HLA—B27测定在诊断强直性脊柱炎的应用

强直性脊柱炎 (ＡｎｋｙｌｏｓｉｎｇＳｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ,ＡＳ)是一种严重危害人体骨骼系统的疾病 ,主要表现为关节部位的疼痛 ,活动障碍 ,进而畸形甚至强直而丧失活动能力。有关ＡＳ的病因学尚未完全明了 ,但已经确定该病的发生与人类白细胞抗原中的Ｂ2 7抗原 (ＨＬＡ -Ｂ2 7)有紧密的关系[1] 。本文对我院就诊ＡＳ病人进行了ＨＬＡ -Ｂ2 7、抗Ｏ(ＡＳＯ)、类风湿因子 (ＲＦ)、免疫球蛋白 (Ｉｇ)、血沉 (ＥＳＲ)检测 ,观察了Ｘ线正侧位片 ,以其了解强直性脊柱炎与Ｂ2 7的关系。1　材料和方法1.1　研究对象 :198例ＡＳ病人来自我院门诊…     

骨显像和血HLA—B27检测早期诊断强直性脊椎炎

目的 探讨放射性核素骨显像及人类白细胞抗原（HLA－B27）检查对强直性脊椎炎（AS早期诊断价值。方法 对首次发病且X线检查未见异常的35例后臀部疼痛患者作了骨显像及HLA－B27测定，并制订了对AS的早期诊断标准，对患者临床随访0．5－2．5a，用纽约会议标准再次进行诊断，以评价早期诊断标准的准确性。结果 根据早期诊断标准有30例患者被诊断为AS，随访后再次诊断，其中29例被诊断为AS，前后2次诊断符合率为96．7％。结论 放射性核素骨显像与HLA－B27检查相结合对AS的早期诊断和治疗可提供可靠依据。     

一种改进的HLA—B27检测方法

一种改进的ＨＬＡＢ２７检测方法孙成文徐茜＊李蕊＊＊张秀云孔繁华军事医学科学院附属医院北京１０００３９人白细胞抗原（ｈｕｍａｎｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎ，ＨＬＡ）是机体内具有高度多态性的抗原系统，与很多疾病呈高度相关。Ｂ２７是ＨＬＡ－Ｂ位点上的一...     

PCR-SSP检测HLA-B27基因

目的 建立序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测HLA—B27基因的方法。方法 合成HLA—B27基因和内对照人生长激素基因引物各一对，建立PCR-SSP方法。提取82例患者临床样品基因组DNA，用于PCR扩增。其中20例与微量淋巴细胞毒法(MLCT)比较。结果 PCR检测HLA-B27阳性率为68．3％。20例样本同时行PCR-SSP和MLCT法，PCR阳性14例(70％)，MLCT法阳性11例(55％)，两者一致率为85％。结论 PCR—SSP是一种敏感特异、快速简便的HLA—B27检测方法，优于MLCT法。     

HLA—DR分子的分离纯化

目的：纯化HLA－DR。方法：纯化抗HLA－DR单克隆抗体1243并与CNBr活化的Sepharose4B偶联亲和柱,应用免疫亲和层析方法纯化HLA－DR分子。结果;从5g HLA-DR阳性的人B淋巴瘤细胞系RAJI裂解液中得到20μHLA-DR分子。它们以二聚体形式存在,能与构象依赖型单抗L243进行结合,煮沸变性后分开为α和β两条单链。这为MHCⅡ类分子抗原表位研究奠定了基础。     

HLA—DR基因的克隆及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

获得表达ＨＬＡ－ＤＲ基因的小鼠墨色素瘤细胞，方法应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人Ｂ淋巴瘤细胞Ｒａｊｉ中克隆了ＨＬＡ－ＤＲ３α和β链ｃＤＮＡ，并经测序证实。将其分别插入至真核表达载体ｐＬＸＳＮ和ｐＣＥＰ４中，用脂质体转上鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，然后用Ｇ４１８和Ｈｙｇ双重筛选。     

基因水平HLA—DR相容对移植肾急性排斥和存活率的影响

回顾性分析基因水平HLA-DR相容对移植肾急性排斥和存活率的影响。318例接受环孢菌素A治疗的首次尸肾移植,DR分型采用PCR-SSP方法。分析DR相容对早期肾功能、急性排斥与激素治疗和1年存活率的影响。结果显示HLA-DR基因分型均获成功,耗时4h。318例受者中达到0MM者占11.6%、1MM占51.9%、2MM占36.5%,总体排斥率49.1%,1年人/肾存活率94.3%、90.3%。DR相容者,早期肾功能、急性排斥与激素治疗、移植肾存活均明显优于配型差的受者,具有统计学差异。提示基因水平HLA-DR相容对尸肾移植急性排斥和存活率具有重要影响。     

