补肾活血方保护FSGS小鼠足细胞的实验研究

[目的] 观察补肾活血方对局灶性节段性肾小球硬化（FSGS）小鼠足细胞骨架蛋白desmin,足细胞裂孔膜蛋白nephrin及肾母细胞瘤wt1的影响,探讨此组方保护足细胞的作用机制。[方法] 以阿霉素诱导方式完成FSGS肾病模型制备,在1周之后以补肾活血方开展治疗（设为治疗组）,时间持续6周。然后再设空白对照组与模型组。针对3组的尿、血及肾组织等进行收集,并检测体质量、血清白蛋白（ALB）、24 h尿白蛋白排泄率（UAER）以及尿白蛋白/尿肌酐比值（UACR）等。通过光镜针对肾组织形态变化情况进行观察分析,以免疫荧光完成小鼠的肾组织nephrin荧光强度测定工作;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测3组肾组织当中的desmin、wt1表达水平。[结果] 模型组UAER、UACR显著高于空白对照组与治疗组（P<0.01）,模型组体质量和ALB显著低于空白对照组和治疗组（P<0.01）。空白对照组nephrin免疫荧光表达具有连续性特征,而模型组则是具有少量点状或者片状特征,较空白对照组和治疗组表达明显减少。模型组当中的wt1 mRNA表达水平明显低于治疗组、空白对照组（P<0.01）,而desmin mRNA表达水平明显超过空白对照组、治疗组（P<0.01）。[结论] 采用补肾活血组方可以降低FSGS小鼠蛋白尿,同时有可能和wt1、nephrin表达水平上调,以及desmin表达水平下调存在关系。     

Sig-1R基因表达抑制对内质网应激和足细胞损伤的影响

目的:Sigma-1受体分子伴侣(Sigma-1 receptor chaperone,Sig-1R)是内质网中主要的伴侣蛋白,参与细胞凋亡等生物学行为,是多种疾病的治疗靶点?本研究旨在探讨Sig-1R基因表达抑制对内质网应激和足细胞损伤的影响,为Sig-1R及内质网应激在肾损伤中的作用提供新视点?方法:体外培养永生性小鼠足细胞系(MPC5),采用LipofectamineTM 2000与Sig-1R siRNA结合形成Sig-1R siRNA-脂质体复合物瞬时转染足细胞,设正常组?阴性对照组和Sig-1R干扰组?采用real-time PCR和Western blot检测Sig-1R的表达水平;Hochest染色法观察凋亡的足细胞核,计数凋亡率;采用Western blot 检测足细胞nephrin?desmin?凋亡相关因子bcl-2?bax?caspase 3,8,9,12的表达水平?结果:①与对照组相比,干扰组Sig-1R核酸和蛋白表达均明显下降(P < 0.05);②与对照组相比,干扰组足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达显著下降,肌间蛋白desmin表达显著上升(P < 0.05);③与对照组相比,干扰组中凋亡的足细胞数显著增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降,促凋亡蛋白bax表达明显增加,bcl-2/bax<1∶2(P < 0.05),凋亡级联反应执行蛋白caspase-3明显活化(P < 0.05);④干扰组中,内质网和线粒体途径相关凋亡蛋白caspase-12,9明显活化(P < 0.05),而死亡受体相关凋亡蛋白caspase-8未见明显活化?结论:Sig-1R基因表达抑制可通过诱导内质网应激介导的足细胞凋亡,引起足细胞损伤,提示内质网应激部分参与Sig-1R诱导的足细胞损伤?     

