不同热缺血时间对大鼠移植肝功能状态及存活期的影响

目的：探讨不同热缺血时间条件下，大鼠原位肝移植术后肝脏功能和组织形态变化规律，并对动物远期存活情况进行观察，预测无心跳供体（NHBD）中供肝耐受热缺血的安全时限。方法：实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45、60min，随机分为7组。然后按各组条件分别作原位肝移植，观察肝移植后24、48h、3和5d各组肝脏功能和组织形态的恢复性变化，并统计生存时间。结果：供肝经受30min以内热缺血损伤，各组移植术后生存天数差异无显著性，热缺血30min组，肝移植术后1周的存活率达到83.3％（10/12），1个月和3个月存活率分别为58.3％（7/12）和50.0％（6/12）。热缺血45min组，术后1周的存活率为66.7％（8/12），但1个月和3个月存活率分别为33.3％（4/12）和8.3％（1/12）。至于热缺血60min组，1周的存活率仅为8.3％（1/12）。结论：大鼠的供肝可以安全地耐受30min以内的热缺血。45min的热缺血损伤，虽对术后1周存活率无明显影响，但大鼠肝移植术后的远期存活时间明显缩短。60min以后，移植肝组织的结构和功能均难以恢复，大鼠术后生存天数显著降低。     

供肝热缺血损伤对大鼠肝移植术后胆汁淤积的影响

目的探讨肝移植中供肝热缺血损伤对肝移植术后胆汁淤积的影响。方法实验分为4组：对照组（C）和移植组,移植组根据供肝获取前经历供体心脏停搏时间的不同分为三组：热缺血0min（W0）、热缺血15rain（W15）和热缺血30min（W30）,其后建立大鼠动脉化原位肝移植模型,每组均为30只大鼠,分别于术后3d、7d、14d和30d处死,每个时间点各取6只大鼠,分别测定移植肝组织学、血清ALP和ALT变化。此外,移植组各组随机选取6只大鼠观察长期生存率（〉100d）。结果随着供肝热缺血时间的延长,术后血清ALP逐渐增高,14天达到高峰后逐渐下降。术后第3d、7d、14d、30d血清ALP与供肝热缺血时间具有显著相关性。随着供肝热缺血时间的延长,移植肝损伤加重,并且恢复过程也延长。移植组和对照组术后血清ALT无显著性改变。W0、W15和W30术后长期生存率无明显差别。结论肝移植术后存在胆汁淤积,供肝热缺血时间的延长明显加重胆汁淤积的程度。但是,供肝热缺血30min以内造成的大鼠肝移植术后胆汁淤积并不影响预后。     

供体热缺血时间对移植肝的影响

目的 探讨大鼠动脉化原位肝移植中供体热缺血时间对移植肝的影响.方法 实验分为4组:对照组(C)和移植组,移植组根据供肝获取前经历供体心脏停搏时间的不同分为三组:热缺血0 min(W0)、热缺血15 min(W15)和热缺血30 min(W30),其后建立近交系大鼠动脉化原位肝移植模型,每组均为30只大鼠,分别于术后3、7、14和30 d处死,每个时间点各取6只大鼠,分别测定移植肝组织学、肝功能的变化.此外,移植组各组随机选取6只大鼠观察长期生存率(＞100 d).结果 随着供肝热缺血时间的延长,移植肝损伤加重,恢复过程延长.移植组和对照组术后3、7、14和30 d血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化无显著性差异.血清碱性磷酸酶(ALP)随着供肝热缺血时间的延长逐渐增高,14 d达到高峰后逐渐下降.术后3、7、14和30 d ALP与供肝热缺血时间具有显著相关性.术后热缺血0、15、30 min长期生存率组分别为100.0%(6/6)、83.3%(5/6)、66.7%(4/6),3组间比较差异无统计学意义(P=0.285).结论 肝移植过程中供肝热缺血主要损伤肝细胞,并随着供肝热缺血时间的延长移植肝细胞损伤加重,肝细胞功能恢复早于其形态学恢复.肝移植术后早期存在胆汁淤积,供肝热缺血时间的延长明显加重胆汁淤积的程度,胆汁淤积的恢复明显晚于肝细胞损伤指标的恢复.在热缺血30 min内来自于心脏停搏的供肝肝移植术后是安全的.     

