCR技术分别检测组织标本及血清标本中miR-181 a-5 p的表达,对比分析miR-181a-5p在不同标本中的表达及其与患者临床特征的关系,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-181a-5p诊断宫颈癌的临床价值.结果 宫颈癌患者癌组织中miR-181a-5p的相对表达水平为9.41±2.38,明显低于癌旁组织的17.62±3.54,差异有统计学意义(t=20.198,P<0.05);宫颈癌组血清中miR-181a-5p的相对表达水平为11.03±2.76,明显低于对照组的18.96±4.13,差异有统计学意义(t=16.492,P<0.05);不同分化程度、有无淋巴结转移、不同国际妇产科联盟分期的宫颈癌患者癌组织标本及血清标本中miR-181a-5p的相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中miR-181a-5p诊断宫颈癌的曲线下面积(AUC)为0.871(95％CI 0.745～0.983,P<0.05),灵敏度为94.42％,特异度为85.39％;血清中miR-181a-5p诊断宫颈癌的AUC为0.752(95％CI 0.703～0.914,P<0.05),灵敏度为89.19％,特异度为79.82％.结论 miR-181a-5p在宫颈癌组织及患者血清中均呈低表达,且其表达与宫颈癌发生、发展有关,可作为宫颈癌临床诊断的评价指标.     

Notch2通过上皮-间质转化促进生长激素腺瘤的侵袭

目的探讨Notch2在生长激素腺瘤侵袭中的作用以及对上皮-间质转化(EMT)相关基因的影响。方法回顾性分析2013年1月至2015年12月首都医科大学附属北京天坛医院收治的62例生长激素腺瘤,按照Knosp分级分为侵袭组(28例)和非侵袭组(34例)。应用免疫组织化学染色检测Notch2和Vimentin在生长激素腺瘤中的表达情况,并分析两者的相关性。将小鼠垂体瘤细胞(GT1-1)分为对照组、空载体组和干扰组(Sh-A、Sh-B、Sh-C、ShD)。干扰组使用Sh-A、Sh-B、Sh-C、Sh-D 4种片段在GT1-1细胞中干扰Notch2的表达并选择干扰效果最佳的两种进行后续实验。采用MTS法检测GT1-1细胞增殖能力,采用小室实验检测GT1-1细胞的侵袭能力,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测GT1-1细胞培养上清中生长激素(GH)水平,采用实时定量-PCR(RT-PCR)实验检测EMT相关基因的mRNA水平。结果免疫组织化学染色显示在生长激素腺瘤中,Notch2的表达水平与Vimentin呈正相关(r=0. 456,P=0. 027)。Notch2在侵袭组中的表达水平较非侵袭组明显升高(P <0. 05)。同样,侵袭组Vimentin表达水平较非侵袭组水平明显升高(P <0. 05)。RT-PCR和Western blotting实验筛选出干扰Notch2表达的有效片段为ShB和Sh-C。MTS实验显示,与对照组比较,Sh-B组细胞活力24 h、48 h和72 h时分别下降(6. 8±2. 1)%、(29. 2±4. 1)%和(43. 1±5. 2)%,差异均具有统计学意义(P <0. 05);Sh-C组分别下降(5. 2±2. 3)%、(17±3. 5)%和(26. 9±3. 8)%,差异均具有统计学意义(P <0. 05)。小室实验显示,对照组穿膜阳性细胞为(407±53)个/视野,Sh-B组为(126±35)个/视野,Sh-C组为(163±41)个/视野,差异均具有统计学意义(P <0. 05)。ELISA结果显示,处理72 h后,Sh-B和Sh-C的GH水平分别为对照组的(27. 7±7. 3)%和(36. 4±8. 5)%,差异具有统计学意义(P <0. 05)。Sh-B组及Sh-C组细胞E-cadherin较对照组升高,N-cadherin和Vimentin mRNA水平均较对照组明显降低,差异均具有统计学意义(P <0. 05)。结论 Notch2通过调控E-cadherin、N-Cadherin和vimentin的表达影响EMT,促进生长激素腺瘤侵袭性生长。     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