Rac1及Cdc42在肾上腺髓质肽(AM)缓解嘌呤霉素氨基核苷(PAN)所诱导足细胞损伤中作用机制的初步探讨

目的 观察肾上腺髓质肽（adrenomedullin,AM）对嘌呤霉素氨基核苷（puromycin aminonucleoside,PAN）所诱导受损足细胞的作用以及Rac1/Cdc42表达变化,初步探讨其可能机制。方法 将小鼠肾足细胞株分为对照组、PAN处理组（100 μg/mL）、PAN联合AM处理组（10^-7 mol/L）及PAN联合AM和蛋白激酶A（PKA）抑制剂H89（10^-6 mol/L）处理组。经一次性腹腔注射PAN（150 mg/kg）建立大鼠足细胞损伤模型,每天经尾静脉注射AM蛋白（66 μg/kg）进行干预。SDS-PAGE法检测尿蛋白水平,电镜观察足细胞足突宽度变化,双重免疫荧光染色及/或Western blot观察足细胞特异性骨架蛋白（synaptopodin、nephrin）、Rac1及Cdc42的蛋白表达水平,实时定量PCR（qRT-PCR）检测synaptopodin、nephrin的mRNA表达,谷胱甘肽巯基转移酶-拉下实验（GST-pull down assay）法检测Rac1及Cdc42活性变化。结果 PAN在体内、外均显著降低synaptopodin、nephrin的蛋白或/及mRNA表达水平,且显著升高desmin表达;大鼠PAN肾病模型的尿蛋白水平显著升高,足突宽度显著增加;PAN显著降低Rac1、Cdc42总蛋白及活性水平。上述由PAN所介导的效应被AM显著抑制;H89显著阻断AM的体外作用。结论 AM主要通过PKA通路促进受损足细胞的修复,该保护机制与AM调控Rac1/Cdc42表达密切相关。     

二甲双胍对2型糖尿病模型大鼠肾组织nephrin表达的影响

目的 观察不同剂量二甲双胍( MET)对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠肾组织nephrin 表达的影响,了解其对肾小球足细胞的保护作用. 方法 高脂饲料喂养结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立T2DM大鼠模型,给予不同剂量[150、300、500 mg/(kg·d)]MET干预治疗(MET1组、MET2组、MET3组),并设立糖尿病模型组(T2DM组)和正常对照组(NC组). 8 周后,观察各组大鼠血糖(BG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿素氮(BUN)、尿白蛋白和尿nephrin排泄的情况以及肾脏组织病理改变和nephrin表达的变化. 结果 8 周末, MET 三组 BG、HbA1c、尿白蛋白/尿肌酐(UACR)、基底膜厚度(GBMT)和足突融合率(FRFP)明显低于T2DM 组,高于 NC 组(P <0. 05);MET2、MET3 组低于MET1 组( P <0. 05 ). MET 组血 BUN、尿 nephrin/尿肌酐(UNER)低于T2DM组(P<0. 05),MET3与MET1组差异有统计学意义(P<0. 05). MET组肾组织nephrin蛋白和mR-NA表达较T2DM 组显著升高(P<0. 05),但是低于 NC组( P<0. 05 );各MET组间nephrin蛋白表达差异无统计学意义,MET3 组nephrin mRNA表达高于MET1 组( P<0. 05 ).结论 MET可减轻T2DM模型大鼠肾组织nephrin表达的减少和保护足细胞,并有一定的剂量依赖性.     

