矽肺大鼠肺组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原含量及其比值变化的研究

用胃酶和醋酸自大鼠肺中提取Ⅰ和Ⅲ型胶原,並用酶联免疫法对其含量及比值进行测定。实验结果表明自大鼠气管注入石英后,在肺部所引起的纤维化的过程中,Ⅰ型与Ⅲ型胶原的含量均不断增长。在染尘后10天时,Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值低于未染尘时的数值,而在20天后,此比值明显升高,並维持恒定。通过Ⅰ型与Ⅲ型肺胶原含量及其比值的测定表明电焊烟尘所引起的大鼠肺纤维化病变进展缓慢,其纤维化程度也轻。本实验结果证明Ⅰ/Ⅲ型胶原之比值可用来表示不同粉尘所引起的纤维化程度。     

矽肺大鼠和病人肺组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维的分布及相对含量的研究

免疫酶标法用于观察肺组织中胶原的分布。显微分光光度法用于研究大鼠与矽肺病人的纤维化组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原的相对含量。染色中应用大鼠及人的抗Ⅰ型与Ⅲ型胶原多克隆抗体。Ⅰ型胶原分布于正常肺泡间隔及间质中。Ⅲ型胶原也在相同的部位存在。在由石英所致的大鼠纤维化肺组织中,Ⅰ型与Ⅲ型胶原在极度扩展的间质中聚集。Ⅲ型胶原是早期纤维化肺中主要增生的胶原。Ⅰ型胶原是纤维化后期主要增生的胶原。在矽肺病人肺组织中也见到同样的现象。染电焊烟尘的大鼠肺,直至180天以前,Ⅲ型胶原为主要积聚的胶原,而在180天以后,Ⅰ型胶原的增加才占优势。     

牛磺酸对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ和Ⅲ型胶原合成及比例的影响

目的 探讨牛磺酸对染矽尘大鼠肺组织不同时相Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及比例的影响.方法 将Wistar大鼠144只随机分为对照组（生理盐水,普饲）、矽肺组（普饲）和牛磺酸组（牛磺酸饲料）给予气管内注入1 ml矽尘混悬液（50 mg/ml）,每组48只.分别在第1、3、7、14、21、28天时,用高效液相色谱法测定其血浆中牛磺酸含量;取肺组织制作石蜡切片,天狼猩红法染色,偏振光显微镜观察各组动物肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成及比例的变化,图像分析系统对其进行定量分析.结果 第7、14、21和28天,矽尘组Ⅰ型胶原含量分别比对照组增加3.84%、3.77%、3.73%、9.83%,差异有统计学意义（P＜0.01）.第7、21和28天时,牛磺酸组Ⅰ型胶原含量分别比矽尘组降低2.39%、1.62%和7.13%;与对照组比较,第14、21和28天Ⅰ型胶原含量分别增加2.12%、2.11%和2.70%,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.第28天时,牛磺酸组Ⅲ型胶原含量比矽尘组减少2.62%,差异有统计学意义（P＜0.05）.矽尘组Ⅰ/Ⅲ型胶原比例第7天开始增加,第28天时达到最大比值1.87,牛磺酸组Ⅰ/Ⅲ型胶原比例从第7天开始增加,且增加幅度高于矽尘组,第28天时增加幅度低于矽尘组.结论 牛磺酸对矽尘诱导大鼠肺组织不同时相的Ⅰ、Ⅲ型胶原合成抑制作用不同.     

烟酸对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原形成的影响

目的 阐明饲料中添加烟酸对染矽尘大鼠早期Ⅰ型、Ⅲ型胶原形成的影响。方法 采用气管暴露法建立矽肺动物模型,高效液相色谱法测定血浆烟酸含量,天狼红染色法结合偏振光显微镜观察Ⅰ型、Ⅲ型胶原的形成,图像分析系统对胶原定量分析。结果 烟酸组不同时点血浆中烟酸含量明显升高,与对照组和矽尘组相比,差异均有显著性。染矽尘后第7天、第28天,与对照组比较,矽尘组大鼠肺组织Ⅰ型胶原阳性区域面积百分比显著增加,而烟酸组Ⅰ型胶原阳性区域面积百分比则明显低于矽尘组。染矽尘后第28天,Ⅲ型胶原阳性区域面积百分比显著高于对照组,而烟酸组Ⅲ型胶原阳性区域面积百分比则显著低于矽尘组。结论烟酸通过抑制Ⅰ型、Ⅲ型胶原的形成,而有效地阻断矽尘诱导的大鼠肺纤维化。     

