下调CD36在心肌中的表达对肥胖小鼠心肌纤维化和凋亡的影响

目的 采用RNA干扰的方法下调小鼠心肌CD36的表达,研究其对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响。方法 4周龄的雄性C57BL/6小鼠,随机分为3组,即正常对照(N-mock)组、肥胖对照(O-mock)组及肥胖干预(O-CD36)组,采用高脂饮食诱导肥胖模型;6周龄时,向O-CD36小鼠心肌内注射靶向CD36的慢病毒,对照组小鼠则注射靶向无关基因GFP的慢病毒,以下调相应基因的表达。16周龄时,取小鼠左心室组织,行Masson染色检测心肌纤维化程度;行TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率;采用real-time RT-PCR和Western blot法检测心肌组织中与纤维化、凋亡相关基因的mRNA和蛋白表达。结果 RNA干扰使肥胖小鼠心肌组织中CD36的表达下调。组织学染色和分子生物学结果均证实,肥胖小鼠较正常饮食小鼠心肌组织纤维化程度和心肌细胞凋亡率增加;下调CD36的表达在一定程度上抑制了上述病理改变。结论 下调CD36在心肌中的表达可抑制肥胖所导致的心肌纤维化,减少心肌细胞凋亡,是一种潜在的治疗肥胖相关心脏重构的策略。     

干扰CD36的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响

目的 研究干扰心肌组织中脂肪酸转位酶CD36的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响。方法 4周龄的雄性C57小鼠,随机分为正常对照组（N-mock）、肥胖对照组（O-mock）及肥胖干预组（O-CD36）,采用高脂饮食诱导肥胖。6周龄时,经心肌注射靶向CD36（O-CD36）或靶向无关基因（N-mock、O-mock）的重组慢病毒,以下调心肌组织中目标基因的表达。16周龄时,取小鼠左心室组织,检测CD36和肌质网钙泵（SERCA2a）的mRNA和蛋白表达;并分离单个心室肌细胞,使用活细胞工作站检测心肌细胞钙瞬变。结果 肥胖小鼠心肌组织中CD36的表达较正常小鼠无显著改变,慢病毒介导的RNA干扰显著下调了CD36的表达。肥胖引起心肌细胞SERCA2a的蛋白表达降低及肌质网钙处理能力的下降;下调CD36的表达增加了SERCA2a的含量,并改善了钙调控异常。结论 下调心肌组织中CD36的表达可改善肥胖所引起的心肌细胞钙调控异常。     

下调心肌CPT1b的表达对肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响

目的 研究干扰心肌组织中肉毒碱脂酰转移酶-1b（CPT1b）的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响。方法 4周龄的雄性C57小鼠,随机分为正常对照组（N-mock）、肥胖对照组（O-mock）及肥胖干预组（O-CPT1b）,采用高脂饮食诱导肥胖。6周龄时,经心肌分别注射靶向CPT1b（O-CPT1b）或靶向无关基因（N-mock、O-mock）的重组慢病毒,以下调目标基因的表达。10周后,取小鼠左心室组织检测RNA干扰的效率;采用Western blot法检测左心室组织中肌浆网钙泵（SERCA2a）的蛋白表达;并分离单个心室肌细胞,使用活细胞工作站检测心肌细胞钙瞬变。结果 肥胖小鼠心肌组织中CPT1b的表达增加,慢病毒介导的RNA干扰显著下调其表达。肥胖引起心肌细胞SERCA2a的蛋白表达降低及肌质网钙处理能力的下降,下调CPT1b的表达增加了SERCA2a的含量,并改善了钙调控异常。结论 下调心肌组织中CPT1b的表达可改善肥胖所导致的心肌细胞钙调控异常。     

