胰岛素受体底物-1基因5'-调控区的一种变异对基因表达的影响

目的研究2型糖尿病患者胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因5'-调控区CAG富含区的一种变异对基因表达活性的影响及其机制.方法构建荧光素酶(luciferase,luc)报告基因重组体pGL2.P-T3和pGL2.P-T5,T3和T5分别为野生型和缺失型等位基因.重组体与pSV-β-Galactosidase Control Vector共转染Hela细胞,通过luc活性分析检测基因的转录活性;采用凝胶滞留和DNA足纹技术,确定DNA调节序列和Hela细胞核蛋白的相互作用.结果T5的相对活性低于T3[(9.98±1.40)%和(7.76±1.05)%,P＜0.05];凝胶滞留实验表明与核蛋白作用后,T3和T5在凝胶上形成一条迁移率相同的滞留区带;T5有2个反式作用因子结合位点,CGCGCCCGCGGGCGGCGGC和GGGCGGCTGGTGGCGGCTG,与T3相同.结论尽管T5的变异未改变Hela细胞核蛋白提取物的DNA结合位点,但是它引起的转录活性的下降可能是携带者2型糖尿病发生发展的重要因素.     

胰岛素受体底物-1基因5′-调控序列CAG富含区碱基缺失/插入的研究

研究胰岛素受体底物 1(IRS 1)基因 5′ 调控序列与 2型糖尿病的关系。采用PCR SSCP技术扫描 76例 2型糖尿病患者和 78例正常对照IRS 1基因 5′ 调控区 ,结合应用PCR 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法 ,检测IRS 1基因 5′ 调控序列CAG富含区的插入 /缺失多态性 ;以检获的正常和变异样品基因组DNA为摸板 ,用高保真pfuDNApolymerase进行扩增 ,采用亚克隆技术 ,将扩增片段分别插入pCATBasic质粒中。通过限制性内切酶酶切并结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染分析后 ,根据迁移率不同筛选含有不同等位基因的重组质粒并进行测序。结果发现人IRS 1基因 5′ 调控区CAG富含区存在以三核苷酸为单位的多种插入 /缺失变异。共检测出 7种基因型和 6种等位基因 (T1～T6 ) ,其中等位基因T5 ,T6仅见于 2型糖尿病组。     

花生油对2型糖尿病大鼠海马CA1区胰岛素受体及胰岛素受体底物表达的影响

目的通过观察2型糖尿病大鼠海马CA1区胰岛素受体(insulin receptor,InsR)、InsR底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)、InsR底物-2(IRS-2)表达的改变,研究花生油对2型糖尿病大鼠海马神经元InsR信号转导通路的影响,探讨花生油在防治糖尿病脑病中的作用及相关机制。方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(C组)、2型糖尿病组(T2DM组)、2型糖尿病给予2mL花生油组(T2DM+2mL组)及2型糖尿病给予5mL花生油组(T2DM+5mL组)。其中C组大鼠给以正常饮食喂养,其他3组大鼠给以高脂饮食喂养。2个月后,按25mg/kg体质量腹腔注射链脲佐菌素制成2型糖尿病模型,T2DM组、T2DM+2mL组及T2DM+5mL组大鼠继续给予高脂饮食。糖尿病造模1个月后处死全部大鼠,行脑冰冻切片,用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马CA1区InsR、IRS-1和IRS-2的表达。结果①T2DM组大鼠海马CA1区InsR表达比C组明显降低(P<0.05),T2DM+5mL组大鼠海马CA1区InsR表达明显高于未给予花生油的T2DM组(P<0.05)。②T2DM组大鼠海马CA1区IRS-1表达显著低于C组(P<0.05),T2DM+2mL组及T2DM+5mL组大鼠海马CA1区IRS-1表达均明显高于未给予花生油的T2DM组(P<0.05)。③T2DM组大鼠海马CA1区IRS-2表达比C组明显降低(P<0.05),T2DM+5mL组大鼠海马CA1区IRS-2表达明显高于未给予花生油的T2DM组(P<0.05)。结论 2型糖尿病大鼠海马CA1区存在胰岛素信号转导通路障碍,这可能是2型糖尿病脑病发生的原因之一。花生油可改善2型糖尿病大鼠海马区内胰岛素信号转导通路相关蛋白的表达,因此,花生油具有一定的保护大鼠糖尿病脑病的作用。     

