腺病毒介导嗜铬瘤细胞中p75神经营养因子的RNA干扰

课题前期研究发现,在急性马尾神经受压模型大鼠中,马尾神经元华勒氏变性和腰骶脊髓前角运动神经元的凋亡及马尾相应阶段脊髓中有p75NTR的高表达存在正向变化关系。本文设想用腺病毒携带shRNA的方式,进行针对p75NTR基因沉默病毒的包装及体外验证重组腺病毒的基因沉默效果。实验按照Reynolds siRNA模板寡核苷酸的设计原则,设计合成3条p75 siRNA模板寡核苷酸片段（shRNA）,随后分别克隆进Shuttle vector 1.0 CMV,与表达加强绿色荧光蛋白的腺病毒载体骨架共转染HEK293细胞成功包装出具有p75shRNA的腺病毒,所得病毒分别命名为Ad.shRNA1、Ad.shRNA2、Ad.shRNA3,重组腺病毒分别感染体外培养的PC12细胞。48h后收集PC12细胞中p75NTRmRNA及总蛋白,发现相对于阴性对照,在mRNA水平,Ad.shRNA1,Ad.shRNA2,Ad.shRNA3组RNA干扰率为分别为（98.49±0.68）％,（95.08±1.79）％,（96.60±1.14）％;在蛋白水平,其RNA干扰率分别为（72.89±2.17）％,（58.83±1.15）％,（59.88±0.44）％。由此得出重组腺病毒成功的抑制了p75NTR的表达,其中以Ad.shRNA1基因沉默效果最为显著。     

神经营养因子及其受体的基因突变与疾病

神经营养因子在神经系统发育和生理功能发挥中具有重要作用。神经营养因子及其受体的基因缺失及突变是导致某些人类疾病，如各种先天性发育不全、神经退行性疾病和癌症等的“候选基因”或“修饰基因”，本文综述了神经营养因子及其受体突变与疾病的关系。     

海马p75神经营养因子受体在老年小鼠术后认知障碍中的作用

目的 探讨海马p75NTR在老年小鼠术后认知障碍(POCD)中的作用及其机制.方法 老年雄性C57BL/6小鼠30只,采用剖腹探查术建立POCD动物模型,随机分为3组(n=10):对照组、手术组及手术+TAT组.造模结束后第5天进行旷场实验,检测小鼠的运动距离及中心区域的活动时间.造模结束后第6～7天行条件恐惧实验,检...     

大鼠脑出血后不同时期神经营养因子受体p75、神经生长因子前体、酪氨酸激酶A的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的研究脑出血后血肿周围组织中神经营养因子受体p75(p75NTR)、神经生长因子前体(pro NGF)、酪氨酸激酶A(TrkA)的表达及细胞凋亡率,进一步探讨其在脑出血后的细胞凋亡中所发挥的作用。方法制作大鼠脑出血模型,于术后6 h、24 h、72 h、10 d处死各组大鼠获取所需脑组织标本,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化SP法检测p75 NTR、TrkA、pro NGF的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测p75 NTR、TrkA的基因表达水平。结果脑出血后p75 NTR、proNGF表达水平及p75 NTR/TrkA值与对照组比较显著升高(P 0. 01),且动态变化规律与脑细胞凋亡率相似;72 h后TrkA的动态变化规律与细胞凋亡率相反。结论脑出血后pro NGF与p75 NTR的结合可能参与介导脑细胞凋亡,p75 NTR/TrkA值增高时,pro NGF及p75 NTR以介导细胞凋亡为主; TrkA在脑出血后72 h内神经营养作用被抑制,72 h后可能发挥神经营养作用。     

