人巨细胞病毒感染对脐血红系祖细胞发育过程中Hoxb2，Hoxb4基因表达的影响

人巨细胞病毒感染可损害造血系统，甚至造成骨髓衰竭。人巨细胞病毒感染抑制红系祖细胞增殖和分化，是否与受染红系祖细胞增殖的基因异常表达有关？ 目的：观察人巨细胞病毒和/或全反式维甲酸对人脐血造血干细胞向红系祖细胞定向增殖分化过程进行干预后Hoxb2、Hoxb4基因表达的变化。 方法：取12例正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血，采用造血干细胞体外培养技术及实时荧光定量聚合酶链反应方法，以人巨细胞病毒-AD169和(或)6×10-8 mol/L的全反式维甲酸持续干预人脐血造血干细胞向红系定向增殖分化过程，检测空白组、全反式维甲酸组、人巨细胞病毒组、全反式维甲酸+人巨细胞病毒组在培养第3，7，10天红系祖细胞Hoxb2、Hoxb4基因的表达情况。 结果与结论：各组Hoxb2、Hoxb4基因均在增殖分化的第3天已有表达，第7天表达明显增加，第10天表达最强烈。与空白组相比，人巨细胞病毒组明显下降；与人巨细胞病毒组相比，全反式维甲酸+人巨细胞病毒组的Hoxb2、Hoxb4基因表达量明显增加(P < 0.05)。提示人巨细胞病毒可能通过调控Hoxb2、Hoxb4基因异常表达而引起造血功能异常；Hoxb2、Hoxb4均与红系造血有相关性；6×10-8 mol/L全反式维甲酸能显著上调正常红系祖细胞Hoxb2、Hoxb4基因的表达，也能上调经人巨细胞病毒感染的红系祖细胞Hoxb2、Hoxb4基因的表达。     

脐血来源AC133+细胞在不同诱导条件下神经分化标志物的表达

背景：近年来，在啮齿类动物中发现，造血干细胞具有向神经分化的塑型性，而在人类，这种造血的塑型性仍然具有争议。 目的:检测人脐血来源的AC133+造血干细胞是否具有向神经分化的潜能。 设计、时间及地点：本实验为成组对照设计实验，于2005-08/2007-12在天津血液学研究所和清华大学玉泉医院神经中心实验室完成。 材料：人脐带取自健康足月新生儿。胎脑滋养层细胞来源于22周流产胎儿脑组织。 方法：应用免疫磁珠分选人脐血AC133+细胞，流式细胞仪检测其纯度为99%以上。同时以机械分离及酶消化法制备胎脑滋养层细胞。选用4种培养条件对脐血来源AC133+造血干细胞进行诱导分化：①生长培养液DMEM/F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子。②DMEM/F12 加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子并联合使用脑源性生长因子，其间用全反式维甲酸处理3 d。③非细胞接触的共培养体系，先将制备的胎脑滋养层细胞生长在培养板内插件的半透膜上，与培养板内的脐血来源的AC133+细胞进行共培养。④细胞直接接触共培养，将预先用BrdU标记的脐血来源的AC133+细胞直接种在胎脑滋养层细胞上进行共培养。 主要观察指标： 1，2，4周收集诱导分化的脐血细胞，以RT-PCT检测是否有巢蛋白、骨形态生成蛋白2及神经细胞黏附分子的表达，免疫细胞化学方法检测细胞分型特异性抗原。 结果：部分脐血来源的AC133+细胞，在体外存在生长必需的因子上皮生长因子和碱性成纤维生长因子时，能表达一些与神经细胞分化有关的基因，如巢蛋白、骨形态生成蛋白，条件不同时，这些基因出现下调和关闭。在DMEM/F12 加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子联合使用脑源性生长因子诱导培养液中，上述基因表达在2周时可检测到，同时可检测到神经发育过程中出现的另一分子神经细胞黏附分子，这一分子在造血过程中并不出现，在使用内插件的胎脑滋养层细胞共培养的脐血细胞中也检测到相同结果。在优化的非细胞接触条件中主要表达胶质酸性蛋白，在细胞直接接触的共培养体系中出现神经元分化的标志物Ⅲ β-tubulin蛋白的表达。这种基因表达变化提示，在特定的培养环境下，脐血来源的AC133+细胞内可能出现了基因重排，使造血潜能的干细胞表达神经细胞发育分子。 结论：脐血来源的AC133+细胞包含部分具有向神经分化潜能的多能干细胞，在适合条件下，表达神经分化相关抗原。     

