氟化钠通过调控Bcl-2和Bax基因的表达诱导大鼠肾脏细胞凋亡机制的研究

目的研究氟化钠(NaF)中毒对大鼠肾脏细胞凋亡的影响,并从抗凋亡的角度探究其凋亡的机制。方法48只体重80~100 g的雄性SD大鼠,随机分成四组:对照组、低氟组、中氟组、高氟组,每组12只,分别饮用浓度为0mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L NaF的去离子水,连续染毒120 d。观察大鼠的一般状态,氟斑牙形成情况,测量体重变化及尿氟含量;制备肾脏细胞悬液,用流式细胞术检测肾脏细胞凋亡率;实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测肾脏组织中Bcl-2和Bax基因的表达。结果在氟化钠染毒的第60天和120天,髙氟组大鼠体重显著低于对照组(P0.05);三个NaF处理组氟斑牙发生率、尿氟含量及肾脏细胞凋亡率均显著高于对照组(P0.05);随着氟化钠浓度的升高,Bcl-2 mRNA和蛋白的表达呈现上调趋势,而Bax mRNA和蛋白的表达则呈下调趋势,并且差异具有显著性(P0.05)。结论氟化钠可通过抑制Bcl-2和促进Bax的表达诱导肾脏细胞凋亡,并且随着氟化钠浓度的升高,凋亡率逐渐升高。     

银杏叶提取物制剂对脑梗死缺血再灌注大鼠氧化应激反应及凋亡因子调节作用

目的探究银杏叶提取物(EGb)制剂对脑梗死缺血再灌注大鼠氧化应激反应及凋亡因子调节作用。方法选取40只6周龄SPF级SD大鼠,采用改良线栓法制作脑缺血再灌注模型(MCAO),分为4组,空白对照(假手术)组、模型组、低浓度银杏叶提取物制剂组(50 mg/kg EGb组)、高浓度银杏叶提取物制剂组(100 mg/kg EGb组)。空白对照组和模型组注射等量的生理盐水,术后1 d静脉注射上述浓度的EGb后连续3 d腹腔注射上述浓度的EGb,1次/d。使用序贯法治疗后,使用mNSS神经功能缺损评分评价大鼠神经功能;取脑组织测定脑梗死面积,计算脑梗死率;检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)含量;使用Westen Bolt检测大鼠Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果 mNSS神经功能缺损评分结果显示,模型组评分显著高于空白对照组、低浓度银杏叶提取物制剂组和高浓度银杏叶提取物制剂组,高浓度银杏叶提取物制剂组显著低于低浓度银杏叶提取物制剂组,差异有统计学意义(P 0. 05);相比空白对照组,模型组大鼠脑梗死面积百分比、ROS水平、MAD水平、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高,GPX水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P 0. 05);相比模型组,银杏叶提取物制剂组大鼠脑梗死面积百分比、ROS水平、MAD水平、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著降低且高浓度银杏叶提取物制剂组显著低于低浓度银杏叶提取物制剂组,GPX水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,且高浓度银杏叶提取物制剂组显著高于低浓度银杏叶提取物制剂组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论银杏叶提取物制剂序贯治疗可显著降低脑梗死缺血再灌注损伤大鼠体内氧化应激反应和凋亡因子,缓解脑梗死损伤,且在一定浓度范围内呈浓度依赖性。     

硼替佐米联合维生素C对淋巴瘤细胞株Jurkat凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的分析硼替佐米联合维生素C(VitC)对淋巴瘤细胞株Jurkat凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法收集淋巴瘤细胞株Jurkat细胞并分成30 nmol/L硼替佐米组、100μg/ml VitC组及联合组(30 nmol/L硼替佐米联合100μg/ml VitC治疗)。用流式细胞仪和CCK-8检测Jurkat细胞凋亡率和周期及采用免疫组织化学法检测Bcl-2和Bax的表达情况。结果 VitC组使Jurkat细胞的生长方式从局部聚集变化成平均分布;硼替佐米组于1～2 d期间Bcl-2的表达水平较VitC组及联合组降低得更慢,其Bax的表达水平较VitC组及联合组升高得更慢,且VitC组的Bax的表达水平显著高于硼替佐米组。硼替佐米组Jurkat细胞抑制率较VitC组显著升高(P 0. 01),联合组Jurkat细胞抑制率较VitC组和硼替佐米组均显著升高(P 0. 01)。相比对照组,硼替佐米组、VitC组及联合组Jurkat细胞凋亡率均显著升高(P 0. 01),且VitC组和联合组Jurkat细胞凋亡率较硼替佐米组均显著升高(P 0. 01)。结论 VitC有利于抑制早期淋巴瘤细胞株Jurkat的增殖,同时细胞凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax的表达情况与VitC诱导Jurkat细胞凋亡关系密切。     

