脑缺血后大鼠神经元和星形胶质细胞p15ink4b表达的差异研究

目的:比较研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p15ink4b在神经元和星形胶质细胞的表达。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,应用流式细胞术检测各组MCAO再灌注后不同时期神经元和星形胶质细胞中的p15ink4b的表达。结果:缺血侧皮质区星形胶质细胞中的p15ink4b的表达在再灌注3d后开始下调,14d显著下调,与假手术组比较有显著性差异(P<0.05);缺血侧皮质神经元中的p15ink4b在再灌注14d后表达下调,与假手术组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:局灶性脑缺血再灌注损伤后,缺血侧皮质区星形胶质细胞和神经元均有p15ink4b不同程度的表达下调,星形胶质细胞中的p15ink4b表达下调比神经元更为显著。     

复方脑肽节苷脂注射液激活线粒体自噬改善脑缺血再灌注损伤

目的观察复方脑肽节苷脂注射液(CPCGI)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用并探讨其机制。方法 Sprague-Dawley大鼠随机分成假手术组、模型组、CPCGI低剂量治疗组、CPCGI高剂量治疗组、阳性药金纳多组,每组10只。线栓法制备大鼠大脑中动脉梗阻2 h后复灌模型,即刻给药,连续14 d。术后1 d、3 d、7 d和14 d行神经功能症状缺损评分,术后14 d行贴纸去除及平衡木行走实验,Western blotting检测损伤周围脑组织Beclin1、PINK1及Parkin的表达。结果术后14 d,与模型组相比,各给药组大鼠神经功能缺损评分降低(P0.05),大鼠过杆时间明显缩短(P0.01),CPCGI给药组去除两侧前肢贴纸的时间缩短(P0.05)。模型组皮层组织中Beclin1及Parkin蛋白表达明显下降(P0.01),PINK1蛋白表达明显上升(P0.01),CPCGI各组均能逆转该作用(P0.05)。结论 CPCGI的神经保护作用机制之一可能与激活线粒体自噬,改善线粒体功能有关。     

脑缺血上调大鼠神经元和星形胶质细胞CDK4的表达

目的:研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后CDK4在神经元和星形胶质细胞的表达。方法:SD大鼠25只,随机分为假手术组和再灌注1d、3d、7d、14d组,建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,假手术组仅进行手术不造成缺血状态,应用流式细胞术检测各组神经元和星形胶质细胞中CDK4的表达。结果:缺血侧皮质星形胶质细胞和神经元中的CDK4的表达在再灌注7d、14d后表达上调,与假手术组比较有差异(P<0.05);大脑皮质神经元和星形胶质细胞的比较发现,神经元中的CDK4在假手术组、再灌注7d组的表达水平高于星形胶质细胞(P<0.05)。结论:脑缺血后,缺血侧皮质区星形胶质细胞和神经元的CDK4表达上调。     

