端粒酶反义寡核苷酸促进顺铂诱导原代胃癌细胞凋亡

目的:探讨端粒酶反义寡核苷酸(PS-ASODN)对顺铂诱导原代胃癌细胞凋亡的影响。方法:采用台盼蓝拒染法计算细胞生长抑制率,观察PS-ASODN联合顺铂对原代胃癌细胞生长的影响;流式细胞学观察细胞凋亡率及细胞周期变化。结果:终浓度为3μM的PS-ASODN作用于原代胃癌细胞24 h后加入顺铂(2.0μg/ml),能明显抑制胃癌细胞增殖,同时流式细胞学检测到凋亡峰,细胞受阻于G0/G1期,作用48 h及72 h的凋亡细胞百分率(35.1％,45.7％)明显高于N-ASODN组、PS-ASODN组、DDP组及N-ASODN+DDP组,差异有显著性(P<0.05)。其作用呈时间依赖性及序列特异性。结论:以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸可促进顺铂诱导的胃癌细胞凋亡,对胃癌具有重要治疗价值。     

端粒酶hTR反义寡核苷酸对K562细胞端粒酶活性的影响

目的：探讨端粒酶RNA反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人白血病K562细胞端粒酶活性及细胞生长的影响。方法：应用与人端粒酶RNA组分模板区互补的硫代ASODN处理K562细胞，用端粒酶重复扩增分析（telomere repeat amplification protocol,TRAP)-PCR-ELISA检测法观察端粒酶活性的变化；用Annexin V分析法及流式细胞术检测凋亡细胞。结果：经ASODN作用后，细胞端粒酶活性明显受到抑制，并与ASODN的浓度和处理时间相关。作用5d后，凋亡细胞明显增加。结论：端粒酶RNA模板区ASODN可明显抑制白血病K562细胞端粒酶活性，抑制细胞生长和增殖，诱导细胞凋亡，可能成为白血病基因治疗新靶点。     

生存素反义寡核苷酸诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的　生存素 (survivin)是近年来发现的凋亡抑制蛋白家族新成员 ,在多数恶性肿瘤组织中丰富表达。因此 ,观察生存素反义寡核苷酸转染对肝癌细胞凋亡、增殖、细胞对化疗药物敏感性的影响。方法　设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸 (ASODN)。肝癌细胞株hepG2 分为 6组 :空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、2 0 0、40 0和 6 0 0nmol/LASODN转染组。作用 2 0h后收获各组细胞。倒置显微镜观察细胞形态变化 ,Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况 ,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数 ,MTT法检测 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和顺铂 (DDP)对各组细胞的生长抑制率。结果　各ASODN转染组细胞生存素表达有不同程度减弱 ,细胞变圆、折光增强、漂浮、细胞碎片形成等 ,而各对照组细胞生长良好 ;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组 (P <0 .0 5 ) ,以 6 0 0nmol/L转染组最为明显 (P <0 .0 5 ) ,而各对照组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;各ASODN转染组细胞增殖指数明显低于各对照组 (P <0 .0 5 ) ,以 6 0 0nmol/L转染组最为明显 (P <0 .0 5 ) ,而各对照组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;等浓度化疗药物 5 FU和DDP对各ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组(P <0 .0 5 ) ,以 6 0 0nmol/L     

端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性和诱导细胞凋亡

目的 研究端粒酶逆转录酶（hTERT)基因反义寡核苷酸（ASODN）对肺癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法 实验分为ASODN组、正义寡核苷酸（SODN）组和空白对照组,所用ASODN和SODN的浓度分别为10μmol/L,脂质体为16mg/L,采用端粒重复扩增法、逆转录－聚合酶链反应、Western Blot及流式细胞术分别观察各组端粒酶活性、hTERP mRNA和蛋白质表达以及细胞凋亡。结果 ASODN组显著下调或抑制肺癌细胞端粒酶活性和hTERT表达,但直到第21天才出现细胞凋亡增多。结论 端粒酶活性与hTERT表达密切相关。     