脑源性神经营养因子修饰的神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠的学习及p75表达的影响

目的研究脑源性神经营养因子(BDNF)修饰的神经干细胞(NSC)移植对阿尔茨海默病大鼠的学习及p75表达的影响。方法 36只SD成年大鼠被选为受试对象。采用Aβ1-40立体定向注射法制作阿尔茨海默病模型(AD),并将AD模型大鼠随机分为3组:BDNF修饰的神经干细胞(BDNF-NSC)移植组、神经干细胞移(NSC)植组和溶剂(Vehicle)对照组(n=6),然后分别向这3组大鼠的海马区注入500μl的BDNF-NSC悬液(5×105)、NSC悬液(5×105)和相同剂量的不含细胞的培养基。注射4w后,采用Y迷宫方法检测AD大鼠的空间学习和记忆能力,随之用过量麻醉的方法处死受试大鼠,立即取脑并分别采用免疫组织化学方法检测BDNF-NSC在海马区的表达和Western blot法检测p75蛋白在海马区的表达。结果 BDNF-NSC组大鼠的行为学能力较NSC组和Vehi-cle组明显提高(P<0.05),同时免疫组化检测显示在海马区的BDNF-NSC阳性细胞数明显增多而Western blot检测显示p75蛋白在该区的表达显著降低(P<0.05)。结论 BDNF修饰的神经干细胞能够通过抑制海马区p75表达来防止由Aβ1-40造成的神经损害。     

神经营养因子与帕金森病的治疗（综述）

1帕金森病的研究概况帕金森病（parkinsondisease，PD）主要是由于位于黑质的多巴胺神经元退行变性造成的。在出现明显症状以前，这些神经元中很大一部分比例（估计50％～90％）已经退化或正在退化[1]。这说明黑质一纹状体系统具有“富余的容量”或足够的弹性或是存在其他基底神经节（basalganglia）通路，可以或至少可以部分缓解多巴胺神经元的丢失。因而从治疗的角度出发，通过在早期适度减缓神经元的退化，恢复萎缩神经元的功能，或是诱导其余神经元的功能适度增强，都可以长期控制病情。左旋多巴（L－dopa）应用于临床治疗PD，可以明…     

精神分裂症与神经营养因子

精神分裂症的神经发育障碍假说认为，神经发育障碍可能是导致精神分裂症的重要原因，而神经营养因子系统在神经发育过程中起重要作用，本文就精神分裂症与神经营养因子的研究进行综述。     

神经营养因子与脑缺血

本文仅就近年来有关神经营养因子在脑缺血后如何表达?表达的机制、表达后的产物是否对神经元有保护作用?以及可能的作用机制等方面的研究进展作一综述。     

神经营养因子与帕金森病

神经营养因子（ＮＴＦ_ｓ）及其基因对帕金森病（ＰＤ）的保护作用研究是目前研究的前沿领域。本文对ＮＴＦ_ｓ的家族与生物特性,ＮＴＦ_ｓ受体,ＮＴＦ_ｓ与帕金森病的相互关系及其对ＰＤ的保护机制等方面的研究作一综述。     

大鼠脑出血后血肿周围脑组织p75NTR的表达及其与细胞凋亡的关系

目的研究大鼠脑出血后不同时期血肿周围组织中p75NTR的表达规律及与其细胞凋亡的相关性。方法采用自体动脉血注入右侧尾状核制备大鼠脑出血动物模型,分别于脑出血后6h、24h、72h和10d处死大鼠获取血肿周围脑组织标本,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法及实时荧光定量PCR检测p75NTR蛋白及mRNA的表达。结果脑出血后6hpp75NTR蛋白和nRNA表达水平即上升,24h继续升高,72h到达高峰,至10d仍维持在较高水平,与对照组相比均差异显著（P〈0．05）。脑出血后细胞凋亡率的动态变化趋势与p75NTR蛋白及mRNA表达变化一致,两者之间呈显著正相关（P〈0．05）。结论脑出血后p75NTR可能参与介导脑细胞凋亡。     

精神分裂症与神经营养因子

精神分裂症的神经发育障碍假说认为 ,神经发育障碍可能是导致精神分裂症的重要原因 ,而神经营养因子系统在神经发育过程中起重要作用 ,本文就精神分裂症与神经营养因子的研究进行综述。     

神经营养因子与癫痫的研究进展

癫痫发病机制中神经营养因子(NTFs)的作用是目前研究的前沿领域。本文总结了近年来NTFs与癫痫关系的研究进展,包括NTFs的理化特性、发作诱导NTFs表达的特点及可能机制,以及NTFs在癫痫发病中的作用。     