成对关联刺激对脑梗死大鼠神经元自噬的影响

目的 观察成对关联刺激（PAS）对脑梗死大鼠神经功能损伤恢复的影响,并从神经元自噬的角度探讨其作用机制。 方法 健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠60只,随机选取20只纳入假手术组（n=20）,另40只大鼠采用经典线栓法制作右侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,并按随机数字表法分为模型组和治疗组（各20只）。治疗组自术后1 d起进行为期14 d的PAS治疗,模型组和假手术组不给予任何干预。分别于术后第1、7和14天,对各组大鼠进行改良神经功能缺损程度量表（mNSS）评分和提尾试验（EBST）评分;于术后第7天和第14天的治疗结束后行脑组织取材, 以Western blot法检测缺血半暗带区LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin 1和Cathepsin B蛋白含量;免疫荧光双重染色法观察缺血半暗带区LC3与NeuN的共表达情况。 结果 ①术后第7天和第14天,模型组和治疗组的mNSS和EBST评分均高于假手术组（P<0.05）,而治疗组mNSS和EBST评分均低于同时间点模型组（P<0.05）,且治疗组术后第14天的mNSS评分低于术后第7天（P<0.05）;②术后第7天和第14天,治疗组和模型组的LC3Ⅱ/Ⅰ比值均较假手术组高（P<0.01）,且治疗组的LC3Ⅱ/Ⅰ比值较同时间点模型组低（P<0.05）;模型组和治疗组的Beclin 1蛋白含量较假手术组高（P<0.01）,而治疗组Beclin 1蛋白含量在术后第7天和14天均较同时间点模型组低（P=0.229,P<0.01）;模型组 Cathepsin B含量较假手术组高（P<0.05）,治疗组Cathepsin B含量亦较假手术组高（第7天时P<0.05,第14天时P=0.059）;术后第14天治疗组的Cathepsin B含量较同时间点模型组低（P<0.01）;③模型组和治疗组缺血半暗带区的LC3阳性细胞数均较同时间点假手术组显著增加（P<0.01）,且治疗组较同时间点模型组减少（P<0.05）;模型组和治疗组LC3阳性表达的神经元数量与神经元总数量的比值均较同时间点假手术组显著增加（P<0.01）,且治疗组较同时间点模型组减少（P<0.05）。 结论 PAS治疗可抑制脑梗死大鼠缺血半暗带区神经元的自噬活性,促进大鼠脑梗死后神经功能损伤的恢复。     

针刺对脑缺血再灌注模型大鼠脑缺血皮质区神经血管单元微血管再生的影响

目的:观察电针对局灶性脑缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion model/reperfusion model,MCAO/R)大鼠脑缺血皮质区VEGF、VEGFR-2、CD34表达水平的影响,探讨针刺调控脑缺血皮质区神经血管单元(neurovascular unit,NVU)微血管再生,促进MCAO/R大鼠神经功能重塑的作用机制。方法:雄性SD大鼠27只随机分为假手术组,模型组,针刺组,每组9只。采用大脑中动脉线栓法制备MCAO/R大鼠。MCAO/R后1d行针刺治疗,取大鼠"百会"穴及"足三里"为针刺穴位,每次刺激时间为20min,每日1次,连续治疗14d。神经功能缺损评分法评价神经功能缺损情况,HE染色观察MCAO/R大鼠脑梗死侧脑组织病理形态变化,免疫组织化学法检测MCAO/R大鼠脑缺血灶周围皮质VEGF、VEGFR-2、CD34的表达。结果:与假手术组比较,造模组造模后出现神经功能缺损,神经功能缺损评分明显增高(P0.05);HE染色见明显脑缺血灶;脑缺血灶周围皮质VEGF、VEGFR-2、CD34表达增高(P0.05)。与模型组比较,针刺组神经功能缺损评分逐渐降低(P0.05);针刺3、7、14d时,针刺组神经缺损评分低于模型组(P0.05);电针14d后,针刺组脑缺血灶周围皮质VEGF、VEGFR-2、CD34的表达明显高于模型组(P0.05)。结论:电针可以改善MCAO/R大鼠神经功能,其作用可能与提高MCAO/R大鼠缺血灶周围皮质VEGF、VEGFR-2、CD34表达水平,促进脑缺血皮质区NVU微血管再生有关。     

缺血性脑损伤大鼠MicroRNA 210的动态变化

目的观察缺血性脑损伤后大鼠缺血皮质区microRNA 210的表达变化规律,探讨mir-210对脑缺血后血管新生的可能影响。方法实验分为缺血后1d、3d、7d组和假手术组(n=5),缺血组采用线栓法制作大脑中动脉阻塞模型,于缺血后1、3、7d处死大鼠,取缺血皮质区用于实验;假手术组仅暴露动脉。提取各实验组脑缺血皮质区的miRNA,Real time PCR比较各实验组mir-210的表达水平。结果脑缺血后mir-210表达显著上调,缺血后1d、3d、7d分别为假手术组的7.2±0.56、20.1±0.87和20.3±0.76倍(P0.05)。结论脑缺血后mir-210表达显著上调,mir-210可能在促进脑缺血后血管新生过程中起重要作用。     

