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1.
【目的】探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用,阐明跗,尸对K562细胞作用的机制。【方法】将慢病毒质粒pReceiver．Lv31-FIV和pReceiver．Lv31-SHIP转染K562细胞;转染细胞与IL-3共培养,Westernblot法检测K562细胞Akt磷酸化;观察转染野生型SHIP基因对K562细胞增殖的影响：末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺失末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡。【结果】重组慢病毒载体pReceiver．Lv31-FIV和pReceiver．Lv31-．SHIP转染K562细胞,GFP阳性率为74．6％。野生型s驯P基因阻断了IL-3对K562细胞的增殖作用,对照组（K562／FIV）细胞增殖抑制率（3．26％）明显低于转染s删P基因组细胞增殖抑制率（26．42％,P〈0．05）;集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[IL-3作用组K562／SHIP细胞形成集落为60．3±6．6,明显低于IL-3诱导的K562／FIV组（91．7±4．2）]（P〈0．01）。细胞形态观察发现凋亡增加．Westernblot检测发现转染s删P基因组前凋亡酶pro．caspase-3降解增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡。IL．3作用不同时间段（3h,6h,12h）,转染野生型SHIP组细胞增殖明显减弱,且Akt磷酸化水平均低于对照组（P〈0．05）。【结论】SHIP基因负调控生长因子（IL-3）介导的K562细胞增殖及其蛋白激酶活化。 相似文献
2.
【目的】 探讨抑癌基因PTEN对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞周期的影响｡ 【方法】 将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562｡MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率､细胞凋亡率和细胞周期的变化;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN､Cyclin D1､Cyclin D2､CDK4､P27Kip1 mRNA水平变化,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化｡ 【结果】 与Ad-GFP组比较,Ad-PTEN-GFP 转染K562细胞后,细胞凋亡率最高为30%,细胞周期显示:G0/G1期细胞比例由54.9%增加至78.5%,G2/M期比例由30.2%降至13.6%,Cyclin D1､Cyclin D2､CDK4 mRNA及CyclinD1蛋白表达降低,P27Kip1 mRNA及蛋白表达增加｡ 【结论】 PTEN基因高表达可以促进K562细胞凋亡,并通过抑制Cyclin D1､Cyclin D2､CDK4及增加P27Kip1表达使细胞周期阻滞在G0/G1期｡ 相似文献
3.
【目的】 研究整合素α5β1介导的粘着斑激酶(FAK)和细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路对K562细胞增殖的影响,并初步探讨其作用机制｡ 【方法】 应用四甲基偶氮唑蓝染色法(MTT)检测抗整合素α5β1单抗(Anti-α5β1)对K562细胞增殖的抑制作用,应用反转录PCR(RT-PCR)和蛋白印迹(western blot)方法检测FAK和ERK的mRNA和蛋白表达水平的改变｡【结果】 Anti-α5β1明显抑制K562细胞的增殖,下调细胞内总FAK及ERK的mRNA和蛋白表达,并抑制其磷酸化水平｡【结论】 整合素α5β1介导的FAK-ras-ERK信号转导通路可能参与了K562细胞的增殖调控,阻断此通路可明显抑制K562细胞的增殖 相似文献
4.
目的 通过慢病毒载体介导外源性5'肌醇磷酸酶(SH2 domain contaihing inositol 5'-phosphatase,SHIP)基因转染K562细胞,探讨ship基因对K562细胞生长增殖的影响.方法 以白血病细胞株K562为研究对象,将携带ship基因的慢病毒感染K562细胞,FQ-PCR方法检测ship转录水平,Western blot方法检测转染后SHIP蛋白表达变化;比较ship基因表达前后细胞增殖、形态的变化.结果 FQ-PCR和Western blot结果显示,携带ship基因的慢病毒载体pReceiver-Lv31能高效转染K562细胞,阳性率(74.6±5.8)%;细胞生长曲线显示SHIP可显著抑制K562细胞生长,抑制率(35.0±3.1)%;集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[K562/SHIP组集落形成率(36.7±7.1)%,K562/FIV组为(77.7±6.3)%,(P<0.05)];细胞形态观察发现凋亡增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡.结论 外源性ship基因表达抑制白血病细胞系K562的增殖活性,并促进其凋亡. 相似文献
5.
【目的】 构建和鉴定针对人抑凋亡基因livin的siRNA质粒载体,并研究其对宫颈癌HeLa细胞的作用｡【方法】 设计和合成针对人livin基因的siRNA寡核苷酸,定向克隆入质粒载体pmU6,脂质体瞬时转染入HeLa细胞中,用RT*9鄄PCR技术检测livin基因的mRNA表达水平,Western Blot技术检测Livin蛋白表达水平｡用MTT法分析HeLa细胞增殖改变,流式细胞仪检测HeLa细胞周期变化｡【结果】 livin siRNA表达质粒能高效而特异地剔除HeLa细胞中livin的表达,抑制肿瘤细胞增殖(P < 0.05),将HeLa 细胞阻止在G1期｡【结论】 livin基因的siRNA对HeLa细胞增殖和细胞周期调控有重要影响,细胞凋亡可能是导致其细胞死亡的主要原因｡ 相似文献
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【目的】 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响｡【方法】 将U937细胞和正常外周血单核细胞分别与HNK共培养,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态,用噻唑蓝比色法(MTT)检测HNK对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测凋亡;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Caspase-3､Caspase-7 mRNA水平变化｡【结果】 HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,48 h半数抑制浓度(IC50)为11.8 μg/mL,而对正常外周血单核细胞的IC50为40.3 μg/mL,Annexin V/PI双标染色显示,细胞凋亡与和厚朴酚呈浓度和时间依赖相关｡HNK明显降低U937细胞线粒体膜电位,增加Caspase3/7活性及mRNA表达水平,但对正常外周血单核细胞的增殖抑制和凋亡作用不明显｡【结论】 HNK可能通过激活caspase-3/7抑制U937细胞增殖､诱导U937细胞凋亡｡ 相似文献
7.
