左归丸对间充质干细胞向软骨细胞分化过程中Ⅱ型胶原及蛋白多糖基因表达的影响

目的观察左归丸含药血清对间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）向软骨细胞定向分化过程中MSCs增殖、Ⅱ型胶原及蛋白多糖基因表达的影响。方法分离培养大鼠MSCs,体外诱导其向软骨细胞分化,诱导同时分别以高（57 g/kg）、中（28.5 g/kg）、低（9.5 g/kg）浓度左归丸含药血清及大鼠空白血清刺激细胞。CCK-8法检测各组对MSCs增殖的影响。将第3代MSCs分为空白对照组（加入大鼠空白血清）、诱导对照组（加入诱导液及大鼠空白血清）及左归丸含药血清组（加入诱导液及中浓度左归丸含药血清）,采用RT-PCR、免疫组织化学和Real-time PCR检测诱导分化软骨细胞中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达。结果与空白对照组比较,不同浓度左归丸含药血清均能促进MSCs增殖（P〈0.05）,其中以中浓度组最为明显（P〈0.05）。诱导第21天RT-PCR和免疫组织化学显示诱导对照组和左归丸含药血清组MSCs中均可见Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达,其中左归丸含药血清组中Ⅱ型胶原mRNA表达明显高于诱导对照组。Real-time PCR结果显示,诱导第21天左归丸含药血清组蛋白多糖mRNA相对表达定量分别约是第7、14天表达量的16倍和3倍（P〈0.05）,并明显高于同期诱导对照组（P〈0.05）。结论左归丸含药血清能促进MSCs增殖、Ⅱ型胶原和蛋白多糖基因表达,可能是其软骨保护作用的分子基础之一。     

5种中药多糖及其含药血清对MSCs增殖的影响

目的：探讨当归多糖、何首乌多糖、熟地多糖、枸杞多糖、黄芪多糖及其含药血清对骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖的影响。方法：分离、培养大鼠MSCs,各中药多糖及其含药血清,分别加入培养基诱导72h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况。结果：1mg/mL黄芪多糖及其10%含药血清对大鼠MSCs增殖的影响,与相应浓度的空白组及空白血清组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：黄芪多糖及其含药血清可促进大鼠MSCs增殖。     

何首乌提取物及其含药血清对MSCs增殖的影响

目的 探讨何首乌多糖、二苯乙烯苷及何首乌含药血清对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响.方法 分离、培养大鼠MSCs,分别加入何首乌多糖、二苯乙烯苷及何首乌含药血清72 h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况.结果 10-4 mol/L二苯乙烯苷及10%何首乌含药血清对大鼠MSCs增殖的影响,与空白组及空白血清组比较,差异有显著性意义(P<0.05),不同浓度的何首乌多糖对大鼠MSCs增殖影响不明显.结论 二苯乙烯苷及何首乌含药血清可促进大鼠MSCs增殖.     

补肾壮骨颗粒含药血清对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：探讨补肾壮骨颗粒含药血清对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞（ MSCs）体外增殖的影响。方法：选用10只6月龄SD大鼠去卵巢制作骨质疏松模型,对骨质疏松骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,传代后的 MSCs分为OP组、OP＋补肾壮骨颗粒含药血清组和OP＋空白血清组,倒置显微镜观察各组MSCs的生长情况,进行形态学观察,并用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法测定生长曲线。结果：OP＋含药血清组,MSCs呈典型的集落生长,细胞呈长梭形,突起细长且多,细胞增殖较旺盛,细胞数量不断增加,随着传代次数的增多,细胞增殖速度减慢。OP组及OP＋空白血清组MSCs接种后胞体立体感下降,体积较大,细胞偏圆形,突起收缩,增殖速度较慢,细胞数量减少;随着传代次数的增多,细胞增殖速度显著减慢。OP＋补肾壮骨颗粒含药血清组骨髓间充质干细胞增殖能力明显提高,生长曲线有显著性差异。结论：补肾壮骨颗粒含药血清能促进去卵巢骨质疏松大鼠MSCs的增殖。     