莱菔硫烷对大鼠缺血性脑卒中后血管新生的影响

目的:观察莱菔硫烷(SFN)对大鼠缺血性脑卒中后血管新生的影响。方法:36只SD大鼠随机分成假手术组、模型组和SFN组各12只。采用改良线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,假手术组不予缺血处理,SFN组腹腔注射SFN,模型组腹腔注射等量生理盐水。MCAO术后1、7、14 d进行神经功能评分;术后14 d采用免疫组化法检测梗死灶周围区二维微血管密度,术后14 d股静脉注射异硫氰酸荧光素右旋糖酐(FITC-dextran)标记微血管,分析梗死灶周围区三维微血管的直径、面积及分支数目。结果:术后1 d模型组和SFN组神经功能评分差异无统计学意义,术后7、14 d SFN组的神经功能评分低于模型组(P0.01)。术后14 d模型组和SFN组的二维微血管密度显著高于假手术组(P0.01),模型组和SFN组的三维微血管直径小于假手术组(P0.05),面积及分支数目均高于假手术组(P0.01)。SFN组二维微血管密度、三维微血管直径、面积和分支数目均高于模型组(P0.05)。结论:SFN可促进缺血性脑卒中大鼠的神经功能恢复,其机制可能与促进缺血性脑卒中后微血管新生有关。     

谷红注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠运动功能障碍的影响

目的观察谷红注射液对脑缺血再灌注损伤模型大鼠运动功能障碍的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠90只分为假手术组、模型组、乙酰谷酰胺组、红花注射液组和谷红注射液组,采用大脑中动脉闭塞(MCAO)建立脑缺血2 h再灌注损伤模型。术后24 h给药治疗,连续给药14 d。采用Bederson神经缺损症状评分平衡杆测试观察各组运动功能。酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色观察各组大鼠黑质神经元细胞存活率。结果模型组大鼠的过杆总时间比假手术组明显增加(P0.01),红花注射液与谷红注射液组过杆总时间较模型组降低(P0.05)。模型组大鼠缺血侧黑质TH神经元细胞存活率较健侧显著减少(P0.001),红花注射液和谷红注射液组TH神经元的细胞存活率较模型组明显升高(P0.01)。结论谷红注射液能显著改善脑缺血再灌注大鼠的运动功能障碍,其保护作用可能与抑制黑质神经元的继发性损伤有关。     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马区胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的 观察电针对大脑中动脉缺血再灌注大鼠缺血脑组织海马区神经细胞凋亡及胰岛素样生长因子-1（IGF—1）的影响。方法 采用大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注模型，分别应用TUNEL染色法、免疫组化法观察脑缺血再灌注及电针对大鼠缺血脑组织海马区神经细胞凋亡及IGF-1的影响。结果 脑缺血再灌注后大鼠缺血侧海马CA1区凋亡细胞数显著增多（模型组与正常组、假手术组比较，P〈0．01），IGF-1阳性表达数目少量增加，胞浆染色呈轻-中度阳性（模型组与正常组、假手术组比较，P〈0．05），电针组大鼠缺血侧海马CA1区的凋亡细胞数减少，IGF-1的阳性表达数目增加，胞浆染色呈中-强阳性（电针组与模型组比较，P〈0．01）。结论 电针可降低大鼠缺血侧海马CA1区的凋亡细胞数，增强IGF-1的阳性表达；早期电针治疗对脑缺血损害的有效防治作用，可能是通过上调IGF-1表达、抑制神经元凋亡的机制实现的。     

