多肿瘤组织芯片在评价肿瘤细胞增殖与凋亡状态研究中的作用

目的：研究多种常见肿瘤组织芯片在观察癌细胞增殖和凋亡中的作用。方法：在病理档案材料中选取10种常见恶性肿瘤及其癌旁或正常组织的石蜡包埋标本，HE染色切片定位穿刺部位，每一蜡块穿取直径0．6mm大小组织柱，排布成196点列阵的芯片；用ki-67、p53、rasp21、bcl-2和bax单抗SP法进行免疫组化染色，对各切片阳性细胞进行计数观察。结果：组织芯片经染色后结构完整，在肿瘤组织中ki-67、p53和rasp21标记的阳性细胞比癌旁和正常组织明显增高；而大多数肿瘤中bcl-2和bax表达呈负相关，即bcl-2阴性或低表达者，则bax呈不同程度阳性表达，反之则相反。结论：组织芯片技术可以同时用于评价多种不同类型肿瘤样本的增殖活性和凋亡状态，为临床预后判断提供资料。     

苦参碱抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖和诱导凋亡的体外实验研究

目的探讨苦参碱对人骨肉瘤细胞株M G-63的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法应用M TT比色法检测不同作用浓度以及不同作用时间苦参碱对M G-63细胞的增殖作用的影响;流式细胞仪分析不同浓度加药组及对照组第3天M G-63细胞周期的改变,并通过分析细胞DNA含量测定凋亡;应用透射电镜观察经不同浓度苦参碱处理3天后M G-63细胞的形态改变。结果苦参碱对M G-63细胞增殖具有抑制作用,其增殖抑制作用随作用时间延长及药物浓度升高更加明显,具有时间和剂量依赖性。流式细胞仪检测可见经苦参碱处理后G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降及低G1期细胞出现,并形成亚二倍体峰(凋亡峰)。对照组和0.25,0.50,0.75,1.0,1.25 m g/m l各处理组中,凋亡细胞比例分别为1.2%、6.7%、21.5%、32.9%、45.8%和51.9%,在实验范围内苦参碱诱导细胞凋亡作用与药物浓度呈一定相关。透视电镜可见典型的细胞凋亡形态改变:细胞皱缩,胞膜结构保持完整,胞核固缩,核碎裂,染色质浓缩边集,形成新月形胞核,胞浆空泡化明显,细胞表面有较多浓缩的胞质突起。结论苦参碱对人骨肉瘤细胞M G-63的增殖具有明显的抑制作用,使细胞阻滞于G0/G1期,并且能诱导其凋亡,其作用具有时间和剂量依赖性。     

凋亡与肿瘤靶向治疗

凋亡异常与肿瘤发生密切相关。由于凋亡过程受基因调控，所以肿瘤对靶向凋亡调控基因的治疗是敏感的。一种靶向凋亡治疗肿瘤的策略已经形成，方法包括：通过活化肿瘤细胞内的凋亡分子和引入外源性促凋亡分子直接诱导凋亡；通过阻断生存信号的传导间接诱导凋亡。     

凋亡与肿瘤靶向治疗

凋亡异常与肿瘤发生密切相关.由于凋亡过程受基因调控,所以肿瘤对靶向凋亡调控基因的治疗是敏感的.一种靶向凋亡治疗肿瘤的策略已经形成,方法包括通过活化肿瘤细胞内的凋亡分子和引入外源性促凋亡分子直接诱导凋亡;通过阻断生存信号的传导间接诱导凋亡.     

三氧化二砷诱导人鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )体外抑制人鼻咽癌细胞株 (CNE1)增殖及诱导凋亡的作用。方法 :以不同浓度的As2 O3 处理CNE1,用四甲基噻唑蓝 (MTT)法测定细胞增殖情况 ,细胞染色方法观察细胞凋亡的形态 ,原位末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞的DNA含量。结果 :As2 O3 明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1细胞的增殖 ,其抑瘤作用优于顺铂 (DDP)和 5 -氟尿嘧啶 (5 FU)。As2 O3 作用于细胞后 ,可见典型凋亡细胞的形态学改变 :细胞核固缩 ,染色质凝集 ,核碎裂 ,凋亡小体形成等。流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。结论 :As2 O3 可明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1的生长和促进细胞凋亡的作用     