供肝热缺血后对冷保存的耐受时限初步探讨

目的探讨供肝热缺血后耐受冷保存的安全时限。方法利用本组所建立的小型猪肝移植模型，设定供肝热缺血时间为20min，根据在UW液中的冷保存时间不同分为3组，分别冷保存12、16、20h，于肝移植术中及术后检测肝功能、肝脏病理、肝组织ATP含量、移植肝脏再灌注后微循环血流量及动物术后1周存活率。结果uw液冷保存12h组肝移植后小型猪1周内全部存活，而冷保存16、20h组存活率分别为20％、0％；随着冷保存时间的从12h延长到20h，ALT、AST逐渐上升，肝脏ATP含量、肝脏微循环血流量逐渐下降，形态学结果显示肝组织细胞变性、坏死及超微结构损害的程度逐渐加重。冷保存12h组与后两组上述指标存在显著性差异，生化及肝脏微循环指标的改变与病理结果及动物生存率相符合。结论在本实验条件下，热缺血时间为20min的供肝耐受冷保存的安全时限约为12h。     

供肝热缺血后对冷保存的耐受时限初步探讨

目的探讨供肝热缺血后耐受冷保存的安全时限。方法利用本组所建立的小型猪肝移植模型,设定供肝热缺血时间为20min,根据在UW液中的冷保存时间不同分为3组,分别冷保存12、16、20h,于肝移植术中及术后检测肝功能、肝脏病理、肝组织ATP含量、移植肝脏再灌注后微循环血流量及动物术后1周存活率。结果UW液冷保存12h组肝移植后小型猪1周内全部存活,而冷保存16、20h组存活率分别为20%、0%;随着冷保存时间的从12h延长到20h,ALT、AST逐渐上升,肝脏ATP含量、肝脏微循环血流量逐渐下降,形态学结果显示肝组织细胞变性、坏死及超微结构损害的程度逐渐加重。冷保存12h组与后两组上述指标存在显著性差异,生化及肝脏微循环指标的改变与病理结果及动物生存率相符合。结论在本实验条件下,热缺血时间为20min的供肝耐受冷保存的安全时限约为12h。     

移植肝热缺血损伤后糖原及酶组织化学活性的动态变化

目的：探讨不同热缺血时间下大鼠移植肝组织糖原及酶组织化学活性变化规律，预测供肝耐受热缺血性的安全时限。方法：用组织化学和细胞化学的方法，对大鼠移植肝组织进行动态观察，按热缺血时间随机分为0、15、30、45、60min5组，观察肝移植后的恢复性变化。结果：随热缺血时间的延长，肝组织琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素氧化酶（CO）和三磷酸腺苷酸（Mg^2 ,ATPase)活性逐渐降低，糖原减少，热缺血30min以前各组酶活性变化轻微，而45、60min组均出现明显的酶活性降低和高碘酸－无色品红（PAS）反应减低，15、30min组，在复流后24h糖原颗粒逐渐增多，呈明显的恢复，酶活性逐渐恢复至接近正常水平，45、60min组，复流后24hPAS反应和酶活性仍无明显恢复趋势，结论：移植肝热缺血在30min以内，肝组织损伤仍处在可复性阶段，复流后能逐渐恢复至正常的形态和功能，移植肝糖原含量，酶组织化学活性的变化以及术后其恢复性的潜能可作为衡量供肝质量的重要标准。     

移植肝热缺血损伤后糖原及酶组织化学性的动态变化

目的探讨不同热缺血时间下大鼠移植肝组织糖原及酶组织化学活性变化规律,预测供肝耐受热缺血的安全时限.方法用组织化学和细胞化学的方法,对大鼠移植肝组织进行动态观察.按热缺血时间随机分为0、15、30、45、60min 5组,观察肝移植后的恢复性变化.结果随热缺血时间的延长,肝组织琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素氧化酶(CO)和三磷酸腺苷酶(Mg2+-AT Pase)活性逐渐降低,糖原减少.热缺血30min以前各组酶活性变化轻微,而45、60min组均出现明显的酶活性降低和高碘酸-无色品红(PAS)反应减低.15、30min组,在复流后24h糖原颗粒逐渐增多,呈明显的恢复,酶活性逐渐恢复至接近正常水平.45、60min组,复流后24h PAS反应和酶活性仍无明显恢复趋势.结论移植肝热缺血在30?min以内,肝组织损伤仍处在可复性阶段,复流后能逐渐恢复至正常的形态和功能.移植肝糖原含量、酶组织化学活性的变化以及术后其恢复性的潜能可作为衡量供肝质量的重要标准.     