熊果酸对矽肺大鼠TNF-α和胶原合成的调节作用

目的观察熊果酸对矽肺大鼠TNF-α含量和胶原合成的调节作用。方法75只Wistar雄性大鼠,SPF级,随机分为对照组、模型组、熊果酸组,每组25只。模型组与熊果酸组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入SiO2悬液(250 mg/kg)复制动物矽肺模型。熊果酸组自注射SiO2第二天灌胃熊果酸40mg/kg,对照组以同样方法灌注等量生理盐水,共连续28天。动物分别在注射SiO2后第7、14、28天处死。ELISA法检测大鼠血清中TNF-α的含量,应用羟脯氨酸试剂盒检测肺组织中总胶原蛋白含量,Western blot法检测Ⅰ/Ⅲ型胶原表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠血清中的TNF-α含量各时间点明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。熊果酸组TNF-α含量与模型组相比均显著降低(P0.05)。模型组肺组织中总胶原蛋白含量与同期对照组比较明显增加(P0.05)。熊果酸组与模型组相比,总胶原含量明显下降(P0.05)。熊果酸组与模型组大鼠肺组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原表达与总胶原蛋白含量变化一致。结论熊果酸可以减少矽肺纤维化过程中TNF-α和胶原蛋白的产生。     

汉防己甲素对矽肺大鼠肺中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的影响

使用Ｐｒｏα１（Ⅰ）、Ｐｒｏα１（Ⅲ）人胶原ｃＤＮＡ探针，采用ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ班点杂交技术，观察了染尘２个月、４个月的矽肺大鼠及汉防己甲素治疗１个月和３个月的矽肺大鼠肺组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的ｍＲＮＡ水平的改变情况。实验结果表明，矽肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的含量比正常肺组织明显增加（Ｐ＜０．０５），汉防己甲素治疗后Ⅰ、Ⅲ型胶原正常含量则较矽肺组织显著减少。因此，我们认为矽肺病变组织中胶原纤维的积聚是由石英粉尘引起胶原基因表达改变所致；汉防己甲素能直接或间接地抑制胶原基因的转录，从而抑制矽肺病变中胶原蛋白的合成。     

熊果酸对矽肺大鼠TNF-α和胶原合成的调节作用北大核心CSCD

目的观察熊果酸对矽肺大鼠TNF-α含量和胶原合成的调节作用。方法75只Wistar雄性大鼠,SPF级,随机分为对照组、模型组、熊果酸组,每组25只。模型组与熊果酸组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入SiO2悬液(250 mg/kg)复制动物矽肺模型。熊果酸组自注射SiO2第二天灌胃熊果酸40mg/kg,对照组以同样方法灌注等量生理盐水,共连续28天。动物分别在注射SiO2后第7、14、28天处死。ELISA法检测大鼠血清中TNF-α的含量,应用羟脯氨酸试剂盒检测肺组织中总胶原蛋白含量,Western blot法检测Ⅰ/Ⅲ型胶原表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠血清中的TNF-α含量各时间点明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。熊果酸组TNF-α含量与模型组相比均显著降低(P<0.05)。模型组肺组织中总胶原蛋白含量与同期对照组比较明显增加(P<0.05)。熊果酸组与模型组相比,总胶原含量明显下降(P<0.05)。熊果酸组与模型组大鼠肺组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原表达与总胶原蛋白含量变化一致。结论熊果酸可以减少矽肺纤维化过程中TNF-α和胶原蛋白的产生。     

