番荔枝内酯类化合物对耐紫杉醇肺癌细胞A549/Taxol的体外活性研究

选择10种番荔枝内酯类化合物对耐紫杉醇肺癌细胞A549/Taxol的活性,并分析其构效关系。采用MTT比色法,检测10种番荔枝内酯类化合物和阳性药对A549/Taxol细胞的抑制活性,分别为uvariamicin-Ⅲ(1), uvariamicin-Ⅱ(2), annosquacin D(3), desacetyluvaricin(4), annosquatin A(5), squamostatin D(6), bullatacin(7), squamocin(8), motrilin(9), annosquatin B(10), 维拉帕米和顺铂。番荔枝内酯类化合物对A549/Taxol细胞有很好的抑制作用,且抑制活性比阳性药维拉帕米和顺铂强。番荔枝内酯类化合物中的四氢呋喃环与内酯环之间的碳数越长,化合物的活性越强;在邻双四氢呋喃型番荔枝内酯类化合物中,链上含有2个羟基的化合物的活性强于链上含有3个羟基的;在间双四氢呋喃型番荔枝内酯类化合物中,链上含有3个羟基的活性强于链上含有4个羟基的。     

番荔枝内酯类化合物基于耐阿霉素肝癌细胞SMMC-7721/ADR的构效关系研究

研究12种番荔枝内酯类化合物对耐阿霉素肝癌细胞SMMC-7721/ADR的作用,并初步探究其构效关系。实验利用实时荧光定量PCR法检测12种番荔枝内酯类化合物:annosquamin A(1),annosquamin B(2),annotemoyin~(-1)(3),uvariamicinⅡ(4),annosquacin D(5),annosquacin B(6),isodesacetyluvaricin(7),uvarigrandin A(8),squamostatin D(9),squamostatin E(10),squamostatin A(11),12,15-cis-squamostatin A(12)对SMMC-7721/ADR细胞中相关基因NDUFV2的表达量。该研究发现所有受试化合物均使SMMC-7721/ADR中NDUFV2表达量有所下调,邻双四氢呋喃环型番荔枝内酯活性最强,而间双四氢呋喃环型番荔枝内酯活性最弱。内酯环与邻近的四氢呋喃环间碳数越少,作用越强;对于邻双四氢呋喃型番荔枝内酯化合物,链上含有的羟基个数越多,化合物作用可能越强;对于间双四氢呋喃型番荔枝内酯化合物,链上含有的羟基个数越少,化合物作用可能越强;且受试化合物中均是含有3个羟基取代的化合物作用较强;相对构型为苏式的番荔枝内酯的作用比赤式的强,四氢呋喃环为顺式构型的番荔枝内酯的作用比反式的强;在其他基团完全相同的情况下,长链烷基端部与邻近的四氢呋喃环之间的碳数越少,作用越强。     

番荔枝内酯类化合物对耐阿霉素乳腺癌细胞MCF-7/ADR体外活性的影响

目的 研究15种番荔枝内酯类化合物对耐阿霉素乳腺癌细胞MCF-7/ADR的活性,并初步探讨其构效关系。方法MTT法检测15种番荔枝内酯化合物:annotemoyin-1(1)、annosquamin B(2)、annosquamin A(3)、annosquamin C(4)、annosquacin C(5)、urarigrandin A(6)、isodesacetyluvaricin(7)、annosquacin D(8)、annosquacin B(9)、12,15-cis-squamostatin-A(10)、squamostatin-A(11)、squamostanin-B(12)、squamostanin-A(13)、squamostatin-D(14)、squamostatin-E(15)对MCF-7/ADR细胞的抑制作用。结果 所有受试化合物对MCF-7/ADR细胞均有强烈的抑制活性,且活性强于阳性药维拉帕米,化合物1的活性达到维拉帕米的190倍之多。结论 四氢呋喃环与内酯环间的碳数越长,活性越强;链上羟基越多,活性越强;间双四氢呋喃型番荔枝内酯中,链上含有4个羟基的活性最强;相对构型为赤式的番荔枝内酯的活性比苏式的强,四氢呋喃环为反式构型的番荔枝内酯的活性比顺式的强。此外,相对分子质量为622,链上含有3个羟基,相对构型为赤式的邻双四氢呋喃型番荔枝内酯活性显著。     

