二甲双胍对AGS胃癌细胞生长侵袭的抑制作用

目的:研究应用安全性较好的二甲双胍对胃癌细胞的抑制作用,初步探讨可能机制.方法:以二甲双胍联合或不联合5-氟尿嘧啶干预AGS细胞作为实验组,无药物组作对照.干预24、48、72 h应用MTT检测细胞增殖,干预48 h流式细胞术检测凋亡、线粒体膜电位,72 h通过细胞划痕实验反映迁移能力改变.药物作用24 h抽提细胞RNA以RT-PCR检测相关基因转录改变.结果:AGS细胞相对活力明显降低(24、48、72h:F=99.32,127.30,235.72,均P<0.01),并具有浓度-时间依赖性,联合应用5-氟尿嘧啶显示协同作用(24h:t=2.97,P<0.05;48、72h:t=4.61,6.02,均P<0.01).线粒体膜电位下降(t=12.43,P<0.01),凋亡增加(t=8.32,P<0.01),平均迁移速率明显减慢(12、24、48 h:t=9.13,13.77,14.21,均P<0.01),cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 mRNA均减少,Bax增加.结论:二甲双胍能够抑制AGS胃癌细胞增殖、迁移,促进凋亡,与5-氟尿嘧啶联合应用具有协同抑制作用.     

二甲双胍对人胃癌细胞株MKN45增殖和迁徙的影响

背景:近年发现二甲双胍具有潜在抑制肿瘤的作用,但其在消化系肿瘤尤其是胃癌中的研究较少。目的:研究二甲双胍对人胃癌细胞株MKN45增殖和迁徙的影响,并初步探讨其可能机制。方法:体外培养人胃癌细胞株MKN45.予10mmol/L二甲双胍进行干预(联合或不联合5-氟尿嘧啶),以MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位,细胞划痕实验检测迁徙速率,RT-PCR检测AMPKα1、cyclin D1、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9mRNA表达。结果:与对照组相比,二甲双胍作用后,MKN45细胞存活率显著降低,并呈浓度-时间依赖性,细胞凋亡率显著增加,线粒体膜电位显著下降,平均迁徙速率显著降低,cyclin D1、MMP-2、MMP-9mRNA表达均显著减少,Bcl-2、BaxmRNA表达显著增加但两者之比降低,AMPKα1 mRNA表达无明显差异。二甲双胍与5-氟尿嘧啶联用对MKN45细胞的存活率无明显协同作用。结论:二甲双胍能抑制人胃癌细胞株MKN45增殖、迁徙,可通过改变线粒体膜通透性促进细胞凋亡。     

二甲双胍通过基质金属蛋白酶抑制血管内皮损伤后的内膜增生

目的 观察二甲双胍对血管内皮损伤后内膜增生的影响,并探讨其可能机制。方法 选用300～350 g的健康雄性SD大鼠45只,随机分为对照组、颈动脉球囊损伤组、颈动脉球囊损伤＋二甲双胍组,3周后HE染色观察内膜增生情况,real-time PCR、Western blot和免疫组织化学染色检测颈动脉组织中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达情况。结果 球囊损伤后,颈动脉出现明显的内膜增生,颈动脉组织中MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达显著上调（P<0.01）;二甲双胍削弱血管内皮损伤所致MMP-2和MMP-9的表达上调（P<0.05）,并抑制血管内皮损伤后的内膜增生（P<0.01）。结论 二甲双胍可能通过抑制MMP-2和MMP-9的表达防止血管损伤后内膜增生。     

二甲双胍对高糖介导的成骨细胞MG63增殖及相关基因表达的影响

二甲双胍干预高糖环境下成骨细胞MG63,应用CCK-8检测细胞增殖,SFBC速率法检测细胞内碱性磷酸酶活性,RT-PCR法检测细胞相关基因的表达.干预后二甲双胍可促进高糖环境中成骨细胞MG63增殖(P＜0.01);增加碱性磷酸酶活性(P＜0.05);上调Ⅰ型胶原和骨钙素的表达,同时抑制基质金属蛋白酶(MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-8)的表达(P＜0.05).结果提示二甲双胍可能通过促进成骨细胞增殖、分化和矿化,抑制成骨细胞外胶原基质的降解,发挥对成骨细胞的保护作用.     

