异常黑胆质成熟剂黄酮类化合物诱导HepG2细胞凋亡机制的研究

目的：观察异常黑胆质成熟剂中黄酮类化合物对人肝癌细胞株(HepG2)体外生长、凋亡及相关基因表达的调控作用,探讨异常黑胆质成熟剂黄酮类化合物诱导癌细胞凋亡及抗癌活性的物质基础及其作用机制。方法：采用四氮甲基唑蓝法(MTT)、琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞术及逆转录-多聚酶链式反应技术(RT-PCR)等,观察异常黑胆质成熟剂黄酮类化合物对HepG2生长、凋亡及凋亡基因调控的影响。结果：异常黑胆质成熟剂黄酮类化合物明显抑制HepG2细胞体外生长,HepG2细胞在sub-G₁期受到阻滞,并能诱导细胞发生凋亡,明显下调Bcl-2 mRNA表达水平,同时可上调p53,p21,Bax基因mRNA表达水平。结论：异常黑胆质成熟剂黄酮类化合物对癌细胞体外生长、凋亡及凋亡基因表达具有明显的调控作用。黄酮类化合物可能是异常黑胆质成熟剂发挥抗癌作用的主要活性成分,而抑制细胞生长、诱导细胞凋亡及调控凋亡基因表达等可能是其发挥抗癌活性的重要途径。     

异常黑胆质成熟剂水提物和醇提物对HepG2细胞m5dc及8-OH-cG形成的影响

目的：观察异常黑胆质成熟剂水提物和醇提物对人肝癌细胞株（HepG2）细胞5-甲基脱氧胞核嘧啶（5-methyldeoxycytosine,m5dC）及8-羟基-2′-鸟嘌呤脱氧核苷酸（8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OH-dG）等表遗传信息的影响,从而探讨异常黑胆质成熟剂水提物和醇提物抗癌作用的分子生物学机制.方法：采用高效液相色谱联用紫外检测技术（HPLC-UV）,分别观察以2.5、5.0及7.5mg/ml浓度的异常黑胆质成熟剂水提物或醇提物作用48h后,对HepG2细胞m5dC及8-OH-dG形成的抑制作用.结果：异常黑胆质成熟剂水提物作用后,HepG2细胞m5dC生成率分别为27.0、24.2及18.6%,而醇提物分别为23.5、20.2及16.8%,与空白对照组（34.0%）比较均具有显著性差别（P＜0.05）;异常黑胆质成熟剂水提物作用后,HepG2细胞8-OH-dG的生成率分别为0.58、0.45及0.32%,醇提物分别为0.46、0.36及0.23%,与空白对照组（0.69%）比较具有明显差异（P＜0.05）.结论：异常黑胆质成熟剂水提物和醇提物对HepG2细胞m5dC及8-OH-dG等表遗传学信息的产生具有浓度依赖性的抑制作用,而醇提物的作用优于水提物,说明抑制癌细胞m5dC及8-OH-dG等表遗传学信息的产生是异常黑胆质成熟剂抗癌作用的重要分子生物学机制之一.     

异常黑胆质成熟剂水提物和醇提物对HepG2细胞m~5dC及8-OH-dG形成的影响

目的:观察异常黑胆质成熟剂水提物和醇提物对人肝癌细胞株(HepG2)细胞5-甲基脱氧胞核嘧啶(5-methyldeoxycytosine,m5dC)及8-羟基-2′-鸟嘌呤脱氧核苷酸(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OH-dG)等表遗传信息的影响,从而探讨异常黑胆质成熟剂水提物和醇提物抗癌作用的分子生物学机制。方法:采用高效液相色谱联用紫外检测技术(HPLC-UV),分别观察以2.5、5.0及7.5mg/ml浓度的异常黑胆质成熟剂水提物或醇提物作用48h后,对HepG2细胞m5dC及8-OH-dG形成的抑制作用。结果:异常黑胆质成熟剂水提物作用后,HepG2细胞m5dC生成率分别为27.02、4.2及18.6%,而醇提物分别为23.5、20.2及16.8%,与空白对照组(34.0%)比较均具有显著性差别(P<0.05);异常黑胆质成熟剂水提物作用后,HepG2细胞8-OH-dG的生成率分别为0.58、0.45及0.32%,醇提物分别为0.46、0.36及0.23%,与空白对照组(0.69%)比较具有明显差异(P<0.05)。结论:异常黑胆质成熟剂水提物和醇提物对HepG2细胞m5dC及8-OH-dG等表遗传学信息的产生具有浓度依赖性的抑制作用,而醇提物的作用优于水提物,说明抑制癌细胞m5dC及8-OH-dG等表遗传学信息的产生是异常黑胆质成熟剂抗癌作用的重要分子生物学机制之一。     