白苞蒿化学成分研究

 目的 研究白苞蒿（Artemisia lactiflora Wall. ex DC.的化学成分。方法 采用多种色谱方法分离纯化化合物,根据波谱学方法结合理化性质鉴定化合物的结构。结果 从白苞蒿乙醇提取物的氯仿萃取部位分离得到的12个化合物,分别鉴定为4-(2-hydroxyethoxy acetophenone (1,黑麦草内酯 (2,异黑麦草内酯 (3,异香草酸 (4,对羟基苯甲酸 (5,反式对羟基肉桂酸 (6,反式对羟基肉桂酸乙酯 (7,(+-松脂素 (8,(+-麦迪奥脂素 (9,(+-丁香树脂素(10,丁香酸 (11,二氢异阿魏酸 (12。结论 化合物1是首次从天然产物中分得,化合物2~12均为首次从该植物中分得,其中化合物4,7,8,12 为蒿属植物中首次发现。     

番荔枝子中4个新的邻双四氢呋喃型番荔枝内酯

目的 研究番荔枝Annona squamosa种子的化学成分。方法 通过多种现代色谱技术对番荔枝子超临界CO₂提取物的化学成分进行分离纯化,并根据理化性质和谱学数据确定其结构。结果 从番荔枝子中分离得到7个化合物,分别鉴定为3-[12-[5-[5-(1-羟基十二烷基)-2-四氢呋喃基]-2-四氢呋喃基]-9,12-二羟基十二烷基]-5-甲基-2(5H)-呋喃酮（1）、3-[11-[5-[5-(1-羟基癸烷基)-2-四氢呋喃基]-2-四氢呋喃基]-8,11-二羟基十一烷基]-5-甲基-2(5H)-呋喃酮（2）、3-[9-[5-[5-(1,3-二羟基十四烷基)-2-四氢呋喃基]-2-四氢呋喃基]-9-羟基壬烷基]-5-甲基-2(5H)-呋喃酮（3）、3-[8-[5-[5-(1-羟基十四烷基)-2-四氢呋喃基]-2-四氢呋喃基]-2,8-二羟基辛烷基]-5-甲基-2(5H)-呋喃酮（4）、阿诺西林甲（5）、annosquacin A（6）和乙酰紫玉盘素（7）。结论 化合物1～4为4个未见报道的新邻双四氢呋喃型番荔枝内酯类化合物,分别命名为顺式-11-羟基鳞状辛素丙（1）、10-羟基鳞状辛素（2）、鳞状亭素戊（3）和鳞状亭素己（4）。     

苦楝中的三萜类和甾体成分及其抗糖尿病活性研究

目的 研究苦楝Melia azedarach皮的化学成分及其抗糖尿病活性。方法 运用正相、反相及Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法分离纯化化合物,通过波谱数据和理化性质鉴定结构,并测试所得化合物体外对葡萄糖激酶（GK）、组蛋白去乙酰化酶SIRT1激动活性和二肽基肽酶IV（DPPIV）、11β-羟基类固醇脱氢酶（11β-HSD）的抑制活性。结果 从苦楝皮甲醇提取物中分离得到6个三萜和3个甾体化合物,分别鉴定为meliastatin 3（1）、苦楝酸（2）、苦楝萜酮内酯（3）、sendanolactone（4）、南岭楝酮B（5）、20, 24-环甘遂烷-7(8)-烯-16β, 21α, 25-三羟基-3-酮（6）、3β-羟基-5, 8-环氧麦角甾-6, 22-二烯（7）、2β, 3β, 4β-三羟基-孕甾-16-酮（8）、3β-羟基-孕甾-5, 17 (20)-二烯-16-酮（9）。化合物2对人11β-HSD1的IC₅₀值为54.15 nmol/L。结论 化合物6～9为首次从该植物中分离得到,受试化合物1～4均未表现出GK、SIRT1体外激动活性和DPPIV抑制活性,但化合物2对人11β-HSD具有良好的选择性。     