二甲双胍抑制人胰腺癌细胞株Patu8988的增殖

二甲双胍孵育胰腺癌细胞株Patu8988 72 h后应用CCK-8(Cell counting Kit-8)检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测相关基因表达.干预后细胞增殖呈浓度依赖性抑制(r=0.994.,P＜0.05),细胞周期G0/G1期所占比例显著增加,G2/M期显著减少(均P＜0.05),相关基因MMP-3、CyclinD1、p53表达下调,Bax表达上调.结果表明二甲双胍抑制Patu8988细胞增殖,主要机制可能与阻滞细胞周期、影响相关基因表达有关.     

二甲双胍对胰腺癌细胞转移相关基因S100A4和MMP-9 mRNA表达的影响

目的研究二甲双胍对人胰腺癌细胞系BxPC-3、AsPC-1的侵袭和转移相关基因S100A4和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9 mRNA表达的影响.方法体外培养胰腺癌BxPC-3、AsPC-1细胞,用不同浓度二甲双胍与细胞培养液孵育后,利用四甲基偶氮唑盐法测定细胞活性,计算IC_(50)值后,应用IC_(50)浓度二甲双胍作用于胰腺癌细胞48 h,应用RT-PCR测定S100A4和MMP-9 mRNA表达的变化.结果二甲双胍对2种细胞生长呈时间和剂量依赖性抑制;二甲双胍处理后2种细胞在24、48、72 h的IC_(50)值:BxPC-3细胞分别为12.13、10.43、9.55 mmol/L;AsPC-1的细胞分别为23.45、15.44、11.30 mmol/L.IC_(50)浓度的二甲双胍作用48 h,BxPC-3、AsPC-1细胞S100A4和MMP-9 mRNA均较对照组明显下降(P0.01).结论二甲双胍可抑制胰腺癌细胞生长呈时间和剂量依赖性,二甲双胍可能通过抑制转移相关基因S100A4和MMP-9的表达来抑制胰腺癌的侵袭和转移.     

二甲双胍对老龄大鼠脑缺血再灌注损伤脑水肿的影响

目的 探讨二甲双胍对老龄大鼠脑缺血再灌注损伤(CIR)脑水肿的影响及机制。方法 选择健康老龄SD大鼠随机分为假手术组(n=20)、缺血/再灌注(I/R)组(n=20)、二甲双胍组(n=20),后两组通过线栓法建立CIR模型,二甲双胍组给予二甲双胍(50 mg/kg)腹腔注射,I/R组给予等量的0.9%生理盐水腹腔注射,连续7 d, 7 d后检测脑血流量、脑组织含水量及神经功能缺损情况,苏木素-伊红(HE)观察脑组织病理变化,检测脑组织一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)变化。RT-PCR、Western印迹检测脑组织基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、水通道蛋白(AQP)9表达。结果 与假手术组相比,I/R组脑组织含水百分数、NO、MDA含量、神经功能缺损评分、脑组织MMP-2、MMP-9、AQP9表达均显著升高(P<0.05),脑血流量及脑组织SOD、CAT、GSH-Px活性显著降低(P<0.05);与I/R组相比,二甲双胍组脑组织含水百分数、NO、MDA含量、神经功能缺损评分、脑组织...     

二甲双胍靶向Notch信号通路抑制胰腺癌干细胞自我更新

目的探讨二甲双胍对胰腺癌干细胞自我更新及其Notch信号通路活性的影响。方法通过细胞球培养法获取Panc1胰腺癌干细胞。通过CCK-8检测二甲双胍对Panc1普通胰腺癌细胞和胰腺癌干细胞的半数抑制浓度(IC 50)。通过CCK-8检测二甲双胍对Panc1胰腺癌干细胞自我更新能力的抑制;通过实时定量PCR检测二甲双胍对Panc1胰腺癌干细胞中Notch4、DLL1、DLL3、Jagged1和HES1 mRNA水平的影响。结果Panc1普通胰腺癌细胞悬浮培养于干细胞培养基后,全部细胞聚集成球状、团块状;5 d后悬浮培养得到的Panc1胰腺癌干细胞与Panc1普通胰腺癌细胞相比体积小,呈梭形或圆形。二甲双胍对Panc1普通胰腺癌细胞的IC 50为27.97 mmol/L,对Panc1胰腺癌干细胞的IC 50为16.10 mmol/L。在加入20 mmol/L二甲双胍后,体外培养的Panc1胰腺癌干细胞增殖能力明显受到抑制(P<0.01),细胞中Notch4、DLL1、DLL3、Jagged1、HES1 mRNA水平明显下调(P<0.01)。结论二甲双胍对Panc1胰腺癌干细胞的IC 50低于对Panc1普通胰腺癌细胞的IC 50,提示Panc1胰腺癌干细胞对二甲双胍更为敏感;二甲双胍可抑制Panc1胰腺癌干细胞自我更新,并可显著抑制其Notch信号通路活性,提示抑制该通路活性可能是二甲双胍抑制胰腺癌干细胞自我更新的机制之一。     

