姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法将人类绒毛膜癌细胞JEG-3细胞株随机分为对照组和姜黄素干预组。姜黄素干预组加入100μl不同浓度的姜黄素与细胞孵育24 h;对照组只加入PRMI 1640培养液与等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT检测检测细胞抑制率。姜黄素干预组加入100μl姜黄素(终浓度为40μmol/L)与细胞孵育24 h后,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki-67和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达,以及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达。结果与对照组相比,姜黄素干预组JEG-3细胞培养24 h后吸光度显著下降(P 0. 05);姜黄素对JEG-3细胞抑制作用呈药物浓度依赖性,半抑制浓度(IC50)为(39. 33±1. 02)μmol/L;与对照组相比,JEG-3细胞的凋亡率明显升高,增殖相关蛋白Ki-67和Cyclin D1的表达显著降低(P 0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的蛋白表达量显著升高(P 0. 05),Bcl-2的表达量显著降低(P 0. 05)。结论姜黄素可以下调人类绒毛膜癌细胞增殖相关蛋白的表达,上调凋亡相关蛋白的表达,调控其增殖和凋亡。     

二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌细胞生长停滞和细胞凋亡作用及对PARP-1/p53信号通路的影响

目的探究二甲双胍(DMBG)联合紫杉醇(PTX)对乳腺癌细胞MCF-7生长停滞和细胞凋亡的作用及对聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)/p53信号通路的影响,以期为疾病的临床治疗提供新思路。方法在细胞培养基(不添加药物处理,空白组)、含有DMBG的细胞培养基(培养基中添加16. 56 mg/ml DMBG,DMBG组)、含有PTX细胞培养基(培养基中添加10μg/ml PTX,PTX组)、含有PTX、DMBG的培养基(培养基中添加16. 56 mg/ml DMBG和10μg/ml PTX,联合组)中分别培养乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆实验检测菌落形成情况; Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测PARP-1、p53、Cyclin D1、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,MCF-7细胞PARP-1PARP-1、p53蛋白表达明显增加(P 0. 05)。空白组细胞形态、大小均正常,DMBG组、PTX组细胞体积明显变小,细胞核荧光强度增高,部分出现碎片化,联合组细胞核固缩现象更加明显。与空白组相比,DMBG组、PTX组细胞抑制率、凋亡率、G1期DNA量、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高;细胞菌落数、PARP-1、p53、Cyclin D1蛋白表达降低(P 0. 05)。与DMBG组、PTX组相比,联合组细胞抑制率、凋亡率、G1期DNA量、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高;细胞菌落数、PARP-1、p53、Cyclin D1蛋白表达降低(P 0. 05)。结论 DMBG联合PTX可能通过抑制PARP-1和p53的表达,引起细胞周期G1期阻滞,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,促进其凋亡,发挥抗肿瘤作用。     

熊果酸对人卵巢癌 SKOV3细胞增殖与凋亡的影响

【目的】探讨熊果酸(Ursolic acid,UA)对人卵巢癌 SKOV3细胞增殖与凋亡的影响。【方法】常规培养人卵巢癌 SKOV3细胞,应用 UA 浓度为5、10、20、40和80μmol/L 分别干预12 h、24 h 和48 h,采用 MTT 法检测细胞增殖;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,应用 Western blot 技术检测细胞周期相关蛋白 P21、CyclinD1的表达水平。【结果】与空白对照组(0μmol/L UA)比较,40和80μmol/L UA 分别作用 SKOV3细胞12 h、24 h 和48 h 后 OD 值均显著降低(P <0.05);10、20和40μmol/L UA 作用24 h 后 SKOV3细胞早期凋亡率、晚期凋亡率和 G0/G1期比率较对照组升高,20和40μmol/L UA 作用24 h 后 SKOV3细胞周期蛋白 Cyclin D1明显降低而 P21水平显著升高(P <0.05)。【结论】体外实验中,UA 可抑制人卵巢癌 SKOV3细胞增殖和促其凋亡,其机制可能与细胞周期蛋白 Cyclin D1表达降低和 P21表达升高有关。     

