环氧合酶-2抑制剂联合苦参碱逆转K562/AO2细胞多药耐药的研究

目的:研究塞来昔布单独及联合应用苦参碱对K562/AO2细胞多药耐药逆转作用的影响,以及探讨他们互相作用的机理.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测阿霉素(ADM)的半数抑制量;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR方法检测多药耐药基因(MDR)和环氧合酶-2(COX-2)mRNA的表达水平;Western blotting方法检测人p-糖蛋白(P-gp)和COX-2蛋白的表达水平.结果:ADM对K562、K562/AO2细胞的IC50值分别为0.398、33.31 μg·ml-1;苦参碱(200 μg·ml-1)、塞来昔布(7.5 μg·ml-1)单独及联合应用处理细胞时,ADM对K562/AO2细胞的IC50值分别为9.44、12.84、2.71 μg·ml-1;苦参碱、塞来昔布单独及联合应用于K562/AO2细胞后凋亡率明显增加,MDR1和COX-2 mRNA以及P-gp、COX-2蛋白的表达明显下调,且两药联合时下调更明显.结论:苦参碱和塞来昔布均有逆转K562/AO2细胞多药耐药的作用,两药联合应用时效果更加明显,P-gp的高表达可能与COX-2的表达上调有关.     

汉防己碱对白血病K562细胞生长的促进耐药作用

目的考察汉防己碱(Tet)对白血病K562细胞生长的影响。方法采用体外细胞培养,即在37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养,培养液为含10%热灭活NBS的完全RPMI1640细胞培养基。待K562细胞与药物作用48 h后,收集并处理细胞,结合MTT和Western blot法研究Tet对K562细胞生长的作用特点。结果 Tet在0.33～1.00μg/ml仅使K562及K562/ADM细胞的存活率降低至75%～80%,低浓度Tet(0.33μg/ml)使阿霉素(ADM)和顺铂(cDDP)对K562细胞生长的IC50增加(P<0.01),1.0μg/ml Tet则降低IC50,使ADM对K562/ADM细胞的IC50增加,cDDP的IC50无明显变化。0.33μg/ml Tet有提升2种细胞的P-gp和MRP1表达的作用(P<0.05)。Tet各浓度对LRP表达无明显影响。结论 Tet对K562及K562/ADM细胞生长抑制作用具浓度依耐性,低浓度具加速耐药的作用,其促进耐药细胞发展的机制至少与提升P-gp和MRP1表达有关。     

双氢青蒿素对白血病多药耐药K562/ADM细胞的逆转作用

目的:探讨双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)在白血病多药耐药中的应用。方法:采用MTT检测DHA联合阿霉素(adriamycin,ADM)对白血病多药耐药细胞(K562/ADM)生长增殖的影响;应用流式细胞技术分析细胞内罗丹明123(Rhodamine 123)浓度,以检测DHA对白血病细胞膜P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)泵功能的影响;免疫组化方法检测DHA对白血病细胞P-gp表达水平的影响。结果:10、20、40μmol/L DHA实验组的细胞耐药逆转倍数分别为1.46、2.16和3.52倍。DHA使用前、后K562/ADM细胞膜P-gp表达水平无明显差异;Rh123蓄积试验中DHA应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由用前的22.16%升至89.18%,Rh123外排试验中DHA应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由用前的27.15%升至60.51%。结论:DHA:能有效逆转白血病细胞的MDR机制为通过抑制肿瘤细胞膜上P-gp的药泵功能,增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转耐药性,而不是抑制和P-gp表达。     