二甲双胍联合顺铂对人肺癌裸鼠移植瘤治疗作用的研究

目的 研究二甲双胍联合常用的化疗药物顺铂对于人肺癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用及对生存素(Survivin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和Ki67分子表达的影响,致力于探索治疗肺癌的新的有效药物.方法 建立肺癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为二甲双胍组、顺铂组、二甲双胍联合顺铂组及对照组,给药42 d后,处死动物,留取肿瘤组织,免疫组织化学法及实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中Survivin、MMP-2和Ki67蛋白及mRNA的表达.结果 二甲双胍组、顺铂组和二甲双胍联合顺铂组抑瘤率分别为28.97％、35.34％和54.65％.与对照组比较,顺铂组及二甲双胍联合顺铂组Survivin、MMP-2和Ki67蛋白及mRNA表达水平均降低(P值均＜0.05),二甲双胍组MMP-2蛋白及mRNA表达水平降低(P值均＜0.05);与二甲双胍组、顺铂组比较,二甲双胍联合顺铂组Survivin、MMP-2和Ki67蛋白及mRNA表达水平均降低(P值均＜0.05).结论 二甲双胍组可抑制MMP-2的表达,顺铂组及二甲双胍联合顺铂组均可抑制Survivin、MMP-2和Ki67的表达,二甲双胍和顺铂联合应用可以增强抗肿瘤的疗效.     

二甲双胍对老年2型糖尿病患者血浆乳酸水平的影响

目的观察老年2型糖尿病(T2DM)患者二甲双胍治疗后血浆乳酸水平的变化。方法收集104例老年T2DM患者的资料,按有无使用二甲双胍分为两组:使用二甲双胍超过3个月者51例(老年双胍组);未使用二甲双胍者53例(老年对照组)。同时收集使用二甲双胍的中年T2DM患者91例作为中年双胍组。比较三组血浆乳酸水平。结果老年双胍组血浆乳酸水平较老年对照组(t=0.902,P=0.369)及中年双胍组(t=0.359,P=0.720)无显著差异;老年双胍组及对照组的内生肌酐清除率(Ccr)明显低于中年双胍组(t=8.924,P=0.000和t=2.865,P=0.005);老年T2DM患者二甲双胍的用量与中年患者无显著差异(t=0.686,P=0.494)。结论二甲双胍在一定剂量范围内用于治疗老年T2DM患者不会增加乳酸酸中毒的风险。     

槲皮素对人胃癌细胞侵袭和MMP-2表达的影响

目的:观察槲皮素(Quercetin,Que)对人胃癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能机制.方法:采用不同浓度的槲皮素处理胃癌BGC-823细胞后,以软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,以Boyden小室模型方法检测癌细胞侵袭能力,采用荧光实时定量PCR检测癌细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metallopeptidase-2,MMP-2)基因mRNA水平,以Western blot方法检测癌细胞MMP-2基因蛋白水平变化.结果:不同浓度的胃癌BGC-823细胞经槲皮素处理后,恶性增殖和侵袭能力均明显下降,且呈剂量依赖性(P<0.005,P<0.005).槲皮素处理组MMP-2基因mRNA和蛋白水平均明显下调,且呈时间和浓度依赖性,即随着作用时间的延长和槲皮素作用浓度的增加,MMP-2的mRNA和蛋白水平逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001).结论:槲皮素可明显抑制胃癌BGC-823细胞侵袭能力,其机制可能与下调MMP-2基因表达有关.     