依达拉奉对大鼠急性全脑缺血再灌注损伤的治疗作用

 目的 评价依达拉奉对大鼠全脑缺血再灌注损伤的治疗作用,为其在临床的应用提供实验依据。方法 采用大鼠四动脉阻断（4VO,20 min制备全脑缺血再灌注模型,用尼氏染色方法考察依达拉奉注射液对海马CA1区神经元病理损伤的影响,生化方法进行脑组织中氧化-抗氧化指标的测定,线粒体氧耗测定仪进行脑线粒体呼吸功能的评价。结果 依达拉奉（3 mg·kg-1,iv对于大鼠全脑缺血再灌注后脑海马CA1区神经元的形态及数量均有显著改善作用;可显著抑制氧化应激导致的脑组织中超氧化物歧化酶（SOD的活性改变,降低丙二醛（MDA、NO、髓过氧化物酶（MPO的含量;显著提高线粒体NADH/FADH₂呼吸链的ADP/O、V3、RCI、OPR,提高氧化磷酸化效率。结论 依达拉奉通过抑制氧化应激、改善线粒体呼吸功能,从而发挥其对于大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

大苞藤黄叶化学成分研究

目的 研究大苞藤黄Garcinia bracteata叶化学成分。方法 采用正、反相硅胶柱色谱及高效液相色谱等多种技术进行分离纯化,并通过NMR、HR-ESI-MS以及量子化学计算鉴定化合物结构。通过CCK-8方法,评价了所有化合物对人非小细胞肺癌细胞A549体外抗增殖活性。结果 从大苞藤黄叶醋酸乙酯提取物中分离得到了12个化合物,分别鉴定为1,3,5-三羟基-5,6,7,8-四氢(口山)酮（1）、1,3-二羟基-5-羰基-5,6,7,8-四氢(口山)酮（2）、1,3,5,6-四羟基-8-异戊烯基缩酚酸环醚（3）、松脂醇（4）、对羟基苯丙烯酸（5）、3-甲氧基-4,4'',5-三羟基联苯（6）、(2S)-2,9-巨豆二羟基-6-烯-1-酮（7）、(2R)-2,9-巨豆二羟基-6-烯-1-酮（8）、(5Z)-9-羟基-1,5-巨豆二烯-2-酮（9）、2-氧代-a-紫罗兰醇（10）、黑麦草内酯（11）、gardeterpenone A（12）。结论 化合物1、2为新的(口山)酮类化合物,化合物3为新的缩酚酸类化合物,分别命名为大苞藤黄甲素、大苞藤黄乙素和大苞藤黄丙素（garbractinones A−C）;化合物7～10为降倍半萜类化合物,化合物11、12为单萜类化合物,均是首次从大苞藤黄叶中分离得到。所有化合物（50 mmol/L）对A549细胞没有表现明显的抗增殖活性,其抑制率小于50%。     

乌天麻二氯甲烷萃取部位化学成分及其胆碱酯酶抑制活性的研究

目的 研究乌天麻Gastrodia elata二氯甲烷萃取部位的化学成分及其胆碱酯酶抑制活性。方法 采用Ellman法测定了二氯甲烷萃取部位对乙酰胆碱酯酶（acetyl cholinesterase,AChE）和丁酰胆碱酯酶（butyryl cholinesterase,BuChE）的抑制活性;利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化;利用NMR、MS等技术鉴定化合物结构;测定所有单体化合物的胆碱酯酶抑制活性。结果 乌天麻二氯甲烷萃取部位对AChE和BuChE均有显著的抑制活性,半数抑制浓度（median inhibition concentration,IC₅₀）分别为10.45、9.20μg/mL;从中分离得到11个化合物,分别鉴定为环[甘氨酸-l-S-(4''-羟基苯基)半胱氨酸]（1）、5''-甲硫基腺苷（2）、对羟基苄胺（3）、对羟基苯甲醇（4）、对羟基苯甲醛（5）、2-甲基-3-羟基吡啶（6）、4-乙酰氧甲苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（7）、4-(乙氧基甲基)苯酚β-D-吡喃葡萄糖苷（8）、小檗碱（9）、(＋)-thalirugidine（10）和(＋)-海兰地嗪（11）。结论 化合物1～3和9～11为首次从天麻属中分离得到。化合物9（IC₅₀＝5.93μmol/L）和10（IC₅₀＝42.49μmol/L）对AChE有抑制活性,化合物10（IC₅₀＝21.20μmol/L）对BuChE有抑制活性。     

