VP-16诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡的研究

为研究ＶＰ－１６对雄激素非依赖性前列腺癌细胞ＰＣ－３凋亡的诱导作用,应用ＨＥ染色观察细胞的形态学改变,以ＤＮＡ凝胶电泳和流式细胞术（ＦＣＭ）分析细胞凋亡和细胞周期分布,同时应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法研究ＶＰ－１６对ＰＣ－３细胞ＤＮＡ合成的影响。结果表明,（１）凋亡的ＰＣ－３细胞呈明显的形态学改变;（２）ＤＮＡ断裂呈梯形变化;（３）ＰＣ－３细胞凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和时间延长逐渐增高;（４）ＶＰ－１６能够明显抑制ＰＣ－３细胞ＤＮＡ的合成。提示ＶＰ－１６可诱导前列腺肿瘤细胞凋亡。     

VP—16诱导PC—3细胞凋亡和bcl—2及kc—myc基因表达的研究

目的 研究ＶＰ－１６诱导ＰＣ－３细胞凋亡和癌基因ｂｌｃ－２及Ｃ－ｍｙｃ表达的关系。方法 用末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）研究ＰＣ－３细胞凋亡,以免疫组化方法研究ｂｃｌ－２及Ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。结果 ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ检测表明,ＰＣ－３细胞的凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用时间延长而升高;免疫组化结果显示：ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因表达的阳性百分率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用     

VP—16诱导HL—60细胞凋亡的研究

探讨ｔｏｐｏⅡ抑制剂的抗瘤机制。方法：选择人急性早幼粒细胞白血病细胞株ＨＬ－６０为实验模型，以ＶＰ－１６为诱导剂，用形态学观察、ＤＮＡ电泳及流式细胞术（ＦＣＭ）等方法人凋亡情况进行了研究。结果：经ＶＰ－１７处理的ＨＬ－６０细胞呈典型凋亡形态学改变，出现梯状ＤＮＡ条带（ＤＮＡ ｌａｄｄｅｒ），ＦＣＭ ＤＮＡ直方图上Ｇ０／Ｇ１峰前是明显的亚二倍体凋亡峰。表明经ＶＰ－１６处理的ＨＬ－６０细胞的确发生了凋     

VP16诱导Raji肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的 从细胞凋亡角度探讨ＶＰ１６抗肿瘤作用的机理。方法 用光学显微镜及电子显微镜观察了ＶＰ１６诱导Ｒａｊｉ细胞凋亡的形态学变化;用琼脂糖凝胶电泳观察了ＤＮＡ的梯形改变。结果 ＶＰ１６可明显诱导Ｒａｊｉ细胞调亡,５ｕｇ．ｍｌ＾－１ＶＰ１６作用４８ｈ时,凋亡指数为５８．３３％±３．０６％。与对照组相比有显性差异（Ｐ〈０．０１）。凋亡指数与药物浓度的对数呈正相关（ｒ＝０．９４０７,Ｐ〈０．０１）。结论 诱导凋亡是ＶＰ１６抗肿瘤作用的机理之一。     

重组丙型肝炎病毒基因载体的构建与表达

应用基因重组技术。从载体ＣＤＺ２酶切获得１．７３ｋｂＤＮＡ片段（含１６ｄ９３ｂｐ的ＨＣＶ结构区ｃＤＮＡ，其特异性已为ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实）。将ＨＣＶｃＵＮＡ片段插入载体ｐｃＤＮＡ３，构建ＨＣＶ重组体。经在大肠杆菌中表达，筛选、酶切分析，获得重组ＨＣＶ（ＰｃＤＮＡ３－ＨＣＶ）。以重组质粒转染Ｈ９细胞（ＣＤ淋巴细胞系），用Ｇ４１８筛选出抗性细胞。经ＲＴ－ＰＣＲ、ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ验证表明，ｐｃＤＮＡ３－ＨＣＶ能在Ｈ９细胞中进行复制、转录和表达。这为丙型肝炎发病机理的研究提供了一个有用模型。     

