中药红花对白血病抑制因子在小鼠早孕子宫内膜表达的影响

目的：探讨中药红花抗早孕作用与白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor, LIF）在小鼠子宫内膜表达的关系。方法：受精后第2天,分别给孕鼠灌服不同剂量的红花浸液（10.5g/kg、15.5g/kg和20.5g/kg）和生理盐水,连续3天。停药后24h取子宫,石蜡包埋制片,进行HE和LIF免疫组化染色;将免疫组化染色结果输入图像分析仪, 对LIF蛋白的表达进行定量分析。结果：各实验组孕鼠子宫内膜充血,上皮细胞排列紊乱,且随着药物剂量的提高逐渐改变。在对照组,孕鼠子宫内膜LIF呈强阳性表达,在实验组的表达水平显著低于对照组（P＜0.05, P＜0.01）;随着红花剂量的提高,LIF的表达逐渐减少。结论：中药红花可抑制孕鼠子宫内膜细胞LIF蛋白的表达,从而影响胚胎的着床。     

降钙素受体在小鼠早期胚胎及围植入期子宫内膜的表达

目的：检测降钙素受体（calcitonin receptor,CTR）在不同发育阶段小鼠胚胎和植入期子宫内膜表达的变化。方法：取小鼠早期胚胎、未孕、真孕及假孕3～7d小鼠子宫．利用免疫组织化学染色结合图像分析法,检测CTR在不同发育阶段早胚及植入期子宫内膜中的表达。结果：①CTR在小鼠植入前胚胎表面呈阳性表达．随着妊娠进展,其表达逐渐加强;②真孕组孕3d,小鼠子宫内膜CTR呈弱阳性表达,孕4～5d表达达到高峰．此后腔上皮CTR表达水平下降;假孕组,小鼠子宫内膜CTR呈弱阳性表达;未孕组小鼠子宫内膜CTR呈阴性表达。结论：①CTR参与了早期胚胎发育分化的调节以及子宫内膜容受性的形成;②启动子宫内膜容受性形成的信号不仅来自母体及交配刺激,还来自胚胎。     

Ghrelin 对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的影响

目的：探讨Ghrelin对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的影响。方法实验将子宫基质细胞分为3组,每组6孔：（1）对照组（只加培养基）;（2）Ghrelin组（细胞培养液中加入100 ng／mL重组Ghrelin细胞因子）;（3）Gh－relin抗体组（细胞培养液中加入30μg／mL Ghrelin抗体）。通过RT－PCR和免疫组织化学技术,观察Ghrelin及其受体在妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化过程中的表达变化;通过子宫基质细胞的分离、培养及宫角注射技术,观察Ghre－lin在离体及在体状态下对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的影响。结果（1）RT－PCR显示：随着妊娠期和蜕膜化的进展,Ghrelin mRNA表达水平明显升高,至妊娠第8天,其表达水平达到最高。（2）在妊娠第5天,GHS－R蛋白主要表达于腔上皮、腺上皮及胚胎植入位点的蜕膜。至妊娠第6天,其表达水平进一步升高,主要表达于胚胎周围的蜕膜。至妊娠第8天,蜕膜中GHS－R蛋白的表达水平渐进下降。（3）与对照组相比,Ghrelin组子宫基质细胞HoxA10蛋白的表达水平明显升高（P＜0．01）,而Ghrelin抗体组子宫基质细胞HoxA10蛋白的表达水平明显下降（P＜0．01）。（4）与对照组相比,重组Ghrelin对胚胎植入位点没有明显的影响（P＞0．05）,却明显增加的子宫重量（P＜0．05）;对于Ghrelin抗体组,能明显抑制胚胎植入位点,且妊娠子宫重量的明显下降（P＜0．01）。结论Ghrelin具有明显促进妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的作用。     

