丹参寒热药性的实验评价

目的：通过前期建立的中药寒热药性的细胞评价方法评价中药丹参的寒热药性。方法用噻唑蓝（MTT）比色法考察丹参对 SGC-7901细胞体外增殖的影响,倒置显微镜观察丹参对细胞形态特征的影响,台盼蓝染色法分析丹参的细胞毒作用。结果丹参在所选浓度5~800μg / mL 内对 SGC-7901细胞增殖的影响表现为抑制。形态学观察表明丹参能使细胞密度减小,细胞固缩变圆,颗粒感增加。台盼蓝染色表明丹参对这两种细胞没有细胞毒作用。结论丹参性寒,与《本经》《本草纲目》《中药学》所述一致,对所用细胞没有细胞毒作用。     

千年健寒热药性的实验评价

目的：通过前期建立的中药寒热药性的细胞评价方法评价中药千年健的寒热药性。方法用噻唑蓝（ MTT）比色法考察千年健对SGC-7901细胞体外增殖的影响,倒置显微镜观察千年健对细胞形态特征的影响,台盼蓝染色法分析千年健的细胞毒作用。结果千年健在5μg/mL（含5μg/mL）以下对细胞生长有促进作用。形态学观察表明千年健在5μg/mL（含5μg/mL）以下使细胞密度增加,细胞结构致密、生长旺盛。台盼蓝染色表明千年健对这2种细胞没有细胞毒作用。结论千年健药性应为温热,且对所用细胞没有细胞毒作用。     

墨西哥仙人掌多糖对人乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用的研究

目的：观察墨西哥仙人掌多糖对人乳腺癌MFC-7细胞生长的抑制作用。方法：体外培养人乳腺癌MFC-7细胞,利用四甲基偶氮唑蓝染色法（MTT法）及倒置显微镜观察仙人掌多糖对人乳腺癌MFC-7细胞生长的抑制作用。结果：不同浓度的墨西哥仙人掌多糖均能够促进人乳腺癌MFC-7细凋亡或死亡,最大浓度的墨西哥仙人掌多糖的肿瘤细胞生长抑制率为78．7％。结论：墨西哥仙人掌多糖能够抑制人乳腺癌MFC-7细胞的生长。     

中药寒热药性表达模糊评价模式的理论与实验研究

目的：寒热药性反映了中药的作用趋向,其认知概念具有模糊性特征,符合模糊数学的应用范畴。本文旨在通过建立药性生物学表达的模糊判别模式并运用其分析实验数据,为整体、综合地评价寒热药性提供方法学指导。方法：首先,建立寒热药性表达模糊评价模式。以经典寒热复方效应作为寒热药性表达的基准方向,运用Fisher线性判别法计算寒热药性表达模糊集的隶属度函数,进一步得到寒性表达函数和热性表达函数,并以此作为评价参数。第二,对评价模式进行实践。以姜附桂方作为经典热性复方,以三黄方作为经典寒性复方,以各系统生化指标考察药性表达,建立寒、热性表达方程。在此基础上,收集热性药肉桂、仙茅,寒性药黄柏、栀子干预正常状态,以及糖皮质激素诱导的虚寒和虚热状态模型的生物学实验数据,将药物干预前后机体状态的相对变化量代入评价模式,分析其药性表达特征。结果：肉桂干预正常、虚寒和虚热3个状态的热性表达均值大于寒性表达均值,分别为0.528〉0.221、0.203〉-0.490、1.750〉-0.479;仙茅干预正常和虚寒状态的热性表达均值大于寒性表达均值,分别为0.474〉-1.601、0.288〉-1.923,体现了药物的热性;黄柏干预正常状态和虚寒状态的寒性表达均值大于热性表达均值,分别为0.798〉-0.870、0.194〉-0.339;栀子干预虚热状态的寒性表达均值大于热性表达均值0.354〉-1.802,体现了药物的寒性。结论：运用寒热药性模糊评价模式,可以有效分析出药物的寒热药性和药性表达方式。药性相同的中药,既有共性表达,也有个性表现。寒热药性表达具有多途径特点。     

抗人Ig抗体诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究

目的观察抗人Ig抗体对人乳腺癌传代细胞系MCF-7细胞的凋亡诱导作用。方法用培养上清中加入抗体和原位电转的方法将抗人Ig抗体分别作MCF-7细胞的抗体封闭实验,用流式分析仪进行细胞凋亡检测。结果培养上清中加入抗人IgG、抗IgM抗体后,对MCF-7细胞系没有明显的凋亡诱导作用。而通过原位电转的方法将抗人IgG、抗人IgM抗体转入MCF-7细胞内,发现二者均对MCF-7有明显的促凋亡作用（P〈0．01）。结论MCF-7细胞内的IgG及IgM对MCF-7细胞的生存具有重要意义。     

