中药蛇六谷提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖影响的实验研究

目的:观察蛇六谷提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,探讨其可能的作用机理。方法:采用系统溶剂法初步提取分离蛇六谷不同提取物,运用MTT法和生长曲线法观察不同浓度的各提取物对人胃癌SGC-7901细胞的增殖的影响,流式细胞仪检测蛇六谷石油醚萃取物对该细胞周期分布及凋亡的影响。结果:蛇六谷醇提取物、石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物均具有一定的抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用,以石油醚萃取物的抑制作用最为明显,呈现较好的剂量-效应曲线。生长曲线法观察发现蛇六谷石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用有一定的时间-效应曲线;流式细胞仪检测发现蛇六谷石油醚萃取物可阻滞SGC-7901细胞周期于G0/G1期,分析表明其作用机理可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。结论:蛇六谷石油醚萃取物可能是该药抗肿瘤的有效部位之一。     

蛇六谷提取物对人胃癌SGC-7901细胞MAPK信号通路的影响

目的:探讨蛇六谷提取物抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用机制。方法:以体外培养胃癌SGC-7901细胞为研究对象,应用WesternBlot方法检测不同质量浓度的蛇六谷提取物对胃癌SGC-7901细胞内ERK、JNK、P38表达及其磷酸化水平的影响。结果:蛇六谷提取物对胃癌SGC-7901细胞内ERK、JNK、P38的表达无明显影响,但激活ERK、JNK和P38的磷酸化水平,并表现出良好的剂量依赖性。结论:蛇六谷提取物可能通过激活MAPK信号通路抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖。     

中药蛇六谷石油醚萃取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的:研究中药蛇六谷石油醚萃取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制。方法:以MTT法检测蛇六谷石油醚萃取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-9的表达。结果:该提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖存在明显的抑制作用,且呈剂量-效应关系。Western Blot实验结果显示该提取物能明显下调Survivin蛋白、Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白、Cleaved-Caspase-9蛋白酶的表达;结论:该提取物诱导SGC-7901细胞凋亡的机制可能与影响上述蛋白的表达。     

南蛇藤提取物靶向mTOR抑制人胃癌细胞SGC-7901的迁移能力的研究

目的 研究不同浓度的南蛇藤Celastrus orbiculatus Thunb.提取物对敲低雷帕霉素靶蛋白（Mammalian Target of Rapamycin，mTOR）表达的人胃癌SGC-7901细胞迁移能力的影响。方法 用siRNA技术，构建敲低mTOR表达的人胃癌SGC-7901细胞。MTT法检测南蛇藤提取物（10、20、40、80、160、320 μg·mL^-1）对人胃癌SGC-7901/mTOR^-细胞增殖的影响。加入不同浓度的南蛇藤提取物（20、40、80 μg·mL^-1）作用24 h后，分别用划痕实验和Transwell小室迁移实验，考察不同浓度的南蛇藤提取物对SGC-7901/mTOR^-细胞迁移能力的影响。Western blot法分析对mTOR信号转导通路相关蛋白的影响。结果 南蛇藤提取物明显抑制人胃癌SGC-7901/mTOR^-细胞的增殖，呈浓度依赖性。南蛇藤提取物明显降低人胃癌SGC-7901/mTOR^-细胞的迁移能力，减少mTOR信号转导通路相关蛋白的表达量。结论 南蛇藤提取物明显抑制人胃癌SGC-7901/mTOR^-细胞的迁移，其分子机制可能与mTOR信号转导通路相关。     

β-咔啉类生物碱抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭的机制研究

该研究主要探索β-咔啉类生物碱抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭的机制与黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因表达的相关性。采用CCK-8法测定不同浓度条件下β-咔啉类生物碱对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率;并通过Transwell小室测定β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移与侵袭能力的影响;qRT-PCR及Western blot技术检测FAK基因mRNA及蛋白的表达差异。然后将si-FAK-1051重组质粒转染到SGC-7901细胞中,再次采用qRT-PCR及Western blot技术鉴定FAK基因沉默效果,最后采用同样的方法检测FAK基因沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响。随着β-咔啉类生物碱浓度增加,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐升高,IC50=13.364 mg·L-1;阳性对照组(5-FU,5 mg·L-1)和β-咔啉类生物碱组中Transwell小室内SGC-7901细胞均可见显著减少(P0.01),且β-咔啉类生物碱组SGC-7901细胞数目较阳性对照组明显降低(P0.01);阳性对照组、β-咔啉类生物碱实验组FAK基因mRNA及蛋白表达水平较空白对照组显著降低(P0.05)。si-FAK-1051转染入胃癌SGC-7901细胞后,FAK基因的mRNA及蛋白表达被明显下调(P0.05),细胞增殖和细胞迁移能力也显著降低(P0.05)。β-咔啉类生物碱较5-FU具有更有效的抑制胃癌SGC-7901细胞迁移与侵袭能力,而该机制可能与β-咔啉类生物碱抑制FAK基因mRNA及蛋白表达水平有关。     

