吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1和凋亡蛋白表达的影响

目的 观察吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 (LOX-1)和凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响,并探讨其作用机制及LOX-1在吡格列酮调节凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达中的作用.方法 清洁型SD大鼠26只,随机分为对照组(n=9)、高脂饮食组(n=17),高脂饮食组喂养12周后再随机分为模型组(n=8)和吡格列酮组(n=9),分别干预4周后,检测各组血脂水平,HE染色观察主动脉病理形态学改变,免疫组织化学法检测主动脉LOX-1、Bax和Bcl-2的表达.结果 高脂饮食组喂养12周后,血脂明显升高(P＜0.01);给药4周后,与模型组比较,吡格列酮组甘油三酯、总胆固醇水平明显降低(P＜0.01),且主动脉血管内皮基本完好,偶有脱落,平滑肌细胞增殖不明显.与对照组相比,模型组主动脉LOX-1和Bax蛋白表达明显升高(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.01);与模型组相比,吡格列酮组主动脉LOX-1和Bax蛋白表达明显降低(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值明显升高(P＜0.01).结论 高脂饮食可引起主动脉LOX-1和凋亡蛋白Bax、Bcl-2及Bcl-2/Bax比值的改变,而吡格列酮可降低血脂,调节LOX-1和凋亡蛋白表达,抑制内皮细胞凋亡,从而改善内皮细胞功能和动脉粥样硬化病理进程.     

吡格列酮对高脂血症大鼠核转录因子kB活性和主动脉凋亡蛋白表达的影响

目的 观察吡格列酮对高脂血症大鼠NF-κB活性和主动脉凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响.方法 SD大鼠26只,随机分为对照组9只、高脂饮食组17只.高脂饮食组喂养12周后再随机分为模型组8只和吡格列酮组9只,干预4周后,检测各组血脂;HE染色观察主动脉组织形态学改变;免疫组织化学法检测NF-κB p65、Bax、Bcl-2 表达.结果 与对照组比较,高脂饮食组12周后,TG、TC、LDL-C明显升高(P＜0.01);与模型组比较,16周后,吡格列酮组TG、TC明显降低(P＜0.01);与对照组比较,模型组NF κB p65、Bax明显升高,Bcl-2和Bcl-2/Bax比值明显降低(P＜0.01);与模型组比较,吡格列酮组NF-κB p65、Bax明显降低,Bcl-2和Bcl-2/Bax比值明显升高(P＜0.01).结论 高脂饮食可引起主动脉凋亡蛋白Bax、Bcl-2及Bcl-2/Bax比值的改变,可能与NF-κB活性增加相关.吡格列酮可减少NF-κB p65表达,调节Bax、Bcl-2表达,从而改善内皮细胞功能和动脉粥样硬化病理进程.     

吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉脂联素受体表达的影响

目的观察高脂血症大鼠主动脉脂联素受体(adiponectin receptors1/2,AdipoR1/2)的表达改变,探讨吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉血管脂联素受体表达的影响。方法清洁级SD大鼠26只,随机分为正常饮食组(9只)和高脂饮食组(17只);高脂饮食组12周后检测空腹血脂,明确造模是否成功,随机分为模型组(8只)和吡格列酮组(9只),后者给予吡格列酮溶液(0.6mg/ml)连续灌胃4周,之后检测血脂水平及主动脉病理,ELISA法检测血清脂联素水平,荧光RT-PCR法检测主动脉脂联素受体AdipoR1和AdipoR2mRNA的表达,Western Bolt法检测脂联受体蛋白表达。结果高脂饲料喂养12周,高脂饮食组TG、TC、LDL水平明显升高(P0.01);给药四周后,吡格列酮组TG、TC水平明显降低(P0.01),模型组主动脉脂联素受体1/2mRNA和蛋白的表达明显下降(P0.01)。与模型组比较,吡格列酮组主动脉AdipoR(1P0.05)和AdipoR2(P0.01)mRNA的表达明显升高,主动脉脂联素受体蛋白的表达明显升高(P0.05),差异有统计学意义。结论脂联素及其受体下降可能介入高脂血症血管损伤,吡格列酮具有抗动脉粥样硬化作用,该作用可能与提高血清脂联素和主动脉血管脂联素受体表达有关。     