VP16对S—180和S—180—R细胞凋亡的作用

目的 探讨ＶＰ１６对细胞凋亡的作用。方法 用两种剂量的Ｖ这６处理腹腔接种Ｓ－１８０瘤细胞和抗阿霉素瘤细胞（Ｓ－１８０－Ｒ）的ＢＡＢＬ／Ｃ鼠。０，６，９ｈ分别取腹水，用流式细胞仪测定细胞相对ＤＮＡ含量。结果 ＶＰ１６在３．１２，６．２５μｍｏｌ剂量时，均可诱导Ｓ－１８０－Ｒ细胞凋亡，且Ｖ这６导Ｓ－１８和Ｓ１８０－Ｒ两种细胞凋亡差别不明显。结论ＶＰ１６是Ｓ－１８０－和Ｓ－１８０－Ｒ细胞亡的诱导剂。Ｖ这     

VP16对S-180和S-180-R细胞凋亡的作用

①目的探讨ＶＰ１６对细胞凋亡的作用。②方法用两种剂量（３．１２，６．２５μｍｏｌ）的ＶＰ１６处理腹腔接种Ｓ－１８０瘤细胞和抗阿霉素瘤细胞（Ｓ－１８０－Ｒ）的ＢＡＢＬ／Ｃ鼠。０，６，９ｈ分别取腹水，用流式细胞仪测定细胞相对ＤＮＡ含量。③结果ＶＰ１６在３．１２，６．２５μｍｏｌ剂量时，均可诱导Ｓ－１８０细胞凋亡，而剂量效应并不明显。在６．２５μｍｏｌ时，也可诱导Ｓ－１８０－Ｒ细胞凋亡，且ＶＰ１６诱导Ｓ－１８０和Ｓ－１８０－Ｒ两种细胞凋亡差别不明显。④结论ＶＰ１６是Ｓ－１８０和Ｓ－１８０－Ｒ细胞凋亡的诱导剂。ＶＰ１６诱导的凋亡与其抗药表型关系不大，但与免疫机制似乎有一定的关系。     

慢性乙型肝炎自体LAK细胞回输前后IL—2变化的意义

目的探讨ＬＡＫ细胞治疗慢性乙型肝炎的机制。方法应用生物学方法检测ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ均阳性慢乙肝患者治疗前后ＩＬ－２水平。结果４０例患者治疗后ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ阴转率分别为４０．４％和６８．６％。治疗前ＩＬ－２水平低于对照组（Ｐ＜０．００１），治疗后有显著提高（Ｐ＜０．００５）。依ＨＢＶ标记阴转情况分组：１组ＨＢｅＡｇ（－）、ＨＢＶＤＮＡ（－）１６例；２组ＨＢｅＡｇ（＋）、ＨＢＶＤＮＡ（－）９例；３组ＨＢｅＡｇ（＋）、ＨＢＶＤＮＡ（＋）１５例。１、２组治疗前ＩＬ－２均低于对照组（Ｐ＜０．００１），治疗后均明显提高（Ｐ＜０．００５，Ｐ＜０．０１）。３组治疗前ＩＬ－２与对照组比较无明显降低（Ｐ＞０．０５），治疗前后无显著差异（Ｐ＞０．０５），治疗后ＩＬ－２比对照组低（Ｐ＜０．０２）。结论ＩＬ－２水平明显降低的慢性乙型肝炎采用ＬＡＫ细胞回输治疗ＨＢＶ标记阴转率高。     

套式PCR技术检测肝细胞癌患者血清HBV DNA

应用套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与ＰＣＲ结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）的方法作了比较。２种方法灵敏度均可达１０￣（－５）ｐｇ。套式ＰＣＲ无需制备探针，试验周期短，更适于推广。１６例ＨＣＣ患者检出ＨＢＶＤＮＡ９例（５６．２５％）。ＨＢｓＡｇ阳性组９例检出４例，ＨＢｓＡｇ阴性组４例检出２例。３例未测ＨＢＶ血清标记物均检出ＨＢＶＤＮＡ。结果表明ＨＣＣ患者血清中仍有ＨＢＶＤＮＡ低水平复制，仍具传染性。     