胰岛素受体底物—1基因5’—调控序列CAG富含区域基缺失／插入的研究

研究胰岛素受体底物-1（IRS-1）基因5’-调控序列与2型糖尿病的关系。采用PCR-SSCP技术扫描76例2型糖尿病患者和78例正常对照IRS-1基因5’-调控区,结合应用PCR-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法,检测IRS-1基因5’-调控序列CAG富含区的插入/缺失多态性;以检获的正常和变异样品基因组DNA为模板,用高保真pfu DNA polymerase进行扩增,采用亚克隆技术,将扩增片段分别插入pCAT Basic质粒中。通过限制性内切酶酶切并结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染分析后,根据迁移率不同筛选含有不同等位基因的重组质粒并进行测序。结果发现人IRS-1基因5’-调控区CAG富含区存在以三核苷酸为单位的多种插入/缺失变异。共检测出7种基因型和6种等位基因（T1-T6）,其中等位基因T5,T6仅见于2型糖尿病组。     

水杨酸钠对胰岛素抵抗大鼠胰岛素受体底物-1的影响

目的 探讨抗炎药水杨酸钠对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性的影响及其作用机制.方法 分别给大鼠静脉输注脂肪乳+肝素,脂肪乳+肝素+水杨酸钠和生理盐水7 h,并在输注的最后2 h,行清醒状态高胰岛素-正血糖钳夹试验,测定血浆葡萄糖、游离脂肪酸(FFA)、胰岛素和C-肽水平,检测肝脏、肌肉中胰岛素受体底物-1(IRS-1)及307位丝氨酸磷酸化的IRS-1表达.结果 输注脂肪乳大鼠葡萄糖输注率(GIR)是输注生理盐水大鼠的45%,水杨酸钠可使GIR提高1.3倍(P<0.01).脂肪乳输注组大鼠肝脏及肌肉中307位丝氨酸磷酸化的IRS-1分别为生理盐水输注组大鼠的3倍和3.8倍(P<0.001),输注水杨酸钠,肝脏、肌肉307位丝氨酸磷酸化的IRS-1下降45%、20%(P<0.05).结论 FFA增高引起肝脏及肌肉中307位丝氨酸磷酸化的IRS.1水平增高.可能是导致胰岛素抵抗发生的机制之一,应用水杨酸钠,大鼠肝脏及肌肉组织中IRS.1丝氨酸磷酸化水平下降,胰岛素抵抗改善.抗炎药物水杨酸钠可能通过抑制FFA引起的IRS-1丝氨酸磷酸化,而发挥改善胰岛素抵抗的作用.     

胰岛素受体底物—1基因3′非翻译区的突变与中国人2型糖尿病的关系

目的：研究胰岛素受体底物－1（IRS－1）基因3′非翻译区的突变与中国2型糖尿病的关系。方法：采用PCR－SSCP技术扫描120例中国2型糖尿病患者和120例正常对照的IRS－1基因3′非翻译区序列，所有SSCP变异的样品进行DNA测序分析。结果：SSCP分析存在假阳性结果。测序未发现有基因突变。结论：IRS－1基因3′非翻译区的突变不是引起中国人2型糖尿病的重要遗传因素。     

胰岛素受体底物-1/-2与胰岛素信号转导

胰岛素受体底物(IRS)是胰岛素信号传递的重要介质,其中IRS-1和IRS-2在胰岛素信号转导通路中的作用尤为重要。IRS-1和IRS-2在体内多个组织中均有表达,其中在胰岛β细胞、肝脏、骨骼肌和脂肪组织中表达最为丰富。近年来国内外在对IRS-1和IRS-2的研究中发现,无论是糖尿病患者或是模型,其胰岛β细胞、肝脏、骨骼肌和脂肪组织中IRS-1和IRS-2的表达均有改变,且变化程度各有不同。     

胰岛素受体底物-1基因3′非翻译区的突变与中国人2型糖尿病的关系

目的 :研究胰岛素受体底物 1(IRS 1)基因 3′非翻译区的突变与中国 2型糖尿病的关系。方法 :采用PCR SSCP技术扫描 12 0例中国 2型糖尿病患者和 12 0例正常对照的IRS 1基因 3′非翻译区序列 ,所有SSCP变异的样品进行DNA测序分析。结果 :SSCP分析存在假阳性结果。测序未发现有基因突变。结论 :IRS 1基因 3′非翻译区的突变不是引起中国人 2型糖尿病的重要遗传因素     