异常黑胆质成熟剂和清除剂抗氧化作用的ESR研究

目的：探讨异常黑胆质成熟剂和清除剂抗氧化的作用机理。方法：采用电子顺磁共振技术（ESR）分别检测异常黑胆质成熟剂和清除剂对超氧阴离子自由基（O2^-）,羟自由基（OH）的清除作用。结果：异常黑胆质成熟剂和清除剂均能有效清除O2^-,OH,但其作用强度不同,清除剂作用大于成熟剂。结论：异常黑胆质成熟和清除剂是维医药中两种有效的天然抗氧化剂,其抗氧化作用可能是治病的重要机理之一。     

异常黑胆质成熟剂化学成分初步研究

目的 初步了解异常黑胆质成熟剂中含有的化学成分.方法 采用不同化学定性方法对异常黑胆质成熟剂中化学成分进行研究.结果 糖、皂苷、酚、黄酮、生物碱、香豆素(和/或内酯)、有机酸和氨基酸等化学成分的鉴别试验均呈阳性.结论 异常黑胆质成熟剂中可能含有的化学成分有糖、皂苷、酚、黄酮、生物碱、香豆素和/或内酯、有机酸和氨基酸等.     

异常黑胆质成熟剂对异常黑胆质载体动物模型支配器官形态学的影响

目的:观察异常黑胆质成熟剂对异常黑胆质载体动物模型支配器官形态学的影响,从组织病理学角度探讨异常黑胆质证的本质,阐明异常黑胆质成熟剂可能的作用机理。方法:采用多因素复制小鼠异常黑胆质载体动物模型,分别用异常黑胆质成熟剂小剂量2.53 g.kg-1,中剂量5.06 g.kg-1,大剂量10.12 g.kg-1对模型进行全程干预。取脑、心脏、肝脏支配器官,观察和比较异常黑胆质载体动物模型组和药物干预组支配器官的组织形态学改变。结果:与模型组相比,异常黑胆质成熟剂小剂量和中剂量组支配器官(脑、心脏、肝脏)细胞修复性指标增强,而损伤性组织病理学改变减轻;大剂量组修复性指标明显提高,损伤性组织病理学改变显著减轻。结论:异常黑胆质成熟剂对异常黑胆质载体动物模型的支配器官组织病理学改变有一定的保护和修复作用。     

异常黑胆质成熟剂抗抑郁作用研究

目的:观察异常黑胆质成熟剂(ASMq)对不同抑郁动物模型行为学的影响,探讨ASMq的抗抑郁作用。方法:采用小鼠强迫游泳、悬尾应激、利血平拮抗实验以及大鼠慢性应激抑郁模型实验,分别用ASMq低、中、高剂量(小鼠2.0、4.0、8.0 g·kg-1;大鼠1.5、3.0、6.0 g·kg-1)对上述模型进行全程干预,观察ASMq的抗抑郁作用效果。结果:ASMq能明显缩短小鼠强迫游泳不动时间(P0.01)、悬尾不动时间(P0.01);具有拮抗利血平所致的体温下降(P0.01)、眼睑下垂(P0.01)及运动不能(P0.01)作用,并呈明显的剂量依赖关系(P0.05);与正常组相比,慢性应激抑郁模型组大鼠糖水摄入量减少,敞箱实验中水平运动、站立次数明显下降,处于抑郁状态。ASMq干预组能够增加糖水摄入量、水平运动及站立次数(P0.01)。结论:ASMq能够改善不同抑郁动物模型的行为学缺损,具有明显的抗抑郁作用。     

异常黑胆质体液成熟剂散剂质量标准的研究

目的:建立异常黑胆质体液成熟剂散剂的质量标准。方法:采用薄层色谱法,对异常黑胆质体液成熟剂散剂中的全方药味分别进行定性鉴别。结果:建立了异常黑胆质体液成熟剂散剂中甘草的薄层色谱鉴别方法。结论:建立的甘草薄层色谱鉴别方法重现性好,专属性强,可用于该制剂的质量控制。     

异常黑胆质成熟剂总黄酮和总酚的含量测定

目的检测异常黑胆质成熟剂中总黄酮和总酚的含量。方法以芦丁为对照品,采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法测定了总黄酮含量;以没食子酸为对照品,采用Folin—Ciocalteu比色法测定了总酚含量。结果芦丁浓度在0．011—0．130mg／ml范围内线性关系良好,最低检测限为0．06μg/ml,最低定量限为0．18μg/ml。该方法加样回收率为95．1％～97．5％,精密度为1．34％,水提物和醇提物中总黄酮含量分别为16．2mg／g和19．0mg／g。没食子酸浓度在1．1～7．7μg/ml范围内线性关系良好,最低检测限为0．01μg／ml,最低定量限为0．03μg/ml。该方法加样回收率为99．5％～104．8％,精密度为3．39％,水提物和醇提物中总酚含量分别为38．28mg／g和21．54mg／g。结论此两种方法灵敏、准确性强,精密度高,重复性好,分别可以用作异常黑胆质成熟剂中总黄酮和总酚含量的测定。     