阿帕替尼对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞生物学行为的影响

目的探讨阿帕替尼对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞生物学行为的影响。方法取对数生长期的人乳腺癌MCF-7细胞,随机分为对照组和阿帕替尼组,对照组不予任何处理,阿帕替尼组分别给予浓度为2. 5μmol/L、5. 0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的阿帕替尼进行处理。采用二甲基四氮唑蓝(MTT)法检测浓度分别为2. 5μmol/L、5. 0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的阿帕替尼对MCF-7细胞生长抑制的作用;采用丫啶橙(AO)/溴乙锭(EB)染色法,于倒置荧光显微镜下观察MCF-7细胞形态变化;采用酶联免疫吸附法测定阿帕替尼对MCF-7细胞上清液血管内皮生长因子(VEGF)含量的影响;采用流式细胞仪检测阿帕替尼对MCF-7细胞周期和凋亡率的影响。结果阿帕替尼对MCF-7细胞具有明显的生长抑制作用,其抑制率随着浓度的增加而升高,呈明显的时间-剂量依赖关系(P 0. 05);对照组细胞结构正常,细胞核呈绿色;而阿帕替尼组细胞形态发生明显改变,染色质呈橘红色,呈凋亡状;与对照组细胞周期比较,干预组与对照组G_0/G_1期、S期、G_2/M期均值比率无明显统计学差异(P 0. 05);干预组VEGF分泌量明显下降,阿帕替尼浓度越高,VEGF分泌量越低(P 0. 05);阿帕替尼组细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论阿帕替尼可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,且具有浓度依赖性,可能与减少VEGF的分泌有关。     

丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 CCK8实验检测5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理人食管癌细胞EC9706 48 h及80μmol/L的丙泊酚处理细胞12h、24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况;80μmol/L的丙泊酚处理细胞72 h后,Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞的侵袭及凋亡情况;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-13、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase 3)、β-catenin、细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达。结果 40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理组细胞存活率显著低于0μmol/L组(P0.05),在24 h、48 h、72 h的细胞存活率显著低于对照组0 h(P0.05);丙泊酚组细胞侵袭数及MMP-2、MMP-13、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白显著高于对照组(P0.05)。结论丙泊酚可通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制食管癌细胞增殖及侵袭能力,诱导细胞的凋亡。     

microRNA-100诱导视网膜神经节细胞氧化应激损伤的机制研究

目的探讨基因调节因子-100(miRNA-100)在氧化应激(OS)诱导视网膜神经节细胞(RGCs)氧化应激损伤中的机制。方法培养RGC5细胞,加入100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、500μmol/L、1 000μmol/L过氧化氢(H_2O_2)建立氧化应激损伤模型。检测RGC5细胞凋亡情况,Real-time PCR检测miRNA-100基因表达情况,观察氧化应激对RGC5细胞miR-100表达的影响以及抑制miR-100后对RGC5细胞保护作用,Western Blot方法分析miR-100对RGC5细胞的作用机制,分析抑制胰岛素生长因子-1受体(IGF1R)对氧化应激损伤RGC5细胞凋亡的影响。结果 RGC5细胞凋亡率随氧化应激损伤程度加重而增高,且氧化应激损伤程度越重,RGC5细胞中miR-100表达越高,各组间差异有统计学意义(P 0. 05);转染miR-100组RGC5细胞凋亡率较对照组明显降低,而RGC5细胞中miR-100表达水平也明显降低,差异有统计学意义(P 0. 05); miR-100下调组RGC5细胞中p Trk B蛋白、p AKT蛋白、p ERK蛋白较对照组明显增加,差异有统计学意义(P 0. 05);抑制IGF1R组氧化应激损伤RGC5细胞凋亡率明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论氧化应激损伤可诱导CGR5细胞凋亡,miRNA-100参与了RGC5细胞凋亡过程,下调miRNA-100可有效调节RGC5细胞凋亡,其可能机制与miRNA-100调节靶基因IGF1R,从而激活了Trk B、AKT、ERK信号通路有关。     

