鼻咽癌细胞凋亡与细胞增殖的原位观察

In order to observe the apoptosis and proliferation of cells in nasopharyngeal carcinoma(NPC) and pericarcinomatous tissue(PCT), 49 cases of NPC and partly PCT were detected by in situ end-labelling (ISEL) technique and proliferating cell nuclear antigen(PCNA) immunohistochemical staining. The results showed that: 1. Massive distribution of ISEL positive cells was frequently exhibited in vesicular nucleus cell carcinoma(VNCC) of NPC, in which no apoptotic pattern character was found. 2. The positive rate and the staining intensity index(SII) of ISEL signals in NPC were higher than that in PCT(P < 0.05); the positive correlation between ISEL SII and PCNA SII was found in NPC(r = 0.341, P < 0.05), whereas the positive rate and the SII of ISEL signals were significantly lower than that of PCNA (P < 0.01). 3. The ISEL SII and the PCNA SII in VNCC were obviously higher than that in poorly differentiated squamous cell carcinoma(PDSCC) (P < 0.01, P < 0.05). Patients with VNCC had a high five-year survival rate. The results suggest that there is a relationship between cellular proliferation and cellular apoptosis in NPC.     

鼻咽癌肿瘤细胞增殖与凋亡关系及其分子机制的研究

目的了解鼻咽癌肿瘤细胞增殖与凋亡的关系及ｂｃｌ２表达在发病机制中的作用。方法１５例癌旁组织,６５例鼻咽癌用免疫组化技术标记ｂｃｌ２、ＰＣＮＡ,ＨＥ染色中作核分裂像计数,并将后两者合并为增殖指数;用ＩＳＥＬ法显示４４例鼻咽癌及１５例癌旁组织中的细胞凋亡。结果①鼻咽癌ＰＣＮＡ、核分裂像、凋亡细胞数均显著高于癌旁组织,但均与组织分型无关。增殖指数与凋亡细胞数呈正相关。②ｂｃｌ２在鼻咽癌中高表达,与组织分型有关,与凋亡细胞数呈负相关。结论①鼻咽癌肿瘤细胞具有高水平增殖的同时也具有高水平的凋亡,其肿瘤本身是高水平基础上增殖与凋亡失衡的结果。②ｂｃｌ２不是调控肿瘤细胞凋亡的唯一因素,但其抑制细胞凋亡的功能在鼻咽癌发病机制中有重要作用。     

膀胱移行细胞癌多种耐药因子与凋亡相关因子的表达

目的 探讨多种耐药因子P糖蛋白（Pgp)，谷胱甘肽S转移酶－π（GST-π），DNA拓扑异构酶Ⅱ-α（Topop Ⅱ-α)与调亡蛋白突变p53,bcl-2在原发性膀胱移行细胞癌多药耐药现象形成中的作用。方法 采用免疫组织化学SP法，检测107例原发性膀胱移行细胞癌中Pgp,GST-π，TpopⅡ-α，p53,bcl-2的表达情况。结果 Pgp,GST-π，p53,bcl-2总阳性表达率分别为63.6%,72.9%,72.9%,54.2%,TopoⅡ-α指数Ⅰ-Ⅳ级分别占45.0%,36.3%,12.5%,6.3%;除TopoⅡ-α指数仅与病理分级有关外，其余各指标均与病理分级，临床分期和术后腔内化疗复发密切相关。Pgp表达与p53,bcl-2密切相关，GST－π与p53,bcl-2无相关，TopoⅡ-α指数与p53相关，而与bcl-2无相关。结论 原发性膀胱移行细胞癌多药耐药的形成是多种因素共同作用的结果。     

膀胱移行细胞癌P-gp170表达与细胞凋亡的关系

目的 探讨原发性膀胱移行细胞癌P－糖蛋白（P－gp170)表达与细胞凋亡的关系。方法 用免疫组化SP方法和凋亡细胞原位标记（TUNEL）检测了40例膀胱移行细胞癌P－gp170表达和细胞凋亡，并应用图像分析系统定量分析其凋亡指数（AI）。结果 40例膀胱移行细胞癌P－gp170表达率为48％，细胞学分级之间无显著性差异（P＞0．05）；AI随组织学分级增高而增高，各分级之间有显著性差异（P＜0．05）；AI在膀胱移行细胞癌P－gp170阳性表达组明显低于P－gp170阴性表达组，有显著性差异（P＜0．01）。结论 原发性膀胱移行细胞癌P－gp170高表达可能抑制细胞凋亡过程致AI降低。     

