人载脂蛋白A1基因转基因小鼠的建立

目的 建立系统性表达人载脂蛋白Al(APOA1)基因的转基因小鼠.方法 将人APOA1基因插入系统性表达启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立人APOA1转基因C57BL/6J小鼠.并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测基因表达水平,血生化分析检测不同月龄转基因小鼠与同龄野生型小鼠的血脂指标.结果 建立了2个不同表达水平的人APOA1基因的转基因小鼠品系；转入的人APOA1基因在血液、肝脏、心脏、肾脏、脾脏、血管组织中均有明显表达；血生化分析结果显示不同月龄转基因小鼠的血浆高密度脂蛋白胆固醇水平高于同龄的野生型小鼠,甘油三酯水平低于同龄野生型小鼠.结论 成功建立了系统性表达人APOA1基因的转基因小鼠,为研究高血脂以及高血脂相关的心血管病提供了工具.     

广泛表达人载脂蛋白E3转基因小鼠的建立

目的 建立人载脂蛋白E3(apolipoprotein E3,ApoE3)转基因小鼠,研究该基因在多种组织中表达水平的变化对动物的影响,探索该基因的功能.方法 RT-PCR法克隆人ApoE3基因,把该基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立转ApoE3基因C57BIJ6J小鼠.并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Westem blot检测基因表达水平.通过生化指标分析初步鉴定ApoE3基因的功能.结果建立了2个系的高表达人ApoE3转基因小鼠.结论 成功建立了CMV启动子启动的高表达人ApoE3基因转基因小鼠,为进一步探索该基因的功能奠定了基础.     

人突变的载脂蛋白E对转基因小鼠学习与记忆能力的影响

目的 研究突变的人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）对大脑皮层功能的影响。方法 以Ｆ１代ａｐｏＥ４与ａｐｏＥ７转基因小鼠为研究对象,分别用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析及ＥＬＩＳＡ检测人ａｐｏＥ基因在Ｆ１代小鼠染色体上的整合与在血中的表达;以主动回避实验检测小鼠的学习能力和短期与长期记忆能力的变化,同时用酶法测定Ｆ１代小鼠的血脂水平。结果 （１）人ａｐｏＥ４和ａｐｏＥ７基因稳定地整合于Ｆ１代小鼠染色体上并高效表达于     

氧化低密度脂蛋白诱导人载脂蛋白AI转基因小鼠血管平滑肌细胞差异表达基因的研究

目的 为研究人载脂蛋白AI(h-ApoA-I)抗氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所导致的平滑肌细胞增生及脂质浸润的分子机制,克隆并分析可明显抑制动脉内膜脂质沉积和粥样斑块形成的h-apoA-I转基因小鼠血管平滑肌细胞(vSMC)抗ox-LDL所致AS过程中表达的相关基因。方法以ox-LDL为刺激物作用于培养的转基因小鼠vSMC,应用抑制性差减杂交方法构建减除文库,筛选、克隆差异表达基因,并进行序列测定及同源性比较。同时用SMART技术构建了ox-LDL诱导的转基因小鼠vSMC全长噬菌体文库。结果从57个差异克隆中随机选取15个克隆测序并分析,得到3个表达序列标签(EST),均为与免疫系统有关的功能基因片段,即：补体C1-抑制物(C1-INH)、植物凝集素及T细胞受体B(TCRB)。有明显抗内膜脂质沉积能力的h-apoA-I转基因小鼠的vSMC在被ox-LDL诱导后,筛选出的3个EST均与免疫系统有关,其中C1-INH及植物凝集素与补体系统密切相关。结论ox-LDL致AS及h-ApoA-I抗AS可能有免疫机制参与,且与补体活化及其调控密切相关。其中C1-INH作为抗AS的潜在靶点值得关注。     