肌苷对脑缺血再灌注后脑组织细胞周期蛋白D1基因表达的影响

目的:观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)mRNA的表达与神经细胞凋亡的关系以及肌苷的干预作用,从细胞增殖角度探讨肌苷的神经保护作用机制。方法:应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,腹腔注射肌苷注射液,应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别检测大鼠脑缺血再灌流不同时间点皮质区和纹状体区神经细胞CyclinD1mRNA的表达与凋亡的变化。结果:脑缺血再灌注2h后皮质区与纹状体区即出现少量凋亡神经细胞,皮质区1d达高峰(72.8±2.66)个/视野,纹状体区2d达高峰(96.75±4.37)个/视野,之后逐渐减少,至再灌注14d(5.50±0.65)个/视野接近假手术组水平(3.75±0.85)个/视野;肌苷治疗组凋亡神经细胞较对照组显著减少;脑缺血再灌流后皮质区与纹状体区的缺血周围区神经细胞CyclinD1mRNA的表达于2h逐渐增强,皮质区和纹状体区分别于12h和1d达高峰,以后逐渐下降;肌苷治疗组CyclinD1mRNA表达较对照组显著减弱。结论:脑缺血再灌流CyclinD1mRNA的表达时序先于凋亡细胞的出现,其异常表达可能诱导了神经元的凋亡。肌苷可在脑缺血再灌注后抑制CyclinD1mRNA的表达,从而减少神经细胞凋亡,起到神经保护作用。     

大脑皮质梗死大鼠继发丘脑腹后外侧核损伤后DNA修复酶的变化

目的 观察大鼠大脑皮质梗死后丘脑腹后外侧核(VPN)继发性损害机制,以及抗氧化剂依布硒啉对脑损伤的改善作用.方法 采用易卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.按随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、溶剂组、依布硒啉组,每组8只.假手术组仅暴露大脑中动脉不结扎;溶剂组和依布硒啉组术后24 h分别灌胃0.5%羧甲基纤维素钠+0.02%吐温20的溶剂或依布硒啉各5 ml/kg.2周后处死大鼠取脑组织,用苏木素-伊红(HE)染色观察VPN细胞形态;用免疫组化法观察无嘌呤无嘧啶核酸内切酶(APE)和大肠杆菌MutY DNA转葡萄糖基酶(MYH)两种DNA修复酶的表达.结果 HE染色显示依布硒啉可以改善皮质梗死所致的VPN细胞形态异常;免疫组化显示APE定位于VPN的胞核,MYH定位于VPN的胞质和胞核.模型组和溶剂组VPN的APE和MYH阳性细胞数(个)较假手术组显著减少(APE:57.0±14.7、49.4±12.5比101.0±13.6,MYH:15.0±4.7、10.4±2.5比56.0±13.2,均P＜0.05);依布硒啉组APE和MYH阳性细胞数较模型组和溶剂组显著增多(APE:72.2±7.6比57.0±14.7、49.4±12.5,MYH:32.2±7.6比15.0±4.7、10.4±2.5,均P＜0.05);模型组与溶剂组间APE和MYH阳性细胞数比较差异均无统计学意义.结论 实验性大鼠大脑皮质梗死后2周,VPN的DNA修复酶APE和MYH水平明显下降,抗氧化剂依布硒啉可明显升高其水平,从而阻止受损细胞死亡.     

银杏叶注射液对脑缺血再灌注大鼠脑组织琥珀酸脱氢酶和肌酸激酶脑型同工酶活性的影响

目的观察银杏叶注射液对脑缺血再灌注大鼠脑组织琥珀酸脱氢酶(SDH)和肌酸激酶脑型同工酶(CK-BB)活性的动态影响。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组、银杏叶注射液治疗组和川芎嗪药物对照组。脑缺血2h,分别再灌注1d、3d、7d,分别给予相应的药物腹腔注射。采用密度离心及差速离心法提取脑组织线粒体用于SDH活性测定,采用化学比色法测定脑组织匀浆CK-BB活性。结果模型组再灌注各时间点脑组织SDH活性显著降低,CK-BB的活性显著升高(P<0.05或P<0.01);再灌注3d、7d时各治疗组SDH活性显著升高(P<0.05),再灌注各时间点CK-BB的活性显著降低(P<0.05);舒血宁注射液治疗组和川芎嗪治疗组组间比较无显著差异(P>0.05)。结论银杏叶注射液可以通过提高SDH活性和降低CK-BB的活性,抗脑缺血再灌注损伤。     