磁共振联合HLA-B27诊断早期强直性脊柱炎的应用价值

目的 探讨MRI联合HLA-B27抗原检测骶髂关节强直性脊柱炎(AS)早期诊断的临床价值.方法 回顾性分析经临床确诊的35例早期AS患者,均行骶髂关节X线、MRI检查及HLA-B27抗原检测,并分别比较骶髂关节MRI、HLA-B27、骶髂关节MRI联合HLA-B27的阳性率.结果 35例早期强直性脊柱炎患者中,通过MRI检查诊断早期强直性脊柱炎的阳性率为74.3%(26/35例),HLA-B27阳性率为88.6%(31/35例),骶髂关节MRI联合HLA-B27的阳性率为97.1%(34/35例),其中MRI联合HLA-B27的阳性检出率高于MRI有统计学意义(P=0.013),MRI与HLA-B27、MRI联合HLA-B27与HLA-B27的阳性检出率比较无统计学意义(P＞0.05).结论 骶髂关节MRI联合HLA-B27检查能提高早期强直性脊柱炎的阳性检出率,有利于临床早期诊断、早期治疗.     

正常年轻恒牙髓中HLA—DR抗原表达细胞的免疫组织化学研究

目的探讨正常年轻恒牙发育过程中HLA-DR阳性细胞阳性细胞抗原呈递细胞的变化特点,为HLA-DR参与牙髓局部免疫防御及生长发育提供重要的理论基础;为临床上选择保存活髓的时机提供实验依据.方法用免疫组织化学染色的方法标记牙髓HLA-DR阳性细胞,并进行定量研究.结果根尖孔的闭合组与未闭合组的牙髓组织中均存在HLA-DR阳性细胞,闭合组阳性细胞数少于未闭合组阳性细胞数(P＜0.05).结论正常年轻恒牙牙根发育的不同阶段牙髓中均存在HLA-DR阳性牙髓树突状细胞,呈递外界抗原产生免疫应答,保证了牙齿的正常发育;随着牙根尖孔的闭合,髓腔的减小,HLA-DR细胞数量下降,保持自身稳定,维持牙髓的生理平衡.     

PCR直接扩增与套式扩增用于HLA—DR基因分型的研究

人类ＨＬＡ抗原分型在人类学、法医学、疾病易感性及器官组织移植等研究中有重要的意义。在骨髓移植中，进行供者、受者ＨＬＡ配型，选择相合的供体，减少ＧＶＨＤ发生，是移植成功的关键。     

人工合成HDV抗原27肽的应用—血清抗HDV的检测

采用自行设计、选择含天然ＨＤＡｇ部分片段的人工合成２７肽建立ＥＩＡ检测抗ＨＤＶ方法，在国内８家医院检测各类人员中血清抗ＨＤＶ状况。ＨＤＶ抗原合成肽由中国科学院上海生物化学研究所合成。结果：献血员（３１５例），甲型肝炎（１１３例）和非乙型肝炎（１５４例）中２例阳性；在ＨＢＶ感染者中共检出抗ＨＤｖ（＋）为２ｌ５／１４８２（１４．５１％）。其中ＡｓＣ为１４／４１４（３．３８％）、ＡＨ为１１／７６（１４．４７％），ＣＰＨ为５／２８（１７．８６％）、ＣＡＨ为３２／１８１（１７．６８％）ＳＨ为１７／８６（１９．７７％），ＬＣ为５２／１４２（３６．６２％），ＰＨＣ为３０／１３０（２３．０８％），另５４／４２５（１２．７１％）未分型。同一单位抗ＨＤＶ的检出与已往用市售试剂结果基本一致，与Ａｂｂｏｔｔ试剂符合率为９４．９％（７４／７８）。提示本ＨＤＶ抗原２７肽具有ＨＤＶ抗原活性，能特异地为天然抗ＨＤＶ识别，可作为检测抗ＨＤＶ诊断试剂。     

人肝癌细胞敲低Rab27 B后的差异蛋白质组初步研究

目的：通过分析敲低Rab27B后肝癌细胞蛋白质表达的变化,研究其在肿瘤细胞中的作用及可能的分子机制。方法在人肝癌细胞系MHCC97H中利用Tet-on系统和RNA干扰（RNAi）技术敲低Rab27B 表达,利用iTRAQ定量蛋白质组学技术比较敲低前后肿瘤细胞蛋白表达的差异,并对其进行亚细胞定位、生物过程和分子功能等生物信息学分析。结果 MHCC97H细胞敲低Rab27B后共鉴定到448种差异蛋白[比值（｜Ratio｜）＞1．21, P＜0．05],其中表达趋势与Rab27B正相关的蛋白229种,负相关的蛋白219种。差异蛋白主要涉及囊泡运输、大分子定位、胞内应激等生物过程,有26种差异蛋白分布于8个肿瘤相关信号通路中,其中11种集中在黏着斑（ focal adhesion）信号通路。结论对Rab27B敲低前后MHCC97H细胞全蛋白的iTRAQ分析表明,Rab27B不仅能影响肿瘤细胞的外泌体分泌,还能引起与细胞增殖和迁移等相关的信号通路中重要蛋白的变化,提示Rab27B确实具有调控肿瘤细胞增殖和迁移的分子基础。     