功劳木组分F_6逆转白血病MDR的作用和机制

目的:背景与目的从中药功劳木中提取、分离出来的异喹啉类生物碱组分(Fraction 6,F6),具有抗病毒、抗炎、降血压等生理活性。近年有文献报道异喹啉类生物碱具有一定的逆转肿瘤细胞耐药的作用。本文以白血病多药耐药细胞(K562/ADM)为对象来研究F6逆转肿瘤多药耐药性(Mu ltidrug resistance,MDR)的效果及作用机制,以寻找具有多药耐药逆转活性的新型中药。方法:采用MTT法检测F6及阿霉素(Adriamyc in,ADM)对K562/S和K562/ADM细胞增殖的抑制作用;RT-PCR法检测F6对耐药肿瘤细胞MDR1基因mRNA表达的影响;流式细胞仪分析细胞内罗丹明123(Rhodam ine123,Rh123)浓度,以检测F6对肿瘤细胞膜P糖蛋白(P-glycoprote in,P-gp)泵功能的影响;免疫组化方法检测F6对肿瘤细胞膜P-gp表达水平的影响;流式细胞仪检测F6对肿瘤细胞凋亡的作用。结果:10 mg/L为F6的无毒剂量;ADM对K562/S和K562/ADM细胞的IC50分别为(1.68±0.08)mg/L和(80.25±1.06)mg/L;无毒剂量F6与ADM联合应用后对K562/S和K562/ADM细胞的IC50分别为(1.09±0.07)mg/L和(16.68±0.72)mg/L,此剂量F6使K562/ADM细胞的IC50下降4.81倍;无毒剂量的F6应用前后,K562/ADM细胞MDR1基因表达水平和细胞膜P-gp表达水平无明显差异;Rh123蓄积试验中无毒剂量的F6应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由F6应用前的29.21%升高到85.35%,Rh123外排试验中无毒剂量的F6应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由F6应用前的27.19%升高到59.22%;凋亡检测结果显示无毒剂量的F6使K562/ADM细胞凋亡率升高3.82倍。结论:F6能有效逆转白血病细胞的MDR;F6逆转白血病MDR的机制为通过抑制肿瘤细胞膜上P-gp的药泵功能,增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转耐药性,而不是抑制MDR1基因和P-gp表达。     

HL-60/ADM细胞系耐药性检测

目的　检测 HL- 6 0 / ADM细胞化疗药物敏感性及 MRP表达。方法　以 HL- 6 0 / ADM细胞为实验对象 ,对化疗敏感的 HL - 6 0细胞为对照 ,MTT法检测药物敏感性 ,免疫细胞化学法检测 MRP蛋白的表达 ,PT- PCR法检测MRP m RNA表达。结果　两种细胞生长周期基本一致 ;HL - 6 0 / ADM细胞对 ADM、MTZ、VCR、H四种化疗药物 IC50 显著高于 HL- 6 0细胞 (P<0 .0 1) ,RF均在 2 0倍以上 ;HL- 6 0 / ADM表达 MRP m RNA,细胞膜表面 MRP阳性。结论　 HL-6 0 / ADM细胞系适合体外 MDR研究。     

微波热疗对人乳腺癌阿霉素细胞MCF-7多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的探讨微波热疗对人乳腺癌阿霉素细胞MCF-7和阿霉素耐药细胞MCF-7/ADM的多药耐药蛋白表达和耐药性的影响。方法应用Real-TimePCR法检测微波热疗对P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响和高效液相色谱法(HPLC)检测微波热疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果MCF-7/ADM细胞在微波热疗后4h和24h,P-gp、MRP表达量明显下降(P<0.01)。微波热疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显上升(P<0.01)。结论微波热疗抑制了耐药蛋白的表达,增加了细胞内的药物浓度,热疗可能是逆转化疗耐药从而提高化疗效果的一种有效手段。     

川芎嗪对转基因多药耐药细胞K562/MDR耐药性的逆转作用

目的：研究川芎嗪（TMP）与环孢菌素A（CsA）单独及联合逆转人红白血病多药耐药细胞K562/MDR的多药耐药性（MDR）,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法：分别以倍比稀释后不同浓度的TMP（50～6　400 mg?L^-1 ）和CsA（0.5～256 mg·L^-1 ）作用于体外培养的K562/MDR细胞72 h,采用MTT法检测细胞生长率,确定TMP和CsA的非细胞毒性剂量;采用非细胞毒性剂量,实验分为5组：G1组（TMP+ADM+K562/MDR）、G2组（CsA+ADM+K562/MDR）、G3组（TMP+CsA+ADM+K562/MDR）、阴性对照组（以K562/S代替K562/MDR）、空白对照组（以1640培养基代替药物）,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC₅₀,计算耐药倍数和逆转倍数;利用荧光分光光度法检测各组细胞内ADM浓度;流式细胞术检测跨膜糖蛋白P-gp的表达情况。结果：TMP及CsA的非细胞毒性剂量分别为320和2.0 mg·L^-1,K562/MDR细胞的耐药倍数为19.2倍;TMP及CsA均能降低K562/MDR细胞的耐药性,逆转倍数分别为5.2及9.6倍,并且两者联合应用,逆转倍数为15.6倍;TMP和CsA单独及联合应用均能明显增加K562/MDR细胞内ADM浓度;TMP及CsA单独应用均能降低K562/MDR细胞P-gp的表达,并且两者联合应用使K562/MDR细胞P-gp的表达率明显降低,与阴性对照组比较差异有显著性（P<0.01)。结论：TMP和CsA单独及联合应用可逆转K562/MDR细胞对化疗药物ADM的MDR,且两者具有协同作用。其逆转机制可能为降低P-gp水平,升高细胞内ADM浓度,增强对ADM的敏感性,从而发挥治疗肿瘤的作用。     