清毒栓血清药对宫颈癌SiHa细胞凋亡及周期的影响

目的通过研究中药含药血清对宫颈癌SiHa细胞凋亡及细胞周期的影响，探讨中药抑制宫颈癌SiHa细胞生长可能的作用机制。方法以不同浓度含药血清培养液作用于SiHa细胞，并设立空白血清及含中、西药阳性药血清为对照，用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测。结果口服各组含药血清组S期所占比例较空白血清对照组减少，其差异有显著性（P〈0．05），尤以西药阳性组明显（P〈0．01），清毒栓组次之，中药阳性组再次之。而GO-G1期所占比例较空白血清对照组增加，其差异有显著性（P〈0．01）。结论清毒栓对人宫颈癌SiHa细胞的作用可能是通过阻断细胞从G0-G1期向S期分化及促进其凋亡而抑制细胞生长。     

含药血清对骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

方法：对大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）体外培养、纯化，运用CD34、CD44、c—Kit进行免疫细胞化学法鉴定，并测定生长曲线，观察含药血清（木豆叶）对离体骨髓间充质干细胞（MSC）生长作用的影响。结果：所培养的细胞在表型表达和细胞形态上初步具备MSC特征，木豆叶血清组增长速度比空白对照组明显加快，并与剂量呈正比；证明含药血清能促进干细胞在体外增殖。结论：木豆叶含药血清对MSC有促进生长作用。     

血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察血府逐瘀胶囊及血塞通胶囊含药血清对溶血磷脂酸（LPA）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖效应的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉VSMC并分为7组：空白血清组,血府逐瘀胶囊含药血清组,血塞通胶囊含药血清组,3组分别＋LPA组,卡托普利含药血清＋LPA组。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察不同含药血清对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果空白血清＋LPA组、血府逐瘀胶囊含药血清组较空白血清组0D值升高（P〈0．05）,S期指数升高（P〈0．01）。血府逐瘀胶囊含药血清＋LPA组、血塞通胶囊含药血清＋LPA组较卡托普利含药血清＋LPA组0D值降低（P〉0．05,P〈0．01）;S期指数升高（P〈0．01,P〉0．05）。结论LPA、血府逐瘀胶囊对体外培养的VSMC有促增殖作用,血塞通胶囊无促增殖作用。血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用,血塞通胶囊作用更强。其作用机制部分与抑制DNA合成、阻止细胞进入S期有关。     

强肌健力口服液对大鼠肝移植术后IL-2和IL-10的影响

目的：探讨强肌健力口服液对大鼠肝移植术后受体的白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-10（IL-10）的影响。方法：应用二袖套技术建立大鼠原位肝移植模型80只,并将其分为强肌健力口服液（QJJL）组、环孢素A（CsA）组和QJJL＋CsA组和未治疗组（对照组）各20只;用双抗体夹心ABC—ELISA法和逆转录多聚酶链反应（PCR）技术,对术前及术后不同时相点采集的各组大鼠外周血的IL-2、IL-10水平及受体肝组织内的IL-2mRNA、IL-10mRNA进行检测,对结果进行比较。结果：外周血IL-2、IL-10水平检测显示：QJJL组、CsA组和QJJL＋CsA组的IL-2和IL-10的术前含量低于术后各时相,但差异无显著性意义（P〉0．05）;对照组术后5天血清IL-2的含量明显高于术前和治疗组（P〈0．05）,IL-10术后5天的含量明显低于术前和各治疗组（P〈0．05）。PCR检测显示：各治疗组的IL-2 mRNA的表达明显低于对照组（P〈0．01）;IL-10 mRNA在各治疗组的表达显著高于对照组（P〈0．01）。各治疗组的急性排斥反应的发生率明显低于对照组（P〈0．05,P〈0．01）。结论：IL-2和IL—10的基因表达与大鼠肝移植术后的免疫反应有关,强肌健力口服液联合免疫抑制剂有助于移植大鼠术后免疫紊乱的防治。     