门静脉转流下大鼠门静脉缺血对肝脏能量代谢的影响

目的探讨在门静脉转流下大鼠门静脉缺血后肝脏能量代谢变化。方法在门静脉转流下阻断门静脉不同时间后,观察大鼠存活率、肝细胞线粒体呼吸活性、肝组织ATP含量及动脉血酮比值。结果在门静脉缺血60、90及120min后7d大鼠存活率分别为100%、100%及40%;缺血后肝脏能量代谢功能明显受损,再灌注后24h,门静脉缺血60、90min两组大鼠肝脏能量代谢功能已有明显恢复,而门静脉缺血120min组仍维持在低水平。结论在门静脉转流下大鼠门静脉缺血90min以内肝脏能量代谢损害可逆,而门静脉缺血120min则不可逆。     

大鼠无心跳供体热缺血损伤后供肝组织学与超微结构的动态变化

目的动态观察移植肝热缺血损伤后组织学与超微结构的变化特点，预测无心跳供体（NHBD）中供肝耐受热缺血的安全时限。方法实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45、60min，随机分为7组。按各组条件分别作原位肝移植，动态观察单纯热缺血期和肝移植术后6h、24h、48h各组移植肝组织学、组织化学和超微结构变化规律。结果NHBD的供肝不仅发生热缺血阶段缺血缺氧造成的损伤，在移植肝复流后，也存在再灌注损伤，且再灌注期肝组织损伤的程度与热缺血时间长短有密切关系。热缺血30min以前，移植肝仅出现组织细胞的变性，未见明显坏死。45min组，肝组织可见小灶状的坏死，在小叶中央区首先发生。60min组，肝细胞坏死的范围扩大，呈片状或弥漫性分布；肝窦内皮细胞明显肿胀呈泡状或气球状，肝血窦阻塞，呈微循环障碍。结论大鼠供肝经受30min以内热缺血损伤，肝组织损伤处在可复性阶段。热缺血60min以后，呈现不可逆性的形态学改变。     

供肝缺血预处理对大鼠肝移植缺血再灌注损伤的保护性作用

目的：探讨供肝热缺血预处理对大鼠供肝冷缺血再灌注（I/R）损伤中的保护作用及其机制。方法：采用SD大鼠建立原位肝移植动物模型，供肝冷缺血期为120 min，受体无肝期16～20min。随机分为3组：假手术组，获取供肝前仅作肝脏周围韧带的解剖;肝移植组，获取供肝前不作肝门阻断;缺血预处理（IPC）组，获取供肝前阻断肝门5min，再灌注5min。术后2，4，24，72h检测血清ALT、抗氧化酶活力、血清NO水平及细胞因子TNF-α。结果：肝移植组及IPC组术后ALT及过氧化物含量均明显高于假手术组，而IPC组低于肝移植组(P﹤0.05)，其抗氧化酶活力较移植组明显升高（P﹤0.05）; NO水平在IPC术后2，4，24，72h均显著高于假手术组，72h时肝移植组明显高于IPC组及假手术组(P﹤0.05)，而IPC组高于假手术组;肝移植组血清中TNF-α释放明显高于假手术组(P﹤0.05);IPC组TNF-α的释放显著低于肝移植组(P﹤0.05)。结论：供肝热缺血预处理对大鼠供肝冷缺血I/R损伤具有明显保护作用;其机制可能是IPC快速提高并稳定了血清中NO水平，降低了炎性细胞因子TNF-a的产生，从而减少移植肝细胞的损害。     

Synergistic effect of cold and warm ischemia time on postoperative graft function and outcome in human liver transplantation

Prolonged cold ischemia time (CIT) during graft preservation and warm ischemia time (WIT) during rewarming time have been reported to cause postoperative graft dysfunction after orthotopic liver transplantation (OLT). However, the effects of both CIT and WIT in combination on patient and graft survivals are not yet defined. The aim of this study was to determine whether simultaneously prolonged CIT and WIT were associated with early graft outcomes after clinical OLT. For analysis of liver graft survival within 90 days of OLT and postoperative graft function, 186 consecutive OLT cases were divided into four groups as follows: group A, CIT < 12 hours and WIT < 45 minutes; group B, CIT > 12 hours and WIT < 45 minutes; group C, CIT < 12 hours and WIT > 45 minutes; and group D, CIT > 12 hours and WIT > 45 minutes. The graft loss rates were 5.4% in group A, 9.8% in group B, 11.1% in group C, and 42.9% in group D. The mean highest aspartate aminotransferase (AST) value after OLT in group D (3352.3 +/- 569.4 U/L) was significantly greater than those in groups A (1411.7 +/- 169.2 U/L) and B (1931.3 +/- 362.6 U/L). The simultaneously prolonged cold and warm ischemia times significantly caused hepatic allograft injury and failure, suggesting some cumulative effects of CIT and WIT on postoperative graft function.     

