粉防己碱对瘢痕成纤维细胞活性功能的影响

目的　观察粉防己碱对体外培养的巨噬细胞介质介导瘢痕成纤维细胞活性功能的调控作用 ,并探讨其在瘢痕防治中的意义。方法　取 5例手术切除的人增生性瘢痕组织标本行瘢痕成纤维细胞体外培养 ,于传代培养至第 4代的成纤维细胞 (5× 10 4)中分组加入巨噬细胞介质、粉防己碱继续培养 ,然后分别用3 H TdR和3 H 脯氨酸脉冲标记 ,放射性核素液闪烁仪定量检测各组3 H TdR和3 H 脯氨酸掺入值。并采用三维培养方法测定体外模拟瘢痕样组织的收缩指数变化。结果　粉防己碱 3mg/L不抑制细胞DNA合成时 ,即可明显减少瘢痕成纤维细胞 3 H 脯氨酸掺入值 ,由对照组的 94 5± 191减少至6 82± 2 0 5 (P <0 .0 5 ) ;并能显著降低巨噬细胞介质介导的瘢痕成纤维细胞3 H TdR掺入值和3 H 脯氨酸掺入值 ,由单纯介质组的 2 75 6± 2 4 4、1384± 2 93分别降低至 194 8± 2 82、10 34± 14 2 (均P <0 .0 1)。粉防己碱 1mg/L即可降低体外瘢痕样组织的收缩指数 (P <0 .0 1)。结论　粉防己碱对体外培养的巨噬细胞介质介导瘢痕成纤维细胞增殖、胶原合成以及收缩三方面具有抑制效应 ,可望在增生性瘢痕的防治中发挥重要作用。     

内皮素对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成作用的实验研究

目的：探讨内皮素（ET）在瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成中的作用及一氧化氮（NO）、粉防已碱（Tet）的拮抗效应。方法：体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，以^3H-TdR掺入法测定细胞增殖；以^3H-脯氨酸掺入量判断细胞胶原合成。结果：ET呈浓度依赖性促进瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成，随着ET浓度（2．5－100ng/ml）的增加，^3H-TdR掺入值较对照组分别增加了1．8、4．0和4．9倍；^3H－脯氨酸掺入值较对照组分别增加了1．1、3．1和3．8倍（P＜0．01）。用NO供体亚硝基乙酰青霉胺（S-nitroso-N-acetyl penicillamine,SNAP)50μg/ml单独处理成纤维细胞，对^3H-TdR掺入值无明显影响（与对照组相比，P＞0．05），但对^3H-脯氨酸掺入值有下调作用；SNAP可拮抗ET－1（25ng/ml）刺激细胞增殖作用（抑制率为22．89％，P＜0．05）；对ET－1的促胶原合成作用无明显影响（P＞0．05）。Tet在不抑制细胞DNA合成的药物浓度（3μg/ml）即可明显减少瘢痕成纤维细胞^3H-脯氨酸掺入值，并能显著降低由ET介导的瘢痕成纤维细胞^3H-TdR掺入值（抑制率为33．21％，P＜0．01）。结论：ET对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成具有显著促进作用，此效应可部分被SNAP、Tet所阻抗。     

半边旗二萜类化合物5F对人病理性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的研究5F对人病理性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响.方法将5F作用于体外培养的病理性瘢痕成纤维细胞,通过3H-脯氨酸掺入法、检测细胞上清液羟脯氨酸含量及人PCⅢ放免试剂盒测定成纤维细胞胶原合成含量.结果 5F可减少成纤维细胞3H-脯氨酸掺入量、细胞上清液胶原蛋白总量及Ⅲ型前胶原的含量.结论 5F在体外能明显抑制病理性瘢痕成纤维细胞胶原的合成.     