右美托咪定对心肌缺血再灌注大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的分析右美托咪定对心肌缺血再灌注(MIR)大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响。方法取30只SD大鼠,随机分为对照组(仅穿线而不结扎)、MIR组(建立MIR模型)、干预组(建立MIR模型前给予右美托咪定预处理),三组各10只。比较干预组与MIR组大鼠心肌梗死面积、危险区面积和心肌细胞凋亡率的差异,并比较三组大鼠心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及补体3蛋白表达水平的差异。结果相比MIR组,干预组大鼠心肌梗死面积和危险区面积明显缩小,心肌细胞凋亡率显著降低(P 0. 01)。相比对照组,MIR组和干预组大鼠Bcl-2和Bax蛋白表达水平均显著升高(P 0. 01);相比MIR组,干预组大鼠Bcl-2蛋白表达水平显著升高,而Bax蛋白表达水平显著降低(P 0. 01)。相比对照组,MIR组和干预组大鼠补体3蛋白表达水平均显著升高(P 0. 01);相比MIR组,干预组大鼠补体3蛋白表达水平显著降低(P 0. 01)。结论通过右美托咪定预处理可提高MIR大鼠模型心肌Bcl-2蛋白表达,降低Bax和补体3蛋白表达,减少心肌梗死面积,缓解大鼠心肌损伤,减少心肌细胞凋亡。     

褪黑激素影响帕金森病模型大鼠前脑纹状体细胞的凋亡

目的:观察褪黑激素对帕金森病模型大鼠行为学和前脑纹状体细胞凋亡的影响。方法:实验于2005-02/2006-05在江苏大学医学院基础医学中心实验室进行。①选取爬杆实验正常(0分)的SD大鼠90只,随机分为空白对照组、生理盐水组和褪黑激素1,5,10mg/kg组5组,每组18只。②除空白对照组外,其他4组大鼠连续7d腹腔注射MPTP(30mg/kg)建立帕金森病大鼠模型,造模成功后,于每日20时进行治疗,生理盐水组腹腔注射1mL生理盐水,褪黑激素1,5,10mg/kg组腹腔注射褪黑激素1,5,10mg/kg。③于用药7,14,21d采用爬杆法(0～2分,评分越高运动能力越差)和迷宫试验评价大鼠行为学和智力改变;3个时间点测试后各组分别取6只大鼠处死取脑,应用SP法Bax/Bcl-2免疫组织化学染色和Tunel法细胞凋亡染色检测前脑纹状体凋亡细胞。结果:90只大鼠进入结果分析。①爬杆实验得分:造模各组均高于空白对照组(P<0.01);治疗14,21d时褪黑激素1,5,10mg/kg组低于生理盐水组(P<0.05,0.01)。②迷宫试验错误次数:褪黑激素1,5,10mg/kg组在治疗7,14d时多于空白对照组,但少于生理盐水组(P<0.05),至治疗21d时与空白对照组比差异不显著[(1.9±0.6),(1.9±0.6),(1.8±0.5),(1.6±0.4)次,P>0.05],生理盐水组仍高于空白对照组[(3.1±0.6)次]。③Bax蛋白表达于生理盐水组最高,褪黑激素组次之,空白对照组最低;Bcl-2蛋白于褪黑激素组呈高表达,空白对照组次之,生理盐水组表达最低;Tunel阳性细胞以生理盐水组最高,褪黑激素组次之,空白对照组最低。结论:褪黑激素能激活Bax/Bcl-2系统,调节前脑黑质纹状体通路多巴胺神经活性,抑制细胞凋亡,从而改善帕金森病症状。     

