应用DHPLC筛查人类mtDNA高变区I的异质性

【目的】检测人类mtDNA HVI区的异质性，建立有效的筛查低水平异质性DNA的技术。【方法】扩增人mtDNA的HVI区内269bp的片段，以不同比例混合相差一个碱基的2种DNA片段的PCR扩增产物，配制异质性DNA模型，用变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测，确定最佳检测条件。【结果】应用DHPLC检测HVI区的片段(269bp)，最低可检测出含量为5％的异质性样本。在80例无关个体的mtDNA样本中，共检测到15例具有异质性。【结论】所建立的PCR-DHPLC方法可用于检测mtDNA的异质性。     

应用DHPLC筛查人类mtDNA高变区I的异质性

[目的]检测人类 mtDNA HVI区的异质性,建立有效的筛查低水平异质性 DNA的技术.[方法] 扩增人 mtDNA 的 HVI区内 269 bp的片段,以不同比例混合相差一个碱基的 2种 DNA片段的 PCR扩增产物,配制异质性 DNA模型,用变性高效液相色谱技术 (DHPLC)检测 ,确定最佳检测条件.[结果] 应用 DHPLC检测 HVI区的片段 (269 bp),最低可检测出含量为 5%的异质性样本.在 80例无关个体的 mtDNA 样本中 ,共检测到 15例具有异质性.[结论] 所建立的 PCR-DHPLC方法可用于检测 mtDNA的异质性.     

应用DHPLC筛查黑白头发mtDNA控制区的异质性研究

目的 探讨黑头发和白头发线粒体DNA(mtDNA)控制区的异质性.方法 将人头发mtDNA控制区扩增成5个部分互相重叠的片段,利用已建立的DHPLC技术分析中国汉族正常人与Alzheimer病同个体黑头发和白头发mtDNA控制区的异质性.结果 50例中国汉族正常人同个体中黑头发和白头发mtDNA控制区的异质性为10...     

黑白头发mtDNA控制区的异质性差异研究

目的探讨黑头发和白头发线粒体DNA(mtDNA)控制区的异质性差异。方法提取毛干mtDNA,用PCR技术扩增mtDNA控制区5个目标片段,以变性高效液相色谱技术分析中国汉族正常人与Alzheimer病同个体黑头发和白头发mtDNA控制区目标片段的异质性差异。结果 30～40岁正常人、50～70岁正常人和50～70岁Alzheimer病患者黑头发mtDNA异质性分别为:3.2%、10.0%及16.4%;30～40岁正常人、50～70岁正常人和50～70岁Alzheimer病患者白头发mtDNA异质性分别为:7.2%、20.4%及28.0%,各年龄段正常人及Alzheimer病患者同个体白头mtDNA异质性明显高于黑头发。结论同个体中黑白头发和mtDNA控制区的异质性有明显差异,年龄越大,异质性越明显。     

线粒体DNA异质性检测方法研究进展

线粒体是真核细胞内的重要细胞器,能量生成的场所,参与脂肪酸的合成及某些蛋白质的合成,也是核外惟一的遗传物质。线粒体在生物的生长、发育、代谢、衰老、疾病、死亡以及生物进化等方面都有非常重要的意义。由于线粒体DNA具有母系遗传、拷贝数多、阈值效应、较高的突变率和序列的多样性等特点,因此线粒体DNA异质性在生物学、医学、法医、生物技术等领域有重要的应用。近几年来,mtDNA异质性研究的新成就为揭示许多疾病的发生机制提供了新的线索。现就线粒体DNA异质性检测方法及研究等进行综述。     

The heterogeneity differences in mtDNA control region between black and white hairs.

目的 探讨黑头发和白头发线粒体DNA(mtDNA)控制区的异质性差异.方法提取毛干mtDNA,用PCR技术扩增mtDNA控制区 5 个目标片段,以变性高效液相色谱技术分析中国汉族正常人与Alzheimer病同个体黑头发和白头发mtDNA控制区目标片段的异质性差异.结果 30～40岁正常人、50～70岁正常人和50～70岁Alzheimer病患者黑头发mtDNA异质性分别为:3.2%、10.0 %及16.4%;30～40岁正常人、50～70岁正常人和50～70岁Alzheimer病患者白头发mtDNA异质性分别为:7.2%、20.4%及28.0%,各年龄段正常人及Alzheimer病患者同个体白头mtDNA异质性明显高于黑头发.结论 同个体中黑白头发和mtDNA控制区的异质性有明显差异,年龄越大,异质性越明显.     