端粒酶催化亚单位基因hTERT反义寡核苷酸与顺铂对Raji细胞协同作用的研究

目的：研究端粒酶催化亚单位基因hTERT反义寡核苷酸可否增强Raji细胞对顺铂（CDDP）的敏感性。方法：hTERT基因的反义寡核苷酸作用Raji细胞24h后,加入CDDP,用台盼蓝拒染的方法计数活细胞、计算对细胞生存的抑制率。结果：单纯hTERT反义寡核苷酸在浓度为10μmol/L时,对Raji细胞生存无明显抑制作用;但反义寡核苷酸加CDDP组对Raji细胞生存的抑制率明显高于随机序列＋CDDP组（P＜0．05）,其抑制作用在反义寡核苷酸作用48h、CDDP作用24h时最为显著（P＜0．01）。结论：hTERT基因的反义寡核苷酸与CDDP具有协同作用,能提高Raji细胞对CDDP的敏感性。     

反义端粒酶寡核苷酸对胰腺癌细胞株生长的体外抑制作用

目的探讨反义端粒酶寡核苷酸片段对胰腺癌细胞株端粒酶活性及细胞株生长的抑制作用.方法人工合成端粒酶反义寡核苷酸片段,电转移法将反义端粒酶序列导入胰腺癌细胞株Aspc-1、Bxpc-3中,RT-PCR-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞活性.结果 Aspc-1、Bxpc-3细胞株的端粒酶活性分别由0.551±0.013、0.540±0.022降低至0.222±0.021、0.224±0.024,两株细胞株的A580值分别由0.420±0.006、0.322±0.013降低至0.169±0.025、0.129±0.026,P＜0.01;细胞生长显著受抑.结论反义端粒酶寡核苷酸片段具有抑制胰腺癌端粒酶活性的作用,并抑制胰腺癌细胞的生长.     

反义寡核苷酸治疗淋巴瘤的研究

随着对淋巴瘤细胞遗传学和分子生物学的深入研究 ,人们对其发病机制有了深入的了解。近年来 ,人们对淋巴瘤的基因治疗产生了浓厚的兴趣 ,并取得了一定进展。反义寡核苷酸 (ＡＯ)是与表达基因互补的 ,短小的 (通常是 13～ 2 0对碱基 )单链ＤＮＡ或ＲＮＡ。ＡＯ被合成后 ,通常需加以修饰 ,以防止其被酶降解。ＡＯ的作用是抑制特定癌基因的表达 ,继而抑制其蛋白产物的产生。众所周知 ,淋巴瘤最常见的染色体重排是ｔ(8;14 ) ,ｔ(14 ;18)等[1] 。ｔ(8;14 )累及癌基因ｃ ｍｙｃ[2 ] ,ｔ(14 ;18)累及癌基因ｂｃｌ 2 [3 ] 。目前研究ＡＯ治疗淋巴瘤…     

脂质体介导的反义寡核苷酸抑制人胃癌细胞端粒酶活性

目的：探讨特异性反义寡脱氧核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳＯＤＮ）对人胃癌细胞端粒酶活性的影响。方法应用脂质体包裹与端粒酶ＲＮＡ模板区互补的ＡＳＯＤＮ,处理人胃癌细胞系ＦＧＣ８５。用端粒重复扩增分析（ｔｅｌｏｍｅｒｅ ｒｅｐｅａｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌ,ＴＲＡＰ）－ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测法观察端粒酶活性的变化,结果经脂质体包裹ＡＳＯ     

重视肾脏病反义寡核苷酸治疗的研究

重视肾脏病反义寡核苷酸治疗的研究陈香美程庆砾反义寡核苷酸是指序列与特定ｍＲＮＡ互补的含有１５～２０个核苷酸的ＤＮＡ合成片段，其主要作用机制是通过与靶序列结合后激活ＲＮａｓｅＨ裂解ｍＲＮＡ、抑制ｍＲＮＡ成熟及向胞浆转运、阻抑翻译而阻断相关蛋白的表达。在...     