阿帕替尼对急性淋巴细胞白血病细胞株Nalm6增殖和凋亡影响的研究

目的研究阿帕替尼对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞株Nalm6细胞增殖和凋亡的影响。方法分别采用CCK8细胞毒性试验与膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)细胞凋亡实验测定不同剂量的阿帕替尼对ALL细胞株Nalm6细胞增殖和凋亡的作用,并采用蛋白质印迹法测定经阿帕替尼处理后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、Bcl-x L及Bcl-2蛋白的表达水平。结果随着阿帕替尼作用时间的延长和剂量的增多,Nalm6细胞增殖抑制率进一步升高(P 0. 01)。随着阿帕替尼使用剂量的增多,Nalm6细胞凋亡率明显升高(P 0. 01);应用阿帕替尼20μmol/L、40μmol/L处理3 d后Nalm6细胞凋亡率较同剂量组处理2 d时的凋亡率明显升高(P 0. 01);未应用阿帕替尼(剂量为0μmol/L)或阿帕替尼应用10μmol/L处理3 d后Nalm6细胞凋亡率与处理2 d时的细胞凋亡率比较,并无显著差异(P 0. 05)。经阿帕替尼处理1、2 d后,Nalm6细胞中Bcl-x L和Bcl-2蛋白的表达水平明显降低(P 0. 05),PARP蛋白被切割。结论阿帕替尼可有效阻滞ALL细胞株Nalm6细胞增殖,促进Nalm6细胞凋亡,其作用机制可能与切割PARP蛋白及降低Bcl-x L、Bcl-2蛋白密切相关。     

羟氯喹对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的探讨羟氯喹(hydroxychloroquine, HCQ)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-1表达的调控作用及分子机制。方法对数生长期MH7A细胞分为空白组(细胞正常培养)、TNF-α组(细胞培养基中加入10μg/L TNF-α)、HCQ联合A组(细胞培养基中加入2.5μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)、HCQ联合B组(细胞培养基中加入5μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)、HCQ联合C组(细胞培养基中加入10μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)。5组细胞培养24 h,采用ELISA法检测细胞培养上清液MMP-1水平,采用实时荧光定量PCR法检测细胞MMP-1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞c-Jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase, JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白相对表达量。将MH7A细胞分为对照组和茴香霉素组,对照组细胞按HCQ联合C组培养方法培养24 h;茴香霉素组细胞培养基中先加入10μg/L茴香霉素培养2 h后,再按HCQ联合C组的培养方法继续培养至24 h;采用实时荧光定量PCR法检测2组MMP-1 mRNA相对表达量。结果 TNF-α组[(791.32±175.40)ng/L、6.89±1.20]、HCQ联合A组[(366.71±224.44)ng/L、4.12±0.71]、HCQ联合B组[(283.22±154.86)ng/L、2.99±0.18]、HCQ联合C组[(173.44±36.25)ng/L、2.01±0.80]、空白组[(133.13±62.19)ng/L、1.00±0.00]细胞MMP-1水平和MMP-1 mRNA相对表达量均依次降低(P0.05);TNF-α组(2.02±0.07)、HCQ联合A组(1.31±0.09)、HCQ联合B组(0.86±0.09)、HCQ联合C组(0.56±0.05)、空白组(0.43±0.03)细胞p-JNK蛋白相对表达量依次降低(P0.05),而TNF-α组(2.30±0.16)、HCQ联合A组(2.16±0.13)、HCQ联合B组(2.03±0.05)、HCQ联合C组(2.16±0.16)、空白组(2.23±0.11)JNK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);茴香霉素组细胞MMP-1 mRNA相对表达量(5.13±1.43)高于对照组(2.01±0.80)(P0.05)。结论 HCQ能通过JNK信号通路调控MH7A细胞MMP-1的表达。     

阿魏酸对大鼠肝纤维化过程中肝细胞的保护作用及其可能机制

目的探讨阿魏酸干预对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的肝细胞增殖、凋亡影响及其保护肝细胞具体作用机制。方法体外培养大鼠肝细胞,随机分为:空白对照组,TGF-β1组(2. 5 ng/ml),100μmol/L阿魏酸组(阿魏酸100μmol/L+TGF-β1 2. 5 ng/ml),200μmol/L阿魏酸组(阿魏酸200μmol/L+TGF-β1 2. 5 ng/ml),400μmol/L阿魏酸组(阿魏酸400μmol/L+TGF-β1 2. 5 ng/ml)。各组均加入含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液,实验组按照剂量按要求添加。MMT法检测肝细胞增殖情况;流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR检测肝细胞Smad3mRNA表达情况; Western Blot检测肝细胞Smad3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果与TGF-β1组相比,MTT实验结果显示阿魏酸促进肝细胞增殖,且呈剂量依赖性(P 0. 05)。流式细胞仪实验结果显示阿魏酸抑制肝细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P 0. 05)。实时荧光定量PCR结果显示阿魏酸抑制肝细胞Smad3 mRNA表达,且呈剂量依赖性(P 0. 05)。Western blot结果显示阿魏酸抑制肝细胞细胞Smad3蛋白表达,且呈剂量依赖性(P 0. 05)。并进一步发现阿魏酸增加肝细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达,抑制肝细胞纤维化(P0. 05)。结论阿魏酸保护肝细胞的机制可能是抑制TGF-β1诱导肝细胞Smad3表达,促进MMP-2、MMP-9表达,减少肝细胞凋亡,并促进肝细胞增殖,减轻肝脏纤维化,并与阿魏酸呈剂量依赖性。     