帕立骨化醇上调糖尿病大鼠肾脏中胰岛素受体的表达

目的观察维生素D受体（VDR）激动剂-帕立骨化醇对糖尿病大鼠肾脏胰岛素受体表达的影响。方法 SD大鼠腹腔注射链脲菌素75 mg/kg建立糖尿病（DM）模型,将诱导成功的20只DM大鼠随机分为糖尿病组（DM组）、DM＋帕立骨化醇治疗组（DA组）。另设相配的10只SD大鼠为对照组（NC组）。第10周测体质量（BW）、收缩压（SBP）,空腹血糖（BG）、血肌酐（Cr）,24 h尿蛋白定量（24 h UP）及尿液足细胞（UPC）的排泄;RT-PCR检测肾组织nephrin、desmin、胰岛素受体α（IRα）的mRNA表达水平;Western boltting检测肾组织IRα蛋白和磷酸化蛋白激酶B（P-Akt）的表达水平。结果 DM组BG、Cr、24 h UP较NC组显著升高,BW显著降低,SBP、UPC无统计学差异。DM组nephrin mRNA、IRαmRNA及蛋白质,P-Akt蛋白质的表达较NC组显著降低;desmin mRNA的表达较NC组显著增加。帕立骨化醇降低DM大鼠的Cr、24 h UP,恢复肾组织nephrin、IRα、P-Akt的表达,抑制desmin的表达。结论帕立骨化醇上调nephrin并抑制desmin的表达,对足细胞起保护作用;改善胰岛素受体α的表达及磷酸化Akt水平,增强胰岛素信号通路,抑制高糖诱导的胰岛素对抗。     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对早期糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病肾病(DN)模型大鼠足细胞去氧肾上腺素(nephrin)、肌间线蛋白(desmin)表达的影响,探讨其在DN治疗中发挥肾保护作用的机制.方法 应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型,将DN模型大鼠随机分为2组:厄贝沙坦组、模型对照组;另设正常对照组.各组分别干预8周后,利用光镜、电镜观察肾脏病理改变,应用免疫组化技术观察足细胞nephrin、desmin表达的变化情况.结果 应用厄贝沙坦干预后,DN大鼠肾脏病理改变显著减轻、足细胞nephrin、desmin的表达量明显减少.结论 血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对DN的肾保护作用机制可能与调节足细胞nephrin的表达量有关,通过延缓或抑制nephrin的损伤、维护足细胞结构和功能的完整而发挥减少尿蛋白、延缓DN进展的作用.     

糖尿病肾病MKR小鼠蛋白尿与尿中nephrin、PCX含量相关性分析

目的 通过检测糖尿病肾病（DN）MKR小鼠足细胞结构蛋白nephrin 与足细胞标记蛋白（PCX）在肾组织中的表达量及尿中的含量,分析尿微量白蛋白(UmAlb)与尿中nephrin、PCX蛋白含量的相关性。方法 取30只8周龄MKR小鼠随机分为2组（空白组和DN组）,空白组以普通饲料喂养,将DN组小鼠单肾切除并加以高脂喂养2个月复制DN模型;另取15只同龄C57野生鼠为正常对照组,以普通饲料喂养。造模前1 d、喂养4周及8周后,采用电化学法检测各组小鼠空腹血糖(FBG);喂养8周后,取各组小鼠肾脏组织,用电镜观察肾组织足细胞形态结构;Western blot检测肾组织中nephrin、PCX蛋白表达含量;ELISA 法测定尿中UmAlb含量及nephrin、PCX蛋白表达含量。结果 电镜结果显示:喂养8周后,与C57组比较,DN组小鼠肾小球足细胞结构损伤明显,DN组FBG升高( P<0.01),且肾组织中nephrin、PCX蛋白表达下调,而尿中nephrin、PCX蛋白含量及UmAlb 含量均升高( P<0.01)。相关分析显示,尿UmAlb与尿中nephrin和PCX蛋白含量呈正相关（相关系数r=0.920,决定系数R 2=0.829, P<0.05)。结论 尿中nephrin、PCX蛋白含量与UmAlb含量呈正相关,足细胞结构蛋白丢失可能是导致糖尿病肾病蛋白尿的机制之一。     

环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响

目的观察足细胞环氧合酶-2（COX-2）基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响。方法（1）以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象：分为正常对照组、5μl的siRNA组、10μl的siRNA组、15μl的siRNA组。经诱导分化成熟,在干扰48h后用半定量RT-PCR和Westernbolt分别检测COX-2mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。（2）以10μl的siRNA组作为研究对象,分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组,用Westernboh检测nephrin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平。结果（1）与正常对照组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μ1的siRNA组凋亡率明显增高。（2）lμlCOX-2siRNA转染组nephrin蛋白表达显著低于阴性转染组（P〈0．05）。（3）与阴性转染组相比,10IxlCOX-2siRNA转染组Bax蛋白表达显著上调,而Bcl-xl蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2的基因表达可以导致足细胞凋亡,并随着干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加;在干扰浓度为10μl时,足细胞nephrin蛋白的表达下调;BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡。     