卵巢癌细胞株COC1/DDP多药耐药逆转前后HLA、B7表达的实验研究

目的 :探讨卵巢癌多药耐药 (multidrugresistance ,MDR)细胞的免疫逃逸机制。方法 :利用三苯氧胺 (TAM)和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,运用MTT法分析了TAM、ARP的逆转效应。采用流式细胞仪技术检测耐药亚株COC1/DDPMDR逆转前后及亲本株COC1细胞的HLA -Ⅰ、HLA -Ⅱ、B7-1、B7-2的表达。结果 :COC1/DDP和COC1均表达较强的HLA -Ⅰ类抗原 ,而HLA -Ⅱ、B7-1、B7-2的表达较较低。但COC1/DDP的B7-1、B7-2抗原的表达却高于COC1。经TAM、VRP作用后 ,COC1/DDP的耐药性发生逆转 ,但HLA、B7的表达无明显变化。结论 :TAM、VRP可以逆转卵巢癌的MDR细胞 ,敏感株细胞和多药耐药细胞有着不同的免疫逃逸机制 ,与耐药株相比 ,敏感株细胞更易逃避机体的免疫反应 ,过继免疫疗法可用于耐药肿瘤     

创伤后多器官功能不定综合征与HLA—DRB1基因的相关性研究

目的 研究ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因与创伤后多器官功能不全综合征（ＭＯＤＳ）的相关性。方法 采用多聚酶链反应－序列特异性引物分析法（ＰＣＲ－ＳＳＰ）,对３７例创伤后ＭＯＤＳ患者ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因进行分型,用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行血浆白细胞介素－１０（ＩＬ－１０）测定,并与相应健康人５２例结果比较。结果 创伤后ＭＯＤＳ患者ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１５０１￣ＤＲＢ１＊１５０２（编码ＨＬＡ－ＤＲ２抗原     

细胞核因子κB受体活化因子配基在强直性脊柱炎的表达及意义

目的 检测细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)在强直性脊柱炎(AS)患者脊柱外关节滑膜组织中的表达．并以类风湿关节炎(RA)、骨关节炎(OA)患者和健康者外周关节滑膜组织为对照,了解RANKL表达在AS患者关节炎症病理机制中的意义。方法 应用单克隆抗体,通过免疫组织化学方法检测13例AS、16例RA、17例OA及6例健康对照关节滑膜组织中RANKL、CD68蛋白表达及分布情况,通过计算机辅助图像分析系统和半定量分析方法确定RANKL在各滑膜组织中的表达水平,分析RANKL的表达与炎性指标及关节X线分期之间的相关性。结果 AS和RA患者组滑膜组织RANKL表达水平明显升高,阳性细胞主要见于滑膜组织衬里层和滑膜软骨交界区,OA患者组和健康对照组滑膜组织中则未见阳性表达信号。AS和RA患者滑膜组织中RANKL表达水平与关节X线分期呈正相关(相关系数r分别为0．41、0．73,P值分别为0．021、0．003)。结论 RANKL在AS患者骨质破坏的病理机制中具有重要作用,其表达量的多少在一定程度上可反映AS患者骨质破坏程度,AS患者滑膜组织中RANKL表达模式与RA相似,提示AS外周关节骨质破坏的病理机制可能与RA类似。     

抗LBP多抗对LPS诱导的肺组织NF—κB活化的抑制作用

通过凝胶电泳迁移率改变法（EMSA）观察兔抗大鼠LBP多抗对LPS诱导的肺组织NF-κB活化的影响，并用ELISA法测定肺组织匀浆TNF-α和IL-6含量。结果发现抗LBP抗体能显著抑制LPS诱导的肺组织NF-κB的活化，并显著降低肺组织TNF-α和IL-6含量，但这一作用只有在早期应用时才会有显著效果，在LPS作用的后期应用抗体的效果不明显。抗LBP抗体对NF-κB活化以及对TNF-α和IL-6生成的抑制作用表明其可能对急性肺损伤具有潜在的预防作用。     

转染金属蛋白酶抑制剂2基因对损伤血管平滑肌细胞核因子—κB和蛋白激酶C的影响

目的探讨血管平滑肌细胞(VSMC)损伤后金属蛋白酶(MMPs)和蛋白激酶C(PKC)、核因子-κB(NF-κB)表达的变化.方法采用脂质体对VSMC转染金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)基因进行基因转染,并用Western blot加以鉴定,分别用酶谱分析法、凝胶电泳迁移率分析技术(EMSA)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学检测该细胞克隆MMPs、NF-κB的活性变化和PKCα mRNA、蛋白的表达水平.结果体外损伤的VSMC金属蛋白酶显著增加.PKCα、NF-κB在正常VSMC中很少表达,但在损伤的VSMC中这种表达非常显著,对兔VSMC进行lIMP-2转染后,损伤的VSMC MMP-2,9活性受抑制,并且PKCα、NF-κB的表达下调(P＜0.05).结论PKCα和NF-κB在MMPs合成及损伤VSMC迁移中有重要价值,TIMP-2能通过抑制平滑肌细胞PKCα、NF-κB信号途径来防止血管再狭窄.