Effect of a nitric oxide synthase inhibitor NG-nitro-L-arginine methyl ester on invasion of human colorectal cancer cell line SL-174T

AIM: To investigate the effect and mechanism of action of the nitric oxide synthase (NOS) inhibitor NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) on invasion and metastasis of human colorectal cancer cell line SL-174T.METHODS: Human colorectal cancer cell line SL-174T was cultured and treated separately with four different dosages of L-NAME for 72 h. Nitric oxide (NO) production was measured with Griess reagent. The effect of L-NAME on invasion and migration of SL-174T cells were evaluated by using Transwell chambers attached with polycarbonate filters and reconstituted basement membrane (Matrigel).RT-PCR was performed to determine the mRNA levels of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitor metalloproteinase-2 (TIMP-2).RESULTS: L-NAME could significantly inhibit NO production of SL-174T in a dose-dependent manner. After being treated for 72 h with 0.2, 0.4, 0.8, and 1.0 mmol/L LNAME, respectively, the ability of the L-NAME treated SL174T cells to invade the reconstituted basement membrane decreased significantly (t = 8.056, P＜0.05;t= 14.467, P＜0.01;t= 27.785, P＜0.01;and t= 29.405,P＜0.01, respectively) and the inhibition rates were 10.29%,19.62%, 34.08%, and 42.23%, respectively. Moreover,L-NAME could inhibit migration of SL-174T cells, and the inhibition rates were 20.76%, 24.95%, 39.43%, and 46.85% for L-NAME at 0.2, 0.4, 0.8, and 1.0 mmol/L,respectively (t = 15.116, P＜0.01). In addition, after treatment with L-NAME, expression of MMP-2 mRNA was significantly decreased (t = 71.238, P＜0.01) and that of TIMP-2 mRNA was markedly increased (t = -13.020,P＜O.01).CONCLUSION: L-NAME exerts anti-invasive and antimetastatic effects on SL-174T cell line via downregulating MMP-2 mRNA expression and upregulating TIMP-2 mRNA expression.     

Effect of a nitric oxide synthase inhibitor NG-nitro-L-arginine methyl ester on invasion of human colorectal cancer cell line SL-174T

AIM: To investigate the effect and mechanism of action of the nitric oxide synthase (NOS) inhibitor NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) on invasion and metastasis of human colorectal cancer cell line SL-174T. METHODS: Human colorectal cancer cell line SL-174T was cultured and treated separately with four different dosages of L-NAME for 72 h. Nitric oxide (NO) production was measured with Griess reagent. The effect of L-NAME on invasion and migration of SL-174T cells were evaluated by using Transwell chambers attached with polycarbonate filters and reconstituted basement membrane (Matrigel). RT-PCR was performed to determine the mRNA levels of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitor metalloproteinase-2 (TIMP-2). RESULTS: L-NAME could significantly inhibit NO production of SL-174T in a dose-dependent manner. After being treated for 72 h with 0.2, 0.4, 0.8, and 1.0 mmol/L L-NAME, respectively, the ability of the L-NAME treated SL-174T cells to invade the reconstituted basement membrane decreased significantly (t = 8.056, P<0.05; t= 14.467, P<0.01; t= 27.785, P<0.01; and t= 29.405, P<0.01, respectively) and the inhibition rates were 10.29%, 19.62%, 34.08%, and 42.23%, respectively. Moreover, L-NAME could inhibit migration of SL-174T cells, and the inhibition rates were 20.76%, 24.95%, 39.43%, and 46. 85% for L-NAME at 0.2, 0.4, 0.8, and 1.0 mmol/L, respectively (t = 15.116, P<0.01). In addition, after treatment with L-NAME, expression of MMP-2 mRNA was significantly decreased (t = 71.238,P<0.01) and that of TIMP-2 mRNA was markedly increased (t=-13.020,P<0.01). CONCLUSION: L-NAME exerts anti-invasive and anti-metastatic effects on SL-174T cell line via downregulating MMP-2 mRNA expression and upregulating TIMP-2 mRNA expression.     