苦瓜蛋白对K562／A02耐药逆转作用的研究

[目的]观察苦瓜蛋白对K562／A02细胞多药耐药的逆转及对PgP表达、功能的影响。[方法]采用CCK-8法测IC50,用流式细胞仪测定苦瓜蛋白对K562／A02细胞上P-gp表达及细胞内ADM潴留的影响。[结果]苦瓜蛋白能提高K562／A02对多种化疗药物敏感性,使P-gP蛋白表达下降,提高细胞内ADM的浓度。[结论]苦瓜蛋白能部分逆转K562／A02的耐药性,逆转机制与下调P-gP蛋白的表达有关。     

白血病耐药细胞中多药耐药基因MDR1与核转录因子κB的关系

目的:研究核转录因子κB与多药耐药基因MDR1在白血病化疗耐药中的作用,阐明核转录因子κB(NF-κB)与白血病多药耐药的关系及相关分子机制。方法：白血病细胞K562和阿霉素(ADM)诱导的耐药细胞K562/ADM分别应用ADM（0、0.25、0.50、1.00和2.00 μg·L^-1）或丝裂霉素(MIT)（0、2、4、8和16 mg·L^-1）　作用48 h,通过MTT法检测细胞生存率,计算细胞耐药指数;RT-PCR方法检测MDR1和IκB mRNA表达;Western blotting方法检测P-gp和P65的蛋白表达。结果：ADM和MIT分别作用后,与空白对照组比较,白血病细胞K562细胞生存率下降(P<0.01),呈剂量依赖性;ADM和MIT对耐药细胞K562/ADM生存率作用不明显;在mRNA水平上,与K562细胞比较,K562/ADM细胞的MDR1 mRNA高表达(P<0.01)。与空白对照组比较,ADM 0.50和1.00　 μg·L^-1>或MIT 4和8 mg·L^-1分别作用K562细胞和K562/ADM细胞,IκBα mRNA表达均下降(P<0.01),并呈剂量依赖性;在蛋白水平上,与K562细胞比较,K562/ADM细胞的P-gp蛋白高表达(P<0.01)。与空白对照组比较,ADM 0.50和1.00 μg·L^-1或MIT 4和8 mg·L^-1分别作用K562/ADM细胞,P-gp蛋白表达量升高(P<0.01),同时P65蛋白表达量升高,且呈药物剂量依赖性(P<0.01)。结论：MDR1基因及P-gp蛋白的高表达很可能是白血病细胞K562多药耐药性形成的关键机制,而NF-κB的激活可能参与了多药耐药的调控。     

TRAIL抑制胃癌多药耐药基因MDR1/P-gp的表达

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药基因MDR1及其编码P-gp蛋白表达的影响,探讨以TRAIL为靶点逆转胃癌多药耐药的机制。方法 SGC-7901/VCR细胞株经不同浓度的TRAIL处理48 h后,RT-PCR检测各组胃癌细胞株中多药耐药MDR1 mRNA的表达情况,同时用ELISA法检测各组胃癌细胞株中P-gp表达的含量。结果不同浓度TRAIL(50、100、200、400μg/L)作用于细胞后,胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR的MDR1/P-gp表达受不同程度抑制,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。400μg/L与200μg/L组相比其MDR1/P-gp抑制程度并不明显,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAIL可抑制SGC-7901/VCR MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。TRAIL可能通过降低耐药基因MDR1的表达逆转胃癌的多药耐药。     