Wnt-1基因在神经干细胞向神经元分化过程中的表达

目的研究Wnt-1基因在全反式维甲酸(ATRA)诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元过程中的表达及其作用。方法用1μmol/L的维甲酸诱导人胚胎神经干细胞,诱导7d后,做NSE免疫荧光染色,计数分化为神经元的比例。于ATRA诱导前、诱导3d和诱导7d,提取细胞的总RNA。用半定量RT-PCR法检测Wnt-1基因的表达情况。结果与对照组相比,全反式维甲酸能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例(P<0.01)。Wnt-1基因在维甲酸诱导后明显上调(P<0.001)。结论Wnt-1基因在全反式维甲酸诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元的过程中起正调控作用,Wnt-1基因与神经元的分化关系密切。     

全反式维甲酸诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化后对T细胞增殖的抑制

背景：研究表明骨髓间充质干细胞能抑制T淋巴细胞的增殖活化,发挥负性免疫调节作用。 目的：利用全反式维甲酸体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,并探讨分化细胞对T细胞增殖的作用。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-03在广东医学院完成。 材料：4周龄雄性SD大鼠2只,由广东医学院动物中心提供。新鲜健康人血由广东医学院检验科提供。 方法：通过贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,体外传代扩增。取传至5代的骨髓间充质干细胞,加入含0.3 mg/L全反式维甲酸、体积分数为10%胎牛血清的LG-DMEM液进行预诱导,24 h后吸去预诱导液,加入含0.6 mg/L全反式维甲酸的LG-DMEM液向神经元样细胞诱导分化。取新鲜健康人血制备反应细胞,大鼠骨髓间充质干细胞作为刺激细胞,进行单向混合淋巴细胞反应实验,设立4组：对照组,单纯反应细胞100 μL,细胞浓度1×109 L-1;实验1组：1×104神经元样细胞+100 μL反应细胞;实验2组：1×105神经元样细胞+100 μL反应细胞;实验3组：1×106神经元样细胞+100 μL反应细胞。 主要观察指标：诱导分化后细胞形态变化及神经细胞鉴定,单向混合淋巴细胞反应结果。 结果：加入诱导液50 min后,光镜下骨髓间充质干细胞呈典型的核周体形态,3 h后大多数细胞转变为双极或多极神经元细胞样形态,出现胞体和突起。免疫细胞化学染色结果显示,大部分细胞呈神经元特异性烯醇化酶及巢蛋白阳性表达,而胶质纤维酸性蛋白呈阴性表达。与对照组比较,各实验组放射性核素每分钟闪烁数值均明显减少(P < 0.05),且各实验组间比较差异亦有显著性意义(P < 0.05),随着加入细胞数量的增多,抑制作用越明显。 结论：全反式维甲酸可在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞,分化后的神经元样细胞能够抑制人淋巴细胞增殖,并呈剂量依赖性增加。     