维吾尔药异常黑胆质成熟剂总黄酮逆转肝癌细胞耐药性的作用

目的研究维吾尔药异常黑胆质成熟剂总黄酮(ASMq)体外对肝癌耐药细胞株Bel/Fu逆转肿瘤耐药性的作用。方法应用MTT法测定应用ASMq前后5-Fu对Bel/Fu耐药细胞株的IC50,计算其逆转倍数;浓度依赖试验确定ASMq逆转浓度;耐药性的集落形成实验初步确定ASMq逆转Bel/Fu的作用。结果ASMq对Bel/Fu细胞IC50是2000.68μg/mL,其浓度为390μg/mL时对细胞无明显的杀伤作用,逆转倍数为7.8,与抗癌药物5-Fu有协同作用,CDI为0.89。集落形成实验从形态上证实ASMq逆转MDR作用,随ASMq浓度的加大集落逐渐变小。结论ASMq对肝癌耐药细胞株Bel/Fu细胞多药耐药有逆转作用。     

RRLC法测定异常黑胆质成熟颗粒中甘草苷的含量

目的 建立高分离度快速分离液相色谱( RRLC)测定异常黑胆质成熟颗粒中甘草苷含量的方法.方法 色谱条件:Zorbax XDB-C18色谱柱(4.6×50 mm,1.8 μm),流动相为1.5％乙酸甲醇-1.5％乙酸水(V/V),流速0.5 mL·min-1,检测波长为330 nm,柱温为25℃.结果 甘草苷在0.021～0.105 mg· mL-1 (r=0.9997)范围内峰面积与浓度呈良好线性关系,平均加样回收率为100.7％,RSD=1.75％(n=6).结论 本方法操作简便、专属性强、灵敏度高、重现性好,适用于异常黑胆质成熟颗粒的质量控制,为其在临床应用及开发提供了研究数据.     

异常黑胆质成熟剂对异常黑胆质载体动物模型下丘脑-垂体-肾上腺轴的调节作用研究

目的阐明异常黑胆质成熟剂对异常黑胆质载体动物模型丘脑-垂体-肾上腺轴(HPAA)功能的调节。方法根据维吾尔医学理论采用多因素复制小鼠异常黑胆质载体动物模型,并用异常黑胆质成熟剂不同剂量(8.58,17.16,34.32g/kg),14d全程干预给药,此后用ELISA法检测血清ACTH和CORT含量;采用高效液相-荧光检测分析法分析了异常黑胆质载体动物模型小鼠血清和脑去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、3,4二羟基本乙酸(DOPAC)等单胺类神经递质含量。结果异常黑胆质成熟剂不同剂量可以降低异常黑胆质载体动物模型血清NE含量(P<0.01),增加血清DA、5-HT和DOPAC含量(P<0.01),同时发现异常黑胆质成熟剂能降低异常黑胆质载体动物模型脑组织中NE含量(P<0.01),异常黑胆质成熟剂大剂量能增加DA含量(P<0.05),小剂量和大剂量能增加DOPAC含量(P<0.01)。结论提示异常黑胆质成熟剂可能通过参与神经内分泌系统的内在调节,改善异常黑胆质载体动物模型的丘脑-垂体-肾上腺轴(HPAA)功能的紊乱。     

HPLC测定异黑成熟颗粒中田蓟苷和甘草酸的含量

目的:建立测定异黑成熟颗粒中2种有效成分田蓟苷和甘草酸含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,乙腈-0.5％甲酸(27∶ 73)为流动相,检测波长324 nm,柱温35℃,流速1.0 mL·min-1.Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.2 mol· L-1酸铵-冰醋酸(67∶33∶1)为流动相,检测波长250 nm,柱温30℃,流速1.0 mL· min-1.结果:田蓟苷和甘草酸分别在1.14～114 μg (r=0.9999)和20.6 ～ 206 μg(r=0.999 7)线性关系良好;平均回收率分别为98.26％(RSD 2.29％),99.39％ (RSD 1.86％).结论:该方法简便可行,重复性好,可用于异黑成熟颗粒中田蓟苷和甘草酸含量测定.     

Immunomodulatory effects of Abnormal Savda Munsiq,a traditional Uighur medicine,on the combined stress mice

Objective

To investigate the immunomodulatory effects of ASMq, a herbal preparation used in Traditional Uighur Medicine, on the combined stress mice.