迷迭香酸衍生物RAD-9调控人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡的作用观察及机制探讨

目的观察迷迭香衍生物RAD-9对人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡的调控作用,并探讨其调控机制。方法将EC9706细胞培养至对数期,调整细胞浓度2×10~6个/孔,随机分为4组,各3个复孔。细胞贴壁后,N组、A组、B组、C组分别用磷酸盐缓冲液(PBS)、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L RAD-9 20μl干预。对比干预24 h、48 h、72 h后各组增殖抑制率及细胞凋亡率; Hoechst 33258染色观察干预72 h后细胞形态学变化;对比干预72 h后血管内皮生长因子(VEGF)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、转化基因(P21) mRNA和蛋白相对表达量;并对比干预72 h后B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3) mRNA和蛋白相对表达量。结果 B组增殖抑制率显著高于A组和C组(P 0. 05),C组增殖抑制率显著高于A组(P 0. 05); A、B、C组增殖抑制率均随时间的延长显著增加(P 0. 05); Hoechst 33258染色观察,A、B、C组部分细胞体积缩小、染色质固缩细胞呈现不规则形态,呈现亮蓝色凋亡小体,且B组凋亡现象最为明显;凋亡率、P21、Bax、Caspase3 mRNA和蛋白相对表达量组间比较,B组最高、C组其次、A组更低、N组最低,其中每两组间比较差异均显著(P 0. 05); A、B、C组凋亡率均随时间的延长显著升高(P 0. 05),N组凋亡率随时间延长变化趋势不明显(P 0. 05); VEGF、PI3K、Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量组间比较,B组最低、C组其次、A组更高、N组最高,其中每两组间比较差异均显著(P 0. 05)。结论RAD-9可抑制人食管癌EC9706细胞的增殖、促进其凋亡,其中50μmol/L的效果最佳,推测机制与下调VEGF、PI3K、Bcl-2 mRNA和蛋白、上调P21、Bax、Caspase3 mRNA和蛋白表达有关。     

Six1基因对As_2O_3诱导的口腔鳞癌细胞凋亡和ROS水平的影响研究

目的探讨Six1 siRNA或三氧化二砷(As_2O_3)对口腔鳞癌细胞活力、凋亡及活性氧(ROS)水平的影响。方法实验分为空白对照组(无需处理)、Six1-siRNA组(细胞转染Six1的特异性siRNA)、As_2O_3组(终浓度为5μmol/L As_2O_3处理细胞)和Six1-siRNA+As_2O_3组(Six1-siRNA及As_2O_3共同处理细胞) 4个组,siRNA转染参照Lipofectamine TM 2000说明。人口腔鳞癌CAL-27细胞处理48 h,Western blotting检测Six1及Wnt/β-catenin信号相关的β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达。CCK8及流式细胞术分别检测细胞活力、凋亡率及ROS含量。结果 Six1siRNA的转染可明显降低CAL-27细胞Six1的蛋白表达,与空白对照组比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。与空白对照组比较,Six1-siRNA组和As_2O_3组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,ROS含量明显升高,β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达明显降低(P 0. 05),而联合使用的细胞活力及β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达均显著低于Six1-siRNA组和As_2O_3组,凋亡率及ROS含量高于Six1-siRNA组和As_2O_3组(P 0. 05)。结论 Six1-siRNA可增加As_2O_3对口腔鳞癌细胞凋亡的诱导,机制与增加细胞ROS水平及下调Wnt/β-catenin信号有关。     