益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的：探讨益气与活血中药含药血清对骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs ）增殖能力的影响。方法全细胞贴壁培养法获取、纯化BMSCs,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞的培养体系,采集空白对照大鼠、益气药、活血药、益气活血中药灌胃大鼠含药血清,用10%浓度以上不同含药血清培养第三代BMSCs,置于37℃,5% CO2培养箱中孵育。用流式细胞术鉴定BMSCs。噻唑基四唑比色法（ methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）测细胞活性,绘制生长曲线,观察10%益气、活血、益气活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs,经流式细胞术检测,CD44、CD106呈阳性表达,基本不表达CD45、CD34;MTT法检测结果显示,培养第2、4、5天细胞快速增长,均较前一天增长明显（ P 〈0．05）,第6天时活血方血清组与益气活血方血清组细胞增长已呈下降趋势,而其它三组在第6天细胞增长达最大,与前一天比较仍有差异（ P〈0．05）,到第7天呈下降趋势。 BMSCs去除基线增殖率组间比较,培养第2天时,各组间比较虽无差异,但活血方血清组达最大（71．39±177;4．98%）;第4、6天时,益气活血方组达最大（66．40±177;1．47%）,与其它三组比较P〈0．01,活血方血清组次之;培养第6天时,益气方血清组较其它三组大,益气活血方血清组次之,活血方血清组最低。结论全细胞贴壁培养的大鼠骨髓间充质干细胞在细胞形态与表形表达上均具备BMSCs特征;益气活血中药含药血清对培养BMSCs增殖影响最大,活血方含药血清对细胞增殖影响出现最早、益气方含药血清对细胞增殖影响时间最长。     

骨疏康颗粒含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨骨疏康颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖及细胞周期分布的影响。方法采用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,制备骨疏康颗粒含药血清干预成骨细胞,以生理盐水大鼠血清作对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果与同浓度生理盐水血清比较,骨疏康含药血清能不同程度地促进体外培养成骨细胞增殖,其中以20%骨疏康含药血清促增殖作用最显著,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,且能明显降低G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,提高S期成骨细胞比例及增殖指数（P〈0.05）。结论骨疏康含药血清能加速成骨细胞周期,促进成骨细胞增殖。     

健骨颗粒含药血清对成骨细胞增殖的影响

目的：探讨健骨颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。方法：采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果：与同浓度生理盐水血清相比,20%健骨颗粒含药血清能明显促进体外培养成骨细胞增殖（P〈0.05）,明显降低G0/G1期细胞分数（P〈0.01或P〈0.05）,提高S期、G2/M期细胞分数和增殖指数（P〈0.01或P〈0.05）。结论：健骨颗粒含药血清能推进体外培养成骨细胞细胞周期,从而促进成骨细胞增殖。     

中药芪红合剂含药血清对人外周血内皮祖细胞增殖的影响

目的观察中药芪红合剂含药血清对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）增殖的影响。方法将12只雄性Wistar大鼠随机分为中药芪红合剂组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）和对照组,制备含药血清和空白血清。采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞,经激光共聚焦显微镜、流式细胞仪鉴定为EPCs。加入各实验血清组培养液培养EPCs,分别作用不同时间（24h、48h、72h）后,倒置相差显微镜下观察EPCs生长情况,噻唑蓝比色试验（MTT法）测定EPCs的吸光度值。结果与对照组比较,中药芪红合剂合药血清低、中、高剂量组EPCs增殖明显（P〈0．05）,且呈一定的量效、时效关系。在同一作用时间,低剂量芪红合剂含药血清干预后EPCs的增殖明显（P〈0．05）。在同一剂量组中,芪红合剂含药血清干预后EPCs的增殖随时间推移逐渐增强,于72h达到高峰（P〈0．05）。结论中药芪红合剂含药血清对体外培养的人外周血EPCs的增殖具有一定的促进作用,可能是其防治血管内皮损伤及内皮功能障碍相关性疾病的作用机制之一。     