TREK-1通道活性改变对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响

目的:观察双孔钾通道TREK-1活性改变对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法:45只大鼠随机分为假手术组(10只)、对照组(10只)和干预组(25只)。建立大鼠光化学脑缺血模型,假手术组不注射玫瑰红,干预组侧脑室注射不同浓度(100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1 mmol/L)亚麻酸(LIN),对照组注射等量生理盐水。应用免疫荧光双标法观察正常生理情况下TREK-1在大脑神经细胞中的表达,TUNEL及DAPI双标法检测缺血边缘区细胞凋亡,Western blot法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-erk)表达。结果:正常生理情况下,TREK-1在神经元和星形胶质细胞中均有表达。与假手术组相比,对照组大量细胞凋亡,Bcl-2/Bax值下降,p-erk蛋白增加(P<0.05);与对照组比较,干预组细胞凋亡显著减少,Bcl-2/Bax值上升,p-erk蛋白降低(P<0.05)。结论:TREK-1在神经元和星形胶质细胞中均有表达。TREK-1激动剂LIN可显著抑制脑缺血后细胞凋亡,上调Bcl-2与Bax比值,抑制erk磷酸化。     

梓醇对脑缺血-再灌注大鼠神经功能、氧化应激和炎症反应的影响

目的探究梓醇对脑缺血-再灌注大鼠神经功能、氧化应激和炎症反应的影响。方法选取40只6周龄SPF级SD大鼠,采用改良线栓法制作脑缺血再灌注模型,并分为模型组、低浓度梓醇组(10 mg/kg)和高浓度梓醇组(20 mg/kg),另设空白对照组,每组10只。将其中低浓度梓醇组和高浓度梓醇组分别在术前3 d及术前30 min腹腔注射上述浓度的梓醇,空白对照组、模型组注射等量生理盐水。使用m NSS神经功能缺损评分评价大鼠神经功能;使用试剂盒检测大鼠脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)含量;使用ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α);使用试剂盒检测总一氧化氮合酶(t NOS)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和一氧化氮(NO)的含量水平;使用Westen Bolt检测大鼠Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 m NSS神经功能缺损评分结果显示,模型组评分显著高于高浓度梓醇组、低浓度梓醇组高于和空白对照组(P 0. 01);相比空白对照组,模型组MDA、ROS、IL-1β、IL-6、TNF-α、t NOS、i NOS、NO含量和Bax蛋白表达显著升高(P 0. 01); SOD、GPX含量和Bcl-2蛋白表达显著降低(P 0. 01)。相比模型组,低浓度梓醇组和高浓度梓醇组MDA、ROS、IL-1β、IL-6、TNF-α、t NOS、i NOS、NO含量和Bax蛋白表达显著降低,且高浓度梓醇组低于低浓度梓醇组,(P 0. 01); SOD、GPX含量和Bcl-2蛋白表达显著升高,且高浓度梓醇组高于低浓度梓醇组(P 0. 01)。结论梓醇可以有效缓解大脑缺血再灌注损伤,其作用机制与保护神经功能、降低氧化应激和炎症反应有关,且在一定浓度范围内呈浓度依赖性。     

黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45诱导凋亡和细胞周期的影响

目的 观察不同浓度﹑不同时间的黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45的影响.方法 应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验﹑流式细胞仪﹑细胞免疫组化等方法对人胃癌细胞MKN45进行检测.结果 MTT实验显示黄芪多糖可抑制MKN45细胞增殖;细胞周期分析提示黄芪多糖可将细胞MKN45阻滞于G0/G1期,均与浓度和时间呈正相关;免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调, Bax蛋白表达上调.结论 黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45有直接杀伤作用,同时诱导肿瘤细胞凋亡,可将细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制可能通过上调促凋亡蛋白和下调抑制凋亡蛋白实现.     