胃癌组织中miR-219a-5p的表达及其临床意义

目的 探讨miR-219a-5p在胃癌组织中的表达状况,并分析其与临床病理特征、生存预后的关系。方法 分析2019年1月至2021年12月于苏州大学附属第二医院行手术治疗的102例胃癌患者临床资料。采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测比较患者胃癌组织和癌旁组织蜡块中miR-219a-5p相对表达量。比较不同临床病理特征、生存预后情况患者的胃癌组织miR-219a-5p相对表达量,并分析患者胃癌组织miR-219a-5p相对表达量对其生存预后的判断效能。结果 患者胃癌组织中miR-219a-5p相对表达量明显低于其癌旁组织,差异有统计学意义(t=22.297,P<0.05)。随着TNM分期增加,胃癌组织miR-219a-5p相对表达量降低,差异有统计学意义(F=8.879,P<0.05);随着肿瘤分化程度升高,胃癌组织miR-219a-5p相对表达量升高,差异有统计学意义(F=15.588,P<0.05);有远处转移患者胃癌组织miR-219a-5p相对表达量低于无远处转移患者,差异有统计学意义(t=5.233,P<0.05);有肌层浸润患者胃癌组织miR-2...     

Exosomal miR-196a-5p、miR-501-3p在前列腺癌患者尿液中的表达及意义

目的探究exosomal miR-196a-5p、miR-501-3p在前列腺癌患者尿液中的表达及在前列腺癌诊断和预后评估中的价值。方法回顾性选择2014年5月至2017年3月中国人民解放军联勤保障部队第九〇四医院收治的45例前列腺癌患者、31例前列腺增生患者及26例健康对照者作为研究对象。收集3组受试者尿液,检测exosomal miR-196a-5p、miR-501-3p表达量。分析exosomal miR-196a-5p、miR-501-3p与前列腺癌患者临床病理资料的关系及在前列腺癌患者诊断和预后评估中的价值。结果3组受试者尿液中exosomal miR-501-5p、miR-501-3p的表达量比较,差异有统计学意义(P<0.001)。前列腺癌组exosomal miR-196a-5p、miR-501-3p表达量(0.14±0.06、0.08±0.03)低于前列腺增生组(0.31±0.13、0.14±0.05)和健康对照组(0.30±0.09、0.17±0.04),差异均有统计学意义(P<0.01)。前列腺癌患者尿液中exosomal miR-196a-5p、miR-501-3p相对表达量与临床分期和骨转移有关(P<0.05),与年龄、Gleason评分和前列腺特异抗原水平无关(P>0.05)。Exosomal miR-196a-5p、miR-501-3p联合检测诊断前列腺癌的效能高于exosomal miR-501-3p单独诊断(P<0.05),与exosomal miR-196a-5p诊断效能比较,差异无统计学意义(P>0.05)。45例前列腺癌患者2年内共死亡14例,生存患者31例。前列腺癌组生存患者中exosomal miR-196a-5p、miR-501-3p的表达量(0.17±0.04和0.09±0.02)均高于死亡患者(0.10±0.06和0.06±0.03),差异均有统计学意义(P<0.05)。Exosomal miR-196a-5p、miR-501-3p联合检测诊断前列腺癌患者预后的效能高于exosomal miR-501-3p单独诊断(P<0.05),与exosomal miR-196a-5p诊断效能比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Exosomal miR-196a-5p、miR-501-3p联合检测有助于前列腺癌患者的诊断及预后评估。     

过表达miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移 及CDK6、N-cadherin表达的影响