反义寡核苷酸技术在肾脏病研究中的应用

反义寡核苷酸技术在肾脏病研究中的应用李美花谌贻璞关键词反义寡核苷酸技术基因调节肾脏病中图法分类号Ｑ３４２３反义寡核苷酸是指反义ＤＮＡ，反义ＲＮＡ和核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）等一类分子量小、可扩散的核苷酸片段和（或）化学修饰产物，它们能与互补的核苷酸...     

反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒研究进展

反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒研究进展钟森，王升启综述张定凤，王玉芝审校乙型病毒性肝炎的抗病毒治疗是清除乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染的一个重要措施。近年来分子生物学和分子病毒学的迅猛发展，使抗ＨＢＶ治疗进入了分子水平的研究阶段。通过多学科的合作，可望在不久...     

反义寡核苷酸转染对SGC-7901胃癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨端粒酶反义寡核脱氧核苷酸（PS－ASODN）对SGC－7901胃癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法：脂质体介导的PS－ASODN作用于SGC－7901细胞后，台盼蓝拒染法计算细胞生长抑制剂，采用半定量TRAP－银染法检测端粒酶活性，用流式细胞仪观察细胞凋亡率及细胞周期变化，采用光镜及电镜观察细胞凋亡形态。结果：终浓度为3、2及1μM的PS－ASODN对SGC－7901细胞均有抑制作用，抑制率与对照组比较，差异有显著性（P＜0．01）；PS－ASODN转染后48h，端粒酶活性明显降低（P＜0．05）。以上抑制作用呈剂量依赖性及序列特异性。流式细胞仪检测到凋亡峰，细胞受阻于G0/G1期；光镜及电镜显示典型的细胞凋亡形态改变。对照寡核苷元上述作用。结论：以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷不但明显抑制胃癌细胞的增殖，降低端粒酶活性，而且具有促凋亡作用，对胃癌具有重要治疗价值。     

自身稳定性反义寡核苷酸抗核酸酶降解作用的研究

反义寡核苷酸（ａｓＯＮ）抗肿瘤,抗病毒基因调控、复制与表达的研究国内外已有报道［１－３］。研究表明ａｓＯＮ能有效地抑制培养细胞中乙型肝炎病毒基因表达［４－５］,是值得研究的新型抗病毒药,但其应用于体内的主要障碍之一是易被血清中各种核酸酶降解。我们在设...     

以Survivin为靶点的反义寡核苷酸在肝癌研究中的应用进展

Survivin是目前恶性肿瘤基因治疗研究中的新靶点.采用反义寡核苷酸等治疗方法可以抑制Survivin的表达,从而诱导肿瘤细胞的凋亡、抑制细胞增殖并增强对化疗药物的敏感性.近年来,已有学者将其用于肝癌的研究,为肝癌的治疗提供了新的方向.     

端粒酶反义DNA影响肺癌细胞体外生长的初步研究

目的：研究端粒酶反义核苷酸对肺癌细胞体外生长的影响,探讨针对端粒酶进行肺癌基因治疗的可行性。方法：人工合成硫化修饰六核苷酸端粒酶反义DNA[5-d(TTAGGG)-3‘],在体外与端粒酶阳性肺癌细胞系801－D共同培养,观察其对肺癌细胞端粒酶活性,细胞形态和生长特性的影响,结果：端粒酶反义DNA对端粒酶阳性肺癌细胞系801－D生长,集落形成有明显的抑制作用,细胞形态发生明显改变,且端粒酶反义DNA的抑制作用与其浓度呈正比,结论：端粒酶反义DNA序列对肺癌细胞系801－D体外生长有明显的抑制作用。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞影响的研究