脾气虚大鼠胃黏膜细胞线粒体自噬相关蛋白表达的研究＊

目的 通过检测PTEN诱导激酶1（PTEN-induced putative kinase protein 1，PINK1）-Parkin通路及自噬相关蛋白表达，探讨脾气虚胃黏膜细胞线粒体损伤的可能机制。方法 16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚证模型组（模型组），每组8只；透射电镜观察胃黏膜细胞线粒体形态，JC-1法测量其膜电位（ΔΨm）；比色法测定其ATP含量和呼吸链复合物（respiratory chain complex，RCC）I-IV活性；Western blot法检测其RCCV、PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein light chain 3，LC3）-I和II及p62等表达。结果 与正常组比较，模型组胃黏膜细胞的线粒体嵴减少，ΔΨm和ATP水平下降，RCCI和IV活性降低，RCCV、PINK1、Parkin和LC3-II表达下降，但LC3-I和p62表达上升。结论 脾气虚胃黏膜细胞线粒体结构和功能损伤与PINK1-Parkin通路抑制所导致的线粒体自噬水平低下有关。     

哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列分析

[目的]获取哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列。[方法]应用差速离心以及滚环扩增的方法得到纯度较高的线粒体DNA,采用Illumina HiSeq X Ten技术对扩增得到的哈氏蜈蚣线粒体DNA进行测序,采用从头组装和mapping近缘种的方法拼接组装线粒体基因组,应用MITOS在线注释及与近缘种进行本地注释等方法注释线粒体基因组。[结果]获得14 538 bp哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列。其共有20个tRNA及13个蛋白基因,2个rRNA(16S rRNA、12S rRNA)。[结论]获取哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列,并可用于药用蜈蚣的资源调查与保护研究。     

羟基红花黄色素A缓解大鼠心肌线粒体损伤的作用研究

 目的研究红花成分羟基红花黄色素A(HSYA)对大鼠心肌线粒体损伤的作用。方法采用低温离心法制备大鼠心肌线粒体;比浊法检测线粒体肿胀;荧光偏振法测量线粒体膜流动性;硫代巴比妥酸比色法观察线粒体脂质过氧化水平。结果HSYA可明显减轻离体大鼠心肌线粒体肿胀(P<0.05)、缓解线粒体膜流动性的下降(P<0.001)、抑制羟自由基诱导的线粒体脂质过氧化(P<0.001)。结论HSYA可减轻大鼠心肌线粒体的损伤。     

益心泰对慢性心力衰竭大鼠线粒体分裂蛋白Fis1、Mff的影响

目的 研究益心泰对慢性心力衰竭大鼠线粒体分裂蛋白的干预作用及其机制。方法 60只SD大鼠随机抽取10只作为假手术组，剩余50只采用结扎左冠状动脉前降支法制备心肌梗死后心力衰竭大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、益心泰低、中、高剂量组（1.4、2.8、5.6 g·kg^-1）、曲美他嗪组（10 mg·kg^-1），各给药组予相应剂量药物灌胃，模型组和假手术组给予等体积的生理盐水灌胃，连续给药28 d。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清氨基末端B型利钠肽（NT-pro BNP）、B型利钠肽（BNP）、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）含量；彩色多普勒超声成像仪检测心功能指标；苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色法观察心脏病理形态学改变，使用Image J软件计算胶原容积分数（CVF）；透射电镜观察心肌细胞超微结构变化；原位末端标记法（TUNEL）染色检测心肌组织细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织线粒体外膜线粒体分裂蛋白1（Fis1）、线粒体分裂因子（Mff）表达。结果 与假手术组比较，模型组血清NT-pro BNP、BNP含量显著升高（P<0.01），ATP含量显著降低（P<0.01），左心室射血分数（LVEF）及左心室短轴缩短率（LVFS）下降（P<0.01），左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）升高（P<0.01），心肌细胞排列紊乱、炎性细胞浸润、胶原纤维增多、CVF上升（P<0.01），心肌及线粒体出现损伤，心肌细胞凋亡指数升高（P<0.01），心肌组织线粒体分裂蛋白Fis1、Mff表达上调（P<0.01）；与模型组比较，益心泰低、中、高剂量组及曲美他嗪组血清NT-pro BNP、BNP含量降低（P<0.05），ATP含量升高（P<0.05），益心泰低、中、高剂量组及曲美他嗪组LVEF、LVFS升高（P<0.01），LVIDd、LVIDs均降低（P<0.01），各剂量益心泰治疗组及曲美他嗪组心肌炎症损伤减轻、纤维化得到改善，CVF降低（P<0.01），各剂量益心泰治疗组及曲美他嗪组心肌线粒体结构得到改善，各剂量益心泰治疗组及曲美他嗪组心肌细胞凋亡指数下降（P<0.01）；益心泰中、高剂量组及曲美他嗪组心肌组织Fis1、Mff蛋白表达下调（P<0.05）。结论 益心泰可改善线粒体结构、减轻心肌细胞凋亡、提升心功能，其作用机制可能与抑制心肌组织线粒体分裂蛋白Fis1、Mff表达有关。     