脐带间充质干细胞对脐血CD34+细胞体外扩增的影响

背景：体外扩增是目前解决脐带血干细胞移植所面临的单份脐血造血干祖细胞数不足问题的主要手段。已有许多关于不同来源的间充质干细胞联合不同细胞因子支持脐血造血干祖细胞体外扩增的报道,而单独应用间充质干细胞对人脐血CD34+细胞体外扩增的报道仍很少。 目的：观察应用脐带源间充质干细胞作基质层的体外培养体系对脐血CD34+细胞体外扩增的支持作用。 设计、时间及地点：对比观察实验,于2006-03/2007-05在中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所、实验血液学国家重点实验室完成。 材料：经产妇知情同意,采集健康足月分娩胎儿脐带9份。 方法：应用贴壁培养的方法从正常足月出生儿脐带中分离培养间充质干细胞,通过细胞形态学、免疫表型、分化实验进行鉴定。利用免疫磁珠分离法从正常足月出生儿脐带血中分离CD34+细胞。应用3种不同培养体系进行脐血CD34+细胞的体外扩增：单独应用脐带源间充质干细胞作基质层、细胞因子培养体系和间充质干细胞联合细胞因子培养体系。 主要观察指标：应用细胞计数法、集落培养计数法和流式细胞学检测法对扩增后细胞数量、集落形成能力和免疫表型进行分析比较。RT-PCR检测间充质干细胞中细胞因子的表达情况。 结果：培养第14天后,间充质干细胞组的CD34+细胞比例明显高于细胞因子联合间充质干细胞组;CD34+细胞总数为培养前的(4.19±1.37)倍,明显高于细胞因子组。培养第7天和第14天,间充质干细胞组的CD34+CD38-细胞亚群比例均高于另两组。RT-PCR结果显示,脐带源间充质干细胞体外可表达干细胞因子和血小板生成素早期干细胞效应因子。 结论：单独应用脐带源间充质干细胞可有效地对脐血CD34+细胞进行体外扩增,更有利于保持较早期干、祖细胞的扩增。 关键词：间充质干细胞;脐带;脐血;CD34+细胞;体外扩增     

脐血间充质干细胞体外扩增和向神经元样细胞的定向诱导*

背景：骨髓间充质干细胞存在取材困难、供体有限、可能病毒污染等缺陷,限制了其临床应用,而目前已证实间充质干细胞不仅存在于骨髓,还存在于外周血,尤其是脐血。 目的：探讨人脐血间充质干细胞的体外分离、扩增纯化方法及其神经分化潜能。 设计、时间及地点：应用研究,体外细胞学观察,于2005-10/2007-10在南方医科大学神经生物学教研室完成。 材料：新鲜脐血来自南方医科大学南方医院足月剖宫产新生儿脐带,取脐血前征得新生儿监护人的知情同意。 方法：无菌条件下收集脐血,去除红细胞,采用低糖DMEM/F12进行培养;取扩增第3或4代的人脐血间充质干细胞,培养基中添加碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和全反式维甲酸。 主要观察指标：用流式细胞仪检测贴壁细胞的表面标志;用免疫组化法检测诱导后细胞神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白、神经元特异性核内抗原和神经丝蛋白表达。 结果：人脐血间充质干细胞强表达CD13、CD 29、CD44和CD105,弱表达CD106,不表达CD34、CD11a、CD14、CD33和CD45。培养基添加神经营养因子诱导后的细胞呈现典型的神经元样表型,诱导后高表达巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经元特异性核内抗原和神经丝蛋白。 结论：人脐血富含间充质干细胞,分离培养后于培养基添加神经营养因子能够分化为神经元样细胞。     