地塞米松拮抗脂多糖对TRPC6表达及足细胞损伤的影响

目的观察脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导足细胞（podocyte,PC）瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（transient receptor potential cation channel 6,TRPC6）表达及胞内Ca2＋浓度的变化,探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）对TRPC6及Ca2＋变化的影响。方法体外分化培养的永生化小鼠PC随机分为：1对照组;2LPS组;3DEX组;4LPS＋DEX组。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2＋浓度,Annexin V-FITC/PI标记流式细胞测定PC的凋亡百分率,免疫荧光染色及半定量分析骨架蛋白F-肌动蛋白分布及数量,Western blotting检测足细胞TRPC6、nephrin及desmin蛋白的表达。结果1对照组、DEX组、LPS组、LPS＋DEX组PC Ca2＋荧光强度变化分别为15.6±6.1、17.8±6.5、116.2±15.4、57.2±13.6;凋亡百分率分别为（0.44±0.24）%、（0.45±0.18）%、（2.28±0.36）%、（1.78±0.33）%;F-肌动蛋白平均荧光强度分别为925±136、924±148、217±44.4、634±71.9;TRPC6蛋白的表达分别为0.33±0.09、0.36±0.08、0.81±0.13、0.61±0.12;nephrin表达为1.14±0.15、1.10±0.15、0.39±0.11、0.68±0.10;desmin表达为0.32±0.05、0.38±0.04、1.01±0.15、0.84±0.14。2与对照组及DEX组相比,LPS组足细胞Ca2＋浓度增加,凋亡百分率增加,F-肌动蛋白减少,TRPC6、desmin表达增加,nephrin表达降低。3与LPS组相比,LPS＋DEX组足细胞Ca2＋浓度及凋亡百分率降低,F-肌动蛋白增加,TRPC6、desmin表达下调,nephrin表达上调。结论 DEX拮抗LPS引起足细胞TRPC6高表达及细胞内Ca2＋水平增加,对足细胞有保护作用。     

Effects of mycophenolate mofetil, valsartan and their combined therapy on preventing podocyte loss in early stage of diabetic nephropathy in rats

Background Podocyte has inflammatory role in the development of diabetic nephropathy (DN). Mycophenolate mofetil (MMF), an anti-inflammatory agent, can suppress macrophage infiltration and reduce renal injury in streptozotocin-induced diabetic rats. Angiotensin II receptor blocker (ARB), another renal protecting agent, can decrease podocyte loss in DN. In this study, we detected the expression levels of monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) and nephrin to evaluate podocyte’s role in inflammatory reaction in DN, observe and compare the effect of MMF alone and in combination with valsartan, on preventing podocyte loss in streptozotocin (STZ) induced diabetic rats. Methods Diabetic model was constructed in uninephrectomized male Wistar rats by single peritoneal injection of STZ (65 mg/kg). The successfully induced diabetic rats were randomly divided into four groups: diabetes without treatment group (DM), valsartan treated group (DMV), MMF treated group (DMM), and combined therapy group (DMVM). Normal rats of the same sibling were chosen as control (NC). At the end of the 8th week, serum biochemistry, 24-hour urinary protein (UP) and the ratio of kidney weight/body weight (RWK/B) were measured. The rats were sacrificed for the observation of renal histomorphology through light and electron microscope. Nephrin, desmin and MCP-1 levels were detected by semi-quantitative immunohistochemical assays. Real-time quantitative PCR was used to detect the mRNA levels of nephrin and MCP-1.Results Compared with group NC, serum glucose level, 24-hour UP and RWK/B in group DM were significantly higher (P&lt;0.01), and the nephrin mRNA level in DM group was significantly lower (P&lt;0.05). The nephrin mRNA expression levels in group DMV, DMM and DMVM were all higher than that of DM group (P&lt;0.05) and no significant differences were found among the three treatment groups (P&gt;0.05). Treatment with MMF, valsartan or their combination could significantly decrease the 24-hour UP and RWK/B, and suppress glomerulosclerosis and interstitial fibrotic lesions in diabetic rats. In diabetic rats, the high expressions of desmin and MCP-1 in kidney were suppressed by valsartan, MMF or their combination.Conclusions Podocytes are involved in the inflammatory reaction of diabetic rats. MMF could suppress MCP-1 and desmin expression, enhance nephrin expression, and attenuate proteinuria in diabetic rats. The combined therapy of valsartan and MMF did not show any superiority over monotherapies on renal protection. MMF may have renoprotective effect in early stages of diabetic nephropathy through preventing podocytes loss and anti-inflammatory activity.     