Analysis of clinical variables of donors and recipients with respect to short-term graft outcome in human liver transplantation

Donor and recipient factors are closely associated with graft survival after orthotopic liver transplantation (OLT). This study was performed to analyze clinical characteristics of recipients and donors, which affect 30-day graft loss after OLT. MATERIALS AND METHODS: One hundred eighty-six livers from heart-beating donors were accepted between May 1997 and June 1998 at the University of Pittsburgh Medical Center. Donor variables that were analyzed included age, sex, cold ischemia time (CIT), warm ischemia time (WIT), imported versus local procurement, cardiopulmonary arrest, serum sodium level, and dopamine dose. The recipient characteristics included native liver disease and UNOS status. Two-sided Fisher exact test and stepwise logistic regression were used for univariate and multivariate analyses. P-values < .05 were considered statistically significant. RESULTS: Twenty-eight grafts (15.1%) were lost within 30 days of OLT. The following factors were found to adversely affect graft survival: donor sodium > 155 mEq/L (P = .002); CIT > 12 hours (P = .002); WIT > 45 minutes (P = .002); and imported liver graft (P = .048). Logistic regression revealed that donor sodium (odds ratio, 3.03; 95% CI, 1.05 to 8.74), CIT (OR 1.20; 95% CI 1.05 to 1.38), WIT (OR 1.06; 95% CI 1.01 to 1.09) were independent predictors of early graft loss. CONCLUSION: Donor hypernatremia as well as warm and cold ischemia times independently affect graft outcomes in the early postoperative period after OLT. Avoidance of long preservation and correction of donor sodium level are recommended to optimize results and survival in OLT.     

无心跳供体中供肝微循环的动态变化

目的 探讨不同热缺血时间下大鼠无心跳供体肝组织微循环的变化规律，预测供肝耐受热缺血的安全时限。方法 实验动物按供肝热缺血时间分别为0、15、30、45、60min，随机分为5组。然后按各组条件分别作原位肝移植．对肝移植术后各组血清透明质酸(HA)的水平进行动态检测，以及观察肝组织微循环超微结构的动态变化。结果 在热缺血30min以内，移植肝组织复流后能逐渐恢复至正常的微循环结构和功能。热缺血45min，复流后大部分肝血窦腔可逐渐恢复通畅。但部分血窦仍充满较多的膜浆泡和血细胞积滞；热缺血45min以前各组术后3d血清HA可基本恢复。热缺血60min，复流后内皮细胞损伤不但不能恢复，且出现加重、扩大趋势。结论 供肝经受30min以内热缺血损伤，肝组织微循环的变化处在可复性阶段。45min的热缺血时间可能县供肝微循环功能耐受热缺血损伤的极限．热缺血60min以后．呈现不可逆性的微循环障碍．     

Continuous Resuscitation for Porcine Liver Transplantation From Donor After Cardiac Death

BackgroundTo solve the serious donor shortage, the demand is increasing for developing a new method to use the marginal donors, including donors after cardiac death (DCD). Continuous machine perfusion from ex vivo to in situ is a novel technique to overcome warm ischemia during organ grafting as an ischemia-free transplantation. Herein, we tested orthotopic and heterotopic ischemia-free liver transplantation in pigs and evaluated the perfusion characteristics of DCD grafts from ex vivo preservation to implantation.Materials and MethodsThe demonstration of ischemia-free transplantation was conducted using both orthotopic and heterotopic transplantation models. Warm ischemia time (WIT) was set at 60 minutes or 120 minutes in the DCD models. Recipients were humanely killed 3 days after transplant. Flow rates of portal vein and hepatic artery were set to 0.06 to 0.15 mL/min/g and 0.04 to 0.06 mL/min/g for the liver weight ratio, respectively.ResultsUnder the stable perfusion rate by machine perfusion, the average hepatic artery pressure of the liver graft after a WIT of 120 minutes was approximately 80 mm Hg higher than after WIT of 60 minutes. The recipient with liver graft of WIT of 60 minutes could not survive overnight. In heterotopic model, the recipient with 1 hour DCD liver survived until humanely killed.ConclusionsThe results of pressure monitoring in our DCD liver graft model indicate that pressures are influenced not only by thrombus formation but also by postmortem rigidity at 2 hours after cardiac death.     