脂肪源性干细胞穴位注射对大鼠脑缺血再灌注后胰岛素样生长因子1及其受体表达的影响

目的探讨脂肪源性干细胞(ADSC)穴位注射对大鼠缺血/再灌注损伤后胰岛素样生长因子1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)表达的影响。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)2 h再灌注模型,大鼠随机分为假手术组、模型组、穴位注射ADSC组(治疗组)、穴位注射0.9%氯化钠注射溶液组(对照组)。治疗组取在大椎、双侧内关穴位注射PKH-26标记ADSC细胞悬液。缺血72 h后NSS法检测神经功能恢复,采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学方法检测IGF-1、IGF-1R蛋白和mRNA的表达。结果治疗组可见PKH26标记的ADSC在海马区有表达。与模型组和对照组比较,穴位注射ADSC组NSS评分显著降低(P<0.05),海马区IGF-1、IGF-1R蛋白和mRNA表达显著增加(P<0.05)。结论穴位移植脂肪源性干细胞对大鼠脑缺血再灌注有神经保护作用,其作用机制可能与促进海马区IGF-1和IGF-1R表达有关。     

羟乙基淀粉对脑缺血/再灌注大鼠颅内压及血浆胶体渗透压的影响

目的 探讨羟乙基淀粉对脑缺血/再灌注(I/R)大鼠血浆胶体渗透压(COP)的调节作用及其对颅内压(ICP)的影响.方法 采用随机对照动物实验研究方法,将24只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组和羟乙基淀粉组,每组8只.采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)建立脑I/R动物模型,于缺血2 h后再灌注,再灌注开始时尾静脉泵入羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液206 ml·kg-1·d-1.于术后0、2、6、12、18、24 h分别测定ICP和COP;术后24 h测量右侧大脑半球含水量,用免疫组化法观察神经元凋亡情况.结果 模型组和羟乙基淀粉组术后2 h ICP(mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa)即显著高于假手术组(11.50±1.43、12.48±0.75比7.95±0.92,均P＜0.05),之后随时间延长,两组ICP逐渐升高,至24 h达峰值(22.76±0.72、23.32±0.98比8.15±1.09,均P＜0.05);但羟乙基淀粉组与模型组各时间点比较均无差异.羟乙基淀粉组术后各时间点COP(mm Hg)显著高于模型组和假手术组,于术后6 h达高峰(13.49±0.50比12.04±0.47、12.00±0.39,均P＜0.01);模型组与假手术组各时间点比较均无差异.羟乙基淀粉组和模型组脑组织含水量、神经元凋亡率均显著高于假手术组[脑组织含水量:(80.16±0.44)%、(80.59±0.67)%比(78.72±0.52)%;神经元凋亡率:(44.27±7.86)%、(42.82±7.82)%比(3.26±0.00)%,P＜0.05或P＜0.01];但羟乙基淀粉组与模型组比较差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 羟乙基淀粉可以有效提高COP,但尚不能证实提高COP是否能够降低ICP、减轻脑水肿.