三氧化二砷诱导人鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究三氧化二砷(As2O3)体外抑制人鼻咽癌细胞株(CNEl)增殖及诱导凋亡的作用。方法：以不同浓度的As2O3处理CNEl，用四甲基噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况，细胞染色方法现察细胞凋亡的形态，原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞，流式细胞仪检测细胞的DNA含量。结果：As2O3明显抑制人鼻咽癌细胞株CNEl细胞的增殖，其抑瘸作用优于颇铂(DDP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)。As2O3作用于细胞后，可见典型凋亡细胞的形态学改变：细胞核固缩，染色质凝集，核碎裂，凋亡小体形成等。流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。结论：As2O3可明显抑制人鼻咽癌细胞株CNEl的生长和促进细胞凋亡的作用。     

caspase-3表达及其与卵巢上皮性肿瘤组织细胞凋亡和增殖的关系

目的 :探讨caspase 3与卵巢上皮性肿瘤发生、发展的关系。方法 :利用免疫组化(SP)法和TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术 ,检测 112例卵巢上皮性肿瘤组织中caspase 3和PCNA的表达水平及细胞凋亡情况。结果 :caspase 3在卵巢恶性肿瘤中的表达 ( 4 4 4% ) ,明显低于良性肿瘤 ( 81 8% ,P<0 0 1) ;在低分化卵巢癌中的表达 ( 61 5 % ) ,明显高于高分化卵巢癌 ( 2 3 5 % ,P <0 0 5 ) ;在晚期卵巢癌中的表达 ( 5 7 9% ) ,明显高于早期卵巢癌 ( 2 4 0 % ,P <0 0 5 ) ;在有淋巴结转移癌中的表达 ( 5 6 4% ) ,明显高于无淋巴结转移癌中的表达 ( 3 3 3 % ,P <0 0 5 )。凋亡指数与增殖指数呈正相关 (r =0 467,P <0 0 1) ,与cas pase 3的表达呈正相关 (r =0 5 97,P <0 0 1)。结论 :caspase 3与卵巢上皮性肿瘤的细胞凋亡密切相关 ,参与细胞凋亡的调节机制 ,在卵巢上皮性肿瘤恶变的过程中发挥作用 ,并与恶性程度关系密切 ,有可能成为卵巢癌预后评估的参考。     

紫杉醇对K562细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的　探讨紫杉醇体外抑制 K5 6 2细胞株及诱导凋亡的作用。方法　体外培养 K 5 6 2白血病细胞株 ,以不同浓度紫杉醇处理 12～ 72小时后 ,用 MTT法测定细胞生长抑制作用 ,用细胞形态学观察和 DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 ,用流式细胞仪 (FCM)检测细胞 DNA含量及细胞周期。结果　 K5 6 2细胞经紫杉醇处理后细胞生长受抑 ,对 K5 6 2细胞的半数抑制浓度 IC50 为 0 .84μg/ ml。经药物作用后可见细胞染色质浓聚和凋亡小体形成 ,FCM显示细胞凋亡率明显增加 ,但电泳检测未见 DNA裂解。结论　紫杉醇能抑制 K5 6 2细胞的生长 ,诱导细胞凋亡可能为其抗肿瘤作用机制之一     

Caspase-3基因在肺癌中的表达及其与bcl-2和Bax蛋白表达的关系

目的 :探讨Caspase 3基因的表达在肺癌发生、发展中的作用及其与bcl 2、Bax蛋白表达的相互关系。方法 :对 13例正常支气管黏膜上皮、11例不典型增生、5 4例肺癌及12例淋巴结转移癌石蜡切片组织 ,应用免疫组化SP法检测Caspase 3、bcl 2和Bax蛋白的表达。结果 :肺癌、淋巴结转移癌中Caspase 3阳性率分别为 44 44 %及 41 66% ,显著低于正常支气管黏膜上皮中的阳性率 84 61% ,P <0 0 1、P <0 0 5 ;低分化肺癌组织中阳性率 (2 0 0 0 % )较中分化 (62 5 0 % )、高分化(69 2 3 % )明显降低 ,P均 <0 0 1;Caspase 3蛋白表达与bcl 2蛋白表达呈负相关 ,P <0 0 1。结论 :Caspase 3基因在肺癌中表达下调 ,提示其失表达可能在肺癌的发生中起重要作用 ,Caspase 3在分化差的癌组织中表达下调是肿瘤异常分化所致。Caspase 3和bcl 2蛋白在肺癌组织中呈现相反的表达方式 ,提示二者在肺癌细胞增殖动力学调节中可能存在着密切联系。     