体外局部微环境下小鼠胚胎干细胞向神经前体细胞的定向诱导分化***★

背景：周围微环境能够调节胚胎干细胞在体外的诱导分化情况，可能与多种信号通路及细胞因子作用有关。 目的：观察局部微环境对体外培养的小鼠胚胎干细胞向神经前体细胞定向诱导分化的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2005-10/2006-04在上海第二医科大学发育生物学研究中心实验室完成。 材料：清洁级孕13.5 d的C57BL/6昆明鼠6只，由中科院上海实验动物中心提供。携带LacZ标记基因的小鼠胚胎干细胞株S8由上海市发育生物学研究中心提供。 方法：取孕鼠胚胎，采用组织块消化法制备小鼠胚胎成纤维细胞，经丝裂霉素C处理得到滋养层细胞。将携带LacZ标记基因的小鼠胚胎干细胞株S8解冻复苏，加入含白血病抑制因子的高糖DMEM培养基体外扩增培养，将细胞克隆吹打成单细胞悬液，加到滋养层细胞上，在37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养。胚胎干细胞传代后，再加入含全反式维甲酸的高糖DMEM培养基，以单纯加入高糖DMEM培养基作为空白对照，调整细胞浓度为3×108 L-1，吹打法悬浮培养48 h，收集悬浮液，反复离心去上清，移入铺有明胶的培养皿中，培养9 d。 主要观察指标：诱导前后细胞形态及生长状态变化，RT-PCR检测诱导后细胞向神经前体细胞的分化情况。 结果：胚胎干细胞在含有白血病抑制因子的高糖DMEM培养基中能够保持未分化状态，克隆生长良好；换用含全反式维甲酸的高糖DMEM培养基悬浮培养后，4.0~5.0 h聚集成团，形成圆球状的类胚体。加入全反式维甲酸的诱导组内胚层细胞呈多边形且数量较多，对照组内胚层细胞呈长梭形且数量少。诱导后细胞表达神经干细胞特异性标志巢蛋白，神经细胞特异性标志微管相关蛋白2呈弱表达，不表达神经胶质细胞特异性标志胶质纤维酸性蛋白。 结论：体外培养的小鼠胚胎干细胞可保持未分化状态，具有不断增殖的能力，经白血病抑制因子与全反式维甲酸两步诱导后可分化为神经前体细胞。     

全反式视黄酸诱导兔骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化

背景：目前,在骨髓间充质干细胞体外向神经细胞分化的实验中,较多采用抗氧化剂法和细胞因子法,但诱导效率低。 目的：探讨全反式视黄酸在兔骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的作用。 方法：体外分离培养兔骨髓间充质干细胞,取第4代骨髓间充质干细胞观察细胞形态,实验组用0.4 μmol/L全反式视黄酸预诱导24 h后,改用神经细胞培养基继续培养。神经细胞培养基培养4,8,16及24 h,免疫组织化学检测巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达情况,采用RT-PCR的方法检测巢蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达水平。 结果与结论：骨髓间充质干细胞经培养、传代后,细胞贴壁生长,呈长梭形。免疫组织化学检测结果显示：全反式视黄酸诱导组巢蛋白及神经元特异性烯醇化酶呈阳性,诱导后细胞的活力良好。RT-PCR结果显示全反式视黄酸诱导组巢蛋白在诱导前后均有表达,神经元特异性烯醇化酶在诱导后16 h可见明显的扩增条带,24 h后更加明显。提示全反式视黄酸能够在体外促进兔骨髓间充质干细胞向神经细胞分化。     

骨髓基质细胞对多细胞因子介导人脐血单个核细胞体外扩增的影响*

背景：体外扩增脐血造血细胞的目的是促进脐血造血细胞的植入能力,细胞因子介导的脐血造血细胞能使细胞数有效扩增,但同时也耗竭了具有分化潜能的造血干细胞。 目的：观察骨髓基质细胞对多细胞因子组合介导人脐血单个核细胞体外扩增及扩增后黏附分子和CXCR4表达的影响。 方法：将分离的人脐血单个核细胞接种在预先建立的人骨髓基质细胞层上,分组培养：对照组仅含有脐血单个核细胞;多种细胞因子+脐血单个核细胞组;骨髓基质细胞+脐血单个核细胞组;骨髓基质细胞+多种细胞因子+脐血单个核细胞组。培养0,7 d检测有核细胞数, CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD62L+,CD34+CD49d+的细胞数。 结果与结论：单纯骨髓基质细胞和单用细胞因子组均可有效地扩增脐血造血细胞,并提高造血细胞上CD49d,CD62L及 CXCR4表达。而单用细胞因子组促进脐血造血细胞扩增能力较单纯骨髓基质细胞强,提高造血细胞CD49d,CD62L及 CXCR4表达能力较单纯骨髓基质细胞差。提示骨髓基质细胞虽可支持脐血造血细胞扩增,但难以实现造血细胞的大量扩增,但在骨髓基质细胞层的支持下,多细胞因子可有效地促进脐血造血细胞的扩增,并优于单用细胞因子及骨髓基质细胞,证实骨髓基质细胞可协同多细胞因子有效地促进脐血单个核细胞的扩增,促进造血干细胞的黏附和趋化能力。     