siRNA对K562和K562/ADM细胞耐药和凋亡的调节

目的 研究联合转染以MRP和bcl-2基因为靶标的siRNA,对白血病细胞株K562和耐药的K562/ADM细胞药物敏感性和凋亡的影响.方法 体外化学合成以多药耐药相关蛋白(MRP)和bcl-2为靶标的siRNA,分别或联合用脂质体转染人阿霉素处理的K562和K562/ADM以单纯化疗处理组和未处理组为对照.转染后24、48、72 h,MTT法检测各组细胞生长抑制率,计算IC50值.转染24 h后RT-PCR检测各组细胞相应靶基因mRNA表达水平,48 h后流式细胞仪检测细胞MRP和bcl-2蛋白表达率和细胞凋亡率.结果 K562/ADM细胞ADM的IC50为12.81 μg/ml,ADM MRP-siRNA组降为3.74 μg/ml,ADM bcl2-siRNA组降为6.82 μg/ml ADM MRP-siRNA bcl2-siRNA组降至2.51 μg/ml;K562细胞ADM的IC50为6.75 μg/dml,ADM MRP-siRNA组降为3.22 μg/ml,ADM bcl2-siRNA组降为3.56 μg/ml,ADM MRP-siRNA bcl2-siRNA降至1.84 μg/ml,有统计学意义(P<0.01).转染以MRP和bcl-2为靶标的siRNA后,细胞相应靶基因的mRNA及蛋白的表达明显减低,细胞凋亡率显著升高,联合转染两种siRNA,细胞的IC50进一步下降,细胞凋亡率进一步升高,与分别转染组相比有统计学差异(P<0.05);结论联合转染以MRP和bcl-2基因为靶标的siRNA,通过降低靶基因蛋白表达,产生协同作用,明显增加耐药和亲本肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率.     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/A02耐药的机制

目的:研究汉防己甲素（TTD）对白血病细胞株K562/A02多药耐药(MDR)逆转的机理。方法：以白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02为TTD作用的靶细胞。细胞水平检测实验分5组（K562组、K562/A02组、K562+ADM组、K562/A02+ADM组和K562/A02+TTD+ADM组）,采用MTT法检测TTD对K562和K562/A02细胞的非细胞毒性剂量,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的浓度,基因、酶学、蛋白水平检测实验分3组（K562组、K562/A02组和K562/A02+TTD组）,采用RT-PCR法检测mdr1 mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表达水平,Western-blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）和bcl-2表达。结果：1.562 5 mg•L^-1的TTD处理K562/A02细胞后,细胞内ADM的浓度较单用ADM组明显提高（P<0.01）;与空白对照组比较,K562/A02细胞内mdr1 mRNA/P-gp的表达量减少（P<0.01）;GST-π和TopoⅡ表达无明显变化;凋亡抑制基因bcl-2的表达量减少（P<0.01）。结论:TTD主要通过增加细胞内ADM浓度,下调mdr1/P-gp和bcl-2表达逆转耐药。     

人肝癌多药耐药细胞系BEL-7402/ADM的建立及耐药相关基因表达检测

目的：建立人肝癌多药耐药细胞系,研究其耐药特性及机制。 方法：应用人肝癌细胞株BEL-7402,采用阿霉素（ADM）大剂量间歇诱导法,建立多药耐药细胞系BEL-7402/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多药耐药基因(MDR)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH／GST)的表达情况,应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平。 结果：BEL-7402/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对ADM的耐药性(半数抑制浓度,IC₅₀)提高了17.31倍。流式细胞仪分析发现（65.5±5.8）%的BEL-7402/ADM细胞表面P-gp 表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（31.3±4.3）%;（32.4±3.5）%的BEL-7402/ADM细胞表面MRP表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（23.4±3.1）%,二者差异有显著性(P<0.01);BEL-7402/ADM和BEL-7402细胞的GSH／GST表达无明显变化（P>0.05）。RT-PCR检测发现BEL-7402/ADM中MDR及MRP mRNA高表达。 结论：BEL-7402/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因MDR及MRP mRNA表达升高。     

蟾酥注射液逆转HL60/阿霉素细胞多药耐药的机制

目的探讨蟾酥注射液(CHS)对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制。方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性;流式细胞术考察CHS对HL60/阿霉素细胞周期的影响;免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞NF-κB、MRP、GST-π、iNOS蛋白表达的调节作用。结果 CHS可将阿霉素对HL60/阿霉素细胞的IC50值由34.1971μmol/L降至17.4393μmol/L,逆转倍数为1.9609倍;FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期,降低进入S期比例,并出现凋亡峰;免疫组化结果显示,CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达,上调NF-κB、iNOS的表达。结论蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达,上调NF-κB、iNOS的表达,促进HL60/阿霉素细胞凋亡,从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性。     