Abstract：

Objective To investigate the regulatory effect of hydroxyethyl starch on colloidal osmotic pressure(COP), and its effect on intracranial pressure(ICP)in rats with cerebral ischemia/reperfusion (I/R)injury. Methods Twenty-four male Sprague-Dawley(SD)rats were randomly divided into sham operation group, model group and the hydroxyethyl starch group, each n = 8. Cerebral I/R model was reproduced by middle cerebral artery occlusion(MCAO), followed by reperfusion after ischemia for 2 hours.Rats in hydroxyethyl starch group received hydroxyethyl starch 130/0. 4 206 ml · kg-1 · d-1 via tail vein at the beginning of reperfusion. ICP and COP were evaluated at 0, 2, 6, 12, 18, 24 hours after the surgery.The rats were sacrificed by decapitation. The water content of the right hemisphere was measured at 24 hours after the surgery, and the ratio of apoptosis of neurons was observed by immunohistochemical method. Results Two hours after surgery the ICP(mm Hg, 1 mm Hg=0.133 kPa)of model group and hydroxyethyl starch group was significantly increased compared with sham operation group(11. 50±1.43,12. 48±0. 75 vs. 7. 95±0. 92, both P＜0. 05). With prolongation of time, the ICP gradually increased and reached the peak at 24 hours(22. 76±0. 72, 23. 32±0. 98 vs. 8. 15±1.09, both P＜0. 05). But there was no significant difference in ICP in the hydroxyethyl starch group compared with that of the model group at all time points. The COP(mm Hg)of hydroxyethyl starch group was significantly higher than the model group and sham operation group at each time point, and peaked at 6 hours after surgery(13. 49±0. 50 vs. 12.04±0. 47, 12. 00±0. 39, both P＜0. 01). There was no significant difference in COP between the model group and the sham operation group at all time points. The brain water content, neuronal apoptosis of hydroxyethyl starch group and model group was significantly higher than sham operation group[brain water content:(80. 16 ± 0. 44)%,(80. 59 ± 0. 67)% vs.(78. 72 ± 0. 52)%; neuronal apoptosis:(44. 27 ± 7. 86)%,(42. 82 ± 7.82)% vs.(3. 26 ± 0. 00)%, P ＜ 0. 05 or P ＜ 0. 01], but there was no significant difference between the hydroxyethyl starch group and model group(both P＞0. 05). Conclusion Intravenous injection of hydroxyethyl starch 130/0.4 can increase the plasma COP, but it can not significantly reduce ICP and brain water content, and it also can not improve the neuronal apoptosis.     

自噬对肾小管细胞毒性损伤后线粒体功能的影响及相关机制研究

目的研究自噬对肾小管细胞毒性损伤后线粒体功能的影响及相关机制。方法将人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)分为杂化siRNA组(对照无关序列片段siRNA转染细胞)、杂化siRNA+顺铂组(对照无关序列片段siRNA转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)、沉默Pink1+顺铂组(Pink1沉默转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)和沉默Parkin+顺铂组(Parkin沉默转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)。培养12 h后,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定各组细胞存活率,JC-1法检测线粒体膜电位,荧光法检测各组细胞内三磷酸腺苷(ATP)的含量,Western blotting和免疫荧光探针检测自噬相关蛋白的相对表达。结果杂化siRNA+顺铂组的细胞存活率为(88.2±2.7)%,显著低于杂化siRNA组[(101.3±3.1)%](P<0.05);沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的存活率为(80.1±2.3)%、(79.4±3.0%),显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的线粒体膜电位和ATP含量为(0.90±0.01)、(0.82±0.01)nmol/mg,显著低于杂化siRNA组[(1.01±0.02)、(1.00±0.04)nmol/mg](P<0.05);沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的线粒体膜电位(0.79±0.02、0.77±0.02)和ATP[(0.66±0.05)、(0.66±0.02)nmol/mg]含量显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的Pink1、Parkin、Beclin蛋白的相对表达量和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值(1.68±0.04、1.80±0.05、1.87±0.05、2.01±0.04)显著高于杂化siRNA组(1.00±0.04、1.00±0.05、1.01±0.01、1.04±0.02)(P<0.05);而沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的Pink1、Parkin、Beclin蛋白的相对表达量和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值(1.17±0.05、0.69±0.05、1.37±0.05、1.43±0.02;1.22±0.04、0.57±0.06、1.39±0.03、1.38±0.10)显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的自噬阳性点数为(12.2±0.7)个,显著多于杂化siRNA组[(2.4±0.3)个](P<0.05);而沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的荧光点数[(5.3±0.8)、(5.6±0.5)个]显著少于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。结论顺铂处理可诱导HK-2细胞的线粒体自噬作用,从而改善顺铂引起的肾小管细胞毒性损伤和线粒体功能,其作用机制可能与Pink1/Parkin蛋白的表达情况有关。     