鼻咽癌中p53、bcl-2、bax、Fas的表达及其相互关系的研究

目的　了解凋亡相关基因p53、bcl2、bax、Fas在鼻咽癌(NPC)中的表达及相互关系。方法　在67例NPC、15例癌旁组织中用免疫组化技术标记bcl2、p53、bax、Fas;用免疫双标记技术同时标记p53与bcl2;从中选取15例NPC用DNA原位杂交技术检测bcl2基因扩增情况。结果　①67例NPC中p53蛋白阳性38例(567%),bcl2蛋白阳性48例(716%),bax蛋白阳性28例(418%),Fas蛋白阳性29例(433%);②NPC中,p53蛋白与bcl2蛋白的阳性率显著高于癌旁组织,而bax蛋白与Fas蛋白的阳性率却显著低于癌旁组织;③p53蛋白与bcl2蛋白阳性表达间呈正相关。④bcl2/bcl2同二聚体在NPC中占优势;p53蛋白表达在bcl2/bcl2同二聚体占优势的肿瘤中显著高于在bax/bax同二聚体占优势的肿瘤中。结论　①p53、bcl2、bax、Fas在NPC中有较高的阳性表达率,与NPC的发生、发展关系密切;②NPC中p53与bcl2蛋白表达呈正相关,提示NPC中p53蛋白主要不是突变型,有异于其它肿瘤。③抑制细胞凋亡的bcl2/bcl2同二聚体在NPC中占优势,尤其是在泡状核细胞癌中,提示其与NPC的发生及分化有关。     

EB病毒BHRF1反义寡核苷酸片段诱导鼻咽癌SUNE—1细胞株的凋亡

观察ＥＢ病毒ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸片段对鼻咽癌ＳＵＮＥ－１细胞侏增殖的影响。方法；ＰＣＲ，＾３Ｈ－ＴｄＲ的掺入法及电泳等。结果：ＰＣＲ从ＳＵＮＥ－１细胞ＤＮＡ中扩增了ＥＢ病毒的４种全基因片段；适当浓度ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸片段能引起无血清培养的ＳＵＮＥ－１细胞株增殖受抑制；透射电镜及琼脂糖凝胶电泳检测结果发现与ＳＵＮＥ－１细胞发生凋亡有关。     

消减免疫法制备抗肝癌凋亡细胞相关抗原单克隆抗体

目的　分析肝癌细胞凋亡过程中相关分子的表达情况 ,制备抗凋亡相关抗原的 m Ab.方法　用 6 0 m L· L- 1乙醇作用 6 h诱导 HCC- 92 0 4细胞凋亡 . May- Grunwald- Giemsa(MGG)法染色观察细胞形态 .流式细胞仪分析细胞 DNA含量 .环磷酰胺消减免疫法免疫 10只小鼠 ,另取 10只小鼠用常规法免疫作为对照 .末次免疫后取鼠尾血清进行免疫细胞化学法检测 .选取尾血清与凋亡细胞和非凋亡细胞的反应差异最明显者取脾细胞 ,与骨髓瘤细胞 SP2 /0融合 . EL ISA法筛选 .计算杂交瘤细胞融合率和抗体阳性率 .有限稀释法连续克隆化 .免疫细胞化学法进一步筛选 .Western blot法分析m Ab相关抗原的分子质量 .结果　 MGG染色可见大部分细胞出现凋亡 .流式细胞仪分析可见亚二倍体凋亡峰 .实验组有 2只鼠的尾血清在凋亡细胞呈强阳性 ,而与非凋亡细胞的反应很弱 .两组的细胞融合率无明显差异 ;在凋亡细胞高表达 ,而在非凋亡细胞低表达的抗体的产生率也未见明显差异 .实验组总的抗体产生率明显低于对照组 (P<0 .0 1) ,在凋亡细胞与非凋亡细胞均高表达的抗体的产生率也明显低于对照组 (P<0 .0 1) .筛选出 1株在乙醇诱导的 HCC- 92 0 4凋亡细胞核内高表达 ,而在非凋亡的 HCC- 92 0 4细胞低表达的 m Ab.此 m Ab相关抗原的相对分子     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡的形态学观察