支气管哮喘大鼠气道重塑中肺泡巨噬细胞的作用

目的研究支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道重塑过程中肺泡巨噬细胞(AM)的变化及其作用。方法48只清洁级雄性幼年SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(A组)、哮喘3d组(B组)、哮喘14d组(C组)和哮喘30d组(D组),每组12只。应用鸡卵白蛋白(OVA)建立哮喘大鼠模型,纯化支气管肺泡灌洗液(BALF)中的AM,测定AM中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)的含量和基质金属蛋白酶9基因(MMP-9mRNA)及其组织抑制物1基因(TIMP-1mRNA)的表达,并测量大鼠支气管壁总面积和平滑肌面积,计算单位基底膜周径(Pbm)的支气管壁厚度(WAt)和平滑肌厚度(WAm)。结果D组WAt和WAm[(85±9)μm2/μm、(28.6±4.9)μm2/μm]与A组[(67±10)μm2/μm、(16.8±2.4)μm2/μm]比较差异有统计学意义(t值分别为2.938、3.227,P均<0.01);D组AM中TNF-α和PGE2含量[(0.68±0.25)μg/L、(0.122±0.030)μg/L]与A组[(0.37±0.09)μg/L、(0.079±0.018)μg/L]比较差异有统计学意义(t值分别为2.683、3.016,P均<0.01),与B组[(0.74±0.29)μg/L、(0.120±0.028)μg/L]、C组[(0.71±0.23)μg/L、(0.117±0.028)μg/L]比较差异无统计学意义(t值分别为1.624、0.472、0.935、0.533,P均>0.05);D组AM中MMP-9mRNA及TIMP-1mRNA含量吸光度(A)值分别为0.346±0.033、0.361±0.040,与C组(0.279±0.015、0.259±0.015)比较差异有统计学意义(t值分别为2.574、2.716,P均<0.01),D组(0.183±0.025)与B组(0.136±0.014)比较差异有统计学意义(t值分别为2.913、3.017,P均<0.01),D组(0.104±0.007)与A组(0.109±0.008)比较差异有统计学意义(t值分别为3.632、3.487,P均<0.01);各组AM中MMP-9mRNA含量与WAt、WAm呈正相关(r值分别为0.693、0.738,P均<0.01),AM中TIMP-1mRNA含量与WAt、WAm呈正相关(r值分别为0.823、0.876,P均<0.01)。结论哮喘大鼠AM及其分泌的一些细胞因子与气道重塑关系密切。     

Effects of antidiabetic drug metformin on the migration and invasion abilities of human pulmonary adenocarcinoma A549 cell line in vitro

Background and purpose

There is growing evidence that metformin, a clinically widely used drug in the treatment of type II diabetes, may impede the growth of human tumors. However in a recent study it was found that metformin treatment might result in promotion of the angiogenic phenotype and promote early tumorigenic progression. In order to evaluate the relevance between metformin and tumor metastases, we investigated the effects of metformin on the migration and invasion abilities of human pulmonary adenocarcinoma cell line A549 in vitro and explored the possible underlying mechanisms.

Methods

A549 cells were treated with 0.5 mmol/L, 2 mmol/L and 8 mmol/L metformin for 72h. The laterad-migration and invasion abilities of the cells in vitro were evaluated by scratch assay and Boyden-Chamber assay, respectively. Expressions of MMP2 and MMP9 mRNA of the cells before and after metformin treatment were measured by Real-Time PCR.

Results

The migration rate of A549 cells was increased after metformin treatment at the concentration of 8mmol/L. The invasion ability was also significantly increased from 37.4±4.6 to 59.8±7.2(P<0.05) by 8mmol/L metformin treatment. No significant difference of the migration and invasion abilities was observed between the Group 0.5mmol/L, 2mmol/L and the Control. The expressions of MMP2 and MMP9 mRNA were both up-regulated after metformin treatment, while in the 8mmol/L Group the genes changes were the most significant.

Conclusions

Metformin can increase the migration speed and enhance invasion abilities of A549 cells in vitro, which may be attributed to the up-regulation of MMP2 and MMP9.     

γ-氨基丁酸对胰腺癌细胞增殖及转移作用的实验研究

目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)对胰腺癌SW1990细胞增殖、细胞周期及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的影响.方法 应用不同浓度(0～320 μmol/L)GABA干预SW1990细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期.RT-PCR检测细胞MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果 GABA促进胰腺癌SW1990细胞的生长,使G0/G1细胞减少,S期和G2/M细胞增多.320μmol/L的GABA干预细胞后的A570值为1.11±0.03,较无GABA干预组的0.56±0.01显著增加(P<0.01);G0/G1细胞为(46.18±1.12)%,较无GABA干预组的(87.29±1.34)%显著减少(P<0.01);MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA及蛋白表达分别为8.6、6.8、10.5、8.4,较0～40μmol/L组显著增加(P<0.05).结论 GABA能促进SW1990细胞增殖和MMPs的表达.