川芎嗪对椎间盘退变髓核细胞的作用机制

目的探讨川芎嗪对椎间盘退变髓核细胞的作用机制。方法选择成年雄性SD大鼠10只,提取并培养椎间盘髓核细胞,随机分为对照组、诱导组、川芎嗪低浓度组、川芎嗪中浓度组、川芎嗪高浓度组,分别加入0. 9%氯化钠注射液、10μg/L的白细胞介素(interleukin,IL)-1β、10μg/L的IL-1β+10μmol/L的川芎嗪、10μg/L的IL-1β+20μmol/L的川芎嗪、10μg/L的IL-1β+50μmol/L的川芎嗪。采用CCK-8检测髓核细胞增殖倍数,流式细胞学检测髓核细胞凋亡率,免疫印迹检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)、髓核细胞外基质蛋白(AGG、COLⅡ和SOX-9)和p65蛋白相对表达水平。结果与对照组比较,诱导组细胞增殖倍数、Bax、AGG、COLⅡ和SOX-9蛋白表达水平减少,细胞凋亡率、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平及磷酸化p65(p-p65)、p-p65/p65水平明显升高,差异有统计学意义(P 0. 05);与诱导组比较,川芎嗪低、中、高浓度组细胞增殖倍数、Bax、AGG、COLⅡ和SOX-9蛋白水平逐渐增高,细胞凋亡率、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平及p-p65、p-p65/p65水平逐渐降低,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论川芎嗪可通过抑制IL-1β诱导的髓核细胞凋亡和p-p65缓解椎间盘退变。     

AMN107联合血红素加氧酶-1抑制剂诱导慢性髓系白血病细胞凋亡

运用AMN107(尼洛替尼)联合血红素加氧酶-1(HO-1)抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)作用于慢性髓系白血病(CML)细胞株K562细胞,研究其对CML细胞增殖的影响并探讨其作用机制。采用MTT法和台盼蓝染色法检测AMN107(10μmol/L)及ZnPPⅨ(10μmol/L)单独或联合处理不同时间的细胞增殖率;半定量RT-PCR法和Westernblot法检测空白对照组、ZnPPⅨ(10μmol/L)组、AMN107(10μmol/L)组、AMN107(10μmol/L)联合ZnPPⅨ(10μmol/L)组48 h时细胞HO-1的表达;AnnexinⅤ/PI双染色法检测处理48 h时各组细胞凋亡情况。结果表明:联合用药对细胞的抑制作用最强,且呈时间依赖性;联合用药组HO-1的表达量最低;空白对照组、ZnPPⅨ(10μmol/L)组、AMN107(10μmol/L)组、AMN107(10μmol/L)联合ZnPPⅨ(10μmol/L)组48 h时细胞凋亡率分别为(11.38±0.02)%、(17.44±0.08)%、(39.81±0.07)%和(56.46±0.19)%。结论:第二代酪氨酸激酶抑制剂AMN107具有诱导CML细胞凋亡的作用;抑制HO-1表达能加强AMN107对CML细胞的杀伤作用,这为临床进一步提高CML的疗效提供实验依据。     

一氧化氮对鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨外源性NO对CNE-2细胞增殖与凋亡的影响。方法:分别用不同浓度NO供体药物硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)干预CNE-2细胞,观察细胞形态学变化、检测细胞的抑制率及细胞的凋亡和坏死率。结果:SNP以浓度依赖性方式抑制CNE-2细胞增殖,SNP 100,200,400,600,800,1 600,3 200μmol/L各组细胞抑制率与药物浓度呈正相关;SNP以浓度依赖性方式促进CNE-2细胞凋亡,SNP(1 000μmol/L)组细胞凋亡率较SNP(600μmol/L)组显著增高(P0.05)。结论:外源性NO能抑制CNE-2的增殖,促进CNE-2的凋亡,其抑制效应与NO浓度呈正相关。     

ERK信号转导通路在哮喘大鼠气道重塑中的作用

目的研究在哮喘大鼠气道平滑肌细胞ASMC（airway smooth muscle cell）中ERK信号转导通路对哮喘气道重塑中的作用。方法原代培养ASMC,实验设未干预组（A组）、ERK阻断剂（U0126）组（B组）、PDGF组（C组）、PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。B组又分为B1组、B2组、B3组、B4组,加入浓度分别为0．1μmol／L、1μmol／L、5μmol／L、10μmol／L的U0126;C组又分为C1组、C2组、C3组、C4组,加入浓度分别为1μg／L、10μg／L、25μg／L、50μg／L的PDGF—BB。免疫组化法测ERK。蛋白的表达（仅测A、B4、C4、D组）,RT—PCR法测其mRNA表达。结果ASMC中ERK,蛋白表达B4组显著低于A组（P〈0．01）,C4组显著高于A组（P〈0．01）,D组与A组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;B1组、B2组、B3组．B4组ERK,mRNA表达均显著低于A组（P〈0．01）,U0126以浓度依赖性的方式抑制PDGF—BB诱导ASMC中ERK的活化;C1组、C2组、C3组、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（P〈0．01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF—BB存在明显的浓度依赖关系,D组则与A组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PDGF可剂量依赖地激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,ERK通路参与了PDGF诱导的ASMC增殖的细胞内信号转导过程。     