目的：探讨在乙醇诱导下发生凋亡时,原发性肝细胞癌（简称肝癌）细胞的形态学变化。方法：用含60mL.L^-1乙醇的培养液持续作用6h诱导人肝癌细胞系HCC－9204凋亡,进行凋亡活细胞的台盼蓝,吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）染色,凋亡细胞固定后的May-Grunwald-Giemsa (MGG),HE染色和透和透射电镜观察,并进行TUNEL法凋亡检测。结果：60mL.L^-1乙醇可使HCC－9204细胞产生明显的细胞固缩,变圆,胞核和胞质浓染,胞核呈颗粒状,环形或新月体状,胞质可见“出泡”现象等凋亡形态学变化,大部分细胞为台盼蓝拒染,并呈TUNEL阳性着色,部分TUNEL阳性细胞也可见明显的凋亡形态学变化。结论：乙醇可使肝癌细胞产生明显的凋亡形态学变化。TUNEL法可原位同时显示凋亡细胞的形态和分布。     

鼻咽癌中p53、bcl-2、bax、Fas的表达及其相互关系的研究

目的　了解凋亡相关基因 p53、bcl 2、bax、Fas在鼻咽癌 (NPC)中的表达及相互关系。方法　在 67例NPC、5例癌旁组织中用免疫组化技术标记bcl 2、p53、bax、Fas ;用免疫双标技术同时标记 p53与bcl 2 ;从中选取 15例NPC用DNA原位杂交技术检测bcl 2基因扩增情况。结果　① 67例NPC中 p53蛋白阳性 38例 (56 7% ) ,bcl 2蛋白阳性 4 8例(71 6% ) ,bax蛋白阳性 2 8例 (4 1 8% ) ,Fas蛋白阳性 2 9例 (4 3 3% )。②NPC中 ,p53蛋白与bcl 2蛋白的阳性率显著高于癌旁组织 ,而bax蛋白与Fas蛋白的阳性率却显著低于癌旁组织。③ p53蛋白与bcl 2蛋白阳性表达间呈正相关。④bcl 2 /bcl 2同二聚体在NPC中占优势 ;p53蛋白表达在bcl 2 /bcl 2同二聚体占优势的肿瘤中显著高于bax/bax同二聚体占优势的肿瘤中。结论　①p53、bcl 2、bax、Fas在NPC中有较高的阳性表达率 ,与NPC的发生、发展关系密切。②NPC中 p53与bcl 2蛋白表达呈正相关 ,提示NPC中 p53蛋白主要不是突变型 ,有异于其它肿瘤。③抑制细胞凋亡的bcl 2 /bcl 2同二聚体在NPC中占优势 ,尤其是泡状核细胞癌中。提示其与NPC的发生及分化有关。     

细胞凋亡检测的研究进展

细胞凋亡(Apoptosis),又称细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD),是细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身程序,自己结束其生命的过程.     

3-溴丙酮酸对耐顺铂鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响.方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达.结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L.低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成.3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)％、(25.5±2.4)％、(45.5±3.5)％,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)％.Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达.结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关.     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对人鼻咽癌(NPC)CNE-2细胞增殖及凋亡的影响.方法 不同浓度(0、10、20、40、60 μmol/L)姜黄素处理NPC细胞株CNE-2,利用噻唑蓝(MTT)实验检测CNE-2细胞增殖活性,利用流式细胞仪检测CNE-2细胞周期及凋亡率,利用Hoechest33258荧光染色法观察细胞凋亡情况.结果 姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且随姜黄素浓度增加,CNE-2细胞抑制率呈上升趋势(P＜0.05),姜黄素作用CNE-2细胞24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(23.54±0.36)、(18.31±0.42)、(8.56±0.37)μmol/L,即姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且呈现明显浓度、时间依赖性;流式细胞检测结果显示,0、10、20、40、60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞,凋亡率随着姜黄素浓度增加而上升;荧光染色结果可见,CNE-2细胞未给予姜黄素处理,细胞呈圆形或者椭圆形,细胞核大小均匀一致,染色质分布均匀的淡蓝色荧光;10 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24h后,细胞胞体缩小,细胞核染色质凝聚,呈颗粒状亮蓝色荧光;20 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞出现胞体缩小,细胞核浓缩、染色质不均匀,出现凋亡小体,甚至出现核碎裂;40和60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞凋亡小体数量增多,出现大量核碎裂.结论 姜黄素对NPC细胞株CNE-2细胞增殖具有明显抑制作用,且促进CNE-2细胞凋亡.     