MicroRNA下调SiHa中CD147的表达及对其肿瘤生物学活性的影响

目的:探讨下调宫颈癌细胞系SiHa中CD147蛋白表达对肿瘤细胞增殖成瘤性等生物学活性的影响。方法:构建重组质粒pSilencer 4.1-CMV neo/CD147 siRNA1、2,稳定转染至宫颈癌细胞系SiHa,采用半定量RT-PCR法、Western blot法检测干扰后细胞CD147及凋亡相关基因Bcl-2、caspase-3 mRNA及蛋白的表达;运用MTT法检测干扰后肿瘤细胞增殖变化;裸鼠成瘤实验分析肿瘤细胞CD147蛋白表达下调后的成瘤性。结果:与对照组相比,转染了pSilencer 4.1-CMV neo/CD147 SiRNA 1、2的SiHa中CD147及Bcl-2的mRNA、蛋白表达水平有显著下调,活性caspase-3表达增加,肿瘤增殖活性下降,裸鼠成瘤实验显示干扰后肿瘤细胞成瘤性及癌肿大小均低于对照组。结论:SiRNA转染能有效抑制宫颈癌细胞系SiHa中CD147的表达,且能抑制肿瘤细胞增殖能力,肿瘤的成瘤能力亦明显下降。     

膜糖蛋白CD36缺失对小鼠胰岛素抵抗的影响

目的:研究膜糖蛋白CD36缺失对C578L/6小鼠胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)的影响.方法:14周高脂饮食喂养的野生型C57BL/6小鼠和CD36基因敲除(CD36KO)小鼠,每组7只,分别进行糖耐量,胰岛素耐量和胰岛素释放试验,以及血清中甘油三酯(Triglycefide,TG)和游离脂肪酸(Free fat acid,FFA)的测定.结果:与野生型C57BL/6相比,CD36KO小鼠血糖水平增高,糖耐量实验异常,胰岛素释放曲线延迟,血清中TG((80±28.74)vs(36±18.88)mg/dl,P＜0.05)和FFA((13.61±1.08)vs(0.8±0.06)mmol/L,P＜0.05)水平增加.结论:CD36缺失可以促进小鼠IR.     

活血降糖饮对肥胖大鼠摄食行为的调节作用及海马CD36表达的影响

目的研究活血降糖饮对肥胖和胰岛素抵抗大鼠摄取膳食脂肪偏好的影响并探讨可能的机制。方法通过高脂高热卡饮食诱导肥胖和胰岛素抵抗大鼠模型,将模型大鼠分为模型组、中药组、二甲双胍组,另设正常对照组。药物干预后检测血脂、血糖及血清胰岛素,并通过双瓶喜好实验检测大鼠对膳食脂肪的偏好,通过免疫印迹方法检测大鼠海马组织CD36蛋白表达。结果与模型组比较,各治疗组大鼠体重、血脂、血糖、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均明显改善,对膳食脂肪的偏好明显降低,海马组织CD36蛋白表达明显下调。结论活血降糖饮的干预可降低肥胖和胰岛素抵抗大鼠在摄食行为中对膳食脂肪的偏好,其作用机制可能与下调海马组织CD36蛋白表达有关。     

葡萄糖对胰岛β细胞CD36表达的影响

目的：观察不同浓度的葡萄糖对胰岛β细胞脂质含量以及脂肪酸转位酶（CD36）表达的影响。方法：分别以5、10、15、20、253、0 mmol/L葡萄糖孵育胰岛β细胞24 h后,测定细胞内甘油三脂（TG）含量及CD36基因表达。结果：（1）在高糖环境下,细胞内TG含量呈浓度依赖性增加。（2）高糖对CD36的基因表达亦有明显的浓度依赖性。结论：高糖对胰岛β细胞CD36表达的影响可能在脂质异位沉积和脂毒性中有着重要的意义。     