人bcl-xL基因在转基因小鼠中的整合和表达

目的研究人bcl—xL基因在显微注射所产生的子代小鼠中的整合、转录和表达情况。方法采用PCR和Southern blot方法检测人bcl—xL基因在小鼠体内的整合；RT—PCR方法检测它们的bcl—xL mRNA水平；用Western blot及免疫组化法检测目的蛋白的表达情况。结果在显微注射所产生的转基因小鼠中，有4只为Southern blot检测阳性，并且在这4只小鼠及其子代中均检测到人bcl—xL的mRNA和过表达的目的蛋白。结论由于在这些小鼠中既有外源基因的整合，又有其mRNA和蛋白质的表达，所以，它们是真正的转基因动物。     

载脂蛋白CⅢ基因多态性频率分布及与高脂血症患者关系的研究

目的 探讨ApoCⅢ基因中,ApoCⅢ3175、ApoCⅢ3206基因型及等位基因频率及其与原发性高脂血症患者的相关性.方法 采用病例一对照相关性研究策略,选择昆明地区汉族作为研究对象,对91例高脂血症患者及76例健康对照者进行了上述基因多态性检测.结果 ①76例健康者中,ApoCⅢ3175位点的CC、CG、GG基因型频率分别是0.421、0.553、0.026;C和G等位基因频率分别是0.697、0.303.ApoCⅢ3206位点的GG、GT、TT基因型频率分别是0.671、0.276、0.053:G和T等位基因频率分别是0.809、0.191.②91例高脂血症患者中,ApoCⅢ 3175(CC、CG、GG)、ApoCⅢ 3175(GG、GT、TT)位点的基因型和等位基因多态性频率与对照组比较,差异无显著性意义(p>0.05).③昆明地区91例高脂血症患者中的TC、TG、HDL-C、LDL-C水平在ApoCⅢ 3175、ApoCⅢ 3206各位点不同基因型间比较,差异无显著性意义(p>0.05).结论 昆明地区汉族健康人群ApoCⅢ 3175、ApoCⅢ 3206基因多态性有地区特征;该地区汉族高脂血症患者中的ApoCⅢ 3175、ApoCⅢ 3206基因多态性可能与高脂血症可能有一定关联.     

载脂蛋白CⅢ基因多态性频率分布及与高脂血症患者关系的研究

目的探讨ApoCIII基因中,ApoCIII3175、ApoCIII3206基因型及等位基因频率及其与原发性高脂血症患者的相关性。方法采用病例-对照相关性研究策略,选择昆明地区汉族作为研究对象,对91例高脂血症患者及76例健康对照者进行了上述基因多态性检测。结果①76例健康者中,ApoCIII3175位点的CC、CG、GG基因型频率分别是0.421、0.553、0.026;C和G等位基因频率分别是0.697、0.303。ApoCIII3206位点的GG、GT、TT基因型频率分别是0.671、0.276、0.053;G和T等位基因频率分别是0.809、0.191。②91例高脂血症患者中,ApoCIII3175（CC、CG、GG）、ApoCIII3175（GG、GT、TT）位点的基因型和等位基因多态性频率与对照组比较,差异无显著性意义（p〉0.05）。③昆明地区91例高脂血症患者中的TC、TG、HDL-C、LDL-C水平在ApoCIII3175、ApoCIII3206各位点不同基因型间比较,差异无显著性意义（p〉0.05）。结论昆明地区汉族健康人群ApoCIII3175、ApoCIII3206基因多态性有地区特征;该地区汉族高脂血症患者中的ApoCIII3175、ApoCIII3206基因多态性可能与高脂血症可能有一定关联。     

人胰岛素转基因小鼠模型的建立

目的:建立人胰岛素的转基因小鼠模型.方法:通过原核显微注射法,把外源基因pEF1α-mINS注射入FVB种小鼠受精卵,胚胎移植给同期发情的假孕受体母鼠获得子代小鼠.结果:移植注射胚胎204枚给38只假孕小鼠共出生108只后代鼠,经PCR和Southern blot检测到5只阳性小鼠.结论:通过显微注射法使外源基因pEF1α-mINS在小鼠基因组中得到整合,建立了人胰岛素的转基因小鼠模型.     