Materials and methods

The combined stress was induced on mice by application of the electric-foot shock in a cold–dry environment and three different doses of ASMq were orally administered to the animals for 14 days. The effect of ASMq on the immune apparatus weight index, lymphocytes proliferation, serum levels of the cytokines, immunoglobulins, hemolysin and NK cells as well as the phagocytic activity of the macrophages were evaluated.

Results

Oral administration of ASMq was found to increase the thymus and spleen indices, lymphocytes proliferation induced by Con A and LPS, the percentage of CD4⁺ in thymus, spleen and peripheral blood and restore the CD4⁺/CD8⁺ ratio. The serum concentrations of INF-β, IL-2, IL-6, IgG, NK cells and hemolysin were also increased. The macrophage phagocytic activity was also enhanced.     

异常黑胆质性肝癌病证模型肝硬化期支配器官的组织形态学研究

目的:观察异常黑胆质性肝癌病证模型肝硬化期支配器官的组织形态,阐明异常黑胆质体液对异常黑胆质性肝癌病证模型肝硬化期肝脏病变发生,发展的影响。方法:根据维吾尔医学理论,采用多因素复合作用3周建立维医异常黑胆质证载体动物模型后,用二乙基亚硝胺(DEN)诱导建立异常黑胆质性肝癌病证模型至发生肝硬化,分别采用光学显微镜和透射电镜观察其对各组大鼠的支配器官(心、脑、肝)的组织形态学。结果:与正常对照组相比,模型对照组、异常黑胆质证组和异常黑胆质病证模型组支配器官的组织形态明显改变,且与模型对照组相比,异常黑胆质性病证模型组损伤性病理改变更加显著。结论:异常黑胆质体液可能通过改变机体的支配器官的组织形态来促进异常黑胆质性肝癌病证模型肝硬化的发生和发展。     

维药异常黑胆质成熟剂总黄酮对 Bel/Fu 细胞株多药耐药性及mRNA表达的影响

目的研究异常黑胆质成熟剂总黄酮对肝癌Bel/Fu细胞株多药耐药性(MDR)及mRNA表达的影响。方法逆转录聚合酶链式反应法检测细胞内MDR1、MRP、GST-π、TopoⅡα mRNA的表达。结果异常黑胆质成熟剂总黄酮可抑制人肝癌Bel/Fu细胞株MDR1 mRNA的表达,提高TopoⅡα mRNA水平。结论异常黑胆质成熟剂总黄酮抑制MDR1mRNA的表达、提高TopoⅡα mRNA水平是其逆转肝癌MDR的机制。     

异常黑胆质清除剂对线粒体氧化损伤的保护作用

目的：观察异常黑胆质清除剂对线粒体氧化损伤的保护作用，以探讨其细胞保护机制。方法：在分离鼠肝线粒体的基础上，采用FeSO4/抗坏血酸羟自由基发生系统直接损伤线粒体，电镜观察线粒体结构完整性，同时测定线粒体超氧化物歧化酶（SOD）活性、脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量和Ca^2 -Mg^2 -ATPase活性的变化。结果：羟自由基损伤后线粒体结构的完整性受到一定程度的影响，线粒体SOD和Ca^2 -Mg^2 -APTase活性降低（P＜0．01），MDA含量增加（P＜0．01）。在体系中预先加入不同浓度的异常黑胆质清除剂后，上述变化趋势以剂量依赖性得到明显抑制。结论：异常黑胆质清除剂可以减轻羟自由基引发的线粒体氧化损伤，保护线粒体结构和功能。     

Correlative analysis of neoplasm patients with phlegm-stasis or abnormal Savda syndrome, based on metabonomics

Objective

To investigate plasma samples from neoplasm patients with phlegm-stasis or abnormal Savda syndrome, with NMR spectroscopy, and to analyze their metabolic varieties, characteristics and reciprocity.

Methods

¹H-NMR spectra were analyzed using the orthogonal projection to latent structure with discriminative analysis (OPLS-DA) method with unit variance scaling. The discriminative significance of metabolites was determined by the Pearson's product–moment correlation coefficient.

Results

Compared to the control group, neoplasm patients with phlegm – stasis or abnormal Savda syndrome had low concentrations of leucine, isoleucine, valine, alanine, tyrosine, histidine, citrulline, glycoprotein, glutamine, myo-inositol, scyllo-inositol, creatine, α-glucose, β-glucose and lactate (P<0.05), and high concentrations of very low density lipoprotein, low density lipoprotein, unsaturated lipid, formate, acetone, acetate, acetoacetate, pyruvate, β-hydroxybutyrate, carnitine and malonic acid (P<0.05), with no significant differences between the phlegm – stasis and abnormal Savda syndrome patients.

Conclusions

Neoplasm patients with different syndromes have very similar metabolic changes. A series of abnormalities such as immune dysfunction and oxidative – antioxidative imbalance, occur in neoplasm patients with abnormal Savda or phlegm – stasis syndrome.