控制性超排卵对胚胎植入前小鼠子宫内膜蛋白质表达的影响

目的研究控制性超排卵（COH）对胚胎植入前小鼠子宫内膜蛋白质表达的影响，探讨体外受精-胚胎移植时子宫内膜容受性的生物学标志物。方法将12只ICR雌性小鼠随机分为实验组和对照组，每组6只。实验组采取促排卵措施，对照组未作任何处理。通过双向电泳和质谱分析技术研究COH对小鼠子宫内膜蛋白表达的影响。结果实验组蛋白电泳图谱与对照组有明显差异，2倍以上差异表达蛋白总数为89个。截取其中16个蛋白质点进行了质谱分析，检测出9种有意义的差异表达蛋白。结论COH可导致子宫内膜多种蛋白质表达改变，通过筛选子宫内膜容受性的生物学标志物，可以为提高COH周期的胚胎种植率和妊娠率提供理论依据。     

小鼠围植入期子宫内膜组织中白血病抑制因子蛋白及mRNA的表达

目的：观察小鼠围植入期子宫内膜组织中白血病抑制因子（LIF）表达的变化规律并探讨其与胚胎种植的关系。方法：取真孕、假孕第3、4、5、6天小鼠（n=10）子宫内膜组织,采用免疫组织化学、RT-PCR法分别检测LIF蛋白和mRNA的表达情况,并设未孕小鼠作对照组。结果：小鼠子宫内膜组织中LIF蛋白的表达主要定位在腔上皮和腺上皮。真孕组第3、4、5、6天子宫内膜组织中LIF蛋白和mRNA的表达水平均高于假孕组和对照组（P均〈0.05）,且表达水平在孕4d达高峰（P〈0.05）。结论：LIF表达的峰值与胚胎种植时间一致,可能是子宫内膜容受性的标志;LIF的表达不仅受母体激素的影响,也和胚胎的刺激有关。     

围着床期小鼠子宫中巨噬细胞的变化及作用

目的观察小鼠子宫中胚胎着床部位与非着床部位巨噬细胞（Macrophage, Mφ）的分布差异,探讨其在胚胎着床过程中的
作用。方法取真孕（n=30）和假孕小鼠（n=30）子宫组织,选择30只妊娠小鼠模型作为实验组,同时选择30只假孕小鼠模型作为
对照组,在围着床期取两组小鼠子宫组织,采用免疫组化技术检测子宫组织中Mφ、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、白血病抑制
因子（LIF）的分布,分析比较子宫组织中胚胎着床部位和非着床部位Mφ、iNOS和LIF的分布差异及相关性。结果在小鼠子宫
组织中,观察到实验组Mφ在D4.5（雌鼠交配后次日晨阴道见栓为D0.5）前主要分布子宫内膜,D4.5后主要分布于子宫外膜,对
照组Mφ主要分布于子宫内膜;实验组iNOS在D4.5前主要分布子宫内膜,D4.5后主要见于子宫肌膜和外膜,对照组iNOS主要
位于子宫内膜,且实验组Mφ和iNOS分布呈正相关。此外,实验组LIF显著表达于子宫内膜,对照组几乎不表达,二者间有统计
学差异（P<0.05）;着床部位Mφ、iNOS和LIF明显高于非着床部位,其中Mφ、LIF比较有统计学差异（P<0.05）。结论围着床期
小鼠子宫组织中Mφ主要分布在子宫内膜及胚胎着床点,并伴有iNOS和LIF的表达,提示Mφ在胚胎着床中可能发挥重要作用。
     