三黄抗氧化方抑制乳腺癌MCF-7细胞氧化应激与增殖的实验研究

目的探查三黄抗氧化方抑制乳腺癌MCF-7细胞氧化应激与增殖的疗效。方法将实验分为空白组：MCF-7细胞培养;实验组按黄芪、制大黄、片姜黄比例分：实验组1：1：1：1,实验组2：3：1：1,实验组3：6：1：l;氧化应激组：以过氧化氢模拟细胞氧化应激状态;乙酰谷氨酸液（NAC）还原组：氧化应激组中加入NAC还原应激反应;免疫荧光法评价其抗MCF-7细胞产生反应性氧化物疗效及ELISA法评价氧化应激后细胞培养液中VEGF含量;同时MTT法评价三黄抗氧化方抑制MCF-7细胞的增殖率。结果实验组2抗氧化氧化应激结果优于其他两组,并显著降低细胞培养液中VEGF水平;同时各实验组MCF-7细胞增殖率得到显著抑制并呈现明显的浓度依耐性,相对空白组,实验组1～3在8mg／ml浓度下分别抑制MCF-7细胞增殖达57％、67％及56％,实验组2的MCF-7细胞增殖抑制率显著高于实验组1与3,有统计学差异（P〈0．01）。结论三黄抗氧化方抑制MCF-7细胞氧化应激同时抑制其增殖率,并降低氧化应激引起的VEGF表达。     

干扰素对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制作用

目的:研究干扰素对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制作用.方法:MTT法检测干扰素-γ(IFN-γ)、干扰素-α2b(IFN-α2b)单独及联合应用,作用不同时间对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制作用.结果:IFN-γ、IFN-α2b及二者联合应用均对MCF-7乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用:单独用药时,作用48h的抑制作用较为明显(P<0.05);联合用药时,作用72h效果显著(P<0.05).结论:IFN-γ、IFN-α2b及二者联合应用对MCF-7乳腺癌细胞增殖均有不同程度的抑制作用,二者联合应用药效作用时间延长、作用效果更佳.     

Sprouty 2蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中表达的实验研究

目的:观察人乳腺癌MCF-7细胞上Sprouty 2蛋白的表达情况,进一步研究Sprouty 2蛋白在乳腺癌的发病机制中的生物学功能。方法:通过培养Sprouty 2蛋白表达的乳腺癌MCF-7细胞,试验组采用Sprouty 2蛋白特异性抗体孵育,对照组采用DPBS代替一抗进行孵育,以流式细胞免疫荧光法检测Sprouty 2蛋白的表达情况。结果:以流式细胞免疫荧光法发现,试验组MCF-7细胞中的Sprouty 2蛋白阳性细胞百分数为(31.1±0.6)%,免疫细胞荧光强度明显弱于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乳腺癌的发生与Sprouty 2蛋白的表达失调有关。     

生精汤对乳腺癌MCF-7细胞增殖影响的实验研究

目的观察生精汤对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,揭示生精汤的雌激素活性。方法选用乳腺癌MCF-7细胞株,应用细胞增殖实验（E—SCREEN法）来检测生精汤的雌激素作用。实验可分为空白对照组与雌激素对照组（己烯雌酚,30tzg／mL）和生精汤低、中、高剂量组（分别为500、800、1000μg／mL）,观察给药前后的细胞形态学变化,并运用四唑盐比色法（MTT法）测定乳腺癌MCF-7细胞的增殖率。结果生精汤高、中、低剂量组均可明显提高乳腺癌MCF-7细胞的增殖率,并呈现一定的量效关系。结论生精汤能显著提高乳腺癌MCF-7细胞的增殖率,即具有明显的雌激素样作用。     