半枝莲抑制胃癌SGC-7901细胞浸润转移作用及机理

目的 研究半枝莲提取物抑制人胃癌SGC-7901细胞浸润转移的作用及机理.方法 采用MTT比色法检测半枝莲提取物对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用;采用不同浓度梯度半枝莲提取物干预细胞,应用AnnexinV-FITC/PI双染色凋亡试剂盒,通过流式细胞仪观察细胞的凋亡情况.结果 半枝莲提取物能显著地抑制SGC-7901细胞的增殖,并具有浓度依赖性;作用16 h后,细胞生长密度变疏,细胞皱缩,其中95％氯仿半枝莲提取物高浓度组大部分细胞破碎;细胞有明显的凋亡改变.半枝莲黄酮类化合物B作用肿瘤细胞后uPA的表达与阴性对照组相比显著减弱,并呈现统计学意义(P＜0.01).结论 半枝莲提取物具有抗胃癌SGC-7901细胞增殖和诱导胃癌细胞凋亡的作用,并能降低uPA的表达.     

蛇六谷乙酸乙酯萃取物A1组分对人胃癌SGC-7901细胞增殖及bcl-2 Bax基因表达的影响

目的：探讨蛇六谷乙酸乙酯萃取物A1组分对人胃癌SGC-7901细胞株的增殖抑制作用及其作用机制。方法：用MTT法检测不同浓度A1组分对SGC-7901细胞的增殖抑制作用,光镜学观察A1组分对SGC-7901的细胞形态学变化,RT-PCR法观察A1组分对SGC-7901细胞bcl-2及Bax基因表达的影响。结果：A1组分对SGC-7901细胞增殖抑制作用为剂量依赖性,并具有明显的细胞形态学改变;RT-PCR结果显示,随着A1组分剂量的增加,具有明显的下调bcl-2基因及上调Bax基因水平的作用。结论：A1组分对人胃癌SGC-7901细胞的增殖具有明显的抑制作用,其抑制作用可能与下调bcl-2基因及上调Bax基因水平作用有关。     

三棱散对人胃癌SGC-7901细胞增殖作用的影响

目的:探讨三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡影响及其可能机制。方法:制备三棱散水提物,培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法观察不同时间(24 h,72 h)不同浓度三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。用流式细胞仪检测三棱散水提物对细胞周期阻滞及其凋亡的影响。RT-PCR法检测不同浓度三棱散水提物作用人胃癌SGC-7901细胞72 h后细胞NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA及p16 mRNA表达情况。结果:随着三棱散水提物浓度增高和作用时间的延长,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐增高(P0.05),同一浓度不同时间的细胞增殖抑制率相比,有显著性差异(P0.05)。人胃癌SGC-7901细胞在G0/G1期表现出明显的增加,S期细胞明显的减少,各浓度组均明显诱导细胞凋亡(P0.05),其凋亡率随三棱散浓度增加而提高。RT-PCR法检测显示,随着三棱散水提物浓度的增加,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA表达逐渐减少,p16 mRNA表达逐渐增加。三棱散水提物浓度5.0 mg/m L,10.0 mg/m L时,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA及p16 mRNA表达存在显著性差异(P0.05或P0.01)。结论:三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞有抑制增殖和促凋亡作用,呈时间和浓度依赖性,且G0/G1期细胞数量增多,S期细胞数量减少。RT-PCR法检测显示,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA呈现低表达,p16 mRNA呈现高表达,由此推测,NF-κBp65表达下调会直接影响Cyclin D1表达,发挥细胞周期的正反馈调节,p16表达上调可启动细胞周期的负反馈调节,共同作用产生细胞增殖抑制及促进凋亡的作用。     