人类线粒体DNA异质性在法医学中的研究进展

线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）是存在于细胞质内惟一的核外遗传物质。它是由16569bp组成的双链环状闭合DNA，分为编码区和控制区。它具有一些核DNA无法比拟的特征，如母系遗传、拷贝数高、高突变率、年龄效应、异质性等。而mtDNA异质性由于其在法医领域的双重作用更受到法医工作者的关注。为了使法医工作者正确对待mtDNA异质性在法医领域的应用价值，本文就mtDNA异质性的认定及产生原理、在个体中出现的频率、检测技术等方面的研究状况及应用前景综述如下。     

线粒体DNA异质性检测方法的研究进展

目的探讨线粒体DNA异质性检测方法在法医学中的应用进展。方法本文就线粒体DNA异质性检测方法及研究等进行综合评述。结果mtDNA呈母系遗传,加之其拷贝数多、突变率高、抗腐败能力强。故mtDNA具有极高的法医学应用价值。随着相关技术的发展,有很多文献报道在非编码区检出异质性,并且以一定的频率存在于正常人群中,因此必须正确评估mtDNA在法医常规检案工作中的重要性。结论异质性的检出在很大程度上依赖检测方法的灵敏度,所以选择检出方法就显得非常重要。     

老年黄斑变性患者线粒体DNA突变及氧化磷酸化功能检测与分析

目的 :探讨老年黄斑变性 (age relatedmacularde generation ,AMD)与线粒体DNA(mitochondrialDNA ,mtD NA)突变及氧化磷酸化功能的相关性 .方法 :选择湿性AMD患者 2 6例 ,干性AMD患者 10例及正常对照者 2 0例 .采集外周血细胞 ,抽提DNA ,检测mtDNA缺失和mtDNA 32 4 3点突变 ,测定电子传递链酶复合物Ⅰ和复合物Ⅳ活性 .结果 :湿性AMD组 2 6例中 ,有 4例检出大小分别为 3.6 7,5 .0 0和 5 .2 0kb的mtDNA多重缺失 ;3例检出 5 .0kb和 5 .2kb的双重缺失 ;2例检出 3.6 7kb的单一缺失 .各组均未检出mtDNA32 4 3点突变 .复合物Ⅰ活性均值湿性AMD组、干性AMD组与对照组分别为 (16 .5 3± 7.2 8) ,(17.2 8± 8.0 6 )和 (18.38±5 .5 3)nmol·min-1·mg-1(P >0 .0 5 ) ;复合物Ⅳ活性均值分别为 (70 .2 5± 2 6 .33)、(92 .13± 30 .6 9)和 (99.13± 32 .11)nmol·min-1·mg-1,湿性AMD组活性较其他两组显著降低 (P <0 .0 5 ) .结论 :①湿性AMD患者体内可能存在较高频率的mtDNA多重缺失 ;②AMD发病可能与母系遗传而来的mtD NA 32 4 3点突变无关 ;③湿性AMD组电子传递链酶复合物Ⅳ活性降低 ,可影响组织氧化磷酸化功能     

线粒体DNA A3243G点突变的临床异质性表现

目的探讨线粒体DNA A3243G点突变的临床表现特点.方法以25例临床怀疑为线粒体病,经血或肌肉线粒体DNA检查证实有A3243G点突变的线粒体脑肌病患者为研究对象,分析其临床表现、脑影像学特点、血乳酸水平和肌肉病理检查结果.结果基因检测证实25例患者均存在比例不同的线粒体DNA A3243G点突变,但临床表型有很大不同,其中19例为线粒体脑肌病伴乳酸血症和卒中样发作(MELAS),2例为无法分类的线粒体脑病,2例为松软儿,1例为Kearns-Sayer综合征(KSS),1例为线粒体胃肠肌病.大部分患者脑影像学检查可见病灶,肌肉活检可见蓬毛样红纤维改变,所有患者均有血乳酸水平增高.结论线粒体DNA A3243G点突变的临床表现和脑影像学均呈高度的异质性.对表现为多系统受累的患者,如果同时合并高乳酸血症,就应考虑线粒体病的可能,应进行线粒体DNA突变的检查以明确诊断.     

七宝美髯丹对60岁以上肝皆不足老年人黑白头发mtDNA再质性影响

目的：研究七宝美髯丹对60岁以上肝肾不足老年人黑白头发mtDNA异质性影响。方法：选择mtDNA高突变位点的编码区和控制区的2片段进行PCIK扩增,以DHPLC技术分析黑、白头发mtDNA目标片段在七宝美髯丹治疗组和对照组异质性差异。结果：七宝美髯丹治疗组黑头发在纳入观察时、纳入观察后30d和60d时mtDNA出现异质性比率和对照组比较均没有统计学差异;七宝美髯丹治疗组白头发在纳入观察后30d和60d时mtDNA出现异质性比率和对照组比较有下降,但没有统计学差异。以mtDNA编码区和控制区2个区域共60个mtDNA片段发生异质性总和数进行七宝美髯丹治疗组和对照组比较,纳入观察后60d,二者有统计学差异。结论：七宝美髯丹能减轻60岁以上肝肾不足老年人白头发mtDNA异质性。     

变性高效液相色谱法在FALS突变位点检测中的应用

目的检测一个肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn su-peroxide dismutase,SOD1)基因的突变位点,同时观察变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)的实用价值.方法对PCR-SSCP检测阴性的外显子,应用DHPLC法及DNA直接测序技术,再次进行SOD1基因的突变位点检测.结果经DHPLC检测,家系成员Ⅲ1SOD1基因的第4外显子有突变峰,DNA直接测序证实存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变,使编码的氨基酸由谷氨酸变为甘氨酸.结论DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段.     