抑郁症“脑源性神经营养因子假说”的进展

传统的抑郁症“脑源性神经营养因子假说”提出,海马及前额叶皮质脑源性神经营养因子（brain - derived neurotrophic factor, BDNF）信号通路损害参与了抑郁症的病理生理改变,抗抑郁药物通过恢复/增强BDNF信号转导发挥疗效。近年来,新的基础和临床研究证据显示了BDNF信号通路在抑郁症发病和抗抑郁治疗中作用的多样性和复杂性：（1）海马和/或前额叶皮质BDNF-TrkB信号通路的抑制或消除并不诱发抑郁样行为表型,但明显损害各种抑郁治疗反应,提示该信号通路在抑郁情绪障碍发生中缺乏直接或关键性的作用,而完整的、正常的BDNF-TrkB信号通路是目前各种抗抑郁治疗发挥疗效的必要条件;（2）BDNF-TrkB信号通路在海马-前额叶皮质和中脑边缘系统中表现出相反的抑郁行为调节作用,提示BDNF可能通过影响情绪相关神经网络而不是单个脑区的活动发挥情绪调节作用;（3）脑内存在BDNF-TrkB和proBDNF-p75NTR信号通路,分别增强和抑制海马神经可塑性,提示脑内不同BDNF信号通路间可能通过相互制约、相互影响共同参与神经可塑性和情绪行为的调节;（4）BDNF基因多态性可能与抑郁症易感性相关。新的研究证据大大扩展了人们对BDNF信号通路作用途径和作用机理复杂性的认识,促进了对传统的“抑郁症神经营养因子假说”的客观评价和进一步完善。     

BDNF和神经干细胞联用对穹隆海马伞切割鼠基底前脑p75NGFR阳性神经元数及其形态学的影响

目的研究神经干细胞（NSC）和脑源性神经营养因子（BDNF）联合治疗对穹隆海马伞切割鼠基底前脑p75^NGFR阳性神经元厦其形态学的影响。方法切断SD大鼠左侧穹隆海马伞模拟AD大鼠模型,利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马NSC。基底前脑注射NSC,同时侧脑室注射BDNF,4周后行免疫组化结合图象分析技术观察各组大鼠基底前脑p75^NGFR阳性神经元厦其形态学变化。结果损伤组大鼠p75^NGFR阳性神经元数在内侧隔核（MS）和斜角带（VDB）较正常组明显下降（P〈0．01）;移植组细胞数较损伤组有改善（P〈0．05）;与正常组相比较,联合组免疫阳性神经元数无显著下降（P〉0．05）。形态学参数测试结果显示,p75^NGFR阳性神经元的面积、周长在4组中的改变类似p75^NGFR阳性神经元数。结论NSC和BDNF联用较单独使用BDNF或NSC更好地增加p75^NGFR阳性神经元数及其形态学参数。     

神经营养因子对脑外伤后神经发生及功能障碍治疗进展

脑外伤是造成死亡和致残的主要原因之一,已成为世界范围内的公共健康负担,一般治疗的效果欠佳。神经营养因子具有促进神经干细胞增殖、分化及促进神经元、轴突、树突生长等功能。本文就神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)等神经营养因子在脑外伤后神经发生及功能障碍治疗情况进行综述,阐述神经营养因子治疗脑外伤的最新进展。     

人脑出血血肿周围组织中神经生长因子前体-神经营养因子受体p75-sortilin通路与细胞凋亡

This study demonstrated that brain areas surrounding the site of hematoma following intracerebral hemorrhage are characterized by significantly increased apoptosis and expression of neurotrophin receptor p75 and sortilin. However, as detected by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling and immunohistochemical staining, there was no significant change in nerve growth factor precursor expression levels. The appearance of neurotrophin receptor p75 expressing cells was positively correlated with cells that were detected by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling. These findings confirm that the nerve growth factor precursor-neurotrophin receptor p75-sortilin heterotrimeric complex-mediated apoptosis pathway may play an important role in cellular apoptosis following intracerebral hemorrhage.     

神经营养因子在应激反应中的作用

自从２０世纪初Ｃａｎｎｏｎ和Ｓａｌｙｅ在医学领域首次提出应激这一概念以来，经过半个多世纪的研究，人们对应激反应的了解愈加深入。现已证明，应激可引起体内组织形态学、生理、生化的改变多达１４００种以上。据统计，在各种普遍流行的疾病中，约７５％～９５％与应...     

神经营养因子与中枢神经系统可塑性

神经营养因子可以促进神经细胞的生存、生长与分化,并维持其功能的执行,对中枢神经系统的可塑性及其损伤后的再生修复也起着重要作用,本文介绍近年来在该领域的研究进展情况.