氯喹对鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的:探讨氯喹(CQ)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度(0、2、4、8、16、32mol/L)CQ对鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖抑制效应;集落克隆实验法检测不同浓度CQ对集落克隆形成的影响;溴化丙啶单染检测CQ诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡;Western blot检测CQ(10mol/L)处理鼻咽癌细胞CNE-2Z不同时间(0、6、16、24 h)内质网应激反应标志物葡萄糖调节蛋白(GRP-78)的表达。结果:不同浓度CQ均对鼻咽癌细胞CNE-2Z具有明显的增殖抑制作用,16mol/L CQ作用于鼻咽癌细胞CNE-2Z 24、48、72 h细胞存活率分别为85.94%、75.34%和56.45%。同时,CQ具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的集落克隆形成的作用。并且,CQ呈剂量依赖性诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z的凋亡。另外,CQ诱导鼻咽癌细胞上调GRP-78的表达。结论:CQ能抑制鼻咽癌细胞增殖,并通过引起过度的内质网应激反应机制诱导其凋亡。     

原发性鼻咽癌患者her2基因表达的意义

目的　探讨鼻咽癌her2基因在DNA水平的变化并弄清her2癌蛋白在部分鼻咽癌中过度表达的分子机制。方法　用间期荧光原位杂交（FISH）和免疫组织化学分析方法对45例原发性鼻咽癌及其癌旁正常组织her2基因在DNA和蛋白质水平的变化。结果　癌旁正常组织细胞核her2信号为1.92±0.10,有2个her2信号和2个17号着丝粒信号核占75.5%±9.3%；与之相比，45例鼻咽癌中无一例有her2基因拷贝数的变化；Her2癌蛋白过表达见于33%（15/45）。但各年龄、性别和不同临床分期鼻咽癌之间表达差异无显著意义。结论　Her2癌蛋白过表达与her2基因扩增无关，其产生机制及其生物学意义有待进一步探讨。     

宫颈癌组织及细胞中环氧合酶-2的表达及其意义

目的: 研究宫颈癌组织及细胞株中环氧合酶-2(COX-2)蛋白及基因表达情况. 方法: 用免疫组化方法检测29例宫颈癌患者COX-2的表达水平,并以14例慢性宫颈炎症患者和18例正常宫颈上皮为对照组;用免疫细胞化学方法和原位分子杂交法检测宫颈癌细胞株SiHa和HeLa中COX-2蛋白及基因表达. 结果: ①宫颈癌患者COX-2表达阳性率为75.9%,高于慢性宫颈炎症患者和正常宫颈上皮组(P<0.01);②COX-2在不同宫颈癌FIGO(国际妇产科联盟)分期、病理分级中的表达水平不同,但这一差异无统计学意义(P>0.05);③COX-2在宫颈鳞癌及腺癌中均有表达,但两者相比无显著性差异(P>0.05),在腺鳞癌中未见COX-2表达;④COX-2在宫颈癌细胞株SiHa和HeLa中均有阳性表达,两者表达强度无明显差异;⑤在宫颈癌细胞株SiHa和HeLa中均可见到COX-2 mRNA呈阳性表达. 结论: 宫颈癌中COX-2的表达水平明显上调,其表达与宫颈癌的发生发展有关.     