高脂饮食诱导的肥胖早孕小鼠子宫内膜蜕膜反应受损

目的： 探讨高脂饮食诱导的肥胖对小鼠子宫内膜蜕膜反应的影响。 方法： 将12只4周龄健康C57BL/6J雌性小鼠随机分为高脂组和对照组（每组6只）,分别饲喂高脂 （22?kJ/g）、 正常 （16?kJ/g） 饲料12周。每周测量小鼠体重,喂养12周后测量小鼠体长、体宽并检测空腹血清三酰甘油和总胆固醇水平。将雌鼠与健康C57BL/6J雄鼠合笼交配,收集妊娠第7天子宫组织,采用苏木精-伊红染色观察子宫内膜细胞形态,Masson染色观察子宫内膜胶原纤维;采用免疫组织化学法、蛋白质印迹法检测子宫内膜蜕膜反应相关蛋白表达。分离原代小鼠子宫内膜基质细胞,油酸、棕榈酸模拟高脂环境进行干预,雌二醇、孕酮诱导细胞发生蜕膜反应后,油 红O、 Bodipy染色观察脂滴累积情况,鬼笔环肽染色观察细胞骨架,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测蜕膜反应相关标志物的基因和蛋白表达。 结果 ：饲养12周后,高脂组体重明显高于对照组（ P <0.01）,两组体长无明显差异（ P >0.05）,但高脂组体宽显著大于对照组（ P <0.01）,血清三酰甘油和总胆固醇水平均显著高于对照组（均 P <0.05）。高脂组胚胎着床数显著少于对照组（ P <0.01）,高脂组子宫内膜基质细胞向蜕膜细胞转换缓慢且形态异常,蜕膜反应标志物骨形成蛋白（BMP）2、同源异形框A10（HOXA10）表达水平均低于对照组,其中两组HOXA10表达水平差异有统计学意义（ P <0.01）。油红O、Bodipy染色结果显示,原代小鼠子宫内膜基质细胞经高脂处理后,脂滴堆积明显增多,鬼笔环肽染色发现其细胞骨架形态异常,蜕膜反应相关基因 dtprp 、 HOXA10 以及蛋白BMP2、HOXA10、环氧合酶2的表达水平均明显低于对照组（均 P <0.05）。 结论 ：高脂饮食诱导的肥胖会损伤小鼠子宫内膜的蜕膜反应。     

鹿茸对去卵巢小鼠子宫内膜LIF蛋白表达的影响

[目的]观察鹿茸对去卵巢(ovariectomized,OVX)小鼠子宫内膜白血病抑制因子(leukemia inhibit tory factor,LIF)蛋白的表达情况.[方法]雌性小鼠去卵巢10d后,随机分为对照组和实验组.实验组用鹿茸冻干粉每天以2mg、6 mg和18 mg剂量连续给去卵巢小鼠灌胃14d,对照组为仅用等量生理盐水,通过免疫组化染色和灰度值检测来确定子宫内膜LIF蛋白的表达情况.[结果]鹿茸处理去卵巢小鼠子宫内膜LIF蛋白的表达主要定位在子宫的腔上皮细胞和腺上皮细胞,通过灰度值检测得到:2mg组、6mg组、18 mg组及对照组分别是(144.78±3.46)、(131.37±3.83)、(113.80±7.04)和(193.10±4.49).2 mg组、6 mg组和18 mg组与对照组比较均有统计学意义(P＜0.05).[结论]鹿茸促进去卵巢小鼠子宫内膜LIF蛋白的表达,并且随着鹿茸的剂量的增大而逐渐增加.     

Rictor/mTORC2在小鼠胚胎植入中的作用

目的：通过研究mTOR配体之一———Rictor基因在早孕小鼠中的表达规律,以及对胚胎植入的影响,为最终阐明其在胚胎植入中的作用和相关机制奠定基础。方法：构建小鼠早孕和子宫内膜条件敲除Rictor基因的动物模型。结果：免疫组化结果表明,Rictor基因在小鼠早孕期D1至D4表达于腔和腺上皮,以及胚胎植入后着床点附近的蜕膜组织区。成功繁殖了基因型为Rictorfl/flCre+/-的条件性敲除小鼠。免疫组化、Western blot及RT-qPCR结果表明小鼠子宫中Rictor表达降低,提示Rictor子宫条件敲除小鼠模型构建成功。相比对照鼠,敲除鼠的子宫体积和重量都明显降低（P<0.01）;敲除鼠孕5 d子宫外观显示无可见胚胎植入位点,且腔上皮细胞中增生标志物Ki67和子宫内膜容受性标志物MUC1表达均升高。结论：子宫内膜条件敲除Rictor后,由于容受性的降低导致胚胎的植入率明显下降。     