活性氧簇诱导硬皮病小鼠模型时效性的基础研究

目的应用活性氧簇(ROS)成分次氯酸(HCl O)构建硬皮病小鼠动物模型,观察其皮肤纤维化和肺间质病变发生的时效特点。方法 36只6周龄雌性Balb/c小鼠随机平均分至造模组和对照组。造模组随机分3组,每组6只,分别予小鼠背部中央区皮肤皮下注射HCl O 300μl,每日1次,分别持续4、5和6周;对照组随机分3组,每组6只,注射等量PBS,1次/日,分别持续4、5和6周。注射时间结束2周后处死小鼠,取注射部位周围、腹部皮肤及小鼠肺组织进行HE染色和Masson染色,镜下观察和测定各组皮肤厚度、胶原纤维含量,新鲜皮肤组织测定羟脯氨酸含量。结果 3组对照组(4、5、6周)小鼠背部和腹部皮肤均未出现表真皮层增厚和弹性降低,3组间皮肤厚度比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,连续注射4周HCl O的造模组小鼠背部均出现弥漫增厚,弹性降低,真皮层明显增厚,腹部皮肤真皮层有所增厚;连续注射6周HCl O的小鼠皮肤厚度较4周显著增加(P<0.05),胶原纤维增粗更加明显,并伴有纤维断裂,真皮层炎性细胞浸润,真皮血管壁增厚甚至闭塞。与对照组相比,连续注射4周的造模组小鼠未见明显肺间质病变,而6周造模肺组织出现肺泡间隔增厚,其间成纤维细胞增生,小血管壁增厚等纤维化表现。3组对照组(4、5、6周)小鼠之间背部皮肤的Masson染色胶原纤维组织化学指数比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,造模组背部皮肤的Masson染色胶原纤维组织化学指数升高,(P<0.05),且6周造模组的表达水平高于4周造模组,(P<0.05)。3组对照组(4、5、6周)小鼠之间背部皮肤的羟脯氨酸含量比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,造模组背部皮肤的羟脯氨酸含量升高(P<0.05),且6周造模组的表达水平高于4周造模组,(P<0.05)。结论ROS构建的硬皮病小鼠动物模型随诱导时间的延长可出现注射区域外皮肤弥漫纤维化和硬皮病肺间质病变,该模型更加符合硬皮病皮肤和肺部病理改变特点。     

Alu RNA及其突变体真核表达质粒构建以及对A549细胞活性氧簇产生的影响

目的：从氧化应激的A549细胞鉴定Alu RNA表达,构建Alu RNA及其2种功能缺失突变体的真核表达质粒,探讨过表达Alu RNA及其突变体对细胞氧化应激的影响。方法：设计Alu RNA特异性引物,H2O2应激A549细胞,RT?PCR扩增目的片段,通过定向克隆、点突变等方法构建pcDNA3.0?Alu（pAlu）重组质粒、右臂缺失突变体pcDNA3.0?Alu?left arm（pAlu?LA）、G25C突变体pcDNA3.0?Alu G25C（pAlu?M）;转染A549细胞,DCFH?DA检测活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）产生水平。结果：从应激的A549细胞成功扩增了Alu分子,重组的真核表达质粒pAlu、pAlu?LA、pAlu?M经酶切及DNA测序鉴定符合预期;pAlu、pAlu?LA转染显著促进A549细胞ROS产生;与pAlu相比,pAlu?M转染诱导产生的ROS显著降低。结论：成功克隆了氧化应激刺激下A549细胞产生的Alu RNA及其2种功能缺失突变体的真核表达质粒,体外实验显示Alu RNA通过翻译水平调控促进A549细胞ROS产生。     

急性脑出血患者外周血单核细胞CD36、CD54表达的临床意义

目的观察急性脑出血（ICH）患者外周血单核细胞CD36、CD54表达的变化及外周血血常规的特点。方法选择急性ICH患者（ICH组）31例及健康体检者（对照组）27例,检测血常规,用流式细胞技术检测外周血单核细胞CD36、CD54表达。结果与对照组比较,ICH组CD54表达率、白细胞计数、中性粒细胞比例均升高（P〈0．01）。发病72hICH组CD36表达率,显著高于对照组（P〈0．01）。治疗1周后外周血单核细胞CD54表达率仍明显高于对照组（P〈0．01）。结论ICH患者外周血单核细胞CD54表达上调,可能与白细胞计数升高共同参与IcH发生、发展,可作为ICH预后观察指标。     

活性氧簇与糖尿病肾病的研究进展

活性氧簇(ROS)在糖尿病并发症的发展过程中起重要作用。在糖尿病患者中,氧化应激增加,而高血糖又可以直接导致ROS的过量产生。在高血糖的刺激下很多血管细胞都能产生ROS。ROS除了可以直接对大分子造成损害,还能成为信号分子。ROS调节高血糖诱导的信号转导级联反应和转录因子的激活,从而影响肾脏纤维化基因的转录活性。此外,ROS激活信号分子,产生的信号又通过ROS进一步激活。抗氧化剂的治疗可能为糖尿病肾病开辟新途径。     