MicroRNA-21靶向PDCD4对胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨MicroRNA-21对胃癌细胞中PDCD4表达、细胞增殖与凋亡的影响。方法将MGC-803人胃癌细胞分为5组,分别为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染不相关siRNA)、mir 21组(转染miRNA-21质粒)、mir 21 Inhibitor组(转染miRNA-21抑制物)、PDCD4 siRNA组(转染PDCD4 siRNA)。分别于转染后36、48、72小时收集细胞,采用实时定量PCR及细胞爬片免疫组织化学检测细胞中PDCD4基因及蛋白水平,运用MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白、阴性对照组比较,mir 21组PDCD4表达量下降,细胞增殖能力增强(均P<0.05);mir 21 Inhibitor组PDCD4表达量增多(P<0.05),细胞增殖受到抑制(P<0.01),细胞总凋亡比例增高(P<0.05);PDCD4 siRNA组PDCD4表达几乎完全被抑制,细胞增殖能力增强(均P<0.01),36小时时细胞总凋亡比例减少(P<0.05)。而阴性和空白对照组比较,细胞PDCD4表达量、细胞增殖与凋亡都无明显差异(P>0.05)。结论 MicroRNA-21能靶向调控PDCD4,抑制胃癌细胞MicroRNA-21的表达后可上调PDCD4表达,发挥抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用。     

Livin反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡影响的研究

目的：探讨Livin mRNA反义寡核苷酸（ASODN）对人乳腺癌MCF-7细胞抑制增殖及诱导凋亡的影响。方法：设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸（MSODN）,脂质体转染至培养的MCF-7细胞。采用MTT法检测Livin ASODN对MCF-7细胞的增殖抑制作用,RT-PCR检测Livin mRNA的表达水平,电镜、流式细胞仪与吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）细胞染色法检测细胞凋亡水平和形态学改变。结果：Livin ASODN在终浓度为600nmol／L作用MCF-7细胞48h时,能明显地抑制其增殖（IC50=604.4）,降低Livin mRNA的表达;电镜、流式细胞仪与A0／EB细胞染色法则表明MCF-7细胞在形态学上出现明显的凋亡改变,细胞凋亡率显著增加,而对照组寡核苷酸未见抑制效应。结论：Livin ASODN能够特异性下调MCF-7细胞中Livin基因表达,在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖中发挥重要作用。     

（125）I联合ADM对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的研究放射性粒子125I联合化疗药物多柔比星（阿霉素,ADM）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法按2×2析因设计将乳腺癌敏感株MCF-7细胞随机分成A、B、C、D 4组,A组：空白对照组;B组：单纯125I粒子组;C组：单纯ADM组;D组：125I粒子＋ADM组。采用流式细胞术检测各组干预后的细胞周期分布及细胞凋亡率。结果 （1）单纯125I粒子近距离低剂量率持续照射后将MCF-7细胞阻滞于G2~M期1。25I联合ADM将MCF-7细胞周期主要集中在G0~G1期,同时伴有较大比例的细胞凋亡。（2）各组细胞的早期凋亡率分别为：A组（0.99±0.05）%、B组（19.22±4.92）%、C组（16.57±4.73）%、D组（3.16±1.08）%;各组晚期凋亡及坏死率为：A组（0.32±0.18）%、B组（3.16±1.39）%、C组（3.24±0.75）%、D组（28.99±7.96）%,D组晚期凋亡及死亡率明显提高。结论 125I放射性粒子能有效诱导乳腺癌细胞凋亡,与化疗药物ADM联合作用除诱导细胞凋亡,还可导致大量细胞死亡,具有协同、增效的作用。     

金喜素诱导人肝癌HCC7721细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的 :研究金喜素诱导人肝癌HCC772 1细胞的凋亡作用。方法 :采用MTT法测定金喜素对人肝癌HCC772 1细胞的杀伤作用 ;通过电镜观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳检测断裂DNA ;流式细胞仪分析DNA含量及细胞周期。结果 :经0 3 μmol/L金喜素处理 6、12、2 4及 3 6h ,HCC772 1细胞的存活率与对照组相比 ,逐渐降至 ( 83± 16) %、( 69± 10 ) %、( 5 2±13 ) %和 ( 3 0± 11) % ,低于对照组 ,P <0 0 5 ;靶细胞出现细胞固缩、染色质凝聚和边集 ;产生梯状DNA并检测到亚二倍体峰(凋亡峰 ) ;同时 ,G0 /G1期细胞增多 ,S期细胞减少。结论 :金喜素可抑制人肝癌HCC772 1细胞增殖 ,使细胞阻滞在G0 /G1期 ,进一步诱导细胞凋亡。     

Glypican-3过表达对A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨glypican-3对人肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法采用glypican-3 cDNA瞬时转染A549细胞,Western blot方法检测转染前后glypican-3在A549细胞中的表达水平,分别采用MTT、流式和Transwell小室研究glypican-3 cDNA对A549细胞增殖、凋亡和迁移的作用。结果转染后glypican-3在A549细胞中表达上调,细胞增殖和迁移能力增强,细胞凋亡率降低（均P〈0.05）。结论 A549细胞中glypican-3过表达促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡,可能对A549细胞的生长和存活具有重要作用。     