抑癌基因MTS1对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物学影响

目的：探讨多肿瘤抑制基因1（MTS1）对人瘢痕疙瘩成纤维细胞在生长增殖、DNA合成代谢及胶原合成量等方面的影响。方法：将外源性MTS1基因导入人瘢痕疙瘩成纤维细胞后，通过MTT法测定细胞的生长曲线，通过^3H-胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR）及^3H-脯氨酸掺入的方法测定细胞的DNA合成量及胶原合成量，来分别比较转染前后细胞的生物学变化。结果：在转染MTS1后瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖受到明显的抑制，同时其DNA合成量及胶原合成量也明显降低，而转染空载体组及正常组细胞均未出现上述变化。结论：外源性多肿瘤抑制基因1(MTS1）能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞在生长增殖、DNA合成及胶原合成等方面生物学功能，为瘢痕疙瘩的临床治疗提供了新的思路。     

人甲状旁腺素(1-34)对新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:研究外源性人甲状旁腺素(1-34)[hPTH(1-34)]对原代培养新生Wistar鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖及胶原合成的影响.方法:分离、培养Wistar乳鼠心肌成纤维细胞, 加入不同浓度的hPTH(1-34)共培养,四氮唑盐比色法(MTT)、3H-TdR 掺入法检测细胞增殖;3H-Proline掺入法测定胶原合成.结果:随着一定浓度hPTH(1-34)的升高,CFs MTT法A490值及3H-TdR的掺入量、3H-脯氨酸掺入率呈明显的递增趋势(P＜0.01);维拉帕米预处理组与单独应用组10-8mol/L hPTH相比,以上指标均显著降低(P＜0.01).结论:PTH可显著刺激成纤维细胞增殖及胶原合成,L型钙通道开放引起的细胞外钙内流增加为其重要机制之一.     

硒化壳聚糖促创面愈合作用的初步研究

目的：通过研究硒化壳聚糖对体外培养皮肤成纤维细胞增殖的影响来评判其对创面愈合的作用。方法：用不同剂量（25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L）硒化壳聚糖作用于成纤维细胞,光镜下观察药物对细胞形态的影响;MTT法、3H-TdR、3H-脯氨酸掺入法、细胞生长动力学研究用于检测药物对细胞增殖及胶原合成影响;LDH漏出率用于检测药物对细胞有无损伤;并以等体积细胞培养液处理为对照组。结果：各浓度药物处理细胞后,细胞形态未见明显改变,均可使细胞吸光度值增加,细胞倍增时间缩短,促进细胞对3H-TdR和3H-脯氨酸的掺入（P〈0.05,P〈0.01）,降低LDH漏出率（P〈0.05,P〈0.01）。结论：硒化壳聚糖可促进体外培养皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成,进而促进创面愈合。     

透明质酸刺激因子对成纤维细胞活性功能和胶原合成的影响

目的研究透明质酸刺激因子(HASF)对正常皮肤及瘢痕成纤维细胞活性和胶原合成的影响。方法层析法从兔羊水及胎兔血清中提取 HASF 并做活性鉴定;用嗜银蛋白(AgNORs)染色法、~3H-脯氨酸掺入法和羟脯氨酸(HYP)测定法观察不同浓度的 HASF 对细胞增殖活性和胶原蛋白合成的影响。结果 HASF 使两类细胞的 AgNORs 含量减少;两类细胞实验组脯氨酸掺入率与HYP 含量均较对照组低,两种胶原测定法相关性好。结论 HASF 对正常皮肤及瘢痕成纤维细胞的活性功能及胶原合成有抑制作用,可能影响伤口愈合中瘢痕的形成。     

三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.05),且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义(P<0.01);三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。     

透明质酸刺激因子对成纤维细胞活性功能和胶原合成的影响

目的 研究透明质酸刺激因子（HASF）对正常皮肤及瘢痕成纤维细胞活性和胶原合成的影响。方法 层析法从兔羊水及胎兔血清中提取HASF并做活性鉴定;用嗜银蛋白（AgNORs)染色法、^3H-脯氨酸掺入法和羟脯氨酸（HYP）测定法观察不同浓度的HASF对细胞增殖活性和胶原蛋白合成的影响。结果 HASF使两类细胞的AgNORs含量减少;两类细胞实验组脯氨酸掺入率与HYP含量均较对照组低,两种胶原测定法相关性好。结论 HASF对正常皮肤及瘢痕成纤维细胞的活性功能及胶原合成有抑制作用,可能影响伤口愈合中瘢痕的形成。     