检测肾病综合征患者尿中足细胞的临床意义

目的:探讨尿中肾小球上皮细胞(足细胞)检测在人局灶节段性肾小球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)诊断中的意义.方法:病例选自我科经肾活检病理证实的FSGS患者12例,微小病变性肾小球病(minimal change disease,MCD)20例,8例健康人作对照.取晨尿离心,沉渣甩片,间接免疫荧光法检测尿中足细胞特异蛋白Podocalyxin(PCX)阳性染色细胞.采用免疫荧光法检测肾小球足细胞PCX的表达.结果:FSGS组尿中足细胞阳性8例(阳性率66.67%),MCD组和正常对照组中尿足细胞均为阴性.FSGS患者中,尿足细胞阳性者临床上呈肾病综合征表现.FSGS患者肾活检标本中,肾小球内均可见足细胞特异标记蛋白PCX表达呈节段性缺失,并与肾小球节段硬化部位一致;而MCD患者肾活检标本的肾小球中,上述标记蛋白表达完整.结论:在肾病综合征中,尿足细胞检测可作为FSGS与MCD鉴别的一项可靠、方便、无创性的辅助手段.     

雷公藤甲素通过调控Toll-样受体(TLR)/核因子κB(NF-κB)信号通路对糖尿病肾病模型小鼠足细胞的作用研究

目的观察雷公藤甲素治疗糖尿病肾病(DN)模型小鼠的疗效,并探讨其通过Toll-样受体(TLR)/核因子κB(NF-κB)信号通路对DN足细胞的作用机制。方法6只9周龄db/m和18只9周龄db/db雄性小鼠,按db/m正常对照组(等量0.9%生理盐水)、db/db DN对照组(等量0.9%生理盐水)、替米沙坦治疗组(5mg·kg^-1·d^-1)、雷公藤甲素组(50μg·kg^-1·d^-1)分组给药,治疗8周。记录各组小鼠一般情况、24h尿白蛋白定量、体质量、肾脏指数和血生化指标,光镜观察肾小球病变情况,免疫组化计算足细胞数量,Western blot检测肾脏足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin以及肾脏组织TLR4和NF-κB蛋白定量表达。结果与DN对照组比较,雷公藤甲素组小鼠治疗后24h尿蛋白定量[(98.28±11.10)mg/24h比(239.89±44.26)mg/24h]、血清肌酐[(38.82±3.66)μmol/L比(45.32±7.63)μmol/L]、总胆固醇[(3.05±0.54)mmol/L比(4.00±0.67)mmol/L]及三酰甘油[(1.23±0.15)mmol/L比(2.09±0.48)mmol/L]均明显下降(P均<0.01),血清白蛋白水平上升[(39.21±4.33)g/L比(25.46±1.54)g/L,P<0.01],肾小球肥大和足细胞损伤减轻[(95.50±5.01)个/肾小球比(58.78±2.86)个/肾小球,P<0.05],Nephrin[(2.05±0.44)比(1.15±0.22)]、Podocin[(1.32±0.25)比(0.72±0.20)]蛋白表达量上升(P均<0.01),TLR4[(0.37±0.04)比(0.61±0.04)]和NF-κB[(0.41±0.05)比(0.76±0.06)]蛋白表达量下降(P均<0.01)。结论雷公藤甲素可能通过抑制TLR/NF-κB信号通路相关因子表达,减轻糖尿病肾病模型小鼠足细胞损伤,减低蛋白尿,保护肾功能,起到治疗糖尿病肾病的作用。     