犀角地黄汤对缺血性脑卒中再灌注大鼠模型自噬水平的调节机制分析

目的探讨犀角地黄汤对缺血性脑卒中(AIS)再灌注大鼠模型自噬水平的调节机制。方法无特定病原级雄性大鼠60只,随机分为假手术组(A组,只分离颈总动脉不插入线栓)、AIS再灌注组(B组,构建AIS再灌注模型)、AIS再灌注+犀角地黄汤组(C组,于构建AIS再灌注模型前30 min经腹腔注射10 mg/kg犀角地黄汤)、AIS再灌注+犀角地黄汤+JNK抑制剂组(D组,于构建AIS再灌注模型前30 min经腹腔注射10 mg/kg犀角地黄汤和JNK抑制剂),每组各15只。于建模后24 h麻醉大鼠取脑组织做切片,分别进行神经功能评分、自噬超微结构观察、Western Blot检测自噬蛋白Beclin 1和微管相关蛋白轻链3(LC3)表达、TTC测定大鼠脑梗死体积、TUNEL染色法检测细胞凋亡率。结果构建AIS再灌注模型后,与A组大鼠比较,其余组大鼠神经功能均出现异常,自噬泡增加,Beclin 1、LC3蛋白表达增加。与B组比较,C组大鼠神经功能评分、自噬水平、脑梗死体积、Beclin 1、LC3蛋白表达、神经细胞凋亡率降低(P <0. 05);与C组比较,D组大鼠自噬水平显著降低,神经功能进一步改善(P <0. 05)。结论 AIS再灌注后神经细胞损伤严重、自噬水平升高,犀角地黄汤可通过激活JNK通路显著降低自噬水平而降低神经功能损伤,这可能为AIS再灌注后神经损伤提供新的治疗靶点。     

电针对脑梗死大鼠海马齿状回Notch1调控作用的研究

目的:观察电针对脑梗死大鼠海马齿状回Notch1的调控作用。方法:采用线栓法成功制备雄性SD大鼠右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠,随机分为电针组、模型组和假手术组。在造模成功后第3天开始电针大鼠"百会"、"人中"穴15分钟/次,直至各个取材时间点。对各组在电针治疗各时间点行Morris水迷宫测试,采用免疫印迹法检测大鼠梗死侧海马齿状回区Notch1蛋白表达量。结果:与相同时间点模型组比较,电针组的Morris水迷宫测试差异有显著性意义(P0.05)。在梗死侧海马齿状回区域,电针组在治疗第3天和第7天时Notch1蛋白表达量较模型组相同时间点增高,差异具有显著性意义(P0.05),且第7天时达到高峰,在第14天时仍高于模型组,但差异无显著性意义(P0.05)。结论:电针能上调局灶性脑梗死大鼠梗死侧海马齿状回区Notch1蛋白表达量,改善脑梗死大鼠的认知功能,从而减轻脑梗死对神经元的损伤,达到治疗脑梗死功能障碍的疗效。     

脓毒症大鼠血清炎症递质水平的变化

目的：探讨脓毒症大鼠血清炎症递质的变化。方法将30只雄性 SD 大鼠随机分为假手术组10只和脓毒症组20只,采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症模型。采集假手术组造模后颈总动脉血,采集脓毒症组造模后0、24、48、72 h 颈总动脉血,用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素6（IL-6）的浓度。结果假手术组血清 TNF-α为（9.27±3.12）ng/ L,脓毒症组造模后0、24、48、72 h 分别为（9.26±8.01）、（32.01±4.52）、（55.22±7.61）、（83.31±8.57） ng/ L,脓毒症组造模后24、48、72 h 与造模后0 h 和假手术组比较差异均有统计学意义（P 均＜0.01）;假手术组血清 IL-1为（8.93±1.26）ng/ L,脓毒症组造模后0、24、48、72 h 分别为（20.01±3.51）、（25.51±2.79）、（59.67±3.26）、（87.86±11.51）ng/ L,脓毒症组造模后24、48、72 h 与造模后0 h 和假手术组比较差异均有统计学意义（P 均＜0.01）;假手术组血清 IL-6为（12.36±3.25）ng/ L,脓毒症组造模后0、24、48、72 h 分别为（11.52±2.32）、（31.59±12.12）、（57.27±13.53）、（71.59±12.67）ng/ L,脓毒症组造模后24、48、72 h 与造模后0 h 和假手术组比较差异均有统计学意义（P 均＜0.01）。结论脓毒症大鼠血清炎症递质水平明显升高,提示机体过度释放大量炎症递质,可能是导致脓毒症发生的因素之一。     