丹玄口康对槟榔提取液刺激下的人口腔黏膜成纤维细胞增殖及增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察丹玄口康对槟榔提取液（Areca Nut Extract，AYE）诱导的人口腔黏膜成纤维细胞（Fibroblasts，FB）的增殖及增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCYA）表达的影响。方法体外培养人口腔黏膜FB，100μg／mL ANE为诱导剂，10％大鼠丹玄口康药物血清为干预物；用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐（MTT）法测定细胞增殖速度，用免疫细胞化学法检测PCNA的表达。结果MTT显示，丹玄口康组的0D值低于AYE刺激组（P〈0．01或P〈0．05），丹玄口康组免疫阳性细胞数及相对灰度值均低于AYE刺激组（P〈0．01或P〈0．05）。结论丹玄口康能够抑制ANE刺激下的人口腔黏膜FB的增殖，下调PCNA的表达。     

四君子汤对胃癌细胞株SGC-7901侧群细胞增殖的影响

目的对胃癌细胞株SGC-7901侧群（side population, SP）细胞、非侧群（non-side population, NSP）细胞及未分选（Total）细胞进行四君子汤药物血清干预,观察药物血清干预后胃癌细胞株SGC-7901的SP、NSP及Total细胞增殖能力的变化。方法16只纯种新西兰家兔按随机数字表法分为对照组及四君子汤低［7 mL/（kg·d）］、中［14 mL/（kg·d）］、高［28 mL/（kg·d）］剂量组,每组4只,每组动物给予对应等体积灌胃,每天2次,持续2周。提取兔血清,应用高效液相色谱法对药物血清进行鉴定;应用流式细胞仪对人胃癌细胞株SGC-7901的SP细胞进行检测并分选出SP及NSP细胞;应用CCK-8法检测SP、NSP及Total细胞的增殖曲线及药物血清干预后的SP、NSP及Total细胞增殖能力变化。结果在制备的药物血清中检测到四君子汤的有效成分人参皂苷Rg1;胃癌细胞株SGC-7901 SP细胞的增殖能力明显高于NSP及Total细胞（P〈0.05）,药物血清对胃癌细胞株SGC-7901 SP、NSP及Total细胞的增殖具有抑制作用,但对SP细胞的增殖抑制作用明显低于NSP及Total细胞（P〈0.05）。结论四君子汤可以明显抑制胃癌细胞株SGC-7901的SP、NSP及Total细胞增殖,但对3组细胞抑制程度存在明显差异。     

黄芪含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性的影响

目的：观察养心汤方中单味中药黄芪不同浓度含药血清对H：O：诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VEC）氧化损伤模型细胞增殖的影响及对损伤HUVEC的保护作用,以进一步研究养心汤对冠心痛不稳定型心绞痛的确切作用机制。方法：以浓度为1．03g·mL^-1的黄芪药液灌胃大鼠1周,于末次给药后取血离心制备含药血清。将HUVEC与不同剂量浓度（2％、4％、6％）单味黄芪含药血清、基础培养液、空白血清培养液一起培养,共分5组,培养24h后加入H2O2作用2h,通过MTT法及形态学方法观察不同浓度黄芪含药血清对H2O2损伤HUVEC生长活性变化。结果：黄芪含药血清2％、4％、6％各组细胞OD值均较H2O2模型对照组明显升高,与H2O2模型组相比较均有统计学意义（P〈0．01）,且2％、4％、6％组间比差异有统计学意义（P〈0．05）。形态学方面,黄芪含药血清可使细胞体积变小,间隙变大,但彼此之间存在联系,脱落细胞较少;皱缩的程度明显改善。结论：黄芪含药血清可以促进H2O2损伤人脐静脉内皮细胞的增殖,增强HUVEC抗氧化损伤能力,逆转和改善内皮功能障碍,具有一定剂量依赖关系。