利用脂肪干细胞构建组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损

目的探讨以脂肪于细胞（ADSCs）复合脱细胞软骨基质支架构建组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损的效果。方法以人关节软骨脱细胞基质为支架，复合经诱导的兔ADSCs，体外分别经静态培养和生物反应器培养，构建组织工程软骨。对膝全厚关节缺损进行修复，并与单支架组、空白对照组比较，其中空白对照组12个关节，脱细胞软骨支架组16个关节，静态培养细胞支架组24个关节，生物反应器培养细胞支架组8个关节。分别于术后3、6个月对修复关节进行大体、组织学及免疫组化观察。结果实际完成观察的关节数为44个，其中空白对照组9个，脱细胞软骨支架组11个，静态培养细胞支架组18个，生物反应器培养细胞支架组6个。空白对照组全为纤维组织或纤维软骨样修复；单支架组5个关节为未成熟透明软骨，无成熟透明软骨形成；静态培养细胞支架组83．3％为透明软骨，其中3个关节为成熟透明软骨，12个关节为未成熟透明软骨；生物反应器培养细胞支架组100％为透明软骨，其中2个为成熟透明软骨，4个为未成熟透明软骨。Wakitani评分各组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论ADSCs复合脱细胞软骨基质支架能良好地修复兔膝关节全厚软骨缺损，应用生物反应器技术有助于构建组织工程软骨，促进软骨缺损的修复。     

关节软骨组织工程种子细胞的研究进展

目的 综述关节软骨组织工程种子细胞的研究进展.方法 广泛查阅近年来有关关节软骨组织工程种子细胞的文献,并进行综述.结果 BMSCs分化为软骨细胞将成为关节软骨组织工程种子细胞的主要来源,与支架利用和培养环境改善构成关节软骨组织工程的重要条件.结论 充分利用细胞因子和转基因技术,改良三维支架和培养条件,将推动关节软骨组织技术的进展.     

关节软骨组织工程研究进展

组织工程技术为损伤关节软骨的修复提供了全新的治疗方法。本文就关节软骨组织工程的种子细胞、生长因子、细胞外基质支架及修复关节软骨缺损的研究进展作一综述。     

组织工程软骨修复关节软骨损伤研究新进展

目前关节软骨损伤修复仍未得到很好的解决,临床修复方法大多近期效果理想,远期效果不确切或者有恶化的倾向[1].随着近几年组织工程技术快速发展,制备具有成软骨活性的人工软骨使之植入人体后能够形成新的软骨组织从而达到软骨修复与重建,为临床治疗软骨损伤带来突破性进展.组织工程软骨应用工程学和生命科学原理将经体外分离、培养的高浓度的种子细胞种植于天然的或人工合成的具有良好生物兼容性和可降解性的聚合物支架,使之植入人体后能够形成新的软骨组织从而达到软骨修复与重建的目的.软骨组织工程研究涉及到种子细胞、支架材料和生长因子3个基本要素.     

软骨细胞外基质源性取向支架与骨髓基质干细胞体外软骨组织工程的初步研究

目的 制备关节软骨细胞外基质源性取向支架,观察其对体外培养的骨髓基质干细胞分布排列的影响,探索其用于修复关节软骨缺损的可行性.方法 收集天然猪关节软骨,在PBS溶液中超微湿法粉碎关节软骨,利用差速离心收集细胞外基质悬液;低温超速离心收集沉淀,制备成2%～3%悬液;采用定向结晶与冷冻干燥技术制备取向支架,应用紫外交联及碳化二亚胺交联.光学显微镜及扫描电镜观察支架的形态结构,冰冻切片后组织化学染色对支架进行定性分析;生物力学方法检测支架的力学特性.分离培养兔骨髓基质干细胞,PKH26标记,接种到支架上体外软骨诱导培养,倒置荧光显微镜及扫描电镜观察培养3 d内种子细胞在支架内的黏附、分布及排列方式.结果 制备的支架材料具有垂直取向排列的孔道结构,软骨细胞外基质特异性染色阳性,纵向压缩弹性模量为(2.02±0.02)MPa,横向压缩弹性模量为(0.264±0.16)MPa,具有各向异性的力学特点.体外培养显示骨髓基质干细胞广泛均匀地分布在支架内部,并且在支架材料表层呈平行排列,深层呈柱状排列,类似于天然软骨组织中细胞的排列方式.结论 以关节软骨细胞外基质材料制备的取向性组织工程支架,在生化组成和结构上仿生天然关节软骨细胞外基质,是一种较为理想的软骨组织工程支架.     

