黄连的组织培养I.愈伤组织诱导及小檗碱含量测定

黄连(Coptis chinensis Franch.)的叶、叶柄和茎作外植体,在6,7-Ⅴ+2,4-D lmgL~(-1)+KT0.1mgL~(-1)的培养基上培养,所得结果表明:1.所有外植体都诱导出愈伤组织;2.所有愈伤组织都含有小檗碱;3.所有愈伤组织的小檗碱含量相当;4.愈伤组织中的小檗碱含量相当于黄连根茎中小檗碱的含量.     

不同培养基及~(60)Coγ-射线辐照对中国黄连叶片愈伤组织生长速度及小檗碱含量的影响

在相同的激素浓度下,中国黄连叶片愈伤组织在B_5培养基上生长较好,且小檗碱含量明显增加。~60Coγ-射线的辐照剂量在5～40Gy范围内都能提高愈伤组织的小檗碱含量,其中以20Gy的辐照剂量效果为最好。     

中国黄连组织培养细胞中小檗碱含量的研究：中国黄连叶片细胞的悬浮培养

薄层层离和高速液相色谱分析证明,中国黄连叶片悬浮细胞中存在有黄连的有效成分小檗碱。当2,4-D浓度在0.3～1.5mg/1范围内,随着2.4-D浓度的增加,中国黄连叶片悬浮细胞的生长速度也相应增加,但小檗碱含量却逐步下降。结果表明,在一个生长期内中国黄连叶片悬浮细胞的生长数量和小檗碱含量是一条S形曲线。     

黄连属植物愈伤组织诱导及生物碱产生

对6种黄连属药用植物进行了愈伤组织诱导和培养,并用薄层层析和高效液相色谱法分析比较了愈伤组织和原生药中小檗碱、药根碱、黄连碱、巴马丁和表小檗碱等成分。     

黄连生长状况及生物碱含量的个体差异

报道了黄连Ｃｏｐｔｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ．不同单株生长状况（叶片数、花茎数、根茎重、须根重、叶片重、花茎重）,生物碱（药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱）含量及叶片性状（裂片质地、花斑、光泽、叶形）的个体差异,为选育黄连良种提供了一些依据。     

湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的分布及变化

目的:研究湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的累积变化过程,为标准化种植提供科学依据.方法:采用紫外分光光度法和HPLC测定黄连有效成分.结果:随着生长龄期的增长,黄连叶片数、根茎干重都在不断的增加;黄连不同部位中总生物碱含量的由大到小的顺序依次是根茎＞须根＞叶片;在黄连2～3龄阶段为黄连生长最旺盛的时期,酪氨酸、总生物碱、小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量增长速度最快;在5龄阶段,这4种生物碱含量的大小顺序依次是小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀,且这4种生物碱含量之和占总生物碱含量的比例在不断增加.结论:为黄连的种植管理提供了参考.     

不同黄连炮制品中黄连小檗碱含量变化

为了探讨不同的炮制方法对黄连小檗碱含量的影响,用四川产的味连,按照1977版《中国药典》中黄连含量测定方法对黄连小檗碱百分含量进行测定。结果见下表。     

黄连及其与肉桂药对配伍中盐酸小檗碱在大鼠体内的组织分布研究

目的:研究黄连药材提取物及黄连、肉桂药对提取物中盐酸小檗碱在大鼠体内的组织分布特征.方法:灌胃给药,采用HPLC法测定大鼠体内盐酸小檗碱的组织含量,用液-液萃取的方法提取组织样品中的盐酸小檗碱.结果:两种提取物以等剂量灌胃后,相同时间点在组织中,大鼠体内黄连、肉桂药对提取物中盐酸小檗碱的组织含量大于黄连药材提取物中盐酸小檗碱的组织含量.结论:在小肠、大肠、胃、肝、肺、脾、睾丸、心、肾、子宫、胰组织中都能检测到小檗碱,特别是胃肠道系统中的组织浓度较高,表明小檗碱在大鼠体内分布广泛.     