基于线粒体靶向机制的石蒜碱抗肝癌作用研究

目的研究石蒜碱诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及其机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测石蒜碱对HepG-2细胞的生长抑制作用;倒置显微镜、荧光显微镜观察HepG-2细胞凋亡形态;透射电镜观察HepG-2细胞超微结构;流式细胞术检测HepG-2细胞凋亡率;激光共聚焦扫描显微镜检测线粒体膜电位;激光共聚焦显微镜检测HepG-2细胞线粒体膜通透性转换孔(MPTP);酶标仪检测Caspase-3蛋白活性;Western blotting法检测细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cyt-C、Caspase-9的表达。结果石蒜碱对HepG-2细胞具有生长抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为5.73μmol/L;形态学观察发现石蒜碱作用48 h后,细胞生长密度变疏、皱缩,且细胞生长呈现不规则形状,出现凋亡小体,随着给药浓度升高,凋亡小体也逐渐增多;透射电镜下可见细胞出现典型的凋亡特征;与对照组比较,随着石蒜碱给药浓度的增加,细胞凋亡率随之升高,线粒体膜电位下降,MPTP开放;石蒜碱作用48 h后,HepG-2细胞内Caspase-3蛋白相对活性升高,细胞内Cyt-C蛋白、Caspase-9蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达量降低,Bax蛋白表达量升高,且呈浓度依赖性关系,与对照组比较,具有统计学意义;结论石蒜碱对HepG-2细胞具有生长抑制作用,并可通过启动线粒体途径诱导HepG-2细胞发生凋亡。     

Mild Mitochondrial Depolarization is Involved in a Neuroprotective Mechanism of Citrus sunki Peel Extract

Mitochondrial membrane potential (?Ψ_m) contributes to determining a driving force for calcium to enter the mitochondria. It has been demonstrated that even a small mitochondrial depolarization is sufficient to prevent mitochondrial calcium overload and the subsequent apoptosis. Therefore, mild mitochondrial depolarization has been recently evaluated as a novel mechanism of neuroprotection via inhibiting neurotoxic mitochondrial calcium overload during neuronal insults. In the present study, using both real‐time recording and flow cytometric analyses of ?Ψ_m, we demonstrated that ethanolic peel extract of Citrus sunki Hort. ex Tanaka (CPE) and its active compounds are capable of inducing a mild mitochondrial depolarization. Polymethoxylated flavones such as nobiletin and tangeretin were found as the active compounds responsible for CPE effects on ?Ψ_m. Neuronal viability was significantly increased in a dose‐dependent manner by CPE treatment in H₂O₂‐stimulated HT‐22 cells as an in vitro neuronal insult model. CPE treatment significantly inhibited H₂O₂‐induced apoptotic processes such as chromatin condensation, caspase 3 activation and anti‐poly (ADP‐ribose) polymerase (PARP) cleavage. CPE treatment significantly blocked mitochondrial calcium overload in H₂O₂‐stimulated HT‐22 neurons as indicated by rhod‐2 acetoxymethyl ester. Taken together, our findings suggest that CPE and its active compounds may be considered as promising neuroprotective agents via inducing a mild mitochondrial depolarization. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