饲养的不同环境对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围IGF-1表达的影响

目的观察饲养的不同环境对局灶性脑梗死大鼠行为学恢复及梗死灶周围胰岛素样生长因子-1（IGF-1）表达的影响,为临床应用不同环境进行脑卒中康复治疗提供基础理论支持和实验依据。方法将实验动物随机分为假手术对照组（15只）和大脑中动脉阻塞（MCAO）（90只）。手术组用电凝法造成右侧大脑中动脉阻塞（MCAO）模型。术后标准笼中群居社交组,5只为一组,共30只;迷宫笼中居学习组,10只一组,共30只;30只居于丰富环境笼。术后剖颅取脑,采用石蜡包埋、切片,免疫组化染色,测梗死灶周围皮质胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的表达情况,分别在术后28天、14天、7天、3天、1天随机在各组中选取5只进行,假手术组于术后1天、3天、7天随机选取大鼠5只处死。结果免疫组化结果：IGF-1阳性细胞表达：社交组MCAO术后3d可见梗死灶周围IGF-1表达增高（P〈0．05）,7d时表达略有下降,各手术组与假手术组没有明显差异（P〉0．05）。各手术组梗死灶周围皮质IGF-1阳性表达随时间延长逐渐增高,于MCAO术后第14天和28天时各手术组表达均高于假手术组（P〈0．05）,探索学习组、丰富环境组于MCAO术后IGF-1表达均明显优于社交组在14天和28天（P〈0．05）。结论在丰富环境及学习笼中的局灶性脑梗死大鼠,梗死灶周围皮层IGF-1的表达明显上调,可能为功能恢复的原因。     

无热量超短波治疗对大鼠脑缺血再灌注损伤后SPCA1的影响

目的 观察无热量超短波治疗对大鼠脑细胞缺血再灌注损伤后脑梗死体积、分泌途径衍生钙离子转运ATP酶（Secretory-pathway Ca2+-ATPase,SPCA）1的影响。 方法 选取80只SD大鼠,将大鼠分为假手术组（8只）、模型组（36只）、超短波组（36只）。用线栓法制备一侧大脑中动脉栓塞再灌注大鼠模型,模型组和超短波组大鼠进行造模处理,假手术组大鼠处理同模型组和超短波组,但不插入线栓。模型组按照再灌注时间分为模型1d组（12只）、模型3d组（12只）、模型7d组（12只）,超短波治疗组分为超短波1d组（12只）、超短波3d组（12只）、超短波7d组（12只）。各亚组分别于造模后1d、3d、7d处死取标本。用红四氮唑染色法观察并计算每组大鼠的脑梗死体积,采用Western blot法检测患侧海马SPCA1蛋白变化。 结果 假手术组大鼠脑切片均红染,未见梗死灶。缺血再灌注后,模型组和超短波组大鼠脑缺血区域出现白色梗死灶,随着时间延长,脑梗死体积均减小。与模型组同时间点比较,超短波组脑梗死体积均较小（P<0.05）。与假手术组比较,除超短波7d组外,各组大鼠SPCA1均降低 (P<0.05)。随着时间延长,模型组和超短波组大鼠SPCA1增加(P<0.05)。与模型组同时间点比较,超短波1d组大鼠SPCA1轻度增加,但差异无统计学意义（P>0.05）,超短波3d组、超短波7d组大鼠SPCA1较模型组3d组、模型组7d组显著增加,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 无热量超短波治疗可减小脑梗死体积,减轻脑缺血再灌注损伤,其机制可能是抑制了SPCA1表达水平下调,从而减轻了神经细胞凋亡,促进神经功能恢复。