人脐血间充质干细胞的体外成骨

背景：用免疫细胞阴性筛选法可以排除造血干细胞对于间充质干细胞生长的影响,较快的获得具有表达间充质干细胞的细胞群。 目的：探讨人脐静脉血间充质干细胞向成骨样细胞分化的能力。 方法：用免疫磁珠阳性筛选法分离脐血间充质干细胞后进行培养。取P2代细胞行成骨诱导分化。 结果与结论：人脐血间充质干细胞贴壁生长,长梭形,3周长满瓶底,传代后细胞增殖迅速。细胞表型为高表达CD44+,CD29+和CD166+。在成骨诱导后碱性磷酸酶染色阳性,Von-Kossa染色提示钙化结节形成。提示脐血间充质干细胞能够在体外分化为成骨样细胞。     

微囊微环境体外扩增人脐血造血干/祖细胞

背景：由于单份脐血所含的造血细胞数量有限,目前只能用于儿童或低体质量成人血液病和急性辐射损伤等疾病患者,有效扩增脐血造血干/祖细胞已成为研究热点。 目的：观察微囊微环境对脐血造血干/祖细胞扩增的影响,以及此过程中可否使造血干/祖细胞在扩增的同时仍维持其未分化状态。 设计、时间及地点：单一样本观察,于2006-06/2007-09在中国科学院大连化学物理研究所完成。 材料：正常足月产新生儿脐带血由大连市妇产医院提供,提供者知情同意。 方法：Ficoll法梯度分离人脐血单个核细胞,采用静电液滴法在生理条件下进行微囊化包封和体外培养。以同条件平面培养的脐血单个核细胞作为对照。 主要观察指标：观察微囊化脐血细胞的生长特点及脐血细胞总数的变化;流式细胞仪检测培养过程中CD34+细胞扩增情况;应用甲基纤维素半固体培养法观察扩增细胞的集落形成能力。 结果：脐血细胞在微胶囊内持续增殖,并以聚集成团的三维方式生长,两种培养方式对脐血细胞总数均无明显影响(P > 0.05)。对比CD34+细胞扩增和细胞集落的生成发现,微囊化培养脐血细胞的CD34+细胞数量和集落密度均在培养第6天达到高峰,明显高于平面培养3 d时所达到的峰值;之后逐渐下降,至12 d后平面培养细胞的CD34+细胞和集落形成能力几乎检测不到,而此时微囊化培养的CD34+细胞数量和集落密度仍与平面培养的扩增高峰相近。 结论：微囊化培养能有效扩增人脐血造血干/祖细胞,并显著减缓造血干/祖细胞的分化进程,维持其多分化潜能,提示微囊为造血干/祖细胞维持未分化状态的扩增提供了特殊的微环境。     

Flt3配体胞外域的原核表达纯化及对脐血CD34+细胞的扩增作用*

背景：Fms 样酪氨酸激酶3配体(Flt3配体)是一种重要的生长因子,通过激活特定的酪氨酸激酶受体,调控造血细胞的生长、生存和/或分化,具有促进造血干细胞体外扩增的应用潜力。 目的：构建pET32a(+)-hFLext原核表达载体,表达、纯化hFLext蛋白,观察其对脐血CD34+细胞的扩增作用。 方法：克隆hFLext,构建pET32a(+)-hFLext重组表达载体。转化大肠杆菌 BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白。磁珠分选脐血CD34+细胞,单独加入hFLext或联合干细胞因子、血小板生成素孵育1周,观察体外扩增作用。 结果与结论：成功克隆hFLext,并构建了pET32a(+)-hFLext重组表达载体。在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hFLext融合蛋白,经8 mol/L尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hFLext融合蛋白。Trx-hFLext融合蛋白不仅具有维持及轻度刺激CD34+细胞体外扩增的作用,并且与干细胞因子及血小板生成素具有协同作用,为造血干/祖细胞体外扩增研究奠定了基础。     