不同矿尘对大鼠肺中Ⅰ型与Ⅲ型胶原含量的影响

采用酶联免疫法研究肺中Ⅰ型与Ⅲ型胶原含量,以比较不同矿尘所致肺纤维化程度。用此方法测定胶原含量比传统方法有快速、特异性强的优越性。矿尘是采自瑶岗仙钨矿现场和化学品金属氧化物如三氧化钨及二氧化锰。所得结果表明,矿尘中的金属如钨、锰、砷等本身均无明显促使肺胶原增生的作用;锡与铁有轻微的促进作用,矿浆与矿壁沉降尘的作用不明显。矿脉石英尘有较强的促进胶原增生作用,说明该矿粉尘的主要危害与矿尘中石英含量有关。     

矽肺肺泡巨噬细胞对人胚肺成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的体外研究

目的探讨矽肺患者的肺泡巨噬细胞(AM)是否通过影响肺成纤维细胞(FB)胶原的表达,参与矽肺纤维化的发生发展。方法收集矽肺患者AM,经SiO_2体外刺激18 h收集培养上清,与人胚肺FB共同孵育6、12、18、24、36、48、72 h,用~3H-脯氨酸掺入检测48 h胶原的合成与分泌,免疫细胞化学方法、Western blot方法检测各时间点Ⅰ型胶原表达。结果经SiO_2刺激矽肺患者AM培养上清,可使FB中Ⅰ型胶原的表达增高,实验组48 h细胞内、外3H-脯氨酸掺入值分别为1259.500±73.879、790.500±70.315,免疫细胞化学染色的积分光密度值为0.341±0.011,Western blot条带扫描灰度值为14.218±0.342,均明显高于空白对照组及AM对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论SiO_2可通过AM介导影响FB中Ⅰ型胶原表达,参与肺纤维化的形成。     

博莱霉素大鼠肺纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原表达

特发性肺纤维化病因不明,中位生存时间仅3年左右,肺移植是目前唯一有望提供长期生存的方法。由于部分研究结论难以从临床患者中得到,肺纤维化动物模型便成为研究人类特发性肺纤维化的有力工具⁽¹⁾。20世纪70年代初,Snider等⁽²⁾首次用博莱霉素造模成功,由于该模型病理学特点与人类特发性肺纤维化十分相似,目前成为国内外公认的用于研究人类肺纤维化的动物模型。Ⅰ、Ⅲ型胶原是肺组织中的主要胶原成分,也成为评价博莱霉素肺纤维化模型的特异指标⁽³⁾。     

尘肺清颗粒防治大鼠实验性矽肺的病理观察

目的了解尘肺清颗粒对大鼠实验性矽肺的病理形态学影响。方法用超细粉碎的石英粉注入大鼠气管,造成矽肺动物模型。4周后开始给药,20、10、5g/kg,灌胃,每日1次,连续给药12周处死动物,做肺组织常规病理学、羟脯氨酸含量测定和肺干重等检查。并对肺碱性磷酸酶、Ⅰ型和Ⅲ型胶原进行原位定量。结果给药组肺干重、羟脯氨酸含量明显低于模型组;肺病变程度减轻;图像分析显示给药组肺组织内碱性磷酸酶增加;Ⅰ型胶原纤维明显减少。结论尘肺清颗粒可以明显改善大鼠实验性矽肺的组织形态,促进组织修复,改变胶原沉着比例,减轻肺纤维化。     

肌肉和脂肪组织工程骨中Ⅰ型胶原的表达

[目的]对HA/β-TCP陶瓷在狗的肌肉和皮下脂肪组织中构建的体内组织工程骨的Ⅰ型胶原进行mRNA水平的定量分析,为优化选择体内组织工程骨的构建部位提供理论基础和实验依据。[方法]制备5mm×8mm的磷酸钙陶瓷30粒并分别植入5只狗的竖直肌和皮下脂肪中。术后4、8、12、16和24周,取出在肌肉和皮下脂肪中构建的体内组织工程骨。提取总RNA,经逆转录成cDNA后,实时相对定量PCR检测Ⅰ型胶原mRNA的表达。[结果]M组(肌肉内构建的体内组织工程骨)的Ⅰ型胶原mRNA在第12周时达到表达高峰(相对表达量为34.45),较F组(皮下脂肪内构建的体内组织工程骨)的(16周)早,但M组的Ⅰ型胶原mRNA最大表达量明显低于F组。两组中,Ⅰ型胶原mRNA的表达趋势相似。[结论]肌肉中体内组织工程骨的发生较早,但形成的骨量却不如脂肪中的多。临床上,可根据实际需要选择体内组织工程骨的构建部位。     