藏红花素对缺氧环境下Wistar大鼠视网膜Muller细胞活性和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察不同浓度藏红花素对缺氧条件下RMC活性和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法改良Reichenbach等方法原代培养Muller细胞,并采用GFAP和Vimentin染色鉴定RMC。RMC培养基中加人终浓度10μmoL／L、50μmoL／L和100μmoL／L藏红花素,于1—7d计数细胞,于24h和48h台盼蓝染色测定细胞活性,对照组RMC培养基中未加入藏红花素。培养液中加入终浓度为200μmol/L的CoCl2建立化学缺氧模型。实验分4组：缺氧组（H组）、藏红花素处理组（C组）、缺氧＋藏红花素处理组（HC组）和正常对照组（NC组）,其中C和HC组培养液中加入10μmol／L藏红花素。处理24h,台盼蓝染色检测细胞活性,采用Westernblot法半定量检测GFAP的表达。结果含10μmoL／L和50μmol／L藏红花素的培养液中,细胞生长无抑制;100μmol/L藏红花素的培养液中细胞增生受到抑制,培养24h和48hRMC活性分别为（68±7）％、（59±9）％,与对照组相比,明显降低（t24h=3．723,P〈0．05;t48h=4．103,P〈0．05）。在缺氧条件下,正常细胞和10μmoL／L藏红花素的培养液中细胞活性受到明显抑制,藏红花素可减轻缺氧环境对细胞活性的抑制作用。在缺氧条件下,GFAP表达明显升高（t=2．945,P〈0．05）;藏红花素可部分抑制GFAP高表达（t=3．362,P〈0．05）。结论缺氧能诱导体外培养视网膜Muller细胞死亡,适合浓度藏红花素可抑制缺氧诱导的视网膜Muller细胞死亡。     

中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白在大鼠造影剂肾病中的表达及其意义

目的观察中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)在大鼠造影剂肾病中的表达情况,总结NGAL表达水平的临床意义。方法 30例健康SD大鼠随机分为空白对照组、造影剂肾病组、阿托伐他汀钙治疗组,空白对照组尾静脉注射氯化钠溶液,造影剂肾病组尾静脉注射10 mg/kg吲哚美辛+左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME) 10 mg/kg+碘帕醇3 g/kg,阿托伐他汀钙治疗组造影剂肾病造模前3 d、造模当天、造模后3 d连续应用30 mg/(kg·d)的阿托伐他汀钙灌胃。比较三组血清、肾组织中NGAL表达水平,检测三组肾功能指标,以免疫组织化学法观察NGAL在肾组织中表达情况。结果 B组血清NGAL水平(100. 05±10. 84μg/L)显著高于A组、C组(12. 16±1. 38μg/L、13. 05±1. 42μg/L)(P 0. 05),A组与C组血清NGAL水平差异无统计学意义(P 0. 05)。B组血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平(13. 18±1. 52 mmol/L,55. 84±5. 63μmol/L)显著高于A组、C组(2. 54±0. 37 mmol/L,40. 16±4. 58μmol/L; 2. 86±0. 46 mmol/L,40. 25±4. 57μmol/L)(P 0. 05),A组与C组血清BUN、Scr水平差异无统计学意义(P 0. 05)。B组肾组织中NGAL蛋白(3. 95±0. 47)相对表达水平显著高于A组、C组(1. 02±0. 16,1. 26±0. 24)(P 0. 05),A组与C组肾组织中NGAL蛋白相对表达水平差异无统计学意义(P 0. 05)。B组肾组织中NGAL阳性表达率(100%)显著高于A组、C组(10. 00%、20. 00%)(P 0. 05)。A组、C组肾组织中NGAL阳性表达率差异无统计学意义(P 0. 05)。结论造影剂肾病大鼠血清、肾组织中NGAL均呈高表达,高表达与肾功能损伤指标密切相关,检测NGAL水平在临床诊断、预后评估中具有一定的临床应用价值。     