黄芪提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制研究

目的:研究黄芪提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度的黄芪提取物干预人胃癌SGC-7901细胞。MTT比色法观察黄芪提取物对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位;分光光度法检测细胞Caspase-3和Caspase-9活性;电泳法检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:黄芪提取物(25、50、100 mg/L)以剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖,诱导其凋亡,并且降低线粒体膜电位;增加Caspase-3和Caspase-9活性,上调Bax蛋白表达的同时下调Bcl-2蛋白表达。结论:黄芪提取物可抑制人胃癌SGC-7901细胞体外增殖且通过线粒体途径诱导其凋亡。     

三物白散对Survivin-RNA基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞的影响

目的观察中药三物白散对含存活素(Survivin)基因沉默的慢病毒颗粒(Survivin-RNAi-LV)转染人胃癌SGC-7901细胞的影响。方法分别采用RT-PCR(聚合酶链式反应)、Western blot方法检测人胃癌SGC-7901细胞中Survivin m RNA和蛋白的表达;采用甲基噻唑基四唑(MTT)方法检测胃癌SGC-7901细胞的增殖情况、流式细胞仪检测凋亡率及三物白散对其增殖抑制率及凋亡率的影响。结果重组慢病毒颗粒介导的Survivin基因沉默转染人胃癌SGC-7901细胞可有效使Survivin m RNA和蛋白的表达沉默;三物白散对人胃癌SGC-7901细胞的生长具有抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡;Survivin基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞组应用三物白散,其细胞增殖弱于、细胞凋亡率高于三物白散+空白对照组和三物白散+阴性对照组(P0.05)。结论含Survivin基因沉默的重组慢病毒颗粒转染人胃癌SGC-7901细胞,能够抑制SGC-7901细胞Survivin的表达,三物白散对Survivin基因沉默转染后胃癌细胞的杀伤力较未转染细胞有明显的提高。     

白背叶提取物A的体外抗肿瘤机制的研究

目的 研究白背叶提取物A对SGC-7901人胃癌细胞增殖抑制作用的发生机制.方法 采用RT-PCR检测白背叶提取物A对SGC-7901人胃癌细胞抑癌基因p53,癌基因Bcl-2表达的影响.结果 不同浓度的白背叶提取物A作用于SGC-7901细胞后:p53的mRNA表达均有增强,10,20,40 μg/ml浓度的p53 mRNA表达均显著高于空白组(P<0.01);各实验浓度的白背叶提取物A作用下SGC-7901细胞的Bcl-2 mRNA表达均有降低,与空白组相比具有显著性差异(P<0.01),且该作用有一定的剂量依赖性.结论 对抑癌基因p53、癌基因Bcl-2表达的影响是白背叶提取物A抗肿瘤的作用机制之一.     

苦马豆素对胃癌细胞中pten和survivin mRNA表达的影响

目的:探讨不同浓度的疯草提取物苦马豆素对胃癌SGC-7901、MKN-45细胞增殖的抑制作用以及对pten和survivin基因的影响。方法:以不同浓度的疯草提取物苦马豆素处理胃癌SGC-7901、MKN-45细胞后,采用MTT法测定细胞活力;以流式细胞术检测细胞凋亡;并用RT-q PCR法检测pten和survivin基因的表达。结果:不同浓度的疯草提取物苦马豆素均能抑制细胞增殖,1.00 mg/m L的苦马豆素可明显诱导胃癌SGC-7901、MKN-45细胞发生凋亡,其凋亡率分别达到了40.94%和43.21%;RT-q PCR法检测显示pten基因表达上调,survivin基因表达下调。结论:疯草提取物苦马豆素抑制胃癌细胞增殖并诱发凋亡,其原因可能与上调pten和下调survivin m RNA的表达有关。     

银杏外种皮提取物有效部位GBEE-2对胃癌SGC-7901细胞凋亡及其通路的影响

目的 研究银杏外种皮提取物有效部位GBEE-2体外对人胃癌细胞凋亡及其凋亡通路的影响.方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,应用MTT法检测细胞增殖;应用流式细胞术检测凋亡率和细胞周期;应用ELISA法检测培养上清中基因蛋白Caspase-9、Fas及Survivin的含量.结果 GBEE-2(5～160μg·mL-1)对SGC-7901细胞的体外增殖具有抑制作用,并具有浓度依耐性,IC50为83 μg·mL-1;在10～160 μg·mL-1浓度下体外培养,GBEE-2可提高SGC-7901细胞的凋亡率,可使Caspase-9、Fas蛋白表达量增加(P<0.05或0.01),而Survivin蛋白的表达则减少(P<0.05或0.01).结论 GBEE-2抑制人胃癌SGC-7901细胞的作用机制与诱导细胞凋亡有关,其凋亡通路涉及Caspase途径.     