FANCF-shRNA 表达质粒的构建及MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型的建立

 目的构建针对人FANCF基因的shRNA 表达质粒（ FANCF-shRNA）,转染FANCF-shRNA 使人乳腺癌MCF-7 细胞
FANCF基因沉默,从而建立MCF-7--RNAi瞬时转染细胞模型。方法实验分两部分： FANCF-shRNA 表达质粒的构建：
根据相关文献报道,使用Ambion 公司的在线设计软件,设计并合成能够编码针对FANCF基因的小发夹RNA（ FANCF-shRNA）
的DNA 模板,将其插入到p SliencerTM 4.1-CMV neo 表达质粒中,形成pSliencerTM 4.1-CMV-FANCF-shRNA 重组质粒;将该重组
质粒转化到感受态细胞JM109 中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增;通过PCR 及FANCF基因
测序方法筛选出插入正确的FANCF-shRNA 表达质粒;MCF-7--RNAi 瞬时转染细胞模型的建立：碱裂解法提取-
shRNA 表达质粒,通过脂质体介导将该质粒转染入人乳腺癌MCF-7 细胞中,RT-PCR 法检测FANCF基因mRNA 表达水平,确
认FANCF基因沉默。结果含有重组质粒的阳性克隆菌液PCR 扩增片段约为250 bp,并且其FANCF基因测序结果显示插入片段碱
基排列顺序正确,没有突变,说明FANCF-shRNA 表达质粒构建成功;与阴性对照组相比,转染FANCF-shRNA 质粒后第2 天、
第3 天、第5 天和第7 天, FANCF基因mRNA 表达水平均明显减低,表达抑制率分别为（36.51±6.84）%、（37.03±6.61）%、
（53.03±9.33）%和（39.51±10.13）%（ 约0.05）,说明FANCF基因沉默,MCF-7--RNAi 瞬时转染成功建立。结论成功构
建了FANCF-shRNA 表达质粒并建立MCF-7--RNAi 细胞模型,为研究FANCF基因在乳腺癌发生发展及耐药产生与调控
中的作用奠定实验基础。     

重组人血管内皮抑素联合NP方案对人乳腺癌裸鼠移植瘤作用的实验研究

目的:探讨重组人血管内皮抑素(Recombinant human endostatin,rh-ES)联合长春瑞滨+顺铂(NP方案)化疗对人乳腺癌裸鼠移植瘤的肿瘤生长及新生血管生成的抑制作用.方法:将40只荷瘤裸鼠随机分成NP方案组(A组)、rh-ES组(B组)、联合用药组(C组)和空白对照组(D组),每组10只.A组给...     

化疗药物体外干预乳腺癌MCF-7细胞株的耐药基因表达

目的 体外评价蒽环类及紫杉类化疗药物与乳腺癌耐药相关基因MDR1(多药耐药基因)和BCRP(乳腺癌相关耐药基因)表达的关系.方法 利用RT-PCR技术和荧光定量PCR技术检测体外化疗药物干预后乳腺癌细胞株MCF-7的耐药相关基因表达情况.结果 蒽环类药物与MDR1基因表达量间有密切关系,随蒽环类药物浓度的增加和作用时间的延长,MDR1基因表达量也随之增加.而蒽环类药物与BCRP基因间及紫杉类药物与MDR1、BCRP间都无明显的量效关系.结论 蒽环类药物是MDR1基因编码的p-gp蛋白的特异性底物之一.临床可能通过检测MDR1的表达量较准确的预测蒽环类药物的疗效,并为个体化的选择敏感性药物提供一定的实验依据.     

反向PCR：缺失断点定位好方法

目的利用反向聚合酶链式反应(PCR)对乳腺癌细胞系MCF-7的9p21缺失断点进行准确定位。方法以乳腺癌MCF-7细胞系为模板,利用反向PCR,通过酶切、连接、PCR反应及测序,检测染色体9p21缺失断点。结果乳腺癌MCF-7细胞系9p21缺失断点起于chr9:21819532、止于chr9:21989622的大小为170kb的大片段缺失,断点处可见ACTGG 5个碱基的插入,与长片段PCR检查结果相符。结论反向PCR是缺失断点定位好方法,适合样本人群研究。     

低毫安的电化学疗法对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期及c-myc和cyclin E蛋白表达的影响

目的探讨低毫安(10 m1A)的电化学治疗对体外人乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期分布及c-myc和cyclin E表达的影响。方法电化学治疗后培养6h和24h的细胞用MTT法、流式细胞术、免疫组化法测定细胞抑制率、细胞周期分布及细胞c-myc和cyclin E蛋白的表达。结果与对照组相比,治疗组人乳腺癌MCF-7细胞抑制率均随电量增加依次增高(P<0.05);治疗组随电量的增加处于G0/G1期的比例逐渐增高,而S期细胞比例逐渐下降(P<0.05),G2/M期变化不明显(P>0.05);治疗组c-myc和cyclin E表达随电量的增加阳性细胞数逐渐减少。电化学治疗后培养24h比6h各组指标变化显著。结论电化学治疗能通过调节人乳腺癌MCF-7细胞c-myc和cyclin E蛋白的表达,促使细胞G0/G1期阻滞,从而抑制细胞生长。     