足叶乙甙诱导HL－60急性早幼粒白血病细胞程序化死亡的实验研究

目的：用不同剂量的ＶＰ－１６诱导急性早幼粒白血病细胞程序化死亡（ＰＣＤ）。方法：通过细胞培养技术获取ＰＣＤ细胞，以ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳确定细胞ＰＣＤ的发生，苔盼蓝拒染法检测细胞活力。结果：不同浓度的ＶＰ－１６在试验条件下于４ｈ内均能诱导ＨＬ－６０细胞发生ＰＣＤ。结论：本实验建立的研究细胞ＰＣＤ的方法可靠，ＶＰ－１６具有良好的诱导细胞产生ＰＣＤ的作用     

人乳头瘤病毒16型(湖北株)E7基因在体内和体外的表达

构建人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）Ｅ７湖北株（ＨＢ）基因真核表达质粒,探讨其在哺乳动物体外,体内表达状况,为本地区ＨＰＶ相关肿瘤的基因治疗提供依据。方法采用分子克隆技术,构建ＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ重组表达质粒,磷酸钙－ＤＮＡ沉淀技术及基因免疫技术将外源目的基因（ＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ）导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞及大、小鼠体内ＰＣＲ,ＲＴ－ＰＣＲ,免疫荧光染色技术对外源目的基因及其产物（ｍＲ－ＮＡ,蛋白质。     

PCR法区别HBV RC—和CCC—DNA

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和基因组为一松驰环状、部分双链ＤＮＡ（ＲＣ－ＤＮＡ）。在其负链的５与３端之间存在一缺口。当ＨＢＶ进入宿主细胞后，基因组转变为共价闭合环状ＤＮＡ（ＣＣＣ－ＤＮＡ）。我们根据ＨＢＶ－ＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ的结构特点，设计了ＰＣＲ区别ＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ。实验表明，该方法可有效地区别两种形式的ＨＢＶＤＮＡ》     

环丙氧苷诱导转导有外源HSV—tk基因的C6胶质瘤细胞的 …

目的 观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）－环丙氧苷（ＧＣＶ）系统在胶质瘤基因治疗过程中,ＧＣＶ能否诱导转导有ＨＳＶ－ｔｋ基因的胶质瘤细胞凋亡。方法 采用光镜、电镜和荧光显微镜观察转导有ＨＳＶ－ｔｋ基因的大鼠Ｃ６／ｔｋ胶质瘤细胞形态学的改变,以末转导ＨＳＶ－ｔｋ基因的Ｃ６细胞作为对照,并以流式细胞术,ＤＮＡ凝胶电流分析进一步验证细胞凋亡的发生。结果 在５μｇ／ｍｌ ＧＣＶ作用７２ｈ后,Ｃ６     

重组人造血生长因子对抗白血病药物作用的影响

采用流式细胞仪及ＮＴ细胞毒检测，研究造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）对抗白血病药物细胞毒性的影响，并探讨ＨＧＦ与化闻药物联合应用的作用机理，研究结果表明，３种抗白血病药物柔红霉素（ＤＮＲ），三尖杉酯碱（Ｈ），足叶乙甙（ＶＰ－１６）对白血病细胞敏感性存在较大差异：ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－３均能增加ＶＰ－１６，ＤＮＲ对白血病细胞的杀伤作用：ＧＭ－ＣＳＦ能提高Ｈ的细胞毒性作用，而对正常骨髓细胞，３种ｒｈＨＧＦ均不     

纤维母细胞增强HCE16／3细胞IL—1基因表达的研究

目的：研究纤维母细胞对ＨＰＶ１６型ＤＮＡ永生化的人宫颈上皮细胞（ＨＣＥ１６／３细胞）白细胞介素－１（ＩＬ－１）基因表达的调节。方法：应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法分析纤维母细胞、纤维母细胞条件培养液以及纤维母细胞分泌的角质细胞生长因子（ＫＧＦ）对ＨＣＥ１６／３细胞ＩＬ－１基因表达的影响。结果：在正常情况下,ＨＣＥ１６／３细胞ＩＬ－１基因表达水平很低,但在与纤维母细胞作共同培养时,ＩＬ－１基因的表达水平     