瘦素对体外大鼠成纤维细胞增殖与胶原合成的影响

目的　研究瘦素对体外培养大鼠成纤维细胞 (fibroblast,FB)增殖与胶原合成的影响 ,以阐明 FB介导瘦素在大鼠皮肤创伤愈合中的促进作用。　方法　体外培养乳鼠真皮 FB,通过 MTT比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷(3H- Td R)和 3H-脯氨酸 (3H- Pro)掺入法观察不同浓度的瘦素 ,分别为 0、10、5 0、10 0、2 0 0及 4 0 0 ng/ ml对其增殖和胶原合成的影响。　结果　瘦素剂量在 4 0 0 ng/ ml以下时 ,随瘦素剂量增加明显增加了体外培养大鼠 FB MTT的光密度值和 3H- Td R的掺入量。3H- Pro的掺入量随瘦素剂量增加基本呈增大趋势。 2 0 0、4 0 0 ng/ ml剂量组的3H- Td R掺入量 379±10 1cpm、32 6± 33cpm,与对照组 2 19± 5 6 cpm比较有统计学差异 (P<0 .0 5 ) ;且 2 0 0、4 0 0 ng/ ml剂量组的 MTT吸光度(A)值 0 .0 82± 0 .0 13、0 .0 91± 0 .0 18与对照组 0 .0 6 3± 0 .0 10比较有统计学差异 (P<0 .0 5 ) ;2 0 0、4 0 0 ng/ ml剂量组的 3H- Pro掺入量 911± 5 5 cpm、10 72± 2 5 9cpm,与对照组 6 79± 176 cpm比较有统计学差异 (P<0 .0 5 )。　结论　瘦素促进了 FB的增殖和胶原蛋白的合成 ,这可能是瘦素发挥促进大鼠皮肤愈合作用的途径之一。     

转化生长因子β1对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：探讨转化生长因子β1（TGFβ1）对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其意义。方法：采用非放射性细胞增殖检测,3H－胸腺嘧啶摄入,3H－哺氨酸摄入及DNA定量分析方法,观察TGFβ1对体外培养的生长融合后早期（24h)的病理性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞的增殖活性和胶原合成的作用。结果：经TGFβ1作用后,来自瘢痕的成纤维细胞的3H－胸腺嘧啶核苷和3H－脯氨酸掺入增强（P＜0．01）,但来自正常皮肤的无明显变化（P＞0．05）。结论：在细胞生长融合后早期（24h),TGFβ1对瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原合成具有正性调控作用,其在瘢痕的形成中可能具有重要作用。     

积雪草甙预防隆乳术后包膜挛缩的细胞及分子机制初探

目的 初步探讨积雪草甙抑制隆乳术后包膜挛缩的细胞及分子机制.方法 将人体来源挛缩包膜组织进行体外分离培养,获得成纤维细胞,将含不同浓度积雪草甙的条件培养基作用于细胞后,采用3H-胸腺嘧啶核苷掺人法、3H-脯氨酸掺入法、Western-blot法分别检测细胞增殖、胶原合成及α-SMA蛋白表达的变化,结果采用SPSS11.0统计学软件分析,并进行t检验.结果 当积雪草甙浓度达到50 mg/L即对细胞DNA合成及胶原合成产生显著的抑制,抑制率分别为34.7%和30.1%,与空白组比较差异具有统计学意义(P＜0.05),随着药物浓度的增加,抑制作用逐渐增强;积雪草甙浓度达到25 mg/L时,α-SMA蛋白表达显著受到抑制,蛋白活化指数为1.673,与空白组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).抑制作用与药物浓度正相关.结论 积雪草甙能有效抑制包膜来源成纤维细胞的增殖、胶原合成及向肌成纤维细胞的转分化.