不同热缺血时间的无心跳供肝在肝移植中应用的疗效评价

目的:探讨不同热缺血时间的无心跳供肝在临床肝移植中应用的疗效。方法:回顾性分析142例冷保存时间在12h之内的不同热缺血时间的无心跳供肝肝移植患者的临床资料, 根据热缺血时间分为3组：Ⅰ组为5 min之内, 43例; Ⅱ组为5～10 min, 77例; Ⅲ组为10～15 min, 22例。比较3组间肝移植术后谷丙转氨酶（ALT）峰值、原发性移植肝无功能、急性排斥反应、胆道并发症、血管并发症、感染以及移植肝存活和受体存活的差异。结果:3组患者术后均未发生原发性移植肝无功能。Ⅱ组术后ALT峰值及感染发生率显著高于Ⅰ组; 而Ⅲ组术后ALT峰值、胆道并发症发生率、血管并发症发生率及感染发生率均显著升高。随访 8~32个月。Ⅲ组移植肝存活率及受体存活率均降低, 与Ⅰ组和Ⅱ组比较, 差异均有统计学意义。结论:冷保存时间在12 h之内的无心跳供肝能耐受热缺血的安全时限为10 min; 热缺血时间大于10 min的供肝, 移植术后相关并发症发生率显著增加, 移植肝和受体存活率显著降低。     

不同热缺血时间犬自体胰移植物功能状态及存活率的实验研究

目的探讨热缺血时间较长犬胰腺移植物功能和组织形态变化状态,研究不同热缺血时间条件下移植物存活率及供胰耐受热缺血的时限。方法根据供胰热缺血不同时间30、60、90、120 min分组,用UW液保存24 h,然后行自体移植,术后连续观察血糖、静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT)、胰液淀粉酶、胰液分泌量、血液中胰岛素含量,并进行病理学检测。结果30 min组和60 min组在术后2~3 d即可恢复至正常范围,而在90 min组和120 min组术后1周血糖不能恢复至正常。IVGTT K值在未热缺血组3、0 min组和60 min组在术后1周>1,而在90 min组和120 min组<1。30 min组和60 min组术后胰液淀粉酶、胰液分泌量、血液中胰岛素含量明显高于90 min组和120 min组(P<0.05)。热缺血30、60、90、120 min各组移植物存活率分别为100%、100%、66.7%、0%。结论移植胰腺经过30~60 min热缺血,UW液保存24 h后移植物生存良好。热缺血时间超过90 min,移植物结构和功能难以恢复,存活率明显降低。     

Deleterious influence of prolonged warm ischemia in living donor kidney transplantation

Background

Recent studies investigating early graft function (EGF) after living donor kidney transplantation (LDKT) identified prolonged warm ischemia time (WIT) as a risk factor for the occurrence of poor EGF. The latter is associated with long-term graft loss; therefore the question arises whether prolonged WIT affects long-term outcomes in LDKT.

Methods

Data were collected on 472 consecutive adult LDKTs. Patients were divided according to the total WIT into 3 groups with short (<30 minutes), intermediate (30-45 minutes), or prolonged (>45 minutes) WIT.

Results

Of all patients, 193 (40.9%) experienced short, 249 (52.8%) intermediate, and 30 (6.4%) prolonged WIT. Prolonged WIT was a significant risk factor for the occurrence of poor EGF with an adjusted odds ratio of 4.252 (95% confidence interval [CI), 1.914 −9.447). Long-term graft survival was impaired in patients with prolonged WIT, with an adjusted hazard ratio of 3.163 (95% CI, 1.202-8.321). Multivariate analysis revealed determinants of prolonged WIT, including laparoscopic procurement, recipient overweight, right donor kidney, and multiple renal arteries.

Conclusion

Prolonged WIT impairs long-term graft survival in LDKT. This finding underlines the need to develop strategies to avoid the occurrence of prolonged WIT in LDKT.