吗啡对乳腺癌MCF-7细胞生存素及livin表达的影响

目的:探讨吗啡对人乳腺癌MCF-7细胞生存素(survivin)和livin的表达及细胞增殖与凋亡的影响。方法:人乳腺癌MCF-7细胞以1×103个/ml密度接种在6孔板内,随机分为对照组,0.1μmol/L吗啡组,1.0μmol/L吗啡组。于吗啡孵育24 h时,分别采用RT-PCR法和蛋白质印迹法测定细胞内生存素及livin mRNA及蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡改变;于吗啡孵育24,48及72 h时采用MTT法检测细胞增殖改变情况。结果:与对照组比较,0.1μmol/L吗啡组及1.0μmol/L吗啡组生存素和livin蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),0.1μmol/L吗啡组及1.0μmol/L吗啡组细胞增殖降低而细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:吗啡通过下调MCF-7细胞生存素和livin的表达,从而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。     

电化学疗法对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及细胞周期的影响

目的探讨电化学疗法对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及周期的影响。方法将等量人肿瘤细胞接种于培养板中,随机分为对照组和治疗组,治疗组按电量不同又分4组,对照组不通电。电化学治疗后培养6h和24h后用流式细胞仪分别检测各组细胞周期变化及凋亡率。结果电化学治疗后6h和24h MCF-7细胞凋亡率治疗组比对照组增加明显（P〈0.05）;治疗各电量组随电量的增加处于G0/G1期的细胞比例先逐渐增高,但至20C时反降低;而S期细胞比例有随电量增加下降至20C时升高的趋势。结论电化学疗法可抑制体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞株的生长,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡及影响其细胞周期有关。     

一种简易的体外分析肿瘤细胞三维迁移行为的医学研究微装置

目的 发展并验证一种体外分析肿瘤细胞在细胞外基质中三维(3D)迁移行为的医学研究微装置。方法 利用精密机械加工方法制作微装置模具,通过聚二甲基硅氧烷(PDMS)浇筑、翻模和封装得到基于PDMS-玻璃材质的肿瘤细胞3D迁移分析装置;分析时,将肿瘤细胞悬液和基质胶混匀后加入微装置迁移通道,通过在迁移通道两侧建立趋化因子浓度梯度诱导肿瘤细胞在基质胶中的可控迁移,同时利用活细胞动态成像装置记录肿瘤细胞的迁移过程。结果 以乳腺癌细胞株MCF-7为例,验证了该微装置在体外控制和动态监测肿瘤细胞3D迁移过程的可行性;定性分析影像学数据显示MCF-7细胞株在基质胶中迁移受化学诱导剂浓度梯度分布方向决定,且呈变形虫样迁移模式;定量分析细胞迁移过程可量化MCF-7的细胞迁移率和迁移速度,基质金属蛋白酶抑制剂(巴马司他)和三磷酸腺苷酶抑制剂(Blebbistation)对MCF-7细胞3D迁移行为的抑制能力存在差异。结论 本装置未来可用于深入解析肿瘤细胞3D迁移行为、机制和抗肿瘤转移药物的药效评估。     

RNA干扰A20基因的表达对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡和迁移的影响

目的 利用 RNA 干扰技术靶向沉默 A20 基因,对MCF-7细胞株增殖、凋亡和迁移的影响进行研究,探讨A20基因作为乳腺癌治疗靶点的潜在价值. 方法 人工合成靶向A20基因的siRNA序列和阴性对照( NC) siRNA序列,利用脂质体转染技术将siRNA导入MCF-7细胞株,采用CCK-8细胞增殖实验、Annexin V、7-AAD双染流式细胞术检测凋亡实验和 Transwell 细胞迁移实验研究沉默 A20 基因对MCF-7细胞增殖、凋亡和迁移的影响. 结果 靶向沉默A20基因表达能够有效抑制MCF-7 细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡的发生. 结论 A20基因在MCF-7细胞的增殖、凋亡和迁移过程中起重要作用,A20基因可能是针对乳腺癌抗肿瘤靶向治疗的潜在靶点.