整合素β3反义寡核苷酸抗小鼠妊娠的作用

目的：探讨整合素β3反义寡核苷酸(ASODN)活体转染假孕小鼠子宫内膜抗早孕的可能性。方法：将整合素β3反义寡核苷酸注入假孕1d小鼠子宫,同时同侧输卵管植入2细胞期受精卯10枚,小鼠正常饲养,5d天取小鼠子宫内膜进行Western Blotting检测整合素β3蛋白表达情况;19d进行小鼠子代出生率评估。结果：①Western Blotting检测5d天小鼠子宫内膜整合索艮蛋白强表达,10pmol整合素β3反义寡核苷酸转染假孕小鼠子宫内膜后5d天小鼠子宫内膜整合素β3蛋白减弱表达,100pmol整合素β3反义寡核苷酸转染时弱表达,单纯脂质体轻度影响其表达;②19d进行小鼠子代出生率评估,受孕鼠转染整合素β3反义寡核苷酸后子代小鼠出生抑制率为85％。结论：整合素陆反义寡核苷酸可能整合到假孕小鼠子宫内膜抑制其蛋白表达,阻止胚胎着床。由于例数较少,其整合素β3反义寡核苷酸后抑制子代小鼠出生率需进一步研究。     

Transcription and Translation of Dickkopf-1 in Endometrium of Pregnant Mice during the Peri-implantation Period

Dickkopf1(DKK1),knowntobeoneoffamilymembersofDickkopf,isanexcretionprotein[1].Itplaysanimportantroleinthecarcinogenesisandembryonicdevelopment.Recently,somestudieshaveconfirmedthatDKK1washighlyexpressedinmidsecretoryphaseinhumanendometrium,whichwascoincid…     

米非司酮对小鼠围着床期子宫内膜Dickkopf-1表达的影响

目的 研究孕酮抑制剂米非司酮对妊娠小鼠围着床期子宫内膜Dickkopf-1（DKK1）表达的影响，探讨DKK1在胚胎着床过程中的作用。方法 用半定量逆转录聚合酶链反应法（RT—PCR）及免疫组织化学SP法检测米非司酮组、载剂对照组和空白对照组小鼠在妊娠第3～7天DKK1 mRNA及蛋白的动态表达。结果载剂对照组和空白对照组小鼠在妊娠第4天出现DKK1 mRNA及蛋白的表达峰值，且两组在第3～7天各时间点DKK1的表达差异无显著性意义；米非司酮组DKK1 mRNA及蛋白的表达较两对照组显著降低（P〈0．01），在妊娠第4天亦无表达高峰。结论 DKK1是介导胚胎着床的重要因子之一，其表达可能受到孕激素的正向调节。     

一氧化氮对小鼠胚胎着床的作用

为探讨一氧化氮（NO）在胚胎着床中可能发挥的作用及其机制,进行小鼠胚胎着床实验,分3个实验进行。实验1及实验2,于小鼠妊娠第3d和第1～6d分别腹腔内注射N-硝基-L-精氨酸甲酯〔L-NAME,一氧化氮合酶(NOS)的非特异性竞争抑制剂〕0.5～5mg和3mg,观察其对胚胎着床的影响。实验3,给予L-NAME+L-精氨酸（NO的前体）,观察L-精氨酸对L-NAME作用的影响,并评价胚胎发育情况。上述3个实验均取子宫内膜行组织学检查。结果发现与对照组相比,妊娠第3d腹腔注射L-NAME1～5mg可减少胚胎的着床位点数（P<0.05),腹腔注射4、5mg的L-NAME可完全抑制小鼠胚胎着床的发生。围着床期（妊娠3～5d）给予L-NAME均可减少胚胎着床位点数。此时,子宫内膜血管通透性的改变被抑制,缺少蜕膜样变,同时胚胎发育阻滞。L-NAME的这种抑制作用可被同时给予的L-精氨酸抵消。提示NO通过增加子宫内膜的血管通透性、子宫内膜的蜕膜化以及胚胎的发育而促进小鼠胚胎着床的发生。     