载脂蛋白E基因缺陷(C57BL/6J-ApoE)小鼠血脂及病理组织学观察

目的观察我部饲养的不同年龄、不同性别的载脂蛋白E基因缺陷小鼠的血脂及病理组织学状况。方法选取2月龄和6月龄C57BL／6J-apoE小鼠，以C57BL／6J小鼠为对照组，测定血清中甘油三酯、总胆固醇、高窑度脂蛋白、低密度脂蛋白和载脂蛋白B的含量；小鼠全心脏液氮骤冷，冰冻切片，油红O染色，观察动脉粥样硬化斑块的形成。结果C57BL／6J-apoE小鼠血清中总胆固醇和低密度脂蛋白的含量显著高于同龄同性别C57BL／6J小鼠，高密度脂蛋白的含量显著低于同龄同性别C57BL／6J小鼠；不同性别、年龄的C57BIJ6J-ApoE小鼠血脂变化差异显著；ApoE小鼠血清中载脂蛋白B水平显著高于同龄同性别C57BL／6J小鼠，且随年龄增长显著升高。6月龄却oE小鼠主动脉切面可见脂质斑块。结论该模型小鼠较C57BL／6J小鼠血清中总胆固醇和低密度脂蛋白含量明显升高，高密度脂蛋白含量明显降低；血脂变化与年龄性别有关。6月龄时已形成脂质斑块，是研究动脉粥样硬化等心血管疾病较佳的动物模型。     

BIGH3R555w突变转基因小鼠模型的建立

目的建立BIGH3R555w突变转基因角膜营养不良小鼠模型。方法构建以磷酸甘油酸激酶（phosphoglyceratekinase,PGK）为启动子的BIGH3（M）-IRES-EGFP重组质粒载体,通过原核显微注射方法将线性化、纯化后的外源质粒注射入C57小鼠受精卵中,胚胎移植入假孕受体母鼠输卵管内,获得子代小鼠。用PCR方法检测子代鼠尾基因组DNA,通过RT—PCR及Western印迹法检测BIGH3基因表达。结果8只假孕小鼠共移植注射后的胚胎84枚,出生35只子代鼠,经PCR检测得到4只转基因阳性小鼠。RT—PCR和Westem印迹法检测结果显示,BIGH3R555w在转基因小鼠角膜表达量明显增多。结论通过显微注射法使外源基因B1GH3555w突变体在小鼠基因组中整合,成功建立了BIGH3突变转基因小鼠模型,该模型可为今后进一步研究角膜营养不良疾病的发病机制提供依据。     

三转基因银屑病小鼠模型建立与表型分析

目的 尿激酶型纤溶酶激活剂(PLAU)、尿激酶型纤溶酶激活剂受体(PLAUR)和信号传导与转录激活因子3(STAT3)是参与银屑病病理发生的重要基因。本文目的是制备皮肤特异性表达PLAU、PLAUR和STAT3三种基因的转基因小鼠,建立可进行性再现银屑病病理进程的小鼠模型。 方法 将PLAU、PLAUR和STAT3基因分别插入牛角蛋白5启动子(BK5)下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立在皮肤组织同时高表达PLAU、PLAUR和STAT3三种基因的转基因C57BL/6J小鼠。利用PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测基因表达水平,HE染色观察皮肤病理表型。 结果 PLAU、PLAUR和STAT3三种基因在选定的转基因小鼠皮肤组织均有明显表达;转基因小鼠与同龄野生型小鼠相比表皮状态差,炎症明显;4月龄的转基因小鼠真皮变簿,表皮过度角化、棘层增厚,毛囊减少、发育异常、部分毛囊内未见毛干,角化不全区域内可见Munro氏小脓肿,真皮炎细胞浸润。 结论 建立了稳定传代的皮肤特异性表达PLAU、PLAUR和STAT3基因的转基因小鼠品系,转基因小鼠具有进行性的银屑病表型,可以作为多病因综合银屑病小鼠模型。     