Thapsigargin逆转K562/A02细胞多药耐药性的实验研究

目的 探讨内质网Ca^2 -ATP酶抑制剂thapsigargin对白血病多药耐药细胞株K562／A02化疗敏感性的影响。方法 用MTT比色法检测K562／A02细胞耐药性、thapsigargin的增殖抑制活性及其对K562／A02细胞化疗敏感性的影响；丫啶橙(AO)／溴化乙锭(EB)染色荧光显微镜观察thapsigargin处理后K562／A02细胞形态改变；流式细胞仪(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)表达；荧光显微镜检测Pgp功能。结果 ①thapsigargin对K562和K562／A02细胞的增殖抑制活性呈剂量和时间依赖性，K562／A02细胞较K562细胞对thapsigargin更敏感，thapsigargin诱导K562／A02细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变。②K562／A02细胞对阿霉素(ADM)、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MXT)均出现不同程度的耐药性；thapsigargin抑制K562／A02细胞P-gP功能而对其表达无影响，thapsigargin能增加K562／A02细胞对ADM、DNR、VCR、VP-16、HHT和MXT的化疗敏感性。结论 Thapsigargin能诱导白血病多药耐药细胞株K562／A02细胞凋亡并能部分逆转K562／A02的多药耐药性；thapsigargin的多药耐药逆转功能可能与其凋亡诱导作用和抑制PgP功能有关。     

Arsenic trioxide inhibits p-glycoprotein expression in multidrug-resistant human leukemia cells that overexpress the MDR1 gene

Objective To investigate the effects of arsenic trioxide (As2O3) on the apoptosis and p-glycoprotein (P-gp) expression of multidrug-resistant human leukemia cells.Methods Human multidrug-resistant leukemia cell line K562/ADM overexpressing the MDR1 gene, was used as the target cells. The cell proliferating activity was assessed using the MTT colorimetric assay. Cytomorphology was investigated under light, confocal and electron microscopes. DNA fragmentation was examined using agarose gel electrophoresis, while p-gp expression, cell cycle status and sub-G1 cells were determined using flow cytometry.Results Zero point five to 20 μmol/L As2O3 inhibited the proliferation of K562/ADM cells, and K562/ADM cells were more sensitive to As2O3 than the parental K562 cells. As2O3-induced apoptosis of K562/ADM cells was determined by the observance of typical morphological changes and the appearance of DNA ladder and sub-G1 cell populations. As2O3 significantly inhibited the P-gp expression of K562/ADM cells, and synergistically enhanced the sensitivity of the drug-resistant cells to adriamycin.Conclusions As2O3 induces growth-inhibition and apoptosis, down-regulates P-gp expression and exerts a synergistic effect in combination with adriamycin in multidrug-resistant leukemia cells.     

中药功劳木提取物对肿瘤MDR的逆转作用

目的:研究中药功劳木的4种不同工艺提取物逆转肿瘤多药耐药性(multidrug resistance,MDR)的作用,以开发新型的肿瘤MDR逆转剂。方法:采用MTT法检测4种提取物的细胞毒性及其对阿霉素(adriamycin,ADM)的增敏效果;罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)蓄积实验检测4种提取物对细胞内药物浓度及P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)功能的影响;流式细胞仪检测4种提取物对耐药肿瘤细胞凋亡的影响。结果:10 mg/L为4种提取物的无毒剂量;在此剂量下,4种提取物对K562/ADM细胞逆转倍数分别为Ⅰ-4.81倍,Ⅱ-2.31倍,Ⅲ-4.17倍,Ⅳ-2.39倍,对MCF-7/ADM细胞的逆转倍数分别为Ⅰ-1.82倍,Ⅱ-1.40倍,Ⅲ-2.54倍,Ⅳ-1.51倍;此剂量的4种提取物应用后,使K562/ADM细胞凋亡率分别增加了Ⅰ-13.27%、Ⅱ-7.03%、Ⅲ-20.24%、Ⅳ-11.75%,使MCF-7/ADM细胞凋亡率分别增加了Ⅰ-6.3%、Ⅱ-3.67%、Ⅲ-8.6%、Ⅳ-3.48%。结论:中药功劳木的4种不同工艺提取物能够不同程度的逆转肿瘤细胞的MDR,抑制肿瘤细胞膜上P-gp的“药泵”功能,增加耐药细胞内药物浓度,有望成为肿瘤多药耐药逆转剂的候选药物。     

ZM-66, a New Podophyllotoxin Derivative Inhibits Proliferation and Induces Apoptosis in K562/ADM Cells