下调STC2基因表达对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨抑制斯钙素-2(stanniocalcin-2,STC2)基因表达对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法通过Lipofectamine TM2000脂质体介导法将siRNA阴性对照组和STC2-siRNA组转染人前列腺癌PC-3细胞,未转染的细胞作为空白对照组,48 h后收集细胞,Western bloting检测各组细胞中STC2的蛋白表达;CCK8及流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western bloting检测增殖相关蛋白ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(pAKT)的蛋白表达。结果 STC2-siRNA转染PC-3细胞后STC2的蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05);阴性对照组细胞OD值及细胞凋亡率与空白对照组差异无统计学意义(P0.05),而STC2-siRNA组细胞OD值显著低于空白对照组,凋亡率显著高于空白对照组(P0.05);阴性对照组ki67、Bcl-2、Bax、PI3K和p-AKT蛋白表达与空白对照组差异无统计学意义(P0.05),STC2-siRNA组ki67、Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著低于空白对照组,Bax蛋白表达显著高于空白对照组(P0.05)。结论 STC2基因表达的抑制可降低前列腺癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制与调节ki67、Bcl-2、Bax及PI3K/AKT信号通路表达有关。     

雌激素对大脑皮质细胞的神经保护作用

目的观察雌激素对体外培养的大鼠大脑皮质细胞在发生缺血缺氧损伤时的保护作用及对凋亡基因 Bcl- 2和 Bax表达的影响. 方法原代培养大鼠大脑皮质细胞,将实验分为对照组和雌激素组.对照组给予等体积蒸馏水+ 100 mmol/L谷氨酸,雌激素组给予雌激素 0.1 mmol/L+ 100 mmol/L谷氨酸,作用 24 h透射电镜观察细胞超微结构.免疫组化和 RT- PCR观察 Bcl- 2和 Bax的表达. 结果透射电镜显示雌激素能改善大脑皮质细胞超微结构,抑制凋亡.免疫组化雌激素组 Bcl- 2的阳性细胞数明显增加,而 Bax的蛋白表达则无明显改变. RT- PCR结果雌激素组 Bcl- 2 mRNA的表达为 0.72,较对照组 0.56明显上调,差异有非常显著性意义( P< 0.01). BaxmRNA的表达虽无明显改变,但 Bcl- 2和 Bax的比率二组差异有非常显著性意义,分别为 1.14和 0.86( P< 0.01). 结论雌激素能改善大鼠大脑皮质细胞超微结构,具有神经保护作用.而且能上调抗凋亡基因 Bcl- 2表达,抑制细胞凋亡.     

雌激素对大脑皮质细胞的神经保护作用

目的：观察雌激素对体外培养的大鼠大脑皮质细胞在发生缺血缺氧损伤时的保护作用及对凋亡基因Bcl-2和Bax表达的影响。方法：原代培养大鼠大脑皮质细胞，将实验分为对照组和雌激素组。对照组给予等体积蒸馏水+100mmol／L谷氨酸，雌激素组给予雌激素0．1mmol／L+100mmol／L谷氨酸，作用24h透射电镜观察细胞超微结构。免疫组化和RT-PCR观察Bcl-2和Bax的表达。结果：透射电镜显示雌激素能改善大脑皮质细胞超微结构，抑制凋亡。免疫组化雌激素组Bcl-2的阳性细胞数明显增加，而Bax的蛋白表达则无明显改变。RT—PCR结果雌激素组Bcl-2mRNA的表达为0．72，较对照组0．56明显上调，差异有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。BaxmRNA的表达虽无明显改变，但Bcl-2和Bax的比率二组差异有非常显著性意义，分别为1．14和0．86(P&;lt;0．01)。结论：雌激素能改善大鼠大脑皮质细胞超微结构，具有神经保护作用。而且能上调抗凋亡基因Bcl-2表达，抑制细胞凋亡。     