复方青龙衣胶囊对胃癌细胞SGC-7901基因芯片表达的影响

目的:研究复方青龙衣胶囊体外对人胃癌细胞SGC-7901基因表达谱的影响,初步探讨其对胃癌细胞抑制作用的机制。方法:设定5个不同药物浓度梯度(0.8×10-3,1×10-3,1.2×10-3,1.4×10-3,1.6×10-3 g·L-1)预处理24 h,采用MTT法测定对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用;以药物半数抑制浓度预处理24 h,全基因芯片技术研究对胃癌基因表达谱的影响,并采用基因集合聚类分析法分析结果。结果:以不同浓度的复方青龙衣处理胃癌细胞SGC-7901 24 h,结果显示该药对肿瘤细胞的生长呈现剂量依赖性的抑制作用,半数抑制浓度为1.27×10-3g·L-1;芯片结果显示:胃癌肿瘤细胞SGC-7901经药物处理后总共筛选出78个差异表达基因,表达上调的基因有23个,表达下调的基因有55个。结论:复方青龙衣胶囊对人胃癌细胞SGC-7901具有显著的抑制作用,并可能通过影响细胞周期基因的表达,使肿瘤细胞停滞于G1/S期发挥抗肿瘤作用。     

盐酸小檗碱对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、自噬及MAPK通路影响的研究

目的观察盐酸小檗碱对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、自噬及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响,探讨盐酸小檗碱治疗胃癌的可能分子机制。方法通过CCK-8实验检测0.5,1,1.5,2,2.5,3,3.5 g/L的盐酸小檗碱培养24 h、48 h、72 h后胃癌SGC-7901细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测0 g/L(空白组)、4 g/L和8 g/L的盐酸小檗碱培养48 h后胃癌SGC-7901细胞凋亡情况,采用Western blot实验检测0 g/L(空白组)、4 g/L和16 g/L的盐酸小檗碱培养12 h后胃癌SGC-7901细胞中Bax、Caspase-3、Bcl-2、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin 1、RAS、p38蛋白表达情况。结果从2 g/L盐酸小檗碱浓度开始,胃癌SGC-7901细胞存活率随着盐酸小檗碱浓度的增加而逐渐降低,差异均有统计学意义(P均0.05);胃癌SGC-7901细胞凋亡率随着盐酸小檗碱浓度的增加而递增;与空白组比较,16 g/L盐酸小檗碱培养后胃癌SGC-7901细胞中Bax、Caspase-3、LC3Ⅱ、Beclin 1、RAS、p38表达量均显著增高,Bcl-2、LC3I蛋白表达量均显著减少,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论盐酸小檗碱可通过调控Bax/Bcl-2蛋白的表达抑制胃癌SGC-7901细胞增殖及促进其凋亡,可通过激活p38 MAPK信号通路诱导胃癌SGC-7901细胞发生自噬,从而达到对胃癌的干预和治疗作用。     

中药蛇六谷提取物对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响

目的:观察蛇六谷提取物对体外生长的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,寻找蛇六谷抗肿瘤的有效部位。方法:采用系统溶剂法初步提取分离蛇六谷不同有效部位,运用CCK8法和生长曲线法观察不同浓度的蛇六谷各提取物对体外培养的MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用,并以流式细胞仪检测其对MDA-MB-231细胞周期的影响。结果:蛇六谷石油醚萃取物、高浓度蛇六谷乙酸乙酯萃取物对MDA-MB-231细胞生长有明显抑制作用,其中蛇六谷石油醚萃取物抑制作用最为明显(P<0.05);经流式细胞仪分析蛇六谷石油醚提取物则将MDA-MB-231细胞阻滞在S期,使得细胞无法完成DNA复制进入G2期。结论:蛇六谷石油醚萃取物可能是该药抗肿瘤的有效部位之一。     