软骨组织工程与细胞黏附关系研究进展

关节软骨是一种无血管组织，损伤后自身愈合能力非常有限，关节软骨缺损的治疗已成为困扰临床医生的一个难题。随着生命科学和工程学的发展，使用组织工程技术构建关节软骨的替代品修复关节软骨损伤已经成为研究热点，目前在临床应用亦已获得成功。组织工程细胞．支架材料之间的紧密黏附反应对细胞的增值、表型的表达、细胞外基质的合成具有重要的作用，但由于种子细胞和载体支架之间的黏附力不强，种子细胞容易从支架上脱落，[第一段]     

胶原蛋白水凝胶在软骨组织工程中的应用

由创伤或骨病所致的关节骨软骨损伤在临床中十分常见,其中软骨缺损者达40.31%。由于关节软骨自身修复能力低下,采用组织工程技术对关节软骨损伤进行修复是目前采用再生医学治疗关节软骨损伤的新方法。组织工程支架按照性状可分为预成型支架材料及水凝胶材料两大类。传统的预成型支架材料移植技术容易给缺损周边软骨带来继发损伤,也存在支架与缺损整合不紧密等问题。如何在避免二次损伤的基础上,应用理想的仿生材料复合种子细胞修复关节不规则软骨损伤将成为未来软骨损伤修复的主要问题。选取微创、仿生并且可以原位塑形的胶原蛋白水凝胶复合种子细胞修复关节软骨损伤为损伤关节软骨的修复带来了希望。本文结合国内外相关文献对目前胶原蛋白水凝胶在软骨组织工程中的应用做一综述。     

体外构建组织工程软骨种子细胞的研究进展

体外构建组织工程软骨的首要问题是种子细胞的来源,目前获得种子细胞的可能途径主要有以下几种:(1)培养扩增自体获得的软骨细胞;(2)同种异体软骨细胞;(3)骨髓基质干细胞及其他组织来源干细胞;(4)胚胎干细胞;(5)基因修饰细胞。本文就当前体外构建组织工程软骨的种子细胞研究进展综述如下:1自体软骨细胞自体软骨细胞可由关节软骨、骺板软骨、软骨膜、肋软骨和耳软骨等分离培养获得。软骨细胞是构成透明关节软骨的唯一细胞成分,是终末分化细胞,具有高度特异性。软骨细胞的主要功能是维持软骨基质成分的稳定。新分离的关节软骨细胞在最初的数天…     

软骨组织损伤修复的组织工程学研究进展

关节软骨在损伤和发生退变后难以发生自发的组织再生过程,可导致骨关节炎及其他并发症的发生,严重影响病人的生活质量。随着细胞生物学和材料科学等相关学科的发展,利用组织工程技术修复损伤的软骨组织已经取得了一系列的成果,在细胞的培养、支架材料和诱导方式的运用等方面有了更深刻的认识和理解。本文旨在种子细胞、支架、诱导因子三方面对软骨组织工程近年来的进展作一综述。     

应用于整形外科领域的组织工程化软骨

软骨组织工程的基本技术路线是在体外培养种子细胞,并以一定浓度将其种植于具有良好生物相容性和可降解性的合适支架上,形成细胞—支架复合物,将此复合物植入生物体内组织缺损部位,最终完成对组织的修复和再造[1,2]。软骨组织工程的应用目前主要集中在两个领域:骨科和整形外科。整形外科软骨组织工程的研究方向与骨科有所不同:就临床常用作修复或填充的器官类型(耳廓、气管、鼻翼、鼻假体、颏假体等)而言,它们属于非承重结构,因而对其在软骨力学方面的要求相对较低。然而,整形外科对于修复体形态的     

骨髓基质干细胞在软骨组织工程中的应用

骨髓基质细胞(BMSC)是倍受关注的具有多向分化潜能的干细胞,可在体外大规模扩增而不丢失多分化潜能,异体移植时排斥反应小,是组织工程再生修复应用的重点种子细胞.近年来BMSC在软骨创伤修复中的应用较为广泛,特别是在BMSC诱导后重新分化,软骨缺损植入后刺激软骨修复再生,减缓关节损伤进一步发展,体内外特定环境下复合组织工程材料分化成骨或软骨的相容性、分化度等生物学特性等方面进行了细致研究.该文就BMSC在软骨缺损组织工程修复中应用的现状和发展方向作一综述.     