目的:研究过表达miR-129-5对胶质瘤细胞增殖、迁移及细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响。方法:培养胶质瘤U87细胞并分为转染阴性对照mimic的对照组、转染miR-129-5p mimic的miR-129-5p组,采用MTS实验检测增殖活力、划痕实验检测迁移活力、Western blot检测CDK6及N-cadherin的表达量,验证miR-129-5p对CDK6、N-cadherin的靶向调控作用。结果:miR-129-5p组的OD490值(0.78±0.15),明显低于对照组的(1.21±0.34)(P0.05);相对愈合面积(32.39±8.79)%,明显低于对照组的(73.39±17.85)%(P0.05);CDK6的表达量(0.28±0.09)及N-cadherin的表达量(0.34±0.08),明显低于对照组的(0.88±0.18)及(0.67±0.15)(P0.05);生物信息学分析及双荧光素酶报告表明miR-129-5p靶向调控CDK6、N-cadherin基因mRNA 3’UTR。结论:过表达miR-129-5p能够抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移,其机制可能与靶向调控CDK6、N-cadherin有关。     

miR-145-3p通过下调CDK1抑制骨肉瘤MG-63细胞系的增殖、侵袭与凋亡

目的研究mircoRNA-145-3p(miR-145-3p)对骨肉瘤细胞系MG-63细胞的增殖、侵袭与凋亡的调控作用。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定miR145-3p在MG-63细胞与人成骨细胞系hFOB1.19细胞中的表达水平。将MG-63分成实验组和对照组,通过人工合成miR145-3p-mimic(miR-145-3p类似物),使用慢病毒载体将miR-145-3p-mimics转入实验组MG-63细胞内,同时使用慢病毒载体将空质粒转入对照组细胞内。通过CCK-8方法检测两组细胞增殖能力;流式细胞仪分析两组细胞的细胞周期及凋亡情况; Transwell实验测定细胞侵袭能力; RT-PCR测定两组细胞miR-145-3p和周期素依赖性蛋白激酶1(CDK1)的表达情况;通过Targetscan数据库和荧光素酶实验确定CDK1是否为miR-145-3p的靶基因; Western印迹法检测基因的表达水平。结果 miR-145-3p在骨肉瘤细胞系MG-63细胞中的表达量为(0. 59±0. 24),较人成骨细胞系hFOB1. 19细胞中的表达量(1. 46±0. 21)明显降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。CCK-8结果显示,在48 h、72 h、96 h、120 h时,实验组细胞增殖能力较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。流式细胞周期结果显示,处于G1期细胞数量为(69. 92±0. 13)%,较对照组(49. 43±0. 09)%明显增多(P 0. 05),而处于S期细胞数量(26. 01±0. 08)%,较对照组(40. 67±0. 11)%明显减少,差异具有统计学意义(P 0. 05)。凋亡实验结果显示,实验组细胞的凋亡比率为(31. 3±4. 7)%,较对照组(9. 35±1. 9)%明显增高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。转染野生型CDK1后,实验组荧光素酶活性较对照组明显降低,差异有统计学意义(P 0. 05);而转染突变型CDK1后,实验组荧光素酶活性较对照组无明显变化,差异无统计学意义(P 0. 05)。Western印迹实验结果显示,实验组中CDK1的表达量较对照组明显降低,且表达水平较对照组也明显降低(P 0. 05)。结论 miR-145-3p通过下调节CDK1表达,抑制骨肉瘤细胞系MG-63细胞的增殖、侵袭能力,并促进其凋亡。     