冠心病患者胰岛素受体底物-1基因多态性的研究

目的　探讨胰岛素受体底物 - 1基因多态性是否与冠心病有关联。方法　应用多聚酶链反应 ( PCR)对成都地区汉族 113例冠心病患者及 194例正常对照者胰岛素受体底物 - 1基因酶切位点的限制性片段长度多态性( RFL P)进行研究。血脂用酶法测定。结果　冠心病组和正常对照组胰岛素受体底物 - 1基因均以 GG基因型为主 ,其频率分别为 0 .960和 0 .985。正常对照组和冠心病组胰岛素受体底物 - 1基因 R等位基因频率分别为 0 .0 15和0 .0 40 ,具有统计学意义 ( P=0 .0 5 )。冠心病组中具有 G/R基因型者血清 TC水平较具有 G/G基因型者显著升高( P<0 .0 5 ) ,具有 G/G基因型者血糖水平较具有 G/R基因型者显著升高 ( P<0 .0 5 )。结论　胰岛素受体底物 - 1基因多态性与中国人冠心病有一定关联。冠心病患者胰岛素受体底物 - 1基因 G/R基因型对血清胆固醇的升高有一定影响 ,而 G/G基因型对血糖的升高有一定影响     

姜黄素对阿尔茨海默病模型小鼠胰岛素受体底物-1的影响

目的 观察姜黄素对阿尔茨海默病模型APP/PS1双转基因小鼠胰岛素受体底物-1(IRS-1)和磷酸化胰岛素受体底物-1(p-IRS-1)表达的影响,探讨姜黄素神经保护作用机制.方法 将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组、姜黄素高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量组,并以同窝阴性小鼠作为正常对照组.连续灌胃6个月后,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法进行检测.结果 免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区IRS-1阳性细胞较正常组明显增加(P＜0.01),与模型组相比,各干预组IRS-1阳性细胞数减少(P＜0.05或P＜0.01),p-IRS-1结果与IRS-1结果相反.Western blot检测海马IRS-1和p-IRS-1的蛋白表达结果与免疫组化检测结果一致.RT-PCR检测IRS-1 mRNA表达结果与免疫组化和Westernblot结果一致.结论 姜黄素可以使APP/PS1双转基因小鼠海马增加的IRS-1和减少的p-IRS-1得以恢复,并调节IRS-1 mRNA表达,改善APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导,提示姜黄素可能通过调节胰岛素信号转导机制发挥抗阿尔茨海默病作用.     

胰岛素受体底物-1与骨代谢

胰岛素受体底物（insulinreceptorsubstrate,IRS）是胰岛素信号传导通路中受体后水平的重要信号蛋白。IRS-1对骨骼生长、骨转换以及骨折愈合等均具有重要作用,为代谢性骨病和骨质疏松的防治提供了新思路。     

胰岛素受体、胰岛素受体底物-2在胰岛β细胞中的作用

长期以来胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能障碍被认为是2型糖尿病发病的主要机制。胰岛素抵抗是胰岛素作用的主要靶器官组织对一定剂量的胰岛素所产生的生理效应低于正常水平的一种状态。胰岛素作用是通过胰岛素信号转导途径的正常传导来完成的。最近转基因鼠的研究表明，胰岛β细胞的功能受胰岛素信号传导途径的调节。胰岛素信号转导途径目前已知至少有两条，     

中国人2型糖尿病患者胰岛素受体底物—1基因变异的筛选研究

目的：研究胰岛素受体底物－1（IRS－1）基因变异与2型糖尿病（NIDDM）发生的关系。方法：采用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）分析方法筛选了68例中国人（来自长沙的病例）2型糖尿病患者和68例正常对照的胰岛素受体底物－1基因的＋1700－＋4437bp片段。结果：中国人2型糖尿病患者胰岛受体底物－1基因变异的发生频率明显高于政党对照（38．2％vs.7．4％，X^2=18．42，P＜0．01）。结论：胰岛素受体底物－1基因的核苷酸变异可能与中国人（来自长沙的病例）2型糖尿病的发生相关。     

胰岛素受体底物-1基因多态性与多囊卵巢综合征

目的 通过检测多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）病人的胰岛素敏感等指标,观察是否存在胰岛素抵抗,对ＰＣＯＳ病人胰岛素受体底物－１（ＩＲＳ－１）基因多态性进行分析,探讨ＩＲＳ－１基因与ＰＣＯＳ的关系,判断其可否作为ＰＣＯＳ胰岛素抵抗的致病基因。方法采用ＰＣＲ技术检测正常人与ＰＣＯＳ病人ＩＲＳ－１的等位基因与基因频率,据不同的基因型（ＧＧ、ＧＡ或ＡＡ）将病人分为３组,比较各组的体重指数、腰臀围比例、黄体生成     