去甲二氢愈创木酸对小鼠胚泡植入的影响

目的研究去甲二氢愈创木酸(NDGA)对小鼠胚泡植入的影响及其作用机制。方法孕2d小鼠随机分4组(A、B、C和对照组),A、B、C组分别经皮下注射1.0、3.0、9.0mg/kg的NDGA,对照组注射等量PBS溶液,孕4d处死一半,取子宫免疫组化检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达,透射电镜分析子宫内膜结构的变化;另一半于检孕8d处死,测子宫脏器系数,观察胚胎着床数。结果与对照组比较:A组子宫脏器系数和妊娠胚胎数无显著差异,B、C组子宫脏器系数显著下降,妊娠胚胎数明显减少;A组子宫内膜MMP-9阳性表达差异无显著性,而B、C组MMP-9阳性表达明显减少;A组子宫内膜细胞超微结构无显著变化,B、C组细胞超微结构均遭受不同程度的损伤。结论NDGA可能通过对子宫内膜细胞直接毒性作用干扰MMP-9的表达,抑制胚泡植入。     

超排卵对着床的影响及中药帮得孕的改善作用

目的:观察超排卵对小鼠着床的影响和中药帮得孕的改善作用。方法:仿照临床超排卵方案,运用腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10IU,于48h后注射绒毛膜促性腺激素(HCG)10IU的方法造模。观察妊娠第8天正常组、超排卵组、不同剂量帮得孕组小鼠胚泡着床率和平均胚泡着床点数。伊文思蓝染色观察妊娠第5天子宫内膜血管通透性情况,HE染色观察妊娠第5天子宫内膜蜕膜化情况,免疫组化和Western blot方法观察妊娠第5天子宫内膜基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:与正常组相比,超排卵组着床率明显下降(P<0.05),与超排卵组相比,帮得孕各剂量组着床率均明显提高(P<0.05);超排卵抑制小鼠子宫内膜血管渗透性,延缓子宫内膜蜕膜化,抑制子宫内膜MMP-9表达,中药帮得孕则有利于促进子宫内膜血管渗透性、促进内膜蜕膜化、促进MMP-9表达。结论:超排卵可致着床障碍,与超排卵药物抑制血管渗透性、抑制子宫内膜蜕膜化和抑制内膜基质降解有关,帮得孕可以一定程度上降低和抵消超排卵这种不良的影响,有利于胚泡成功着床。     

血流方对肾虚血瘀型冻融胚胎移植患者子宫内容受性影响

目的：观察血流方对肾虚血瘀型冻融胚胎移植周期患者子宫内膜的容受性的影响。方法：收集复苏移植周期中子宫内膜发育不良的肾虚血瘀型不孕症患者80例,随机分为2组,观察组40例,于月经干净开始服血流方,每日1剂,用至移植日;月经第3天口服戊酸雌二醇片,每日2次,每次2mg;对照组40例,月经第3天开始口服戊酸雌二醇片,每日2次,每次2mg。移植后均加用黄体酮,每日1次,每次肌肉注射60mg;肌肉注射HCG,隔日1次,每次2000U,用3d。于月经第2天、移植前1天监测子宫内膜类型及厚度和子宫内膜下的血流参数,同时随访两组的妊娠结局。结果：治疗后两组患者子宫内膜厚度及类型比较差异显著（P〈0.05）。治疗后两组患者子宫内膜下血流参数比较差异有统计学意义（P〈0.05）;观察组妊娠率高于对照组,差异显著（P〈0.01）。结论：血流方能改善复苏移植周期中子宫内膜的生长,改善子宫内膜类型及子宫内膜下血流情况,有利于胚胎着床,提高临床妊娠率。     