【目的】 研究不同血清型腺相关病毒(rAAV)载体介导的增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)对体外培养犬骨髓间充质干细胞(MSC)的转染效率及其毒性作用｡【方法】 应用密度梯度离心法及贴壁筛选法分离培养犬MSC,倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态,透射电镜观察其超微结构,流式细胞仪鉴定其表面标记物｡取第3代MSC,以MOI为104 ~ 105 v.g./cell 的rAAV1-EGFP 和rAAV2-EGFP进行转染,3 d､7 d､21 d后荧光显微镜观察检测转染效率;MTT法检测rAAV1-EGFP 和rAAV2-EGFP对MSC的毒性作用｡ 【结果】 原代及传代培养的MSC呈梭形外观,具有较强的增殖能力｡MSC超微结构显示其胞体较小,细胞核/浆比例大,胞浆少,染色质较疏松｡细胞表面抗原CD29､CD44表达阳性,CD34表达阴性｡随MOI的增加及时间的延长,rAAV1-EGFP､rAAV2-EGFP对犬MSC的转染效率逐渐增加,rAAV2-EGFP转染效率明显高于rAAV1-EGFP(P < 0.01)｡转染MSC细胞后,细胞生长正常,MTT法显示各转染组与未转染组的OD值无统计学差异(P > 0.05)｡ 【结论】 相对犬MSC,rAAV2是一种比rAAV1更优越的转基因载体,而且对细胞生长无明显抑制,做为组织工程种子细胞的载体是安全可行的｡ 相似文献
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【目的】 研究microRNA-21(miR-21)对膀胱癌T24细胞系中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和活化因子蛋白-1(activator protein-1, AP1)及mRNA表达的调节作用,探讨miR-21对膀胱癌T24细胞增殖的影响｡ 【方法】 用人工合成的miR-21相应的双链互补DNA片段,插入pSilencerTM 3.1-H1 neo载体表达载体,经测序鉴定后作为microRNA的表达质粒;用脂质体将miR-21高表达质粒转染进T24膀胱癌细胞,经G418筛选获得阳性克隆｡用RT-PCR技术和Western blot方法分别检测该细胞系中VEGF和AP1的mRNA和蛋白表达情况｡四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测膀胱癌T24细胞增殖的变化情况｡【结果】 Western blot结果显示miR-21能够增加VEGF和AP1蛋白的表达,RT-PCR方法分析显示VEGF和AP1 mRNA水平升高｡MTT显示转染后细胞的生长速率比未转染的细胞明显加快｡【结论】 miR-21促进T24膀胱癌细胞增殖, 提示可能与VEGF和AP1 的低表达有关｡ 相似文献
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瞬时感受器电位M7通道对RBL-2H3细胞增殖 及凋亡的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】 观察瞬时感受器电位M7通道(TRPM7)在大鼠肥大细胞系RBL-2H3的表达,探讨其对RBL-2H3增殖和凋亡的影响｡【方法】 Western blot及细胞免疫荧光分别检测TRPM7 在RBL-2H3的表达｡通过离子通道阻断剂2-APB抑制TRPM7通道的表达,以WST-1法检测细胞增殖,流式细胞术及Hoechst 33342 荧光染色检测细胞凋亡｡【结果】 Western blot及细胞免疫荧光法均检测到TRPM7在RBL-2H3的表达,细胞免疫荧光提示TRPM7主要表达于RBL-2H3细胞膜｡100 μmol/L和 200 μmol/L的2-APB可明显抑制TRPM7的表达｡100 μmol/L和 200 μmol/L的2-APB对RBL-2H3的增殖抑制率分别为(30.4 ± 4.2)%和(42.0 ± 0.8)%,早期凋亡率分别为(36.9 ± 6.7)%和(49.3 ± 1.8)%,总凋亡率分别为(40.2 ± 7.0)%和(76.8 ± 5.5)%｡【结论】 TRPM7通道表达于RBL-2H3肥大细胞系并参与其增殖和凋亡｡ 相似文献
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生长激素促进体外培养的Bel-7402肝癌细胞增殖 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】 了解重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7402肝癌细胞增殖的影响｡【方法】 应用放射性配体法了解GHR在Bel-7402肝癌细胞株的表达情况;采用肿瘤细胞计数､噻唑蓝比色法和集落形成实验了解Bel-7402肝癌细胞株在不同浓度rhGH(0､1､10､100､1 000､10 000 ng/mL)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率,集落形成率;并用3H-TdR渗入法了解肿瘤细胞DNA代谢情况｡【结果】 放射配体法发现Bel-7402肝癌细胞表达GHR, rhGH对体外培养的7402肝癌细胞的生长具有一定程度的刺激作用,表现为rhGH在100 ng/mL的浓度时促进肝癌细胞的增殖较为显著,而rhGH在其它浓度时(1､10､1 000､10 000 ng/mL)的部分时段,对肝癌细胞的增殖虽也能表现出一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH 在100 ng/mL浓度时为弱｡【结论】 一定浓度范围的rhGH对7402肝癌细胞的增殖有促进作用,原因可能与7402肝癌细胞表达GHR有关｡ 相似文献