中医药靶向调节线粒体动力学及相关蛋白SUMO化修饰防治脑缺血/再灌注损伤的研究进展

线粒体稳态失衡在脑缺血/再灌注损伤（cerebral ischemia/reperfusion injury,CI/RI）病理过程中扮演重要角色。线粒体分裂/融合的动态调节（线粒体动力学）作为线粒体质量控制（mitochondrial quality control,MQC）的关键环节，在CI/RI中维持线粒体稳态发挥重要作用。小泛素相关修饰物（small ubiquitin-related modifier,SUMO）修饰是一类存在于细胞内动态可逆的蛋白质翻译后修饰形式，通过对底物蛋白进行多步酶促反应以完成对靶蛋白的SUMO修饰和去SUMO修饰过程，进而影响底物蛋白的亚细胞定位、蛋白互作和稳定性，其普遍参与了蛋白转运、信号传导、DNA修复、炎症反应及氧化应激等病理生理过程。线粒体动力学及相关蛋白通过SUMO化修饰调控线粒体融合和分裂，进而调节线粒体稳态，在CI/RI进展与转归中发挥着关键作用。中药在防治缺血性脑病方面具有明显优势，综述了线粒体分裂/融合过程中相关蛋白的SUMO化修饰的调节机制，以及靶向调节线粒体动力学及相关蛋白SUMO化修饰防治CI/RI的中医药研究进展，以期为缺血性...     

不同脏腑虚损对慢性阻塞性肺疾病患者病情及线粒体功能的影响

目的：探讨不同脏腑虚损对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者病情及线粒体功能的影响。方法：纳入161例COPD稳定期患者,记录病史按脏腑虚损标准对纳入病例进行中医辨证分型,检测患者肺通气功能,采用COPD评估测试量表（CAT）、呼吸困难量表（m MRC）对患者进行评分、进行6 min步行试验（6MWT）;采集患者外周血分离有核细胞用流式细胞术进行线粒体膜电位、细胞内活性氧（ROS）检测;采用SPASS21.0对数据进行统计分析。结果：161例COPD患者中辨证为肺气虚者36例,肺脾气虚者31例,肺肾气虚者50例,肺脾肾虚44例,其中104例完成了线粒体实验。COPD患者的病程在肺脾气虚组最长,肺气虚组最短,4组间差异不具显著性（P=0.503）;肺通气功能FVC%在4组间差异不具有显著性（P=0.265）;FEV1%在各组间差异具有显著性（P=0.025）;CAT 在各组间差异具有显著性（P=0.001）,6MWD 在4 组间差异不具显著性（P=0.057）,FEV1%、FVC%、6MWT均值在肺脾肾虚组最低,CAT均值在肺脾肾虚组最高。线粒体膜电位（MTP）在肺脾气虚组与肺气虚组、肺肾气虚组比较差异有显著性（P<0.05）;细胞内活性氧（ROS）在肺脾气虚组与肺气虚组、肺肾气虚组比较差异有显著性（P<0.01）;线粒体膜电位（MTP）在肺脾气虚组明显降低,细胞内活性氧（ROS）在肺脾气虚组明显升高。结论：COPD的防治应重视脏腑虚损在发病中的作用;COPD患者线粒体功能障碍与脾虚有关,推测补脾疗法可能改善线粒体功能障碍。     

异丙酚预处理对Ca^2＋诱导大鼠心肌线粒体损伤的保护作用

目的探讨异丙酚预处理对Ca^2＋诱导大鼠心肌线粒体损伤的保护作用。方法健康Wistar大鼠35只，体重220g～235g，雌雄各半，断头处死迅速取出心脏制备线粒体悬液后，随机均分为5组，空白时照组（C组），CaCl2组加入CaCl2 100nmol／（mg·prot），不同浓度异丙酚组（P25组、P50组、P100组）分别加入不同终浓度异丙酚25μmol／L、50μmol／L、100μmol／L，5min后加入CaCl2 100nmol／（mg·prot）。分光光度法测540nm处吸光度的改变反映线粒体膜通透性转换（mitoehondrial permeability transition，MPT）的程度，以罗丹明123为荧光探针测定线粒体跨膜电位（mitochondrial transmembrane potential，△ψm）。结果与C组比较，其余各组线粒体膜MPT程度升高（P〈0．01），线粒体△ψm下降（P〈0．05或P〈0．01）。与CaCl2组比较，P25组、P50组和P100组线粒体膜MPT程度降低（P〈0．01），线粒体△ψm上升（P〈0．05或P〈0．01）。与P25组比较，P50组和P100组线粒体膜MPT程度降低（P〈0．01），线粒体△ψm上升（P〈0．05）。与P50组比较，P100组线粒体膜MPT程度降低（P〈0．01），而线粒体△ψm差异无统计学意义。结论异丙酚预处理可减轻Ca^2＋造成的线粒体膜MPT和△ψm的降低，对Ca^2＋诱导的大鼠心肌线粒体损伤产生保护作用。     