人子宫内膜异位症裸鼠模型的建立

目的研究C57BL／6J—HBV转基因小鼠的繁育规律,并从DNA、RNA、蛋白质、病毒学角度对该品系转基因小鼠进行综合分析。方法C57BL／6J-HBV转基因小鼠以两种不同的交配方式进行繁殖,利用PCR法对每一世代仔鼠检测其阳性率。利用RT—PCR和real-time PCR对转基因小鼠肝组织中的HBV DNA进行定性和半定量检测并对HBV基因在转基因小鼠中的转录特征进行分析。利用血清ELISA和Western Blotting方法,分析HBV病毒抗原在转基因小鼠中的表达和分泌特征。结果两种交配方式窝产仔数和离乳数存在显著性差异（P〈0．05）,互交后代小鼠的阳性率高于回交后代。4只乙型肝炎病毒转基因小鼠分别与正常C57BL／6J鼠杂交进行传代,其阳性率始终保持在40％～50%,表明C57BL／6J-Tg（AlblHBV）44Bri／J型HBV已稳定整合表达,并能可靠地遗传给下一代。转基因小鼠的肝组织可稳定表达的病毒抗原并可分泌入血。结论该转基因小鼠可长期稳定高表达HBV病毒抗原,可应用于乙型肝炎病毒相关研究。     

脂肪细胞因子CTRP4转基因鼠的构建与鉴定

目的建立人CTRP4基因的转基因小鼠,为脂肪细胞因子CTRP4的体内功能研究奠定基础。方法首先构建人CTRP4的转基因小鼠线性化表达载体,再利用显微注射的方法将载体注射入小鼠受精卵,从而构建人CTRP4的首建鼠(Founder)并与野生型小鼠交配繁殖得到F1代阳性小鼠,再通过近亲繁殖与测交的方法,得到CTRP4转基因纯合子小鼠,并通过PCR和western blot的方法对纯合子小鼠进行鉴定。结果得到人CTRP4转基因小鼠纯合子小鼠两个品系,western blot鉴定该转基因小鼠心脏,肝脏,脑,肾脏等多种组织中均呈现CTRP4高表达。结论成功构建了人CTRP4转基因小鼠纯合子小鼠。     

人ApoE转基因小鼠与TGE_（7－2） TGE_（7－3）转基因鼠系的建立

用含小鼠金属硫蛋白（ＭＴ－１）基因启动子与突变的人ＡｐｏＥ７基因的６．０ＫｂＤＮＡ片段作为目的基因制备转基因小鼠，利用显微注射法将目的基因导入４４１枚受精卵，移植于２０只假孕鼠，其中１５只受孕，共产仔鼠８０只，经ａ－３２Ｐ斑点杂交与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法鉴定出两只整合有人ＡｐｏＥ基因的转基因雌鼠，其拷贝数分别为２和５。将两只首建鼠（雌性Ｆｏ代）与正常雄鼠交配，建立Ｆ１代转基因鼠系ＴＧＥ７－２和ＴＧＥ７－３，为进一步从整体上研究ＡｐｏＥ在脂质代谢中的作用以及ＡｐｏＥ与动脉粥样硬化和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病的关系创造条件。     

人SR-AI转基因小鼠遗传与繁育的研究

目的探讨被转入的人SR-AI基因的整合与复制情况及其对小鼠繁育的影响.方法采用类似系祖建系的方法,对人SR-AI转基因小鼠的2、3534、3560、3638、3639五个系列进行了繁育.并用PCR和Southermblot的方法,检测五个系列小鼠尾组织的DNA样品.结果五个系列小鼠共产仔431只,PCR检出阳性小鼠178只,阳性率为41.2%.在3639系的F1、F2、F3代及纯合子转基因鼠中PCR阳性率分别为47.8%、71.3%、75%和100%.结论人SR-AI基因在子代鼠中能稳定遗传,且对生殖和发育无明显影响.     