富血小板血浆对人乳牙牙髓干细胞的 增殖与向成骨分化的调控作用

目的探讨富血小板血浆(m PRP)对人乳牙牙髓干细胞(SHED)的增殖与向成骨分化的调控中的作用。方法收集陕西省宝鸡市中医医院门诊6～8岁儿童拔除的乳牙,酶消化法培养SHED,将细胞随机分为:对照组、3μmol/L组和10μmol/L组,依照分组依次以0μmol/L、3μmol/L、10μmol/L m PRP作用于SHED。采用MTT法检测m PRP对SHED增殖能力的影响,采用碱性磷酸酶(ALP)试剂盘检测m PRP作用于SHED后ALP活性的改变,RT-PCR方法检测细胞内骨涎蛋白与骨钙素mRNA含量的改变。结果①采用m PRP培养的SHED生长形态良好,单细胞形式的成纤维细胞样形态,体积较小,大多数细胞为长梭型或多角型,有些细胞呈现出立方形,细胞胞质均匀,胞体丰满。每5～7天汇合可传代。②m PRP对SHED细胞具有促进其增殖的能力,3μmol/L组与10μmol/L组SHED细胞测得的OD值均高于对照组(P 0. 05)。随着m PRP浓度的升高,测得的OD值增大(P 0. 05)。③ALP活性方面,在3μmol/L组和10μmol/L组,测得的OD值均随着时间的变化,OD值增大,且差异具有统计学意义(P 0. 05)。3μmol/L组与10μmol/L组测得的OD值在不同时间点上均高于对照组,且差异具有统计学意义(P 0. 05)。④3μmol/L组及10μmol/L组SHED细胞中骨涎蛋白和骨钙素的mRNA含量均高于对照组,且随着m PRP的浓度升高,促进作用逐渐增强(P0. 05)。结论 m PRP对SHED细胞的增殖和向成骨分化均具有一定的促进作用,随着浓度的增大和作用时间的延长,其促进增殖的能力也随之增强,可见m PRP促进SHED的增殖和向成骨分化具有一定效果。     

共轭亚油酸对胃癌MGC-803细胞增殖的影响

目的 研究共轭亚油酸（CLA）对体外培养人胃癌MGC-803细胞生长的影响。方法 采用体外培养人胃癌MGC-803细胞，用MTT比色、流式细胞光度术以及Cyclin D1蛋白表达检测的方法，观察不同浓度CLA（50．0、100．0、200．0μmol／L）对MGC-803细胞生长的影响。结果 MTT比色结果显示，不同浓度CLA可抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖，72h的抑制率分别为48．61％、62．02％、66．33％，呈现剂量-效应关系（P〈0．05）。流式细胞仪检测表明，不同浓度CLA（50．0、100．0、200．0μmol／L）作用MGC-803细胞48h，C1期细胞从0μmol／L浓度组的32．2％分别上升到43．1％、59．7％、63．9％，出现G1期阻滞。免疫组织化学结果显示，Cyclin D1蛋白表达随着CLA浓度的增加呈现逐渐下降的趋势。结论 CLA对体外培养的人胃癌MGC-803细胞增殖有良好的抑制作用。     

花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨花旗松素通过抑制核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法将H9c2细胞分为A组、B组、C组、D组、E组,A组于37℃、5%CO_2恒温箱中培养30 h; B组缺氧(O_2浓度6%的厌氧培养箱)培养24 h,再复氧(37℃、5%CO_2恒温箱)培养6 h; C组加入1μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h; D组加入10μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h; E组加入100μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h。比较各组H9c2细胞形态学变化、存活率、凋亡率、NF-κB蛋白表达量、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达量。结果 HE染色显示,A组细胞形态结构正常,B组H9c2细胞形态结构异常,横纹模糊,可见大量点状坏死灶,间质水肿明显,炎性细胞浸润明显; C、D、E组H9c2细胞病理改变较B组显著改善,随着花旗松素剂量增大,H9c2细胞病理改善越明显。B组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较A组明显下降(P 0. 05); C、D、E组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较B组明显升高(P 0. 05),呈剂量依赖性。B组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较A组明显升高(P 0. 05); C、D、E组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较B组明显下降(P 0. 05),呈剂量依赖性。结论花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤起到保护作用,并这种作用呈剂量依赖性,这可为心肌缺血再灌注损伤的防治提供新的方向。