TSA诱导胰腺癌BxPC-3细胞周期阻滞与凋亡的研究

目的观察曲古抑菌素A(tricho-statin A,TSA)对胰腺癌BxPC-3细胞增殖及凋亡的诱导作用,探讨TSA抗胰腺癌的作用机制。方法BxPC-3细胞应用TSA处理后采用流式细胞技术分析其细胞周期分布和细胞凋亡率,免疫组化方法检测细胞乙酰化组蛋白H4表达,Western blot分析p21 WAF1/CIP1蛋白表达。结果TSA对胰腺癌BxPC-3细胞具有生长抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。TSA可将BxPC-3细胞阻滞于G0/G1期,TSA组G0/G1期细胞达(61.8±2.5)%,较空白对照组(42.5±2.2)%和乙醇对照组(47.3±3.4)%明显增多(P=0.004);三组细胞凋亡率分别为25.5%、5.5%和5.1%(P=0.000)。TSA组细胞p21 WAF1/CIP1蛋白表达及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调。结论TSA对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和细胞周期具有影响作用并可诱导细胞凋亡,p21 WAF1/CIP1蛋白及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调可能是其抗胰腺癌作用机制之一。     

维甲酸对胃癌细胞生长抑制及凋亡的诱导作用

目的:研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人胃低分化黏液腺癌细胞(MGC80-3)的作用。方法:MTT比色法观察9-cis-RA对MGC80-3细胞株的生长抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33342/PI双荧光染色和DNA凝胶电泳技术分析细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果:9-cis-RA可抑制MGC80-3细胞生长,半数抑制浓度(IC50)为8·07×10-6mol/L;显微镜观察可见细胞凋亡特征性改变;10-5mol/L浓度的9-cis-RA药物作用后96h可明显诱导MGC80-3细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带;流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型亚二倍体凋亡小峰,G0/G1期细胞百分率明显升高,由对照组的(61·5±2·2)%增加到(74·3±4·7)%,F=149·795,P=0·000;同时处于S期的细胞数减少,由对照组的(26·3±1·3)%减少到(17·2±1·4)%,F=143·936,P=0·000。细胞周期出现G1期阻滞。结论:9-cis-RA对MGC80-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

醋酸甲羟孕酮体外诱导卵巢癌SKOV-3细胞株凋亡的研究

目的:研究醋酸甲羟孕酮体外诱导卵巢癌SKOV-3细胞株凋亡的作用机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度醋酸甲羟孕酮(1×10-4、1×10-3、1×10-2和1×10-1 mmol/L)和LY294002(PI3K抑制剂,1.4×10-3 mmol/L)对人卵巢上皮癌SKOV-3细胞株生长的抑制作用.蛋白质印迹法检测不同浓度醋酸甲羟孕酮作用下,细胞内Akt、p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平的变化.结果:醋酸甲羟孕酮以剂量依赖方式抑制SKOV-3细胞的体外增殖(P<0.01),这种抑制作用可被LY294002所阻断.随着醋酸甲羟孕酮使用剂量的增大,SKOV-3细胞内p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平逐步降低,P<0.05.与对照组相比,醋酸甲羟孕酮浓度为1×10-4 mmol/L时,p-Akt表达量下降约28%,Bcl-2表达量下降约10%;当醋酸甲羟孕酮浓度上升至1×10-1 mmol/L时,p-Akt表达量下降约35%,Bcl-2表达量下降约27%.不同药物浓度组间Akt表达水平差异无统计学意义,P>0.05.结论:醋酸甲羟孕酮能够体外诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡,可能与抑制Akt发生磷酸化相关.     

Nrf2对蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响的观察

目的:红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)在蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取一系列人甲状腺未分化癌细胞系FRO、KTC1、KTC2、KTC3、8305C和8505C,分别设空白对照组和万珂处理组;蛋白质印迹法检测甲状腺癌细胞中Nrf2蛋白表达情况;共聚焦显微镜检测Nrf2甲状腺癌细胞核定位;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况。结果:与FRO和KTC2细胞相比,Nrf2在人甲状腺癌细胞系8505C和8305C细胞中基础水平呈现高表达,万珂诱导后的表达增加更高,但对万珂诱导的细胞凋亡表现出不敏感,4种细胞的细胞凋亡率分别为(51.98±3.01)%、(46.92±2.72)%、(17.33±4.18)%和(7.97±1.01)%;万珂可诱导8505C和8305C细胞中的Nrf2细胞核易位。结论:Nrf2抑制蛋白酶体抑制剂诱导的甲状腺癌细胞凋亡,其抗凋亡作用可能源于蛋白酶体抑制剂诱导其细胞核转位。