Differentiation of human adult CD34+ stem cells into cells with a neural phenotype: role of astrocytes

It has recently been reported that adult hematopoietic stem cells can differentiate into neural cells, opening new frontiers in therapy for neurodegenerative diseases. In this study, adult human hematopoietic stem cells (HSCs) were isolated via magnetic bead sorting, using a specific CD34 antibody and cultured with human astrocyte culture conditioned medium (ACM). In order to evaluate their differentiation into neurons and/or astrocytes, ACM-treated cultures were probed for the expression of several neural markers. We observed morphological modifications and, after 20 days of treatment, cell morphology displayed extending processes. Immunocytochemistry, Western blotting and RT-PCR showed the expression of neuronal markers such as neurofilaments, neuron specific enolase (NSE) and NeuN in ACM-treated HSCs cultured in poly-L-lysine-coated dishes. On the contrary, when the same ACM-treated cells were grown on a plastic substrate, they expressed high levels of glial fibrillary acidic protein (GFAP), with only weak expression of neuronal markers. Nestin, a neural progenitor cell marker, was present in treated cells, regardless of the substrate. These results demonstrate that astrocytes can generate a suitable microenvironment for inducing HSCs to differentiate into neural cells. Therefore, adult bone marrow may represent a readily accessible source of cells for treating neurodegenerative diseases.     

慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞的生物学特性及其造血调控

由于慢性粒细胞白血病存在造血微环境异常和免疫异常,推测间充质干细胞可能在慢性粒细胞白血病的病理过程中扮演了一个重要角色。 目的：观察慢性粒细胞白血病骨髓间充质干细胞的生物学特征和对造血调控的影响,比较其与正常人骨髓来源的间充质干细胞的异常。 方法：分离正常人和慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞,分别检测它们的形态、表型、生长曲线和对T细胞活化的能力;将它们分别与脐带血干细胞共培养,检测共培养体系中对集落形成的影响和相关分子表达的差异。 结果与结论：慢性粒细胞白血病患者和正常志愿者骨髓来源的间充质干细胞的细胞形态、表型和干细胞的倍增时间均没有差异,慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞抑制T细胞活化的能力减弱;共培养体系中,悬浮细胞簇增加,说明造血干细胞与间充质干细胞之间的黏附性减弱,同时蛋白和RNA水平显示慢粒组中基质金属蛋白酶9升高,同时使ICAM-1的KitL从膜形式转变为可溶性形式。结果提示,慢性粒细胞白血病骨髓间充质干细胞是细胞分化发育的微环境,其基础的机制在于基质金属蛋白酶9对细胞外基质的降解和黏附分子的裂解,改变骨髓微环境对造血干细胞黏附,增殖和分化的支持作用,导致造血干细胞异常增殖和动员,降低了恶变细胞对免疫细胞的敏感性导致免疫逃逸。     

Bone marrow mesenchymal stem cells can be mobilized into peripheral blood by G-CSF in vivo and integrate into traumatically injured cerebral tissue

The efficacy of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) in mobilizing mesenchymal stem cells (MSCs) into peripheral blood (PB) and the ability of PB-MSCs incorporated into injured brain were tested. Colony forming, cell phenotype and differentiation potential of mouse MSCs mobilized by G-CSF (40 μg/kg) were evaluated. Mortality and pathological changes in mice with serious craniocerebral trauma plus G-CSF treatment (40 μg/kg) were investigated. Bone marrow (BM) cells derived from GFP mice were fractionated into MSCs, hematopoietic stem cells (HSCs), and non-MSC/HSCs using magnetic beads and adherent culture. The resultant cell populations were transplanted into injured mice. The in vivo integration and differentiation of the transplanted cells were detected immunocytochemically. The expression of SDF-1 in injured area of brain was tested by Western blot. G-CSF was able to mobilize MSCs into PB (fourfold increase). PB-MSCs possessed similar characteristics as BM-MSCs in terms of colony formation, the expression pattern of CD73, 44, 90, 106, 31 and 45, and multipotential of differentiation. Accumulative total mice mortality was lower in TG group (5/14) than that in T group (7/14). It was MSCs, not HSCs or non-MSC/HSC cells integrated into the damaged cerebral tissue and differentiated into cells expressing neural markers. Increased SDF-1 expression in injured area of brain was confirmed, which could facilitate the homing of MSCs to brain. G-CSF can mobilize MSCs into PB and MSCs in PB can integrate into injured cerebral tissue and transdifferentiated into neural cells and may benefit the repair of trauma.     