Abstract：

Objective To explore the cellular and molecular mechanism of the inhibitory effect of asciaticoside on capsular contracture following breast augmentation. Methods Contractured capsule derived fibroblasts were cultured in medium with different concentration of asciaticoside. The cell proliferation, collage synthesis and α-SMA expression were detected by means of 3H-thymidine incorporation, 3H-proline incorporation, and Western-blot. The results were analyzed by SPSS 11.0 with t test. Results DNA and collagen synthesis of fibroblasts were dramatically inhibited when the asciaticoside reached the concentration of 50 mg/L. The inhibitory rate was 34.7% and 30.1%respectively, showing a significant difference from that in control group( P＜0.05 ). The inhibitory effect increased with the rise of the asciaticoside concentration in a dose-dependent manner. When the concentration of asciaticoside reached 25 mg/L, the expression of α-SMA was down-regulated with an activation index of 1. 673, showing a significant difference when compared with that in control group(P＜0.05). Conclusions Asciaticoside can effectively inhibit the DNA and collagen synthesis of capsulederived fibroblasts. The trans-differentiation of fibroblast to myo-fibroblasts is also prevented by it.     

姜黄素体外抗人增生性瘢痕纤维化的实验研究

目的:观察姜黄素对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,分别应用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法检测姜黄素作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:和对照组相比,姜黄素能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成(P<0.05)。结论:姜黄素具有体外抗瘢痕纤维化的作用,可能成为治疗增生性瘢痕的有效药物。     

反义结缔组织生长因子对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用

目的：研究结缔组织生长因子（CTGF）反义寡核苷酸（ASODN）对人瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGFmRNA的表达和细胞增殖及胶原合成的影响,探讨瘢痕疙瘩的基因治疗。方法：体外分离、培养人正常皮肤成纤维细胞（NSF）和瘢痕疙瘩成纤维细胞（KF）,以脂质体介导方法将CTGFASODN转染KF中,用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测细胞中CTGFmRNA的表达;采用MTT方法测细胞增殖3;H-脯氨酸掺入法检测细胞的胶原合成量。结果：CTGFmRNA在NSF中几乎无表达,在KF中表达增高,CTGFASODN可以抑制其增殖和胶原合成（P〈0.05）。结论：CTGFASODN能够抑制成纤维细胞CTGFmRNA表达和细胞增殖及胶原合成,表明阻断CTGF可能是延缓瘢痕纤维化的有效手段。     

汉防己甲素对成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

目的　探讨汉防己甲素预防和治疗增生性瘢痕的可行性。方法　对增生性瘢痕中的成纤维细胞进行培养 ,然后加入不同浓度的汉防己甲素 ,培养后继续观察成纤维细胞合成胶原蛋白的能力的变化。结果　汉防己甲素可以抑制成纤维细胞合成胶原蛋白。结论　汉防己甲素对成纤维细胞胶原蛋白的合成具有抑制作用 ,因此它可能对增生性瘢痕具有预防和治疗作用     

反义寡核苷酸对人瘢痕疙瘩成纤维细胞结缔组织生长因子基因表达和胶原合成的作用

目的　研究结缔组织生长因子 (CTGF)在人瘢痕疙瘩发病机制中的作用。　方法　体外分离、培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞 (HKF)。在脂质体介导下 ,将异硫氰酸荧光素标记的硫代磷酸化CTGF反义寡核苷酸 (ASODN)转染至HKF中 ,设为CTGFASODN治疗组 (AT组 ) ,同时设脂质体对照组 (LC组 ,仅加入脂质体 )和空白对照组 (C组 ,不加脂质体和ASODN)。于荧光显微镜下观察CT GFASODN在各组细胞中的分布 ;通过逆转录聚合酶链式反应检测细胞中CTGFmRNA指数 (RI);采用3 H 脯氨酸掺入法检测细胞的胶原合成量。　结果　转染后 12h,AT组细胞胞浆内可见大量荧光 ,LC、C组HKF内无此现象。AT组转染后 4 8hRI值为 0 .12± 0 .6 2 ,明显低于LC组值 0 .5 1± 0 .18及C组值 0 .5 4± 0 .35 (P <0.0 1)。AT组的3 H 脯氨酸掺入率为 10 8.96± 79.0 5 ,较LC组值 171.2 4± 14 .99及C组值 16 5 .38± 4 3.6 1低 (P <0.0 1)。　 结论　CTGFASODN能够抑制体外培养的HKF中CTGF基因表达和胶原合成 ,表明CTGF在人瘢痕疙瘩纤维化进程中发挥了一定作用。