黄芩苷对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及其Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究黄芩苷对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响,并从抗凋亡的角度探讨其作用机制。方法:采用小剂量高脂高糖喂养联合链脲佐菌素单次注射法造成2型糖尿病大鼠模型,黄芩苷[150mg(kg·d)]灌胃8周,8周后称体重、肾重,计算肾指数;收集大鼠血液和24h尿,测定血糖和尿微量蛋白;一侧肾脏采用TUNEL法检测凋亡及免疫组化检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,另一侧肾脏液氮保存后采用荧光实时定量RT-PCR法测Bcl-2和BaxmRNA的表达。结果:与对照组比较,糖尿病组肾脏凋亡细胞数明显增多。Bax和Bcl-2表达均增强,Bax/Bcl-2增高(P<0.01);黄芩苷治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,Bax表达减弱,Bcl-2表达增强,Bax/Bcl-2降低(P<0.01)。结论:黄芩苷可以抑制糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡,其作用机制可能与影响凋亡基因Bax和Bc1-2表达有关。     

腺苷预处理对缺血/再灌注心肌细胞凋亡和凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的 研究腺苷预处理对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡和凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响.方法 制备缺血/再灌注损伤(I/R)和腺苷预处理的大鼠模型,采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率和凋亡蛋白Bcl-2和Bax.结果 ①缺血/再灌注组和腺苷组心肌细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.01),而腺苷组凋亡率显著低于缺血/再灌注组(P<0.01).②缺血/再灌注组抗凋亡蛋白Bcl-2表达与对照组比较无明显差别,而腺苷组Bcl-2显著高于缺血/再灌注组和对照组(P<0.01);缺血/再灌注组和腺苷组促凋亡蛋白Bax表达显著高于对照组(P<0.01),而腺苷组Bax低于缺血/再灌注组(P<0.01);缺血/再灌注组和腺苷组Bcl-2/Bax比值显著低于对照组(P<0.01),而腺苷组Bcl-2/Bax比值显著高于缺血/再灌注组(P<0.01).结论 腺苷预处理明显抑制大鼠缺血/再灌注后心肌细胞的凋亡,并使Bcl-2/Bax比值增加.     

黄芪当归合剂对大鼠缺血性急性肾损伤的保护研究

目的:探讨黄芪当归合剂对实验性缺血性肾损伤大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用.方法:建立大鼠实验性缺血性急性肾损伤模型,在缺血30 min再灌注不同时间点检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)和尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖酐酶(NAG).同时取肾组织,苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察细胞形态学变化.免疫组织化学方法检测Bcl-2和Bax基因的蛋白表达,观察黄芪当归合剂对上述表达的影响.结果:缺血性急性肾损伤时肾脏存在明显的细胞凋亡;Bcl-2和Bax基因的蛋白表达主要在近曲肾小管和远曲肾小管,肾小球很少;肾脏缺血性损伤时Bcl-2基因表达增加,Bax基因表达中量增加,Bcl-2/Bax比率升高.与缺血/再灌注组比较,黄芪当归合剂组Bax表达明显增加,Bcl-2/Bax比率降低,肾脏损伤亦减轻.结论:黄芪当归合剂对急性肾损伤具有显著的保护作用,其机制可能与其降低Bcl-2/Bax比率有关.     