细胞凋亡(Apoptosis)是由基因控制的细胞主动死亡方式.应用药物选择性诱导肿瘤细胞凋亡能改善肿瘤的预后[1].染色体端粒(Telomere)是位于细胞染色体末端的一种特殊结构,在人体细胞中,端粒由串联的短片段重复序列(TTAGGG)n及一些结合蛋白组成,在染色体的定位、复制、保护和控制细胞生长寿命等方面起重要作用,并与细胞凋亡密切相关[2].端粒酶 (Telomerase)是一种核糖核蛋白,它通过不断合成端粒重复序列添加至染色体末端,维持染色体稳定.Bcl-2(B-cell lymphoma/leukemia-2)基因是一种癌基因,可抑制多种因素引起的细胞凋亡,Bcl-2蛋白高表达是端粒酶激活的途径之一[3].我们旨在探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(ASDDN-t)诱导肝癌细胞凋亡[4],抑制端粒酶活性,从而抑制肝癌细胞的生长,为肝癌基因治疗提供依据.     

反义寡核苷酸对培养内皮细胞c—sis表达的抑制作用

用合成的与人ｃ ｓｉｓ ｍＲＮＡ起始码有其后五个密码子互补的硫代型寡聚核苷酸处理培养的人脐带静脉内皮细胞，观察其对细胞ｃ－ｓｉｓ基因表达的抑制作用。实验结果，ｃ－ｓｉｓ反义寡核苷酸可抑制内皮细胞ｃ－ｓｉｓ ｍＲＮＡ量（Ｐ〈０．０１）和其表达产物血反衍化生长因子量，以７２小时作用最强。而用正义寡核苷酸片段及空白做对照。未出现上述结果。实验提示，ｃ－ｓｉｓ反义寡核苷酸可特异地抑制人内皮细胞ｃ－ｓｉｓ基     

反义寡核苷酸抑制β-catenin表达及细胞生长的研究

反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)可以选择性和特异性地阻断目的基因的表达,是基因治疗的重要组成部分。随着ASODN硫代磷酸化修饰技术的出现,ASODN在透膜性和抗核酸酶降解方面都有很大提高,一些ASODN药物已进入了临床试验。ASODN技术目前主要应用于抗病毒和抗肿瘤的研究。     

反义寡核苷酸生物分布及药代动力学研究

目的 研究反义寡核苷酸在小鼠体内的生物分布及药代动力学。方法 用γ-32 p-ATP标记15聚硫代磷酸反义寡核苷酸(S-asON),36只小鼠分12组,以30mg/kg体重剂量经尾静脉一次性给小鼠注射,每24小时收集尿液和粪便;分别在5min、15min、30min及1h、2h、3h、4.5h、12h、24h、48h和72h放血杀死3只小鼠,取各器官组织匀浆,用液体闪烁计数测定cpm值。结果 S-asON广泛分布于全身各器官,肝、肾聚积浓度较高,血浆消除曲线可用药代动力学二室模型描述,其t_(a1/2)为0.12 h,t_(β1/2)为46.2h,曲线下面积(AUC)为1776.4μg/ml×h。最大浓度(C_(max))为129.7μg/ml,表观分布容积(Vd)为4.6ml,血浆清除率(CL)为0.07 ml/h,尿液为主要排出途径,24 h排出28.2％,72h排出43.9％,粪便排出量少。结论 反义寡核苷酸分布于全身各器官,药代动力学符合二室模型,尿液为其主要排出途径。     

反义端粒酶逆转录酶对肺癌细胞的抑制作用

端粒酶活化与肿瘤发生发展密切相关 ,86 .8%肺癌患者的癌组织端粒酶活性为阳性[1 ] 。其逆转录酶组分 (ｈｕｍａｎｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ,ｈＴＥＲＴ)是其主要活性组分 ,该组分表达与肺癌端粒酶活性密切相关[2 ] 。本实验采用逆转录病毒载体介导反义ｈＴＥＲＴ作用于端粒酶阳性肺癌细胞系Ａ549,以期通过抑制ｈＴＥＲＴ表达而抑制端粒酶活性 ,探讨其对肺癌细胞端粒酶活性和细胞生长增殖的影响 ,寻找可能的肺癌基因治疗方法。材料与方法　肺癌细胞系Ａ549和包装用鼠成纤维细胞系ＰＴ67为北京大学第一…