吡格列酮对实验性动脉粥样硬化大鼠血脂水平的影响及临床意义

目的观察吡格列酮对高脂饮食诱导动脉粥样硬化模型大鼠血脂水平的影响,并探索其临床意义。方法设清洁型SD大鼠26只,随机分为对照组(n=9)、高脂饮食组(n=17),高脂饮食组喂养12周后再随机分为模型组(n=8)和吡格列酮组(n=9),分别给予蒸馏水、蒸馏水(1.5ml/100g)和吡格列酮10mg/(kg·d)灌胃,1次/d,同时继续高脂饮食,干预4周后,检测各组血脂水平并观察主动脉病理形态学改变。结果高脂饮食喂养12周后,与对照组相比,模型组和吡格列酮组三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)显著升高(P<0.01)。给药干预4周后,吡格列酮组干预后TG、TC、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较干预前明显降低(P<0.01),与模型组比较,吡格列酮组TG、TC水平明显降低(P<0.01)。且可减轻高脂饮食诱导的主动脉内膜增厚和平滑肌细胞增殖。结论吡格列酮可改善高脂血症大鼠血脂水平,延缓主动脉粥样硬化病理改变,提示吡格列酮的抗动脉粥样硬化作用可能部分归于血脂改善效应。     

非诺贝特和吡格列酮对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大和凋亡的干预作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α和γ(PPARα和PPARγ)的配体非诺贝特、吡格列酮对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞肥大、凋亡的干预作用,并观察其对凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达变化的影响 .方法 分别以非诺贝特和/或吡格列酮预处理体外原代培养的新生大鼠心肌细胞24 h后,再加用Ang Ⅱ作用24 h.采用软件分析细胞表面积,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用Western-blot法观察凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达变化,逆转录聚合酶链反应检测PPARα和PPARγ的mRNA水平.结果 与Ang Ⅱ组比较,非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组的心肌细胞表面积、细胞凋亡率及Bax蛋白的表达明显降低(P＜0.05),而 Bax蛋白的表达和Bcl-2/Bax蛋白水平比值显著增加(P＜0.05),非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组间的上述指标差异无显著性(P＞0.05),非诺贝特组的PPARα mRNA和吡格列酮组的PPARγ mRNA表达增高.结论 PPARα和γ激活可逆转心肌细胞肥大,抑制心肌细胞凋亡,并能改变凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达,但PPARα、γ配体合用无叠加效应.     

吡格列酮对动脉粥样硬化大鼠核因子-κB表达的影响

目的探讨吡格列酮对动脉粥样硬化大鼠核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组,正常饮食组、高脂饮食组、高脂饮食加吡格列酮干预组,比较3组大鼠主动脉病理形态学改变,测定大鼠的血脂变化,采用免疫组化技术测定NF-κB在血管内皮细胞的表达。结果吡格列酮能减轻动脉粥样硬化所致的内膜和肌层增厚。吡格列酮能降低胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C),升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。高脂饮食能刺激大鼠主动脉NF-κB的表达,吡格列酮能显著减轻这种作用。结论吡格列酮能减轻动脉粥样硬化大鼠NF-κB的表达,从而可能会有效防治动脉粥样硬化。     