姜黄素抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖及诱导凋亡作用研究

目的研究姜黄素(Cur)对人胃腺癌细胞(SGC-7901)增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用CCK-8检测不同浓度Cur对SGC-7901细胞的24、48、72 h的抑制作用;TUNEL检测各浓度Cur作用24h后SGC-7901细胞凋亡的发生率;Western blot法检测各浓度Cur作用SGC-7901细胞后剪切半胱氨酰天冬氨酸酶-3(cleaved-caspase-3)、剪切半胱氨酰天冬氨酸酶-9(cleaved-caspase-9)、Bax和Bcl-2蛋白量的表达。结果与对照组比较,50、100、200μmol/L Cur作用胃癌SGC-7901细胞后吸光度下降(P0.05),同时药物剂量越高,作用时间越长,吸光度越低(P0.01);12、24、48h IC50分别为156.51、86.88、35.32μmol/L;Cur能上调SGC-7901细胞中cleaved-caspase-3,cleaved-caspase-9和Bax蛋白的表达(P0.05),而同时能下调Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论姜黄素具有抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导其凋亡的作用;其抗肿瘤作用机制与激活caspase-3凋亡通路及Bcl-2蛋白家族相关。     

川芎嗪对人胃癌细胞株SGC-7901/ADR增殖、凋亡和MDR1、GST-π表达的影响

目的:探讨川芎嗪诱导人胃癌细胞株SGC-7901/ADR凋亡及对MDR1、GST-π表达的调控作用。方法:不同剂量(0~120μM)川芎嗪内酯与人胃癌细胞株SGC-7901/ADR同培养不同时间(24、48及72 h),50μM 5-氟尿嘧啶(5-FU)作为阳性对照组,采用CCK8法测定细胞的增殖,流式细胞术测定细胞凋亡率。用不同剂量的川芎嗪与细胞培养48 h后,采用Western blot测定MDR1、GST-π蛋白的表达情况,用半定量RT-PCR测定MDR1、GST-πmRNA表达。结果:不同浓度川芎嗪处理人胃癌细胞株SGC-7901,川芎嗪抑制SGC-7901细胞增殖呈浓度及作用时间依赖性且120μM川芎嗪的抑制率与阳性对照组相当;而且应用流式细胞仪检测发现川芎嗪作用于人胃癌细胞株SGC-7901 48 h后,细胞出现凋亡。Western blot及半定量RT-PCR检测细胞中MDR1、GST-π及其mRNA的表达,结果显示,川芎嗪可下调MDR1、GST-π表达,下调作用与TMZ相当甚至更具优势。结论:川芎嗪能够抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖,诱导其凋亡,且能抑制细胞中MDR1、GST-π的表达,其表达量与川芎嗪剂量呈现明显的时间-浓度效应关系。     

核桃楸皮甲醇提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖活性的影响

目的 研究核桃楸皮甲醇提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖活性的影响及相关机制.方法 体外培养SGC-7901细胞,并用不同浓度核桃楸皮甲醇提取物进行处理.通过MTT法研究核桃楸皮甲醇提取物对SGC-7901细胞增殖活性的影响;采用流式细胞仪分析核桃楸皮甲醇提取物对SGC-7901细胞周期的影响,并且测量了Caspase-3的活性.结果 核桃楸皮甲醇提取物可以显著抑制SGC-7901细胞生长,具有时间和计量依赖性.与未经过核桃楸皮甲醇提取物处理的SGC-7901细胞相比,给药组的G2期细胞显著降低.核桃楸皮甲醇提取物将细胞阻滞在G1和S期,并具有剂量依赖性.不同浓度桃楸皮甲醇提取物可以显著提高SGC-7901细胞Caspase-3的活性.结论 桃楸皮甲醇提取物可以通过调节细胞周期分布和诱导细胞凋亡有效抑制SGC-7901细胞生长.     

化瘀解毒方对过表达PDK1和Akt人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的:利用细胞瞬时转染技术,探讨过表达PDK1和Akt后化瘀解毒方对人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用。方法:采用Elisa检测化瘀解毒方提取物对PDK1激酶活力的影响,先后将SGC-7901细胞瞬时转染PDK1质粒和Akt质粒,采用Western blot检测PI3K/Akt通路关键分子p-Akt,Akt活性变化;MTT法检测化瘀解毒方提取物对过表达PDK1或者Akt细胞增殖抑制作用。结果:化瘀解毒方提取物剂量依赖性的抑制PDK1蛋白激酶活性。免疫印迹结果显示过表达PDK1或者Akt可以阻止化瘀解毒方提取物或者LY294002抑制SGC-7901细胞中Akt蛋白的磷酸化。MTT结果显示,化瘀解毒方提取物剂量依赖性的抑制转染空质粒组中SGC-7901细胞增殖。结论:化瘀解毒方通过PI3K/Akt通路抑制胃癌增殖作用。