盐酸右美托咪定调控HIF-1α对高糖诱导心肌线粒体损伤与细胞凋亡的影响

目的探讨盐酸右美托咪对高糖诱导的心肌线粒体损伤与细胞凋亡的影响及作用机制。方法用葡萄糖浓度为33 mmol/L的培养基培养H9C2细胞作为高糖组,正常培养基培养的细胞作为正常对照组;用1μmol/L的盐酸右美托咪定预处理H9C2细胞1 h后用葡萄糖浓度为33 mmol/L的培养基培养作为盐酸右美托咪定+高糖组;将con小干扰RNA(si-con)、HIF-1α小干扰RNA(si-HIF-1α)质粒分别转染至H9C2细胞中用1μmol/L的盐酸右美托咪定预处理H9C2细胞1 h后用葡萄糖浓度为33 mmol/L的培养基培养作为盐酸右美托咪定+si-con+高糖组、盐酸右美托咪定+si-HIF-1α+高糖组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH活性;蛋白质印迹(Western Blot)法检测裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素c(Cyt-C)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;JC-1荧光标记法检测线粒体膜电位;2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测活性氧(ROS)荧光强度;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测细胞HIF-1αmRNA水平。结果与正常对照组相比,高糖组心肌细胞活力显著降低,LDH活性显著升高,Cleaved caspase-3、Bax表达水平显著升高,Bcl-2表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,线粒体膜电位降低的细胞比率显著升高,Cyt-C蛋白表达水平显著升高,ROS荧光强度显著升高,HIF-1αmRNA和蛋白表达显著降低(P <0. 05)。与高糖组相比,盐酸右美托咪定+高糖组心肌细胞活力显著升高,LDH活性显著降低,Cleaved caspase-3、Bax表达水平显著降低,Bcl-2表达水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,线粒体膜电位降低的细胞比率显著降低,Cyt-C蛋白表达水平显著降低,ROS荧光强度显著降低,HIF-1αmRNA和蛋白表达显著升高(P <0. 05)。与盐酸右美托咪定+si-con+高糖组相比,盐酸右美托咪定+si-HIF-1α+高糖组可逆转上述盐酸右美托咪定对高糖诱导的心肌细胞线粒体损伤与细胞凋亡的抑制作用。结论盐酸右美托咪定可促进心肌细胞存活,抑制LDH的漏出和ROS的产生,抑制细胞凋亡,稳定线粒体膜电位,减轻高糖对线粒体和细胞凋亡的影响,其机制可能与HIF-1α有关。     

低剂量电离辐射对Ⅰ型糖尿病大鼠海马神经元细胞凋亡和氧化损伤的影响

目的探讨低剂量电离辐射(LDR)对Ⅰ型糖尿病模型大鼠海马神经元细胞凋亡和氧化损伤的影响,阐明二者的关系。方法利用链尿佐菌素(STZ)建立Wistar大鼠糖尿病模型(DM)后,造模完成后分为正常组、模型组、模型+25mGy、模型+50mGy和模型+75mGy组,每组20只。给予25、50和75mGy隔日照射,共计12次,继续饲养4周后麻醉后处死大鼠,取出海马组织利用生化法检测海马中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力;并利用流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(ROS)含量,并利用Western blot检测Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达。结果Ⅰ型DM模型血糖显著高于正常对照组,而LDR可以显著降低模型大鼠的血糖(P0.05)。同时,与正常组比较,DM模型海马细胞ROS水平和MDA含量显著增加(P0.05),SOD和CAT活力未见显著变化;LDR照射后DM模型海马中ROS水平和MDA含量显著降低(P0.05),但对SOD和CAT活力仍处于较低水平;另外,DM模型海马细胞凋亡百分比较正常对照组显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白表达降低,Bax和caspase-3蛋白表达增加,而LDR照射能够降低DM大鼠海马神经细胞的凋亡百分比,且升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax和caspase-3蛋白表达。结论Ⅰ型糖尿病大鼠海马神经元细胞氧化损伤和凋亡增加,而LDR能显著降低这种作用,且涉及到Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的表达。     

黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45诱导凋亡和细胞周期的影响

目的观察不同浓度不同时间的黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验流式细胞仪细胞免疫组化等方法对人胃癌细胞MKN45进行检测。结果 MTT实验显示黄芪多糖可抑制MKN45细胞增殖;细胞周期分析提示黄芪多糖可将细胞MKN45阻滞于G0/G1期,均与浓度和时间呈正相关;免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调。结论黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45有直接杀伤作用,同时诱导肿瘤细胞凋亡,可将细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制可能通过上调促凋亡蛋白和下调抑制凋亡蛋白实现。     