酒黄连中小檗碱HPLC含量测定

<正>酒黄连为黄连的加工炮炙品。具有泻火解毒,燥湿,消炎,杀菌,健胃的功效。临床主治热盛心烦,痞满,消渴,吐血,衄血,目赤口疮,疮疥,细菌性痢疾、肠炎、上呼吸道感染等。酒黄连是《中国药典》2005年版一部收载的品种,其成分主要为小檗碱。HPLE测定黄连中小檗碱的含量已有文献报道,但未见测定酒黄连文献报道,为了更有效地对其进行质量控制,作者拟定了HPLE测定小檗碱含量。结果满意,为酒炙黄连的质量提供了可靠的检验手段。     

黄连对幽门螺杆菌的体外抗菌活性研究

目的研究黄连乙醇提取液的成分及小檗碱含量,比较黄连和盐酸小檗碱对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)体外抗菌活性。方法使用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法鉴定黄连乙醇提取液中成分及小檗碱含量,选取盐酸小檗碱做体外对比抑菌实验,观察黄连和盐酸小檗碱的抑菌效果并进行比较。结果与结论黄连对H.pylori的体外抗菌活性与小檗碱的相比,黄连较好。     

一测多评法优选黄连最佳提取工艺

目的:优选黄连的最佳提取工艺。方法:应用一测多评法测定黄连中表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱的含量,通过正交试验设计,以黄连中表小檗碱、黄连碱、巴马汀及小檗碱含量之和为指标优选黄连最佳提取工艺。结果:最佳工艺条件为10倍量70%乙醇提取3次,每次1.5 h。结论:该提取工艺可以有效提取黄连中小檗碱等多种生物碱。     

增强UV-B对黄连代谢及小檗碱含量的影响

目的:测定黄连根中小檗碱含量对不同UV-B辐射强度的响应,为提高黄连小檗碱含量提供理论参考.方法:实验设置了CK(自然光),UL(0.05 W·m-2),UM(0.10 W·m-2),UH(0.20 W·m-2)4个处理组,探讨UV-B辐射下初生代谢中光合特性、PPP途径和次生代谢中酪氨酸酶及黄连根中的小檗碱含量的变化特性.结果:在UH辐射胁迫下,黄连叶片中光合色素、PSⅡ非光化学猝灭系数(qN),初始荧光(Fo),电子传递速率(ETR)以及6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性、根中小檗碱含量均较其他组低.而处于UM辐射下的黄连,光合作用能力、PPP途径、酪氨酸酶活性以及小檗碱含量均高于对照组,产生了胁迫应激反应来抵御适度的UV-B辐射.结论:黄连处于UM辐射时,通过增强光合作用及PPP途径,能提供较多的次生代谢物前体物及次生代谢物所必需的NADPH,进而小檗碱的含量也相应提高,为黄连栽培种植中提高小檗碱含量提供参考.     

黄连有效成分积累动态的研究

目的研究黄连(味连)有效成分积累的动态规律,为确定黄连最佳采收期提供依据。方法定期定点采集2～5年生黄连样品,分析黄连根茎中盐酸小檗碱和总生物碱的含量,分别用高效液相色谱(HPLC)法和UV法测定。结果黄连根茎中有效成分动态积累有一定规律,盐酸小檗碱含量每年4月(开花结实期)几乎均为全年最低,4～5年生黄连以10～11月黄连根茎中的小檗碱含量达到全年最高值,而以5年生黄连的盐酸小檗碱含量为最高;总生物碱含量呈上升趋势,每年在10～11月含量达到全年最高,而以5年生黄连的总生物碱含量最高。结论根据黄连有效成分的积累动态规律,黄连的最佳采收期为10～11月的5年生黄连根茎。     

薄层色谱扫描法测定黄连吴茱萸药对中黄连生物碱的含量

目的:比较黄连中主要生物碱成分在黄连-吴茱萸药对配伍前后的差异.方法:采用TLCS法对黄连单煎液、黄连吴茱萸合煎液、黄连吴茱萸单煎混合液中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的含量进行测定.结果:黄连与吴茱萸配伍后,盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的含量均显著降低,以盐酸小檗碱的减少较为明显.结论:两药合用,黄连生物碱含量均有不同程度降低,说明吴茱萸可制约黄连苦寒之性,为临床两药配伍使用提供了实验依据.     