MiR-199a-5p通过靶向DRAM1调控急性髓系白血病对阿柔比星的敏感性

目的:比较miR-199a-5p在急性髓系白血病(AML)耐药细胞株K562/ADM以及敏感细胞株K562中的表达,研究其对AML耐药的调控效应并探索其机制。方法:采用MTT法检测阿柔比星(ADM)对K562/ADM和K562细胞的生长抑制率并计算IC_(50)。采用实时荧光定量RT-PCR的方法检测2种细胞株(K562/ADM和K562)以及患者骨髓标本(复发难治AML患者和化疗后完全缓解AML患者)中miR-199a-5p的表达。通过细胞转染的方法在K562/ADM细胞中转入miR-199a-5p mimic使其表达上调,在K562细胞中转入miR-199a-5p inhibitor使其表达下调,采用CCK-8法检测ADM对2种细胞的增殖抑制率,实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测转染后2种细胞中DRAM1基因和蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-5p与DRAM13′UTR是否存在直接结合位点。采用siRNA的方法下调K562/ADM细胞中DRAM1表达,CCK-8法检测ADM对细胞增殖抑制率的变化。结果:ADM对K562/ADM和K562细胞的IC_(50)分别为146.14±0.079和3.08±0.056μg/ml。miR-199a-5p在复发难治AML患者骨髓中的表达明显低于完全缓解患者,在K562/ADM细胞中的表达明显低于K562细胞(P 0.05)。当K562/ADM细胞中miR-199a-5p表达上调时,ADM对细胞的增殖抑制率升高,DRAM1基因和蛋白表达明显下降。当K562细胞中miR-199a-5p表达下调时,ADM对细胞的增殖抑制率明显下降,DRAM1基因和蛋白表达明显升高(P 0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-199a-5p与DRAM1的3′UTR区存在直接结合位点。K562/ADM细胞中DRAM1在基因和蛋白水平表达均明显高于K562细胞(P 0.05)。当K562/ADM细胞中DRAM1基因表达下调后,细胞对ADM的敏感性显著升高(P 0.05)。结论:miR-199a-5p在耐药白血病细胞中呈低表达。miR-199a-5p表达能够调控AML细胞对ADM的敏感性。DRAM1是miR-199a-5p调控AML耐药的功能性靶基因。     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

MiR-125a-5p和信号传导与转录激活因子3在胃癌中的表达及其生物学功能

目的 采用生物信息学及分子生物学手段验证miR-125a-5p和信号传导与转录激活因子3(STAT3)在胃癌中的表达及其生物学功能.方法 从30例胃癌患者中分离出胃癌组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(WB)法检测胃癌组织和非癌性胃组织中miR-125a-5p及STAT3的表达.细胞转染后,采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况.采用Transwell迁移实验检测迁移细胞.通过双荧光素酶报告基因检测验证miR-125a-5p与STAT3的靶向关系.通过体内裸鼠成瘤实验对miR-125a-5p的肿瘤抑制作用进行验证.结果 胃癌组织中miR-125a-5p表达较非癌性胃组织降低,差异有统计学意义(P＜0.05).在胃癌细胞系中,与正常上皮细胞相比,miR-125a-5p的表达也下降,差异有统计学意义(P＜0.05).采用miR-125a-5p模拟物转染胃癌细胞,结果表明miR-125a-5p的过表达可以通过靶向作用STAT3抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.裸鼠成瘤实验证实miR-125a-5p过表达能够抑制肿瘤增殖并促进肿瘤细胞凋亡.结论 MiR-125a-5p能够通过抑制STAT3的表达发挥肿瘤抑制作用,这将为临床靶向治疗及早期生物标志物的选择提供可靠的理论依据.     

乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1与miR-513a-5p的表达及临床意义

目的研究乳腺癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS1、miR-513a-5p的表达,并分析二者的关系及临床意义。方法选取2015年8月—2017年8月诊治的乳腺癌患者83例为研究对象。应用实时定量PCR检测乳腺癌及癌旁组织中LncRNA ADAMTS9-AS1、miR-513a-5p的表达。Pearson相关分析二者的相关性,在线生物信息学软件分析二者的相互作用位点,Kaplan-Meier生存分析二者表达对乳腺癌患者预后的影响,多因素Cox回归分析影响患者预后的危险因素。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1表达降低,miR-513a-5p表达升高(P0.01)。乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1与miR-513a-5p表达呈明显负相关(P0.01),且二者存在潜在的结合位点。乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1、miR-513a-5p表达与肿瘤分期及淋巴结转移有相关性(P0.05,P0.01)。Kaplan-Meier生存分析结果LncRNA ADAMTS9-AS1低表达及miR-513a-5p高表达乳腺癌患者的3年总体生存率较低(P0.01)。乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1低表达、miR-513a-5p高表达、高肿瘤分期及伴有淋巴结转移是影响乳腺癌患者预后的独立危险因素(P0.05,P0.01)。结论乳腺癌组织中LncRNA ADAMTS9-AS1表达下调,而miR-513a-5p表达上调,二者表达与乳腺癌患者肿瘤分期及不良预后有关,可作为乳腺癌的肿瘤标志物。     