通络方剂减轻糖尿病大鼠肾小球足细胞损伤

目的：采用糖尿病大鼠模型研究通络方剂对肾小球足细胞的保护作用及其可能的机制。 方法：SD大鼠分为正常对照组、糖尿病对照组、通络方剂组和α硫辛酸组。干预组大鼠分别予以通络方剂（0.4g/kg/d）、α硫辛酸（100mg/kg/d）灌胃,干预12周后处死大鼠,留取血清和尿标本,测定肾重体重比,24h尿蛋白定量、BUN、Cr、Alb/Cr等肾功能指标,留取肾组织标本,体视学方法计数足细胞数量,计算足细胞相对密度,western blot方法检测肾皮质Nephrin的表达,同时测定肾皮质MDA含量和SOD活力。 结果：通络方剂组和α硫辛酸组大鼠24小时尿蛋白定量低于DM对照组,足细胞计数和Nephrin表达量高于DM对照组,差异有统计学意义（p<0.05）;与DM组相比,通络方剂组和α硫辛酸组大鼠肾皮质MDA含量较少,SOD活力较高（p<0.05）。 结论：通络方剂对糖尿病大鼠肾小球足细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。     

足细胞超微结构及其相关分子表达变化在糖尿病肾病发病中的作用

目的:探讨足细胞超微结构改变及其相关分子表达变化在糖尿病肾病(DN)发病中的作用.方法:将20只大鼠随机分为正常对照组和糖尿病肾病大鼠模型组,于第4,8周检测24h尿蛋白量等生化指标、用免疫组织化学和RT-PCR方法检测肾皮质nephrin,podocin蛋白及mRNA表达,用透射电镜检测足细胞超微结构变化.结果:糖尿病肾病大鼠24h尿蛋白排泄增多(P＜0.01),第4周即发现足细胞数减少、足突增宽(均P＜0.01),nephrin,podocin蛋白及其mRNA表达均减少(均P＜0.01);24h尿蛋白排泄量与nephrin和podocin蛋白表达呈负相关(均P＜0.01).结论:糖尿病肾病大鼠早期即出现足细胞数减少、足突增宽及nephrin和podocin表达均减少,随着病变加重,这种变化愈明显.足细胞病变不仅导致大量蛋白尿的发生,而且还与肾小球硬化和肾功能损伤的发生有关.     

糖肾康颗粒对糖尿病肾病患者尿蛋白的影响

目的:观察糖肾康颗粒对糖尿病肾病患者PCX、Nephrin、Podocin表达的干预作用。方法:72例糖尿病肾病患者随机分为观察组和对照组各36例,最终完成69例,观察组35例,对照组34例。观察组与对照组均给予基础治疗,观察组加服糖肾康颗粒口服,每日3次,每次10g。两组疗程均为8周。观察两组的临床疗效、中医证候积分变化、治疗前后UACR、24hUPr及尿中PCX、Nephrin、Podocin蛋白的变化情况。结果:观察组临床疗效和中医证候疗效均优于对照组(P<0.05)。两组治疗后中医证候积分、UACR、24hUPr较治疗前均显著下降(P<0.01),但观察组均显著优于对照组(P<0.01)。两组治疗前尿PCX、Nephrin、Podocin水平均高于正常组(P<0.01);治疗后两组尿PCX、Nephrin、Podocin水平均较治疗前降低(P<0.05或P<0.01),但观察组均显著优于对照组(P<0.05)。结论:糖肾康颗粒可有效改善糖尿病肾病患者的临床症状,减少尿蛋白,其作用机制可能与保护足细胞而降低尿中PCX、Nephrin、Podocin蛋白的表达有关。     