当归补血汤载药血清干预后骨髓基质细胞中粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的分泌

背景：实验表明,当归补血汤的有效成分多糖对造血干细胞和造血祖细胞的增殖分化存在显著的促进作用,对造血微环境具有重要的调控作用。 目的：观察当归补血汤载药血清干预后小鼠骨髓基质细胞中粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的分泌状况。 方法：分离骨髓基质细胞,于96孔板培养,在相差显微镜下观察细胞形态和生长状况;将细胞分4组,加含有不同剂量的当归补血汤载药血清进行干预,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性,ELISA法检测粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的表达情况。 结果与结论：当归补血汤载药血清可明显促进骨髓基质细胞的增殖,促进骨髓基质细胞分泌粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3,呈剂量依赖性,含等效剂量载药血清组促增殖作用和促分泌作用优于其他各组,浓度过高可减弱细胞的增殖分泌效应。     

Effects of GM-CSF on the neural progenitor cells

Granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) is a potent hematopoietic cytokine, which stimulates stem cell proliferation in the bone marrow. We now report that GM-CSF receptors expressed on neural progenitor cells and can mediate a biological response in cells to treat with GM-CSF treated neural progenitor cells exhibited a proliferative response and a marked decrease in terminal differentiation to mature neuron or astrocytes. GM-CSF treatment also suppressed neural progenitor cell apoptosis. These findings suggest that GM-CSF can stimulate the proliferation and inhibit the apoptosis of neural progenitor cells to expand the progenitor population, and that GM-CSF has a potential role in neural development or repair.     

体外共培养大鼠骨髓间充质干细胞对肝星状细胞增殖的影响：Cyclin D1与P27表达调控****

背景：在肝纤维化发生发展过程中,肝星状细胞起着关键作用。研究证实骨髓间充质干细胞移植可作为治疗肝纤维化的方法,但其逆转肝纤维化的机制不明。 目的：探讨体外共培养条件下,大鼠骨髓间充质干细胞对肝星状细胞增殖的调控机制。 方法：实验组在半透膜上接种大鼠骨髓间充质干细胞,在6孔塑料培养板上接种肝星状细胞,建立上下双层细胞共培养体系;对照组将大鼠骨髓间充质干细胞更换为成纤维细胞;空白组仅行肝星状细胞单独培养。WST-8法检测肝星状细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测肝星状细胞CyclinD1和P27 mRNA的表达,Western blot检测肝星状细胞CyclinD1和P27蛋白的表达。 结果与结论：与空白组、对照组比较,实验组共培养24,48,72 h肝星状细胞生长抑制率均显著升高(P < 0.01);共培养72 h G0/G1期细胞显著增加(P < 0.01),S期细胞显著减少(P < 0.01),可阻滞肝星状细胞由G0/G1期向S期转换。共培养24 h,实验组CyclinD1 mRNA及蛋白表达开始下调,至72 h时表达量显著低于对照组、空白组(P < 0.01);共培养全过程中各组p27 mRNA的表达无明显差异(P > 0.05),共培养24 h时实验组p27蛋白表达较对照组、空白组均显著上调(P < 0.01)。结果证实大鼠骨髓间充质干细胞能够抑制肝星状细胞的增殖,其机制可能是通过下调CyclinD1表达、上调P27蛋白表达,使细胞周期停滞于G0/G1期实现的。