活性氧与男性不育相关研究进展

在生殖系统内,活性氧主要由精子自身和精液中的白细胞产生,活性氧在低浓度时可以调节正常精子功能,而过量活性氧会引起氧化应激反应,影响精子膜功能、精子运动能力和DNA完整性,是男性不育的重要原因。因此,如何清除过量活性氧、进行抗氧化治疗是男性不育研究的重要课题。     

活性氧簇介导的信号转导通路与糖尿病肾病

糖尿病时,在高糖等一系列致病因素的作用下,将导致肾小球系膜细胞和小管上皮细胞活性氧产生增多,抗氧化物质减少,不仅对机体造成氧化损伤,而且使蛋白激酶C、丝裂原活化蛋白激酶以及蛋白酪氨酸激酶/信号转导子和转录激活子通路活化增加而上调多种细胞因子的表达,使细胞外基质合成增加,降解减少,促进了糖尿病肾病的发生与发展。而抗氧化治疗则能减轻糖尿病肾病患者的肾损伤,为其临床治疗提供了又一新的策略。     

活性氧在急性脊髓损伤中的关键作用

急性脊髓损伤(SCI)是一种常见的严重的神经功能损伤性疾病。SCI包括初始的机械性创伤和继发性损伤。一系列的病理生理机制共同促成了继发性损伤,如由出血和缺血/再灌注诱导的血管损伤效应、氨基酸的兴奋性毒性、钙超载、凋亡、线粒体功能障碍、活性氧生成等。这些因素能加重组织损伤的程度,促使损伤范围在伤后一段时间内不断扩大。在继发性损伤中关键的生化反应事件是活性氧诱导的氧化应激,鉴于其在SCI进程中的重要性,关注活性氧将有助于寻找治疗SCI的药物。     

丙泊酚对急性颅脑损伤患者体内活性氧的清除作用

目的:分析丙泊酚对急性颅脑损伤患者体内活性氧的消除作用及效果.方法:分别采用电子自旋共振法及化学发光-高效液相色谱法,测定43例急性颅脑损伤患者手术前后血内氧自由基,一氧化氮、脂质过氧化物含量,分析丙泊酚对急性颅脑损伤患者体内活性氧的清除作用及效果.结果:除开颅去骨瓣2 h一氧化碳检测均值外,开颅手术去骨辩2h及4h各...     

活性氧簇介导肠道缺血/再灌注损伤机制的研究进展

肠道缺血/再灌注(I/R)损伤是临床危重病和外科领域中较为常见的现象,在严重烧伤(创伤),休克,新生儿坏死性肠炎及肠系膜动脉闭塞、腹部动脉瘤手术中常伴有较高的发病率和病死率。目前,肠道I/R损伤的病理生理机制尚有待深入研究,有学者先后提出过无复流现象、钙超载、能量衰竭、活性氧簇(ROS)损伤、白细胞黏附与内皮细胞损伤、介质病、细胞凋亡等一系列学说,其中ROS生成增多是肠道I/R损伤的重要机制。现就ROS介导肠道I/R损伤致肠及远隔器官损伤的发生机制予以综述。     

补体活化与中性粒细胞产生活性氧之间的反馈调节作用

目的在试管实验中证明补体系统的活化与中性粒细胞产生的活性氧间存在相互作用的反馈关系。方法用菊糖活化的补体作用于中性粒细胞产生活性氧,并进一步通过测定吸光度以观察补体进一步活化情况。用佛波醇肉豆蔻醋酸酯激发中性粒细胞产生的活性氧作用于补体,并进一步采用发光测定仪测定活性氧来观察活化的补体对中性粒细胞释放活性氧的促进作用。结果试管实验证明活化的补体能刺激中性粒细胞产生活性氧,而活性氧又能进一步活化补体。结论补体和中性粒细胞产生的活性氧两者间存在着相互活化的反馈调节作用。从而推测炎症过程中补体活化在炎症反应的产生中起主要作用,而在炎症反应的持续过程中,此两者起互相促进的反馈调节作用。