非诺贝特和吡格列酮对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大和凋亡的干预作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α和γ(PPARα和PPARγ)的配体非诺贝特、吡格列酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大、凋亡的干预作用,并观察其对凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达变化的影响。方法分别以非诺贝特和/或吡格列酮预处理体外原代培养的新生大鼠心肌细胞24h后,再加用AngⅡ作用24h。采用软件分析细胞表面积,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用Western-blot法观察凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达变化,逆转录聚合酶链反应检测PPARα和PPARγ的mRNA水平。结果与AngⅡ组比较,非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组的心肌细胞表面积、细胞凋亡率及Bax蛋白的表达明显降低(P<0.05),而Bax蛋白的表达和Bcl-2/Bax蛋白水平比值显著增加(P<0.05),非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组间的上述指标差异无显著性(P>0.05),非诺贝特组的PPARαmRNA和吡格列酮组的PPARγmRNA表达增高。结论PPARα和γ激活可逆转心肌细胞肥大,抑制心肌细胞凋亡,并能改变凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达,但PPARα、γ配体合用无叠加效应。     

吡格列酮对高脂饮食兔主动脉CD40L表达的影响

目的探讨吡格列酮对高脂饮食兔主动脉CD40L表达的影响。方法设立正常饮食、高脂饮食及高脂饮食加吡格列酮干预三组,比较主动脉病理形态学改变、血脂变化,采用免疫组织化学检测兔主动脉CD40L的表达,采用逆转录聚合酶链反应检测兔主动脉凝血酶样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达。结果吡格列酮能减轻高脂饮食所致的内膜增厚和平滑肌细胞增殖,吡格列酮还能明显升高高密度脂蛋白胆固醇水平。高脂饮食刺激兔主动脉CD40L的表达,吡格列酮能显著减轻这种作用。高脂饮食能上调兔主动脉表达凝血酶样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达,而吡格列酮能显著抑制这种作用。结论吡格列酮能减轻高脂饮食兔主动脉CD40L的表达,其作用可能与抑制凝血酶样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达有关,提示吡格列酮可通过抑制高脂血症患者炎症信号通路而达到抗动脉硬化的作用。     

吡格列酮对非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脂肪变的影响

目的观察吡格列酮对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠肝组织学、胰岛素抵抗、肝功能和血脂的影响。方法C57小鼠适应性喂养1周后,对照组8只和模型组18只,对照组饲喂对照饲料,模型组喂养60%高脂饲料诱导非酒精性脂肪肝模型,共计14周。第10周模型组随机抽取10只为吡格列酮组,按10 mL/kg灌胃吡格列酮,共计4周。实验结束观察各组小鼠体质量、肝组织学、胰岛素抵抗、肝功能和血脂的变化。结果与模型组相比,吡格列酮组肝重和肝脏指数显著升高(P=0.01,P0.001),肝脏病理提示脂肪变性、肝小叶炎症明显改善(P0.001,P0.001),TG、空腹血糖、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)下降明显(P=0.002,P=0.001,P=0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL)上升显著(P0.001)。结论吡格列酮可改善NAFLD模型动物胰岛素抵抗,减轻肝脂肪变和调节血脂作用。     

吡格列酮对高脂饮食大鼠心肌PPARγ表达和抗氧化作用的研究

目的 观察吡格列酮(PI)对高脂饮食大鼠心肌PPARγ mRNA表达的影响及抗氧化作用.方法 随机选取雄性SD大鼠24只,随机分为对照组(C)、高脂组(HL)、吡格列酮处理组(HL+PI)3组,每组8只.对照组饲喂基础饲料,其他两组饲喂高脂饲料.同时做灌胃处理,各组分别为蒸馏水、蒸馏水和吡格列酮剂量10mg/(kg*d).0周、3周、6周采血测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量.6周末,10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,腹主动脉采血,留取心肌组织,-70 ℃保存备用.测6周末脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量及抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性变化;运用RT-PCR分析各组PPARγmRNA表达水平.结果 与高脂组比较吡格列酮组血清TG、TC含量明显降低(P＜0.05);与对照组比较,高脂组血清MDA含量明显增加(P＜0.05),血清SOD、全血GSH-Px活性降低(P＜0.05);与高脂组比较,吡格列酮组血清MDA含量降低(P＜0.05),血清SOD、全血GSH-Px活性增加(P＜0.05);高脂组心肌PPARγmRNA表达水平较对照组明显降低(P＜0.05);与吡格列酮组比较,后者心肌PPARγmRNA表达明显升高(P＜0.05).结论 吡格列酮可以激活高脂大鼠心肌PPARγmRNA拮抗其低表达,并具有降血脂、抗氧化作用.     

荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的:研究荔枝核总黄酮(total flavone from Litchi Chinensis Sonn,TFL)对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响及作用机制.腔注射制备大鼠肝纤维化模型,造模的同时,TFL干预组分别以高、低剂量的TFL灌胃6wk进行干预治疗,空白对照组、秋水仙碱组分别以生理盐水、秋水仙碱灌胃作为阴阳性对照.HE及Masson染色观察肝纤维化程度;免疫组织化学二步法检测Bcl-2、Bax的表达;测定血清ALT、AST的水平.结果:模型组大鼠肝组织中Bcl-2、Bax的表达较正常组显著升高(P=0.000),TFL高、低剂量给药组及秋水仙碱组Bcl-2的表达较模型组升高(P=0.000,0.047,0.021),Bax的表达较模型组降低(P=0.000,0.014,0.007),TFL高剂量组与低剂量组比较Bcl-2的表达升高(P=0.018),Bax的表达显著降低(P=0.002).Bcl-2、Bax在秋水仙碱组与TFL低剂量组中的表达无显著性差异(P=0.726,0.767).肝纤维化严重程度与Bax的表达显著正相关(P=0.000);与Bcl-2的表达负相关(P=0.000).空白对照组、TFL高低剂量给药组及秋水仙碱组血清ALT、AST均明显低于模型组,具有显著性差异(P=0.000).低剂量组与秋水仙碱组无显著性差异(P=0.597,0.669).结论:TFL具有较好的抗肝纤维化和改善肝功能的作用,并推测这种作用可能与上调Bcl-2、下调Bax的表达,抑制肝细胞的凋亡有关.     

螺内酯和缬沙坦对高血压大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白的影响

目的探讨螺内酯和缬沙坦对肾血管性高血压大鼠左心室细胞凋亡调控相关蛋白P53、Bax及Bcl-2表达的影响。方法选取SD大鼠46只制成肾血管性高血压大鼠模型后,随机分为高血压组(N组,12只)、缬沙坦组(V组,11只)、螺内酯组(S组,12只)、螺内酯加缬沙坦组(S+V组,11只),另选10只未造模大鼠为假手术组(C组),各组治疗10周后行超声心动图检查,测定大鼠颈动脉压,应用免疫组织化学法检测P53、Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果治疗10周后,与C组比较,N组大鼠收缩压明显升高(P0.01);与N组比较,V组、S+V组大鼠收缩压明显降低(P0.05);与C组比较,N组大鼠Bax、Bcl-2和Bax/Bcl-2明显升高,S组大鼠Bax和Bax/Bcl-2明显升高(P0.05,P0.01);与N组比较,S组大鼠Bax、Bax/Bcl-2和V组、S+V组大鼠Bax、Bcl-2、Bax/Bcl-2均明显下降(P0.05,P0.01);与S组比较,V组、S+V组大鼠Bax、Bax/Bcl-2明显下降(P0.05,P0.01)。结论两肾一夹肾血管性高血压大鼠左心室肥厚形成过程中,Bax过表达不完全依赖P53调节。缬沙坦可以通过与血管紧张素Ⅱ1型受体结合,抑制心肌细胞凋亡相关蛋白P53、Bax及Bcl-2的表达及左心室肥厚的发生。螺内酯可以通过与醛固酮受体结合明显降低P53及Bax的表达,降低Bax/Bcl-2比值,部分地逆转左心室肥厚。     

吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉核因子-KB／单核细胞趋化因子1表达的影响

目的观察吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉核因子-KB／单核细胞趋化因子1（NF—KB／MCP—1）表达的影响,并探讨其作用机制。方法将26只雄性SD大鼠按照随机数字表法分成普通饲料对照组（n=9）和高脂饲料组（n=17）,高脂饲料组喂养12周后再按照随机数字表法分成模型组（n=8）和吡格列酮组（n=9）。分组干预4周后,平行检测各组血脂、血糖水平,HE染色观察主动脉组织形态学改变,免疫组化法检测主动脉NF-KB／MCP-1的表达。结果高脂饲料组大鼠喂养12周后,与对照组比较,三酰甘油、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平明显升高[（1．729±0．472）mmol／L比（0．929±0．150）mmol／L,（2．981±0．318）mmol／L比（1．831±0．226）mmol／L,（0．499±0．337）mmol／L比（0．195．4±0．051）mmol／L,均为P〈0．05];给药4周后,与模型组相比,吡格列酮组血清三酰甘油、总胆固醇水平明显降低[（0．731±0．319）mmol／L比（1．534±0．172）mmol／L,（1．720±0．249）mmol／L比（3．0844-0．984）mmo]／L,均为P〈0．05],且主动脉内皮组织基本完好,偶有脱落,平滑肌增生不明显。与对照组相比,模型组NF-kB、MCP-1表达水平也明显升高（0．5064-0．083比0．215±0．021,0．378±0．100比0．167±0．012,均为P〈0．01）;与模型组相比,吡格列酮组NF-KB、MCP-1表达水平明显下降（0．250±0．033比0．506±0．083,0．171±0．012比0．3784-0．100,均为P〈0．01）。结论吡格列酮能够减轻高脂血症对动脉内膜的损伤。     

大鼠脑缺血半暗带神经元蛋白表达和凋亡的动态变化研究

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血半暗带神经元蛋白表达和凋亡的动态变化。方法 48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组8只和模型组40只,模型组又根据缺血再灌注时间分为6、24、48 h和3、5 d 5个时间点,各时间点8只。免疫组织化学法观察各组大鼠脑缺血半暗带神经元Bcl-2及Bax蛋白表达,TUNEL法观察相应区域神经元凋亡的动态变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠缺血再灌注6 h Bcl-2、Bax阳性细胞明显增加,随时间延长,Bcl-2阳性细胞逐渐下降,48 h最低;而Bax阳性细胞则逐渐增加,于48 h达到高峰;Bcl- 2/Bax比值变化趋势与Bcl-2阳性细胞相一致;各时间点均可见神经元凋亡,48 h达高峰(P<0.01)。相关分析显示,神经元凋亡与Bax蛋白表达呈正相关(r=0.352,P<0.05),与Bcl -2和Bcl-2/Bax比值呈负相关(r=-0.517,r=-0.529,P<0.01)。结论大鼠脑缺血半暗带存在大量神经元凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax比值失衡有关。     

吡格列酮对缺血再灌注心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的观察吡格列酮对大鼠在体心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的影响。方法实验动物随机分为2组,一为缺血30 min再灌注30 min组,进一步分为假手术组（n = 5）、模型组（即溶剂对照组,n = 6）和吡格列酮组（3mg／kg,n = 7）,测定心肌梗死面积;另一为缺血30 min再灌注2h组,然后进一步分为假手术组（n = 5）、模型组（n = 6）及吡格列酮0．3mg／kg组（n = 6）、1mg／kg组（n = 7）和3mg／kg组（n = 6）,各用药组于缺血前30 min静脉注射给药。然后,取心脏标本,石蜡包埋后切片,免疫组化检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、PPARy蛋白质表达,原位杂交方法检测PPARymRNA表达。TUNEL法和DNA凝胶电泳观察心肌细胞凋亡。结果（1）与模型组比较,吡格列酮组梗死面积与缺血区面积之比减少28％（P 〈 0．01）,梗死面积与左室面积之比减少32％（P 〈 0．01）;（2）免疫组化和原位杂交结果示：吡格列酮0．3、1、3mg／kg可呈剂量依赖性减少Bax、Caspase-3,增加Bcl-2、PPARy蛋白质以及PPARymRNA表达;（3）TUNEL法检测吡格列酮可减少心肌细胞凋亡指数,3组作用均显著（P 〈 0．05）,但DNA凝胶电泳模型组、吡格列酮0．3、1mg／kg可见到DNA梯带,假手术组和吡格列酮3mg／kg则无DNA梯带。结论吡格列酮预处理可通过减少心肌细胞凋亡和梗死面积起到抗缺血再灌注损伤的作用。     