PCR技术在转人肾素基因小鼠繁殖保存及育种中的应用

应用聚合酶链反应(PCR,Polymerase Chain ReacLion)方法检测转基因小鼠繁殖及育种过程中外源基因的整合,筛选携带目的基因的阳性仔鼠。     

人SR-AI转基因小鼠模型的主要形态学特性、血液学指标和血脂水平的研究

目的明确人SR-AI转基因小鼠的一些形态、脏器、血液学和血浆脂质参数,为人SR-AI转基因小鼠模型的应用提供相关依据.方法用游标卡尺和电子称量天平测量人SR-AI转基因小鼠的吻长、眶间距、体长、尾长及12个脏器系数并与C57BL/6J小鼠进行比较分析;用SysmexK-4500型全血自动多参数血液分析仪检测其血液学指标;并用酶法分别测定血浆总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇含量.结果人SR-AI转基因小鼠外部形态指标和脏器系数与C57BL/6J小鼠比较差异没有显著意义(P>0.05);转基因小鼠的各项血液学指标无明显改变,血脂蛋白成分的改变亦未显示统计学意义(P>0.05),甘油三酯的浓度略有增高(P<0.05).结论人SR-AI转基因小鼠的外部形态指标、脏器系数及各项血液学指标均无明显改变,适合用作动脉粥样硬化模型的研究.     

转绿色荧光蛋白基因小鼠子宫内膜异位症模型的建立和评价

目的建立小鼠子宫内膜异位症种植模型,探讨荧光检测异位子宫内膜的方法。方法将转绿色荧光蛋白(GFP)基因小鼠的子宫内膜剪碎后,注射入C57BL/6小鼠的腹腔,喂养含17-β-雌二醇的无菌水,3周后剖检小鼠,在活体荧光成像系统下观察腹腔的绿色荧光,并做免疫组化染色。结果在移植转GFP基因小鼠子宫内膜的C57/BLC57BL/6小鼠的腹腔内存在绿色荧光,且免疫组化证实该异位内膜组织中表达GFP,而对照组均阴性。结论转GFP基因小鼠子宫内膜模型可清晰地显示异位内膜病灶,具有良好的应用前景。     

CLCN3/MMTV-PyMT转基因小鼠杂交群体的建立及鉴定

目的 建立并鉴定CLCN3/MMTV-PyMT双转基因小鼠杂交群体,构建氯通道ClC-3过表达的自发乳腺肿瘤转基因小鼠模型.方法 将CLCN3转基因小鼠和MMTV-PyMT转基因小鼠分别进行繁殖,选取阳性子代鼠进行配对,培育杂交后代,然后通过PCR鉴定基因型、通过组织免疫荧光方法、Western blot检测转基因小鼠蛋白表达情况.结果 成功繁育CLCN3转基因小鼠和MMTV-PyMT转基因小鼠,经PCR鉴定成功构建CLCN3/MMTV-PyMT双转基因鼠杂交群体,并成功保种和扩群,经组织免疫荧光和Western-blot分析双转基因小鼠的ClC-3蛋白的表达高于MMTV-PyMT转基因小鼠.结论 成功构建ClC-3过表达的自发乳腺肿瘤转基因小鼠模型,为进一步研究ClC-3在肿瘤生长和转移中的功能提供了良好的动物模型.     

重症肌无力小鼠模型的建立

1961年,在美国召开了一个比较病理学研讨会。40余年后的今天,比较病理学的“比较”理念已扩展到整个医学领域,把一切以比较方法研究包括人类这一物种在内的动物界之正常与异常生命现象及其诊治问题的结果,冠以“比较医学”这一学科名称。以此为名的中国学术期刊、专著与论文也随之出现了。在上述的那次研讨会上,包括人医与兽医等在内的各方与会学者还讨论了如何加