新疆博州蒙古族胰岛素受体底物-1基因与高血压病的关系

目的：研究新疆博州蒙古族族胰岛素受体底物-1（IRS-1）G972R多态性同原发性高血压的关系。方法：选择蒙古族原发性高血压患者182例及正常对照者375例，测定身高、体重、收缩压、舒张压、空腹血糖、血浆胆同醇及甘油三酯。提取DNA，采用链式反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术测定IRS-1基因G972R多态性。结果：蒙古族原发性高血压男性比例、年龄、BMI、血糖、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白明显高于对照组。2组IRS-1 G972R多态GG、GR基因型频率差异无统计学意义（χ^2=0．576，P〉0．05）；2组G、R等位基因频率差异无统计学意义（χ^2=0．571，P〉0．05）。GG、GR基因型间体重指数、血糖及血脂水平无明显差异。结论：IRS-1基因G972R多态性可能与新疆博州蒙古族原发性高血压无关。     

营养因素对小鼠肌肉胰岛素受体及其底物基因表达的影响

研究不同膳食组成对不鼠肌肉胰岛素受体及其相关底物基因表达的影响。上鼠分别饲以高脂饮食,高脂加谷氨酰胺饮食,高脂３个月后补加谷氨酰胺饮食以及正常对照饮食,实验期为５．５个月。以反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）分别测定肌肉胰岛素受体及其受体底物１（ＩＲＳ－１）、受体底物２（ＩＲＳ－２）以及磷酸肌醇３激酶（ＰＩ－３ｋｉｎａｓｅ）ｍＲＮＡ水平。结果高脂可使小鼠肌肉ＩＲ,ＩＲＳ－１,ＩＲＳ－２,ＰＩ－３     

雌激素对前成骨细胞胰岛素受体底物-1的影响

目的:观察前成骨样细胞(MC3T3-E1细胞)分化过程中17β-雌二醇对胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)的影响。方法:应用10mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50mg/L抗坏血酸诱导小鼠MC3T3-E1细胞分化成熟,分别在0,6,12,18,24,30d收集细胞。17β-雌二醇干预,用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测干预组和对照组细胞IRS-1mRNA和蛋白的表达,比较两组细胞IRS-1表达量的变化。结果:在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中,IRS-1 mRNA和蛋白的表达在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中逐渐增高。结论:IRS-1可能在17β-雌二醇诱导的骨转换过程中起着重要作用。     

NIDDM患者胰岛素受体底物-1基因突变研究

目的：探讨胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因Gly971Arg突变与非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)的相关性。方法：采用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法，对60例NIDDM患者和30例正常个体IRS-1基因Gly971Arg突变进行筛查。结果：60例NIDDM患者中检测出2例Gly971Arg突变者，30例正常人中没有发现突变者。结论：IRS-1基因Gly971Arg突变在NIDDM患者中出现频率较正常人略高，Gly971Arg突变对IRS-1活性的影响及其在NIDDM发病中的作用有待进一步研究。     

妊娠期糖尿病患者胰岛素受体底物-1 1223丝氨酸位点基因突变的研究

目的 研究妊娠期糖尿病(GDM)患者胰岛素受体底物(IRS)-1 1223丝氨酸位点的基因突变,验证其与GDM之间的相关性.方法 提取32例GDM患者及20例正常孕产妇胎盘组织DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)产物直接测序法检测IRS-1 1223丝氨酸位点基因突变.结果 病例组及对照组所有受检样本均扩增出目的片段,但经测序未发现一例IRS-1 1223丝氨酸位点的基因突变.结论 IRS-1 1223丝氨酸位点的基因突变可能不是该地区GDM患者的主要发病机制.     

新疆博尔塔拉蒙古自治州哈萨克族胰岛素受体底物-1基因G972R多态性与原发性高血压关联

目的 研究哈萨克族胰岛素受体底物-1(IRS-1)G972R多态性同原发性高血压的关系.方法 抽取哈萨克族原发性高血压及正常对照测定身高、体重、收缩压、舒张压、空腹血糖、血浆胆固醇、甘油三脂.提取DNA,链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术测定IRS-1基因G972R多态性.结果 哈萨克族原发性高血压和正常人群IRS-1 G972R多态GR,GR基因型频率之间差异无显著性(0.97,0.04及0.97,0.03,X2＝0.240,P＞0.05);两组中G及R等位基因频率差异无显著性(0.98,0.02及0.99,0.01,P＞0.05).未发现GG,GR基因型间体重指数、血糖及血脂水平有显著性差异.结论 IRS-1基因G972R多态性可能与新疆博尔塔拉蒙古自治州哈萨克族原发性高血压无关.