参附注射液对心肺复苏后大鼠神经细胞的保护作用

目的:探讨参附注射液对心肺复苏后大鼠脑神经细胞凋亡及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl相关x蛋白(Bax)、核转录因子κB(NF-κB)等蛋白表达的影响,为防治神经细胞的凋亡提供依据。方法:90只Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、参附治疗组,各30只。采用窒息合并冰氯化钾致大鼠心跳骤停-心肺复苏模型。运用免疫组化观察复苏后神经细胞中NF-κB、Bcl-2、Bax基因的蛋白表达,采用末端标记技术(TUNEL)检测各组神经细胞的凋亡情况;并在电镜下观察神经细胞超微结构。结果:参附治疗组复苏后各时相点Bcl-2表达明显增强(P0.05),NF-κB的表达明显降低(P<0.05)。Bcl-2阳性表达率在复苏后24h达到高峰,参附治疗组阳性表达率明显高于模型组(P0.05)。在心肺复苏后的不同时段神经细胞确实有凋亡发生,参附治疗组各时相点凋亡细胞阳性指数均明显低于复苏模型组(P<0.05);而假手术组无明显凋亡现象发生(P<0.01)。超微结构显示参附治疗组神经细胞损伤较模型组明显减轻,假手术组神经细胞超微结构正常。结论:细胞凋亡参与了心肺复苏后大鼠神经细胞的损伤,参附注射液可降低NF-κB活性,上调Bcl-2蛋白表达,改善神经细胞的超微结构,抑制细胞凋亡的发生,对神经细胞具有明显的保护作用。     

吡格列酮对成骨细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的 研究吡格列酮对成骨细胞增殖及凋亡的影响,并进一步了解其凋亡发生机制.方法 以MC3T3-E1成骨细胞株为实验对象,分别用0、5、10、20、30、40 μmol/L吡格列酮干预,观察细胞活性、细胞周期及凋亡率的变化,同时检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达.结果 随着浓度增加,成骨细胞的活性逐渐降低;与对照组相比,G0/G1,G2/M期细胞增多,S期细胞明显减少;凋亡率在5、10 μmol/L时低于对照组,30、40 μmol/L较对照组显著增高;Bax表达在10 μmol/L时明显减弱,20 μmol/L时回复到正常,30、40μmol/L较对照组显著增强;Bcl-2表达在浓度≤20 μmol/L时显著增强;对于Bax/Bcl-2相对表达强度与细胞凋亡率做相关性分析,两者呈显著性正相关(n=15,r=0.796,P＜0.01).结论 吡格列酮在低浓度抑制成骨细胞凋亡,对细胞起保护作用,较高浓度则促进细胞凋亡,Bax/Bcl-2参与其凋亡机制,并可能起关键调控作用.吡格列酮抑制成骨细胞DNA合成,抑制细胞增殖,导致细胞活性下降.