变性高效液相色谱检测乳腺癌患者血浆线粒体D环HVR2突变

目的 :探讨扩增乳腺癌患者血浆线粒体DNA(mito chondrialDNA ,mtDNA)的可行性 ,研究乳腺癌患者血浆线粒体DNA基因突变检测对于乳腺癌早期诊断及其预后的意义 .方法 :选取乳腺癌患者 10例 ,正常健康者 10人 ,提取血浆DNA ,采用聚合酶链反应 (PCR)扩增血浆线粒体DNA的D环HVR2 ,用两对引物扩增 ,用变性高效液相色谱法 (DHPLC)对产物进行突变筛选 .结果 :10例乳腺癌患者血浆提取的DNA能扩增出 11个目的片断 ,DHPLC检测到有 4例突变 ,正常健康者 10人扩增出 1例 .结论 :乳腺癌患者血浆DNA扩增与正常组有明显差异 (P <0 .0 5 ) ,血浆线粒体DNA基因突变检测对于乳腺癌早期诊断及预后有重要意义     

高效液相色谱法测定人血浆中汉防己甲素

本文建立了人血浆中汉防己甲素的高效液相色谱测定法。采用C18柱 ,以含 0 0 3%三乙胺的甲醇∶水 (80∶2 0 )为流动相 ,检测波长 2 82nm ,安定为内标 ,样品用乙醚提取。汉防己甲素线性范围 0 2 89～ 4.6 18μg·ml-1,平均加样回收率 95 8% ,日内及日间变异少于 5 %。方法简便、快速、可靠 ,可用于汉防己甲素的生物样本分析。     

海南黎族人缺血性脑卒中与MTHFR基因多态性关系的研究

目的探讨N5,N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与海南黎族缺血性脑卒中(IS)的关系。方法运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测87例海南黎族IS组及83例对照组的MTHFR基因多态性。结果IS患者的MTHFR基因TT、CT、CC基因型频率分别为8.0%、64.4%、27.6%,T等位基因频率为40.2%,C等位基因频率59.8%;对照组的TT、CT、CC基因型频率分别为3.6%、39.8%、56.6%,T等位基因频率为23.5%,C等位基因频率76.5%,两组的TT基因型及T等位基因频率比较差异有显著性意义。结论MTHFR基因多态性与海南黎族IS有一定关系,MTHFR基因可能是IS的易感基因,对人群进行大规模筛选,早期对TT和CT基因型的人群进行维生素干预,对预防IS的发生有一定价值。     

反相高效液相色谱法测定人血浆中薁磺酸钠浓度

目的建立薁磺酸钠血药浓度测定的高效液相色谱法.方法以对二甲氨基苯甲醛为内标,甲醇为血浆蛋白沉淀液,上清液经40℃真空干燥恒温箱挥干,100 μl流动相溶解,20μl进样.以Water symmetry C18柱(3.9×150 mn,5μm)为分析柱.流动相为甲醇:0.05 mol/L磷酸缓冲液=57:43(pH7.0),流速1.0 ml/min,柱温25℃,检测波长292.5 nm.结果血药浓度线性范围25～6 400ng/ml(n=9,r=0.996 6),最低检测浓度25ng/ml(S/N＞3),相对回收率90.58%～111.00%,日内和日间RSD分别为0.2%～5.4%和2.4%～6.0%.结论所建方法简便、准确、重现性好、灵敏度高,适用于薁磺酸钠血药浓度的实际测定.     

广东省家族性和早发性乳腺癌BRCA1基因突变的相关研究

目的 研究广东省家族性和早发性乳腺癌患者的BRCAI基因突变情况及其与ER、PR、HER2和ALN等表达的关系.方法 抽取广东省58例家族性和早发性乳腺癌患者的外周静脉血,提取基因组DNA,应用PCR技术对BRCA1基因的全部编码序列进行扩增,突变分析由变性高效液相色谱分析(DHPLC)进行预筛后,进行DNA测序方法证实.免疫组化法检测患者中ER、PR、HER2和ALN的表达情况,并分析其表达与BRCA1基因突变的关系.结果 58例乳腺癌患者中,2例年龄<35岁的患者发生BRCA1致病突变,而且其中1个为新发现的拼接点突变(331G→A).BRCA1基因突变位点与ER、PR、HER2和ALN的表达无关.结论 广东省早发性乳腺癌患者和家族性乳腺癌患者的BRCA1基因突变的发生率明显低于西方围家;331G→A致病突变位点可能是广东省早发性乳腺癌的特有突变位点;基因突变位点可能与ER、PR、HER2和ALN等组织学表达无关.