LncRNA TBX5-AS1靶向miR-92a-3p调控结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的探讨长链非编码RNA T-box转录因子5反义RNA 1(LncRNA TBX5-AS1)对结直肠癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌组织、癌旁组织中TBX5-AS1和miR-92a-3p的表达量。体外培养人结直肠癌细胞HCT116,分别将TBX5-AS1过表达载体(pcDNA-TBX5-AS1)及其对照空载体(pcDNA)、miR-92a-3p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-92a-3p)及其阴性对照(anti-miR-NC)、miR-92a-3p寡核苷酸模拟物(miR-92a-3p mmics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、pcDNA-TBX5-AS1与miR-92a-3p mimics转染至HCT116细胞。MTT法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测TBX5-AS1和miR-92a-3p的靶向关系。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织中TBX5-AS1的表达量降低,miR-92a-3p的表达量升高,差...     

miR-1调控胃癌细胞SGC-7901迁移能力的实验研究

目的探讨微小RNA-1(miR-1)对胃癌细胞系SGC-7901迁移能力的调控作用。方法脂质体转染寡核苷酸片段NCmimics及miR-1-mimics、NC-inhibitor及miR-1-inhibitor至SGC-7901细胞,定量RT-PCR检测转染后SGC-7901细胞中miR-1的表达水平,Transwell实验观察转染后细胞迁移能力,western blot检测转染后细胞上皮间质转化(EMT)指标。结果miR-1-mimics转染组miR-1的表达水平(900.10±240.40)明显高于NC-mimics转染组(1.01±0.18),差异有统计学意义(t=6.48,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组miR-1的表达水平(0.65±0.04)明显低于NC-inhibitor转染组(1.01±0.14),差异具有统计学意义(t=4.19,P0.05)。miR-1-mimics转染组迁移细胞数量[(362±10)个]明显高于NC-mimics转染组[(112±10)个],差异有统计学意义(t=21.65,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组迁移细胞数量[(64±8)个]明显低于NC-inhibitor转染组[(133±14)个],差异有统计学意义(t=17.07,P0.01)。与NC-mimics转染组比较,miR-1-mimics转染组上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)表达减弱(t=19.28,P0.01),神经钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达增强(t=5.43,P0.01;t=23.14,P0.01);与NC-inhibitor转染组比较,miR-1-inhibitor转染组E-cadherin表达增强(t=6.14,P0.01),N-cadherin和Vimentin表达减弱(t=6.78,P0.01;t=7.94,P0.01)。结论 miR-1过表达可促进胃癌细胞的迁移;miR-1低表达能可抑制胃癌细胞的迁移;miR-1可能通过EMT转化增强胃癌细胞的迁移能力。     

miR-133a-3p高表达对ZIKV复制的影响及其潜在机制

目的探究寨卡病毒(ZIKV)感染A549细胞后诱导的小分子非编码RNA-133a-3p(miR-133a-3p)对ZIKV复制的影响及其潜在机制。方法在1×10~5/mL腺癌人类肺泡基底上皮细胞系A549中感染ZIKV,感染复数(MOI)为0.5,感染后在不同时间点收取RNA样品,以荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-133a-3p相对表达变化;同时在1×10~5/mL的A549中,转染3μL的miR-133a-3p模拟物(miR-133a-3p mimic)使miR-133a-3p高表达,转染后24 h,接种MOI=0.5的ZIKV或用终浓度为100μg/L的polyⅠ∶C处理细胞,感染后48 h收取细胞RNA或蛋白样品,通过RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blots)检测ZIKV的RNA的复制水平及宿主抗病毒先天免疫相关基因表达水平;将1μg含干扰素刺激应答元件(ISRE)的萤火虫荧光报告质粒(ISRE-luc)和50 ng海肾荧光报告质粒(pRL-TK)与3μL的miR-133a-3p共转入1×10~5/mL的A549中,转染后24 h,接种MOI=0.5的ZIKV或用终浓度为100μg/L的polyⅠ∶C处理细胞,在处理48 h后通过双荧光报告实验检测含ISRE序列的萤火虫荧光蛋白表达情况。结果 ZIKV感染可影响A549细胞内miR-133a-3p表达,相对于0 h,在8、16、24、36、48和72 h,miR-133a-3p值分别为:0.45±0.048、0.4±0.084、0.52±0.004、0.82±0.229、1.41±0.167、2.86±0.219; miR-133a-3p过表达使miR-133a-3p mimic组的ZIKV NS5 RNA相对于mimic control组值为:0.335 5±0.031,使IFN-α/β、ISG15、IFIT1(按图A→H的顺序)相对值为:3.46±1.105、1.329±0.198、2.723±0.966、1.48±0.059 5、3.3±0.4、2.83±0.442、5.79±0.277、1.98±0.362、5.96±0.796、5.94±1.007、7.07±0.111 5、5.96±0.795 7、5.96±0.796、7.16±0.42、2.2±0.491、1.92±0.189。结论 ZIKV感染A549细胞影响miR-133a-3p表达;miR-133a-3p过表达抑制ZIKV复制并激活Jak/STAT信号通路。     

miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断和预后评估中的临床价值

目的探讨miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断和预后评估的临床价值。方法选取2014年1月至2016年12月在该院就诊的胃癌患者血清标本117例为胃癌组,选择同期在该院行胃镜检查诊断为息肉的患者血清标本75例和健康体检者血清标本45例分别设为胃息肉组和健康对照组。比较各组研究对象血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平,观察胃癌患者血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平与临床病理因素和随访2年胃癌患者预后的关系,以及其在诊断胃癌和预测胃癌患者2年内死亡的效能。结果胃癌组术前血清miR-181a-5p表达水平明显高于胃息肉组和健康对照组(P<0.01),而胃息肉组miR-181a-5p表达水平明显高于健康对照组(P<0.01),胃癌术后血清miR-181a-5p表达水平较术前明显降低(P<0.01);胃癌组术前血清miR-451a表达水平明显低于胃息肉组和健康对照组(P<0.01),而胃息肉组的血清miR-181a-5p表达水平明显高于健康对照组(P<0.01),胃癌组术后血清miR-451a表达水平较术前明显升高(P<0.01)。血清miR-181a-5p和miR-451a联合检测诊断胃癌的灵敏度为77.8%,特异度为97.3%,曲线下面积均明显高于miR-181a-5p和miR-451a单项检测(P<0.01),而miR-181a-5p与miR-451a的曲线下面积差异无统计学意义(P>0.05)。血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平在不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度的胃癌患者中差异有统计学意义(P <0.001)。死亡组患者血清miR-181a-5p表达水平明显高于存活组(P <0.01),而血清miR-451a表达水平明显低于存活组(P<0.01)。血清miR-181a-5p和miR-451a联合检测在预测胃癌患者2年内死亡的灵敏度为100.0%,特异度78.6%,曲线下面积明显高于miR-181a-5p和miR-451a单项检测(P<0.05),而miR-181a-5p与miR-451a的曲线下面积差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合检测血清miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断中具有重要临床价值,其表达水平与患者的预后具有重要关系,在预测2年内死亡具有较高的效能。     

胃癌组织中miR-133a-3p、miR-4317的表达及临床意义

目的检测胃癌组织中微小RNA(miR)-133a-3p和miR-4317表达情况,并探究二者的临床意义。方法收集60例胃癌患者的癌组织及其相对应的癌旁组织,采用实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)技术检测组织样品中miR-133a-3p和miR-4317表达水平,同时分析miR-133a-3p和miR-4317表达与患者临床特征之间的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-133a-3p和miR-4317表达与患者预后的关系。结果RTqPCR试验结果显示,胃癌组织中miR-133a-3p、miR-4317相对表达量均低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中miR-133a-3p表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05);miR-4317表达水平与淋巴结转移、远处转移及肿瘤TNM分期有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,miR-133a-3p高表达胃癌患者的5年生存率高于低表达者,术后生存时间长于低表达者(P<0.05);miR-4317低表达胃癌患者的5年生存率低于高表达者,术后生存时间短于高表达者(P<0.05)。结论胃癌组织中miR-133a-3p和miR-4317均表现为低表达,二者有可能作为胃癌预测和预后判定的潜在标志物,为胃癌患者的预测和预后判定提供一定的参考价值。     