大蒜素对LM-8细胞Bcl-2及Bax表达的影响

背景:有研究证实,大蒜素对LM-8细胞增殖及凋亡有影响.目的:观察大蒜素干预C3H小鼠骨肉瘤细胞株LM-8细胞Bcl-2、Bax凋亡蛋白的表达,以及LM-8细胞的形态学变化与Bcl-2及Bax变化的关系.设计:随机分组,非盲法,细胞水平体外实验.单位:实验于2006-09/2007-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成.材料:实验所用C3H小鼠LM-8骨肉瘤细胞株购自解放军第四军医大学实验动物中心.大蒜素为武汉汇海公司产品,是从大蒜球茎中分离出的硫化物.Cell Counting Kit-8试剂购于上海同仁化学研究所,Bcl-2和Bax抗体及SP试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司.方法:以含体积分数为0.1新生牛血清的1640完全培养基,培养LM-8细胞,制作细胞爬片.SP免疫细胞组织化学技术检测细胞爬片中Bcl-2和Bax蛋白表达;倒置显微镜下观察5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素作用前后LM-8细胞形态变化;将LM-8细胞调整至7.5×107L-1接种于96孔板,用1.0,5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素处理细胞,设立不加任何处理因素的对照组及不含细胞和药物的培养基空白组,孵育24,48,72 h后取出培养板,加入CCK-8测定吸光度值,计算LM-8细胞生长抑制率:以5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素干预LM-8细胞24,48,72 h,消化离心收集细胞,以流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化.主要观察指标:LM-8细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达;LM-8细胞形态及增殖、凋亡情况.结果:①Bcl-2和Bax蛋白表达:大蒜素可以降低Bcl-2表达,增强Bax表达,经15.0mg/L大蒜素作用72h,Bcl-2和Bax蛋白表达阳性率及Bcl-2/Bax表达与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).②LM-8细胞的形态:经不同质量浓度大蒜素干预后均出现明显凋亡表现.③LM-8细胞的增殖:大蒜素能明显抑制LM-8细胞的增殖,当大蒜素浓度从1.0 mg/L增加到15.0 mg/L,LM-8细胞72 h时生长抑制率由(23.87±3.26)%增至(58.32±5.38)%,在72 h其药物半数抑制率浓度是11.09 mg/L.④LM-8细胞的凋亡:5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素作用72 h后可诱导LM-8细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P＜0.05).结论:①大蒜素可抑制LM-8细胞增殖,该效应与大蒜素的浓度和时间有关.②大蒜素可诱导LM-8细胞凋亡,作用呈浓度依赖性.③大蒜素抑制LM-8细胞增殖和诱导LM-8细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达有关.     

复方三七颗粒对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的：探讨复方三七颗粒对动脉粥样硬化平滑肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法：建立动脉粥样硬化大鼠模型,采用TUNNEL法检测各组细胞凋亡率,免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：复方三七颗粒组与模型组比较,平滑肌细胞凋亡率明显减少（P〈0.05）,Bcl-2蛋白表达增加（P〈0.05）,Bax蛋白表达降低（P〈0.05）。结论：复方三七颗粒可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白,从而得出复方三七颗粒拮抗动脉粥样硬化的机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

透骨消痛胶囊对凋亡软骨细胞Rac1和Cdc42表达的影响

背景：透骨消痛胶囊治疗早、中期骨性关节炎有较好疗效,但作用机制尚未完全阐明。小GTP酶Rho能够抑制软骨细胞肥大分化,促进软骨细胞的凋亡。
　　目的：观察透骨消痛胶囊对体外培养凋亡大鼠关节软骨细胞Rac1和Cdc42的影响,并初步探讨其防治骨性关节炎的作用机制。
　　方法：采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用甲苯胺蓝染色法对第3代软骨细胞进行鉴定。用20μg/L的肿瘤坏死因子α诱导体外培养软骨细胞的凋亡,诱导成功后,给予透骨消痛胶囊(500,100,20 mg/L)孵育24 h后,分别用MTT法检测各组软骨细胞的存活率,用流式细胞仪检测各组软骨细胞的线粒体膜电位情况,Western Blot检测各组软骨细胞Rac1,Cdc42,Bcl-2及Bax蛋白表达。结果与结论：透骨消痛胶囊能够减少肿瘤坏死因子α所致的软骨细胞凋亡,提高线粒体膜电位,提高细胞的存活率,同时能够下调Rac1,Cdc42,Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白表达,差异均有显著性意义(P<0.05)。提示透骨消痛胶囊可能通过下调Rac1,Cdc42和 Bax蛋白表达,增加凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达,从而抑制软骨细胞的凋亡,而起到治疗骨性关节炎的疗效。