Abstract：

Objective To investigate the effects of pioglitazone on osteoblast proliferation and apoptosis.Methods MC3T3-E1 mouse osteoblastic cells were treated with 0, 5, 10, 20, 30, and 40 μmol/L pioglitazone for 24 h. Cell viability was measured by MTT, cell cycle and apoptosis were inspected with flow cytometry, the expressions of Bcl-2 and Bax proteins were examined via immuno-chemical staining. Results Survival of osteoblasts decreased in a dose-dependent manner. Compared with the control group, the cells in the G0/G1 and G2/M stages increased, while the cells in S stage decreased significantly. The percentage of apoptosis at 5 and 10 μmol/L were lower than that of the control group(P ＜ 0.05), While it was increased significantly at 30 and 40 μmol/L(P ＜0.01). Bax expression was attenuated at 10 μmol/L(P＜0. 01), returned to normal by 20 μmol/L, and was increased by 30 and 40 μmol/L(P ＜ 0. 01). Bcl-2 expression was enhanced at the dose ≤ 20 μmol/L(P ＜0.01). Positive correlation was found between the death rate and the expression intensity of Bax/Bcl-2(n = 15, r=0.796, P＜0.01). Conclusions Pioglitazone inhibits apoptosis of osteoblasts at low concentrations and protects the cells, but promotes their apoptosis at higher concentration, Bax/Bcl-2 may play an important role in mediating the piglitazone-induced apoptosis of osteoblasts. It inhibits DNA synthesis and cell proliferation.     

Janus激酶-信号转导子与转录激活子通路介导粒细胞集落刺激因子影响冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)后心肌细胞凋亡的影响以及Janus激酶-信号转导子与转录激活子(JAK/STAT)通路的介导作用.方法 将92只雄性成年SD大鼠,随机分成CME组(24只)、G-CSF组(24只)、JAK2特异性抑制剂(AG490)组(G-CSF+AG490,24只)和假手术组(20只).CME组、G-CSF组及AG490组升主动脉夹闭后自左室腔内注入自体微血栓,造成CME,假手术组注入等量生理盐水.G-CSF组及AG490组术后2 h起给予皮下注射重组人G-CSF(rhG-CSF)100 μg·kg-1·d-1持续5 d,AG490组同时给予AG490溶液腹腔注射5 mg·kg-1·d-1,其他组给予等量生理盐水.术后3 d、1、2及4周处死动物.各组心肌样品中以实时定量聚合酶链式反应法检测Bcl-2、Bax、Fas及FasL的mRNA表达,并计算Bcl-2/Bax比值;以Western blot法检测Caspase-3、裂解多聚二磷酸腺苷-核糖聚合酶(PARP)、总JAK2(t-JAK2)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、t-STAT3以及p-STAT3蛋白的表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法测定凋亡细胞.结果 (1)与假手术组比较,CME组术后Bcl-2、Bax、Fas及FasL的mRNA表达均升高,Bcl-2/Bax比值降低(0.28±0.04比2.98±0.49),Caspase-3(0.762±0.129比0.133±0.027)及PARP蛋白(0.992±0.146比0.386±0.074)表达增强,心肌细胞凋亡指数升高(P＜0.05或P＜0.01);t-JAK2、p-JAK2、t-STAT3以及p-STAT3蛋白表达差异无统计学意义.(2)与CME组比较,G-CSF组术后p-JAK2与p-STAT3蛋白表达明显增强,Bax、Fas及FasL的mRNA表达明显减弱,Bcl-2的mRNA表达增强,Bcl-2/Bax比值升高(2.07±0.29比0.28±0.04),Caspase-3(0.371±0.041比0.762±0.129)及PARP蛋白(0.548±0.093比0.992±0.146)表达减弱;心肌细胞凋亡指数下降(P＜0.05或P＜0.01);t-JAK2及t-STAT3蛋白表达则差异无统计学意义.(3)经AG490干预后,G-CSF引起的基因与蛋白表达的变化均有不同程度减弱(P＜0.05或P＜0.01).结论 G-CSF通过激活JAK2/STAT3细胞内信号通路减轻CME导致的心肌细胞凋亡.