铀矿尘致大鼠肺纤维化过程中Ⅰ和Ⅲ型胶原及层粘连蛋白表达的变化

目的 探讨铀矿尘致大鼠纤维化过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原、层粘连蛋白(Laminin,LN)表达的变化特征.方法 60只Wistar大鼠随机分为铀矿尘组(30只)和对照组(30只),铀矿尘组大鼠一次性非暴露气管内滴注20 mg/ml的粉尘悬液1 ml,对照组大鼠一次性气管内滴注生理盐水1 ml,分别于处理后7、14、21、30及60 d每组随机处死6只,取肺组织,HE染色观察肺组织形态学改变,天狼猩红染色法观察肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原变化,免疫组织化学法检测LN蛋白的表达.结果 铀矿尘致肺组织纤维化过程中可见Ⅰ、Ⅲ型胶原的大量增生,染尘后早期主要以Ⅰ型胶原增生为主.铀矿尘组21、30、60d时Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维面积百分比明显增高,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).LN主要见于肺组织内血管、支气管周围、血窦壁以及肺间隔的基底膜,形态上以增粗的线状或丛状分布为主.铀矿尘组21、30、60 d时肺组织中LN阳性细胞积分吸光度(14.89±2.25、22.98±2.29、30.34±2.19)增加,与对照组(9.06±1.21、8.98±0.86、10.04±2.00)比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 铀矿尘诱导大鼠肺组织纤维化早期以Ⅰ型胶原纤维为主,后期Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维均大量增多,分布范围扩大.肺组织过程中有LN高表达.

Abstract：

Objective To explore the characteristics of LN and type Ⅰ, Ⅲ collagen in pulmonary fibrosis induced by uranium ore dust in rats. Methods 60 adult Wistar rats were divided randomly into two groups, control group (30 rats)and uranium ore dust group (30 rats). Non-exposed intratracheal instillation method was used. Uranium ore dust group was exposed 20 mg/ml uranium ore dust suspension 1ml per rat,meanwhile control group was exposed normal saline 1ml per rat. Post-exposed the 7, 14, 21, 30 and 60 d, 6 rats in each group were killed randomly, lung tissue were collected. The pathological changes in lung tissue were observed by microscope using HE staining, the collagen Ⅰ and Ⅲ in lungs were observed by polarizing microscope using Biebrich scarlet staining. The expression of LN protein in lung tissue was observed by immunohistochemistry-SP. Results During lung fibrosis, a large amount of the proliferated Ⅰ and Ⅲ collagen in lungs were observed. Post-exposure to uranium ore dust, the characteristics in proliferated collagen in lungs were type Ⅰ collagen deposited in lung interstitium mainly in the early stage. The area percentage of collagen Ⅰ and Ⅲ was increased significantly at 7,14, 21, 30 and 60 d in the experimental group as compared with that in the control group (P＜0.05 or P＜0.01). The over expression of LN in the lung tissue were observed. The expression of LN was distributed in the lung tissue as thickening of the linear or cluster. The integral optical density of LN was increased significantly at 21,30 and 60d in the experimental group as compared with that in the control group(P＜0.05 or P＜0.01). Conclusions After exposure to uranium ore dust, the characteristics in proliferated collagen in lungs are the type of Ⅰ collagen deposited in lung interstitium mainly in the early stage, while the type of Ⅲ collagen increase significantly at the later period. The overexpression of LN exists in the process of pulmonary fibrosis. It suggests that LN has a role effect in the process of pulmonary fibrosis.     