1,6-二磷酸果糖镁盐对大鼠实验性心肌线粒体损伤的治疗作用

 目的观察1,6-二磷酸果糖镁盐(FDP-Mg)对由异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌线粒体缺血性损伤的治疗作用。方法采用皮下多点注射Iso致大鼠心肌缺血损伤模型,静脉分别予FDP-Mg100mg·kg^-1及FDP-Na120mg·kg^-1和MgSO₄30mg·kg^-1进行治疗,观察心肌细胞及线粒体超微结构的变化,测定药物对缺血损伤的心肌细胞内的线粒体膜电位的影响及对线粒体肿胀的抑制率。同时利用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶氧自由基发生系统和CuSO₄/细胞色素C羟自由基发生系统分别检测药物对超氧阴离子(O₂^-)和羟自由基(·OH)的清除率。结果FDP-Mg可以显著改善由Iso所诱导的线粒体膜电位异常改变,抑制线粒体肿胀。且对·OH和O₂^-有较高的清除率,与对照组相比有显著差异。电镜显示FDP-Mg对维持线粒体的正常形态有明显作用。结论FDP-Mg可有效保护由Iso所致的心肌细胞的线粒体实验性缺血损伤。     

芍药苷对糖尿病周围神经病变状态下线粒体输入途径蛋白TOM20的作用

目的 探究芍药苷对糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy,DPN）大鼠坐骨神经和高糖环境下雪旺细胞（Schwann cells,SCs）线粒体输入途径蛋白线粒体外膜转位酶20（translocase of outer mitochondrial membrane 20,TOM20）的影响。方法 以25、100、150 mmol/L葡萄糖分别干预RSC96雪旺细胞株12、24、48 h,用高内涵分析法检测TOM20和线粒体硫氧还蛋白2（mitochondrial thioredoxin 2,Trx2）的表达;设置对照组（给予25 mmol/L葡萄糖）、TOM20 siRNA组、TOM20 siRNA＋芍药苷24 h组和TOM20 siRNA＋芍药苷48 h组,转染TOM20 siRNA后给予10 mmol/L芍药苷分别干预24、48 h,利用Western blotting检测TOM20和Trx2蛋白表达;设置对照组（给予25 mmol/L葡萄糖）、高糖组（给予150 mmol/L葡萄糖）和芍药苷组（给予150 mmol/L葡萄糖和10 mmol/L芍药苷）,利用高内涵分析法检测TOM20和Trx2蛋白表达。制备DPN大鼠模型,给予白芍总苷后,利用免疫荧光法检测大鼠坐骨神经中TOM20和Trx2蛋白表达。结果 高内涵分析结果显示,150 mmol/L葡萄糖干预12、24 h后,TOM20和Trx2蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05、0.01）,且2种蛋白的表达变化存在相关性。与对照组比较,高糖组TOM20和Trx2蛋白表达均显著降低（P＜0.01）;与高糖组比较,芍药苷组TOM20和Trx2蛋白表达均显著升高（P＜0.01）。Western blotting结果显示,与对照组比较,TOM20 siRNA组TOM20和Trx2蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05、0.01）;与TOM20 siRNA组比较,芍药苷干预24、48 h后TOM20和Trx2蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05、0.01）。与对照组比较,模型组大鼠坐骨神经中TOM20和Trx2蛋白表达均显著降低（P＜0.01）;与模型组比较,白芍总苷组TOM20和Trx2蛋白表达均显著升高（P＜0.01）。结论 芍药苷能够通过上调SCs以及大鼠坐骨神经中TOM20蛋白的表达,促进Trx2蛋白的线粒体输入,从而有效对抗线粒体氧化应激干预DPN。