新型氨基甾体对WEHI—3B白血病细胞作用的研究

目的：观察新型氨基甾体（ＫＨ）对小鼠粒单系白血病细胞ＷＥＨＩ－３Ｂ细胞增殖、分化和凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。方法：采用集落培养及细胞毒性实验检测ＫＨ对ＷＥＨＩ－３Ｂ细胞增殖的影响；用ＮＢＴ还原实验及ＮＳＥ染色检测ＫＨ对ＷＥＨＩ－３Ｂ细胞分化的影响；用形态学观察和ＤＮＡ片段凝胶电泳检测ＫＨ对ＷＥＨＩ－３Ｂ细胞凋亡的影响；用ＲＴ－ＰＣＲ检测癌基因ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ在ＷＥＨＩ－３Ｂ细胞中表达水     

宫颈鳞状上皮癌蜡块中 HPV16 感染检测方法的比较研究

分别用原位杂交（ＩＳＨ）、多聚酶链反应（ＰＣＲ）和原位多聚酶链反应（ＩＳ－ＰＣＲ）方法，检测３９例宫颈鳞状上皮癌石蜡切片中ＨＰＶ的感染。ＩＳＨ的检出率为４６．２％（１７／３９），明显低于ＩＳ－ＰＣＲ的６６．７％（２６／３９，Ｐ＜０．０１）和ＰＣＲ的８４．６％（３３／３９，Ｐ＜０．０１）。用常规ＩＳＨ和地高辛标记探针能检出宫颈鳞状上皮癌ＨＰＶ１６感染的表皮细胞，而用ＩＳ－ＰＣＲ方法在同样标本中可显示出更多的ＨＰＶ１６阳性表皮细胞，并且着色更深。ＰＣＲ方法敏感性最高，但它不能用于组织细胞内的ＨＰＶ１６ＤＮＡ精确定位。     

5-氟尿嘧啶诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制研究

目的 研究５－氟尿嘧啶（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ,５－ＦＵ）体外诱导胃癌ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡作用,及细胞凋亡与Ｋｉ－６７抗原、核增殖抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ５３蛋白、Ｂａｘ蛋白、死亡受体Ｆａｓ表达的关系。探讨５－ＦＵ诱导胃癌细胞凋亡作用的机制。方法 应用流式细胞仪和３’－ＯＨ末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测凋亡细胞,电镜观察凋亡细胞的形态改变,免疫组织化学法检测细胞Ｋｉ－６７、ＰＣＮＡ、Ｐ５３、Ｂ     

应用PCR技术检测慢性乙肝病毒性肝病血清及外周血单个核细胞中HBV－DNA

本文应用多聚酶连反应（ＰＣＲ）技术检测了１０４例慢性乙肝病毒性肝病患者血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＢＶ－ＰＮＡ，并与放免法进行了比较。结果显示，ＰＣＲ检测结果更能客观地反应ＨＢＶ在体内存在的状态，在外周血单个核细胞中有ＨＢＶ感染；１０４例慢性肝病患者外周血单个核细胞中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为２８．８％，而血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性的２０例患者有７例ＰＢＭＣ中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ，占３５％。因此，在检测血清ＨＢＶ标志物及ＨＢＶ－ＤＮＡ的同时检测ＰＢＭＣ中的ＨＢＶ－ＤＮＡ可进一步防止ＨＢＶ传播与输血后肝炎的发生。     

IL—12提高DNA疫苗诱导小鼠抗HBV皮下移植瘤的免疫研究

目的 观察ＩＬ－２真核表达载体（ｐＷＲＧ３１６９）对ＨＢＶ－ＳＤＮＡ疫苗（ｐＣＲ３．１－Ｓ）诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２＾ｄ）的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达ＨＢｓＡｇ的小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５细胞（Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ）成瘤性的影响。方法肌肉注射ＤＮＡ疫苗,背部皮下接种Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ细胞,观察成瘤情况,４ｈ＾５１Ｃｒ释放法检测小鼠脾细胞ＣＴＬ活性。结果 对照组、ｐＣＲ３．１－Ｓ及共同免疫