茶氨酸对鼻咽癌细胞CNE2增殖及凋亡影响的研究

目的研究茶氨酸在体内外对鼻咽癌细胞株CNE2增殖、凋亡、抗血管生成的作用。方法体外培养鼻咽癌CNE2细胞,将其分为阴性对照组,顺铂(CDDP)组和茶氨酸实验组,分别用PBS、CDDP和不同浓度的茶氨酸处理体外培养的CNE2细胞。MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪和TUNEL法分析细胞凋亡,观察茶氨酸对CNE2细胞株裸鼠移植瘤的抑制作用,免疫组织化学检测CD34、VEGF的表达情况。结果 100,200,400,800 mmol/L浓度的茶氨酸对鼻咽癌CNE2细胞作用72 h时细胞增殖抑制率达到峰值。流式细胞仪和TUNEL法检测100,200,400,800 mmol/L浓度的茶氨酸处理72 h后细胞凋亡率最高,而且随着浓度的增加,细胞凋亡率升高。茶氨酸对移植瘤的抑瘤率为44.54%。实验组与对照组相比,瘤体组织中CD34、VEGF的表达均降低,具有统计学意义。结论茶氨酸通过抑制肿瘤血管生成、抑制肿瘤生长、促进肿瘤细胞凋亡,从而抑制鼻咽癌细胞CNE2的增殖。     

白藜芦醇对鼻咽癌细胞株 CNE-2Z 增殖和凋亡的影响

目的　探讨白藜芦醇 (resveratrol,Res)对鼻咽癌细胞株 CNE- 2 Z增殖和凋亡的影响。方法　采用 MTT法检测 IC50 值 ,流式细胞术、Hoechst 332 5 8/PI荧光染色和 DNA琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡。结果　不同浓度Res分别处理细胞 2 4 ,4 8和 72 h,其 IC50 值分别为 (10 9.2± 7.5 ) ,(83.6± 6 .0 ) ,(5 4 .3± 2 .8) μmol/L,各 IC50 值间比较差异显著 (P<0 .0 1)。2 5 ,5 0 ,10 0和 2 0 0 μm ol/L Res分别处理细胞 2 4 h后 ,5 0 ,10 0 ,2 0 0 μmol/L Res处理组经流式细胞术和荧光染色检测出的细胞凋亡率均明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,荧光染色可见典型的凋亡形态学改变 ,10 0 ,2 0 0 μmol/L Res处理组可见明显的 DNA梯带。结论　 Res可通过诱导 CNE- 2 Z细胞株凋亡而抑制其增殖。     

二甲双胍对人鼻咽癌C666-1细胞的增殖与凋亡作用

目的：探讨二甲双胍对人鼻咽癌C666-1细胞增殖和调亡的作用,并初步研究其作用机制.方法：体外培养人鼻咽癌C666-1细胞,以剂量5,10,20 mM的二甲双胍干预细胞24 h或48 h.采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Real-time PCR检测Bax、Bcl-2和Caspase-3表达.结果：二甲双胍抑制C666-1细胞增殖,随剂量增加和干预时间延长,细胞增殖的抑制作用增强（P＜0.05）.二甲双胍诱导C666-1细胞早期凋亡,有剂量效应关系,20 mM的二甲双胍干预细胞24 h,细胞早期凋亡率（12.40±1.01）％,高于对照组的（7.20±0.53）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.二甲双胍诱导C666-1细胞Caspase-3表达上调,降低Bcl-2/Bax比值.结论：二甲双胍抑制人鼻咽癌C666-1细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达有关.     

胃癌组织ezrin表达的意义

目的:研究ezrin基因与胃癌发生发展的关系.方法:采用原位杂交和免疫组化法,检测60例胃癌和15例正常及40例不典型增生胃黏膜中ezrin mRNA及蛋白的表达.结果:在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中ezrin mRNA及蛋白阳性表达率呈递减趋势.组间差异性均有统计学意义(P＜0.001);ezrin mRNA和蛋白表达在不同浸润深度、肿瘤大小和有无淋巴结转移组内表达率的差异性有统计学意义(P＜0.05),而在年龄、性别和脉管侵犯组内差异无统计学意义(P＞0.05).Ezrin mRNA和蛋白表达呈正相关(rs=0.990,P＜0.01).结论:Ezrin表达降低与胃癌的发生、发展及浸润转移有密切关系.