Expression of Nuclear Factor-κB in Mouse Uterus during Peri-implantation

To investigate the expression of the subunit p65 of NF-κB and inhibitor kappa B alpha (lκBα) in mouse uterus during peri-implantation, thereby investigating whether transient activation of nuclear factor-κB (NF κB) takes place during embryo implantation in mice. Immunohistochemical technique was used to examine the expression and localization of p65 in endometrium or deciduas, and Western blot analysis was employed to detect the levels of lκBα protein in mouse endometrium or deciduas. P65 protein was detected in stromal cells, epithelial cells of endometrium as well as in myometrium. Staining was predominately seen in the cytoplasm of the cells. Staining intensity for p65 was stronger in the epithelial compartment than the stromal compartment and myometrium. Staining intensity increased slightly during pregnancy, and it reached a high level on pregnancy day 5 and day 8. In contrast to p65, the level of IκBα protein was lowest on pregnancy day 5 in all groups. Our results suggested that NF κB may regulate embryo implantation by its transient activation in mice.     

骨桥蛋白(OPN)在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的 检测骨桥蛋白在围植入期小鼠子宫内膜中的表达,明确OPN表达规律.方法 将清洁级性成熟期昆明小鼠44只,雌性24只,雄性20只,雌性小鼠阴道涂片检查为动情前期,在此期注射PMSG和HCG,4只雌鼠不合笼(孕D0,对照组),用颈椎脱臼法处死,剪取子宫组织,直接液氮保存和福尔马林固定保存,其余的雌:雄小鼠1∶1合笼,次日检查阴栓,发现阴栓计为妊娠第1天.分别于妊娠第4、5、6、7和8天用颈椎脱臼法处死,迅速剖腹,剪取子宫组织予以保存(实验组),采用免疫组化方法和Western-blotting技术分析围植入期小鼠子宫内膜中的骨桥蛋白表达规律,采用RT-PCR技术半定量分析围植入期小鼠子宫内膜骨桥蛋白mRNA表达特征.结果 小鼠整个围植入期子宫内膜中均有OPN表达,但表达的高峰在着床窗口期,即孕D5.孕D0(非孕)子宫内膜的OPN表达较弱,孕D4时表达增强,孕D5时表达最强,孕D6时表达突然回落,孕D7、孕D8时表达减弱,降至非孕水平.结论 骨桥蛋白在围植入期小鼠子宫内膜中的表达随着孕龄的增加逐渐增强,但表达的高峰在孕D5,与植入窗的开放相吻合,是子宫内膜接受性的客观标志,提示骨桥蛋白在胚泡着床过程中起重要作用,该研究为阐明胚泡着床机制提供了实验依据.     

健胎液对模型小鼠着床期子宫内膜容受性的影响

目的:研究健胎液对胚泡着床障碍小鼠着床期子宫内膜容受性的影响。方法:于妊娠第4天9∶00利用米非司酮建立胚泡着床障碍小鼠模型,予健胎液进行干预,于妊娠第4天21∶00处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,采用放免法检测血清及子宫组织雌二醇、孕酮的含量,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测子宫ERmRNA、PRmRNA表达。结果:与模型组相比,中药组着床率和平均着床胚胎数均显著升高,与对照组无显著差异;模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;3组血清及子宫组织的雌二醇和孕酮的含量无显著改变;中药组子宫ER mRNA、PR mRNA表达均较模型组显著提高,与正常组比较差异无显著性。结论:健胎液通过促进子宫内膜发育,调节胚泡着床障碍小鼠子宫组织ER、PR基因的表达,改善子宫内膜容受性,利于胚泡着床。