保肾通络方含药血清调节线粒体自噬对高糖诱导下足细胞氧化损伤的影响

目的 观察保肾通络方含药血清对高糖培养下足细胞氧化损伤的影响,并对保肾通络方的作用机制进行探讨。方法 以体外培养的肾小球足细胞为研究对象,给予高浓度葡萄糖刺激,采用CCK-8法分析足细胞活力以确定最佳模型及给药浓度,分为正常对照组、高糖组、保肾通络方组,采用鬼笔环肽进行细胞骨架染色,Western blotting法检测足细胞裂孔膜蛋白nephrin,自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)、ATG7、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达,流式细胞术检测足细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)及线粒体膜电位,免疫荧光共标LC3B及线粒体,观察各组足细胞内线粒体自噬泡的生成情况。结果 30 mmol/L高糖干预48 h可显著降低足细胞活力(P＜0.05),保肾通络方含药血清可使高糖诱导的足细胞活力明显提升(P＜0.01);与正常对照组相比,高糖组足细胞骨架褶皱呈多边形,应力纤维束被破坏,ROS生成显著增多(P＜0.01),足细胞nephrin、ATG5、ATG7表达显著降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P＜0.05),LC3B与线粒体共标减少,线粒体膜电位下降(P＜0.01);与高糖组相比,保肾通络方组足细胞骨架改善,ROS生成减少(P＜0.01),nephrin、ATG5、ATG7表达显著增加(P＜0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升(P＜0.05),LC3B与线粒体荧光共标增多,线粒体膜电位升高(P＜0.01)。结论 保肾通络方含药血清能够减轻高糖诱导的足细胞氧化损伤,其作用可能与改善足细胞线粒体自噬有关。     

地塞米松对阿霉素诱导的肾小球足细胞活动力的影响

目的探讨地塞米松（dexamethasone,Dex）改善阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的肾小球足细胞活性的机制。方法将体外培养的小鼠肾小球足细胞分为3组:ADR组,Dex预处理组（Dex+ADR）和空白对照组。采用划痕实验、Transwell实验、异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白（FITC-BSA）方法进行肾小球足细胞功能分析。另取SD雄性大鼠72只,随机分为ADR组（尾静脉注射ADR 7.5 mg/kg）,Dex治疗组（ADR+Dex,尾静脉注射ADR 7.5 mg/kg后24 h,再注射Dex 1 mg/kg）和对照组（尾静脉注射等量生理盐水）,分别给药后7 d、14 d、21 d和28 d收集24 h尿液,测定24 h尿蛋白。采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测nephrin表达变化。电镜下平均足突宽度（FWP）进行相关分析。结果划痕实验和Transwell结果显示,与空白对照组相比,ADR诱导肾小球足细胞活性升高,而Dex预处理后,肾小球足细胞的活力明显下降,与ADR组的差异有统计学意义（P<0.05）。FITC-BSA结果显示,与空白对照组相比,ADR诱导肾病肾小球足细胞FITC-BSA滤过率升高（P<0.05）;与ADR组相比,Dex预处理组肾小球足细胞FITC-BSA滤过率降低（P<0.05）。实时荧光定量PCR和Western Blot结果显示,与对照组大鼠比较,ADR诱导的肾病组肾小球足细胞nephrin表达升高（P<0.05）,而Dex预处理后,大鼠肾小球足细胞nephrin 表达下调（P<0.05）。电镜下结果显示,ADR组大鼠FWP高于正常组（P<0.01）;与ADR组相比,Dex治疗组FWP降低（P<0.01）。与对照组相比,ADR注射14 d开始,大鼠24 h尿蛋白增多（P<0.01）,第28天达到峰值（P<0.001）。与ADR组相比,Dex治疗组大鼠第14、21和28天24 h尿蛋白下降（P<0.001）。结论Dex下调nephrin表达,进而拮抗ADR诱导的体外肾小球足细胞活动力升高,参与缓解肾病大鼠的蛋白尿发生。     