miR-218-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对TPD52的靶向调控作用

目的 分析miR-218-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对TPD52的靶向调控作用。方法 回顾性收集2020年9月至2021年12月青岛大学附属青岛市中心医院行手术切除的治疗NSCLC患者39例,术中收取患者的癌组织及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-218-5p表达,体外培养H1975细胞株,将H1975细胞分为NC组(mimics NC转染)、miR-218-5p组(miR-218-5p mimics转染)、TPD52-siRNA组(TPD52-siRNA转染)和miR-218-5p+TPD52-siRNA组(转染miR-218-5p mimics后再加入TPD52-siRNA试剂进行转染)。平板克隆形成实验检测H1975细胞的克隆形成数目,Transwell检测H1975细胞侵袭,划痕实验检测H1975细胞迁移,双荧光素酶实验测定miR-218-5p和TPD52靶向关系,蛋白质印迹检测TPD52蛋白表达。结果 NSCLC组织中miR-218-5p的表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P <0.05)。miR-218-5p的表达与性别、年龄、吸烟无相关性(P> 0...     

MicroRNA-199a-3p在肾癌中的表达及作用

目的检测microRNA-199a-3p（miR-199a-3p）在肾癌细胞株和组织中的表达情况并探究miR-199a-3p在肾癌细胞中的作用。方法利用实时定量RT-PCR检测miR-199a-3p在肾癌细胞和组织中的表达水平;利用miR-199a-3p模拟物转染肾癌细胞786-0上调miR-199a-3p后,通过CCK-8、克隆形成、Transwell以及细胞周期检测来探究其在肾癌细胞中的作用。结果 miR-199a-3p在肾癌细胞中明显低表达,在78%（14/18）的肾癌组织中亦明显低表达;上调miR-199a-3p可显著抑制肾癌细胞的增殖、存活和侵袭并能诱导细胞周期G1期阻滞。结论我们的研究显示在肾癌中miR-199a-3p明显低表达并参与肾癌的发生、发展,这表明miR-199a-3p具有作为肾癌诊断和治疗靶点的潜能。     

肺癌中miR-21与β-catenin表达的相关性及其对远期生存的预测价值

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中miR-21与β-catenin表达的相关性及其对远期生存的预测价值。方法 回顾性收集2014年8月至2015年8月沈阳医学院附属第二医院病理科明确诊断为NSCLC的石蜡包埋组织50例作为NSCLC组,对应正常癌旁组织50例作为癌旁组。采用荧光定量PCR法测定标本组织中miR-21的表达量,采用Western-blot法测定标本组织中β-catenin的表达量,对比NSCLC组、癌旁组标本中miR-21、β-catenin表达水平的差异,NSCLC组miR-21、β-catenin表达水平的相关性。分析不同病理特征NSCLC患者病灶组织中miR-21、β-catenin表达量的差异,NSCLC病灶组织中miR-21、β-catenin低表达、高表达患者生存时间的差异。结果 NSCLC组标本组织中miR-21、β-catenin的表达量均高于癌旁组标本组织(P 0. 05); NSCLC组标本组织中miR-21的表达量与β-catenin的表达量呈正相关(P 0. 05)。NSCLC患者中,TNMⅢ～Ⅳ期、肿瘤最大直径≥3 cm、中低分化、合并淋巴结转移患者的miR-21、β-catenin表达量分别大于TNMⅠ～Ⅱ期、肿瘤最大直径3 cm、高分化、未合并淋巴结转移的患者(P 0. 05); miR-21、β-catenin高表达组患者的总生存时间分别低于miR-21、β-catenin低表达组(P 0. 05)。结论 NSCLC患者病灶组织中miR-21表达量异常增高,可能通过调控β-catenin表达而促进病情进展并缩短患者生存时间。