黄连生物碱在大鼠体内的代谢转化及分布

目的:测定黄连生物碱在大鼠体内的药代动力学、组织分布,及药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱4种生物碱在大鼠体内的转化。方法:大鼠分别灌胃黄连总碱、小檗碱,采用反相高效液相色谱法测定大鼠的血浆、组织、胃肠道中黄连4种生物碱的含量。结果:小檗碱在大鼠体内的血药浓度出现2个峰值,达峰时间分别2,5h,其中血药浓度分别为Cmax3.7,2.8mg.L-1;小檗碱在大鼠血液中可以转化为药根碱;给大鼠灌胃黄连总生物碱后,小檗碱在大鼠胃中的浓度单调下降,而黄连碱、巴马汀和药根碱逐渐增加,表明在大鼠的胃中小檗碱可转化为药根碱;小檗碱和巴马汀主要分布在动物的肺部,其次分布在肝脏中,而药根碱和黄连碱主要分布在动物的肝脏中,其次分布在肺部。结论:小檗碱可以转化为药根碱,根据胃肠道推进实验部分解释了小檗碱在血液中出现2次峰值的原因。     

茉莉酸甲酯对黄连生物碱含量积累的影响

目的:探究茉莉酸甲酯（MeJA）对黄连中生物碱积累的影响,为进一步研究茉莉酸甲酯对黄连生物碱生物合成途径的分子调控机制提供依据。方法:用100 μmol/L的茉莉酸甲酯喷施黄连幼苗叶片,于处理后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h取样,采用高效液相色谱法对黄连幼苗中的药根碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱含量进行测定。结果:茉莉酸甲酯处理48 h后的黄连幼苗中药根碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱含量显著升高,增长率也最高,其中黄连碱对茉莉酸甲酯的响应性更好,处理48 h后的黄连幼苗中黄连碱含量为对照组的3.15倍;96 h茉莉酸甲酯处理后,黄连幼苗生物碱含量有下降趋势。结论:短时间内施加外源性茉莉酸甲酯可显著促进黄连幼苗中生物碱的积累。     

川渝产黄连提取液颜色与有效成分相关性研究

目的探讨四川、重庆所产黄连的提取液颜色值与其有效成分的相关性。方法依据CIE L^*a^*b^*数字化系统,采用分光测色计测定色度值,HPLC测定有效成分含量。结果黄连的亮度与盐酸小檗碱、黄连碱呈显著负相关,红色方向与盐酸小檗碱、黄连碱呈显著正相关,且其黄色方向与盐酸小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱的含量均呈显著正相关。结论黄连提取液的色度值与有效成分具有相关性,黄连提取液的色度值可以反映黄连的成分含量,为黄连建立简捷、快速质量评价技术方法奠定基础。     

不同用量的吴茱萸炮制黄连后成分的比较

目的 考察不同用量的吴茱萸炮制黄连对小檗碱的影响以及英黄连中吸收吴茱萸成分的情况。方法 以小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱为指标，采用高效液相色谱法测定黄连，吴茱萸，10％，20％，30％，40％，50％英黄连中的成分含量。结果 黄连用吴茱萸炮制后小檗碱的含量减少，20％，30％英黄连中小檗碱的含量较高；萸黄连中确实吸收了吴茱萸中的成分。结论 吴茱萸炮制黄连的用量以20％为宜。     

黄连不同炮制品的质量考察

目的:对黄连不同的炮制品进行质量考察。方法:将黄连分别炮制成生黄连、炒黄连、酒黄连、姜黄连、吴茱萸黄连,采用显色反应,薄层层析鉴别和高效液相法测定不同黄连炮制品中小檗碱的含量。结果:各种黄连炮制品的显色反应均呈阳性,薄层层析鉴别斑点也基本相同,小檗碱的含量分别是:生黄连8.472%、炒黄连7.119%、酒黄连8.886%、姜黄连7.775%和吴茱萸黄连8.018%。结论:经不同方法炮制的黄连,其主要成分小壁碱的含量发生变化,但均符合2005版中国药典一部中规定的不低于3.6%的标准。     

萸黄连不同炮制方法对其小檗碱含量的影响

目的探讨不同炮制方法对萸黄连中小檗碱含量的影响。方法采用薄层扫描法测定4种炮制品中小檗碱的含量,以小檗碱的含量高低来评价炮制方法的优劣。结果以微波法炮制出的萸黄连中小檗碱含量最高。结论用微波法炮制萸黄连最好。