肾康丸对早期糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

OBJECTIVE: To investigate the morphological changes and expressions of desmin and podocin in podocytes of rats with diabetic nephropathy (DN) rats and renal protection mechanism of Shenkangwan. METHODS: DN model was established in rats by a single injection of streptozotocin. The rats were then randomly divided into model group, Shenkangwan treatment group, irbesartan treatment group, and Shenkangwan plus irbesartan treatment group, with normal rats as the control group. All the rats received daily gavage for 8 weeks. The urinary protein quantity in 24 h were detected, and the morphological changes of the kidneys were observed with optic and transmission electron microscopes. The expressions of desmin and podocin in the podocytes were detected by immunohistochemistry. RESULTS: Shenkangwan and irbesartan reduced the urinary protein quantity in 24 h and alleviated the renal damage in DN rats, and the expression of desmin was significantly attenuated while podocin expression increased in the podocytes. CONCLUSIONS: Shenkangwan can provide renal protection against DN in rats and alleviate the structural and functional damages of podocytes possibly by reducing desmin expression and increasing podocin expression in the podocytes.     

人脐带间充质干细胞干预微小病变型肾病大鼠的实验研究

目的观察人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对微小病变型肾病(MCN)大鼠蛋白尿及足细胞的作用,并探讨其可能的机制。方法 60只雄性SD大鼠随机分为3组,每组20只。空白对照组经尾静脉注射1 mL生理盐水;模型组注射阿霉素(5 mg.kg-1,用1 mL生理盐水溶解);hUCMSCs干预组注射阿霉素[5 mg.kg-1,用1 mL hUCMSCs悬液(约1×107个细胞)溶解]。每组于造模后第10、28天各选择10只大鼠留取血、尿、肾脏标本,检测24 h尿蛋白量、血浆白蛋白和胆固醇、血清肌酐和尿素氮,光镜及电镜观察肾小球病理形态,反转录聚合酶链反应检测肾组织nephrin mRNA表达。结果造模后第10天,模型组24 h尿蛋白、血胆固醇高于空白对照组,血浆白蛋白、nephrin mRNA表达量低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,干预组24 h尿蛋白、血脂相对降低,血浆白蛋白、nephrin mR-NA表达量相对增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。造模后第28天,与模型组比较,干预组24 h尿蛋白、血胆固醇降低,血浆白蛋白及nephrin mRNA表达量增加,其差异有统计学意义(P<0.05);电镜下模型组肾小球出现足突广泛融合,hUCMSCs干预组病变较模型组减轻,足突部分融合。结论 hUCMSCs可修复足突病变,减少MCN大鼠的尿蛋白量,上调nephrin mRNA表达,可能机制为hUCMSCs的旁分泌作用、直接分化或改善肾血管管周微环境等。     

复肾功方对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏nephrin mRNA表达的影响

目的 研究复肾功方对慢性肾功能衰竭（chronic renal failure,CRF）大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白（nephrin） mRNA表达的影响,探讨其降低尿蛋白、减轻肾损害的作用机制。方法 将55只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,复肾功方低、中、高剂量组,每组11只。正常组常规饲养,其余4组大鼠食用含腺嘌呤饲料建立慢性肾功能衰竭模型,连续喂养21 d。造模成功后,所有大鼠改用常规饲料。正常组和模型组按20 mL/(kg·d)灌胃给予生理盐水;复肾功方低、中、高剂量组按大鼠体质量分别以生药4、8、16 g/kg灌胃复肾功方,1次/d,连续灌胃30 d。实验结束后,收集大鼠尿液测定24 h尿蛋白定量,检测各组大鼠血清血肌酐(SCr)和尿素氮（BUN）水平,HE染色检测肾小球组织形态学改变,免疫荧光检测nephrin蛋白表达,Real-Time PCR法观察肾脏nephrin mRNA表达情况。结果 与正常组比较,模型组24 h尿蛋白定量、SCr和BUN水平升高(P<0.05),nephrin蛋白及mRNA表达下降（P<0.05);与模型组比较,经复肾功方治疗后,24 h尿蛋白定量、SCr和BUN水平降低（P<0.05）,肾组织nephrin蛋白及mRNA的表达升高（P<0.05）。结论 复肾功方降低CRF大鼠尿蛋白,减轻肾损害程度,其机制可能与升高肾组织nephrin蛋白及mRNA的表达、减轻足细胞损伤有关。