染尘大鼠Ⅰ和Ⅲ型胶原与相关细胞因子含量的变化关系

目的探讨IL-1β、TNF-α及TGF-β1在染尘矽肺大鼠肺组织内的变化和对Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响。方法将50只大鼠随机分为对照组、染尘组,各组于1、7、14、21、28d5个时间点分别取5只大鼠,采用气管暴露法建立大鼠矽肺模型;分别进行HE常规染色、天狼猩红染色并用Image-pro Plus Version 4.5 for WindowsTM图像分析系统进行Ⅰ、Ⅲ型胶原定量分析;肺组织内IL-1β、TNF-α、TGF-β1测定采用悬浮芯片蛋白测定法。结果Ⅰ、Ⅲ型胶原分别在第14天和第7天开始急剧增高;染尘组肺组织IL-1β的浓度在第1天达到高峰;TNF-α的表达量持续增加,在第14天出现峰值;TGF-β1第14天表达量增加并达峰值;回归分析结果显示IL-1β表达水平下降和TNF-α表达水平升高可能直接或间接导致Ⅰ型胶原的增加;IL-1β表达水平下降、TGF-β1表达水平升高可能直接或间接导致Ⅲ型胶原的增加。结论矽尘可以诱导肺组织过度表达Ⅰ、Ⅲ型胶原,并且IL-1β、TNF-α及TGF-β1可以直接或间接地增加胶原含量。     

燃煤型氟中毒大鼠血清中Ⅰ型胶原交联N末端肽变化

目的观察血清Ⅰ型胶原交联N末端肽(NTX)在燃煤型氟中毒大鼠血清中的变化,探讨骨吸收在氟骨症发生中的地位。方法将160只断乳4周的SD大鼠随机分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组,食用病区煤烘玉米,复制燃煤型氟中毒动物模型。分别于染毒后30 d、90 d、180 d分批处死动物,ELISA法检测血清NTX水平。结果随着染毒时间增加,各实验组尿氟、骨氟、氟斑牙发生率、股骨病理积分逐渐增加(P小于0.05)。实验不同阶段各实验组与对照组比较,差异具有统计学意义(P小于0.05),并有随着染氟剂量增加而增加的趋势(P小于0.05)。实验30 d和90 d时,各组NTX水平差异无统计学意义。实验180 d时,低氟组及中氟组NTX高于对照组及高氟组(P小于0.05)。结论在摄氟早期,氟未增强骨吸收,随着时间及染氟剂量增加,可促进骨吸收。     

层粘连蛋白、Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白在大鼠实验矽肺形成过程中分布的变化

用免疫荧光和免疫酶标组织化学技术对大鼠实验性矽肺形成过程中的Ⅳ型胶原、层粘连蛋白(LM)和纤维连接蛋白(FN)三者的分布变化进行了动态观察。发现FN从病变初始的炎症期就出现在肺泡上皮周围炎症灶内疏散分布,随后明显增多及至包裹在所有胶原纤维的表面。LM是一种专一的基底膜成份,与FN的变化完全相反,随肺泡结构的破坏和纤维化病变的形成逐渐减少以致消失。Ⅳ型胶原也称基底膜胶原,但不是专一的基底膜成份,在肉芽肿期肺泡结构被破坏,网状纤维取而代之时,它并未减少却呈纤维走向,当病变发展成胶原纤维结节时,它才趋于消失。作者对观察到的上述现象及其在矽肺纤维化过程中的意义进行了讨论。     

纤维化淤胆性肝炎肝组织α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达

目的了解纤维化淤胆性肝炎（FCH）肝星状细胞（HSC）活化状态及其与肝纤维化的关系。方法肾移植术后乙型肝炎病毒（HBV）相关性FCH患者9例，正常者5例作为对照。用免疫组织化学的方法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白（a—SMA）及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果FCH肝组织α—SMA与Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达显著增加，表达分布部位一致，定量分析呈明显正相关（P〈0．01）。结论肾移植术后HBV相关性FCH患者肝纤维化的发生与HSC的活化状态有关。