Objective To investigate the anti-tumor effect of ZM-66 on multidrug-resistant leukemic cell line K562/ADM. Methods The K562/ADM cells were treated with varying concentrations （0, 1, 2, 4×10^-3 mmol/L） of ZM-66 or etoposide for 24 hours. The proliferation was detected by Sulforhodamine B Sodium Salt （SRB） assay and apoptosis was detected by flow cytometry analysis and fluorescent staining. In addition, the expression levels of p53 and bax genes in K562/ADM cells were detected by RT-PCR analysis. The level of P-glycoprotein （P-gp）, P53 and Bax protein in K562/ADM cells were detected by Western blot assay. Results SRB assay demonstrated that etoposide had little inhibitory effect on K562/ADM cells, whereas ZM-66 （1, 2, 4×10^-3 mmol/L） had significantly inhibitory effect on K562/ADM cells （all P〈0.01）. The acridine orange/propidium iodide dual staining showed that there were typical condensation of chromatin and nuclear fragmentation nuclei with red color in ZM-66 treated cells. Flow cytometric analysis showed that there was a significantly increase of apoptotic cells i~ K562/KDM cells after treated with ZM-66. RT-PCR showed that the p53 and bax mRNA expression levels in K562/ADM cells treated with ZM-66 at 1, 2, 4×10^-3 mmol/L were higher than those in the cell without treatment. Western blot showed that the P53 and Bax protein expression levels in K562/ADM cells treated with ZM-66 at 2, 4x 10 s mmol/L were higher than those in the cell without treatment. But the P-gp protein expression level in K562/ADM cells treated with ZM-66 at 2, 4×10^-3 mmol/L was gradually lower than those in the cell without treatment. Conclusion ZM-66 is able to induce cell death by apoptosis in vitro, as a result of the reverse of theapoptosis resistance in drug-resistant K562/ADM cells by modulating expression of key factors associated with apoptosis induction.     

5种生物碱胃癌多药耐药逆转剂的筛选及机制研究

目的 研究骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱对肿瘤细胞多药耐药性（MDR）的逆转作用及机制。方法 以胃癌亲本细胞系SGC-7901和MDR细胞系SGC-7901/VCR为细胞模型,采用MTT法检测上述5种生物碱的细胞毒活性及对MDR的逆转效果;用流式细胞仪检测MDR逆转效果最好的贝母素乙对肿瘤细胞内阿霉素（ADR）蓄积的影响;Western blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）的表达;Hoechst荧光染色和细胞免疫荧光法检测贝母素乙诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡情况。结果 骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱均能不同程度地抑制SGC-7901和SGC-7901/VCR细胞的增殖,在非毒剂量下贝母素乙能够显著提高SGC-7901/VCR细胞对ADR的敏感性及细胞内ADR的浓度,降低P-gp表达。贝母素乙联合5-氟尿嘧啶（5-FU）给药可诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡,凋亡细胞cleaved caspase-3呈高表达。结论 贝母素乙具有作为胃癌MDR逆转剂的潜力,其逆转耐药的机制可能与下调P-gp表达和诱导细胞凋亡有关。     

Induction of actin disruption and downregulation of P-glycoprotein expression by solamargine in multidrug-resistant K562/A02 cells

Background  Solamargine (SM), a steroidal glycoalkaloid isolated from the Chinese herb Solanum incanum, has been shown to inhibit the growth of some cancer cell lines and induce significant apoptosis. However, the effects of SM on multidrug-resistant (MDR) cells and the molecular mechanisms involved are poorly understood. The purpose of this study was to evaluate the anti-MDR effects of SM and the associated mechanisms in MDR K562/A02 cells.

Methods  The cytotoxicity of SM was measured by 3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. The 14′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) nuclear staining and flow cytometry were used to detect SM-induced apoptosis. The mRNA expression of P-glycoprotein (P-gp) was investigated by real-time PCR (RT-PCR). Western blotting was used to determine the expression of Bcl-2, Bax, and actin. The changes in the morphology of actin were examined with immunofluorescence staining.

Results  MTT results showed that SM effectively killed the MDR sublines K562/A02, KB/VCR, and H460/paclitaxel (Taxol), and their parental cell lines K562, KB, and H460 to an equivalent or more sensitive degree. Based on the results by flow cytometry and immunostaining, the pro-apoptotic effects of SM were observed in MDR K562/A02 cells. Furthermore, the RT-PCR results showed that SM induced the downregulation of MDR1 mRNA. In addition, the expression of P-gp and actin was decreased in the SM-treated cells, as measured by western blotting and immunostaining.

Conclusions  These results demonstrate that SM effectively triggers apoptosis in MDR tumor cells, which is associated with actin disruption and downregulation of MDR1 expression. This compound may merit further investigation as a potential therapeutic agent that bypasses the MDR mechanism for the treatment of MDR tumors.