真皮多能干细胞复合聚乳酸支架修复关节软骨全层缺损的实验研究

[目的]探讨真皮多能干细胞在软骨缺损修复中的可行性,为扩大软骨缺损修复中种子细胞的选择提供实验依据.[方法]以新生青紫蓝兔为研究对象,机械法直接分离得到真皮组织,采用酶消化法获取细胞,利用干细胞贴壁粘附生长的特性获取高克隆细胞群,并进行传代培养.使细胞浓度达到1×106/ml与聚乳酸支架材料共培养一周后植入兔膝关节软骨全层缺损处,用3～5个月龄青紫蓝兔30只,60个关节,随机分为真皮多能干细胞/聚乳酸支架材料、聚乳酸支架材料、空白对照三组,每组20个关节,于术后12周空气栓塞处死实验兔,对修复组织进行取材,行HE、甲苯胺蓝染色,根据软骨缺损修复情况进行大体、组织学评分,并进行统计学分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义.[结果]大体及组织学观察显示,真皮干细胞/支架材料实验组修复组织表面光滑、呈透明样,与周围软骨及软骨下骨整合良好,而聚乳酸支架材料组有少许透明样软骨,主要以纤维软骨修复,空白对照组则表面有缺损,以纤维软骨修复.大体及组织学观察后进行统计学评分分析,显示A组修复效果最优、优于B、C组(P＜0.05),B组优于C组(P＜0.05)[结论]真皮多能干细胞修复关节软骨缺损效果明显,恢复正常关节软骨结构,可作为组织工程化软骨种子细胞之一.     

关节软骨缺损组织工程修复研究面临的问题

各种原因如外伤、骨病等所造成的关节软骨面缺损经常出现在临床工作中.关节软骨面的完好对关节功能的正常发挥有重要意义,但软骨组织几乎没有自身修复能力,因此,关节软骨的修复成为当前组织工程的研究热点.软骨细胞组织工程研究需要解决以下问题:(1)寻找理想的种子细胞及其培养、扩增方法;(2)明确各种细胞因子的调控机理;(3)提供适当的细胞载体支架及固定方法.     

应用自体脂肪干细胞修复猪关节软骨缺损的初步实验研究

目的 探索自体脂肪干细胞修复猪关节软骨缺损的可行性.方法 从猪背部脂肪组织中获取脂肪干细胞,经过体外培养扩增,以50×106/ml的浓度将脂肪干细胞接种于PLGA(polylacticacid/polyglycolicacid,PLA/PGA,PLGA)中,细胞材料复合物在体外成软骨诱导2周.于猪膝关节软骨非负重区形成2个直径8mm的环形、全层软骨缺损,实验组回植经诱导后的细胞材料复合物,对照组放置单纯支架材料.术后12周取材,缺损修复区行大体观察、组织学HE及藏红花染色、免疫组化检测.结果 术后12周实验组缺损区大部分被修复,缺损被软骨组织填充,修复区表面光滑.组织学染色显示有典型的透明软骨样结构.藏红花染色发现修复组织表达丰富的聚合蛋白多糖.对照组则未能修复关节软骨缺损,缺损区面积增大,表面覆盖薄层纤维组织.结论 猪自体脂肪干细胞可以作为组织工程种子细胞,修复猪关节软骨缺损.     

小鼠骨髓基质干细胞与人耳脱细胞软骨复合培养的研究

目的探讨以小鼠骨髓基质干细胞(MSCs)作为组织工程软骨的种子细胞,在人耳脱细胞软骨支架上生长的可行性.方法将人耳软骨经脱细胞处理,得到脱细胞软骨支架.抽取鼠的骨髓,经离心得到单个核细胞,进行体外分离培养得到MSCs.将鼠的第2代MSCs种植于脱细胞软骨支架上,体外立体培养10天,在光镜及电镜下观察细胞生长及胶原纤维排列情况.结果 MSCs在人耳脱细胞软骨支架上能立体培养成活,细胞分布不均,靠近培养液的一面细胞分布较多,其中大部分细胞进入已脱细胞的软骨陷窝内,每个陷窝内的细胞数为1～2个.结论以鼠MSCs为种子细胞,可在人耳脱细胞软骨支架上良好生长,构建组织工程软骨.     

骨髓间充质干细胞修复关节软骨缺损研究进展

关节软骨损伤在临床上很常见．由于关节软骨的自身修复能力很差．关节软骨一一旦损伤即很难修复．继而会发生不可逆的病理变化，造成关节的退行性改变．严重影响患者的生活质量。目前．关节软骨损伤临床上尚无有效的治疗方法。近年发展起来的一门新兴学科一组织工程学．通过利用少量的种子细胞经过体外培养扩增，并附着在一定的吏架材料上，移植到体内而形成新的有生命力的组织。骨髓闸充质干细胞（Bone Marrow—derived Mesenchymal Stem Cells，BMSOs）用作种子细胞具有增殖能力强．多向分化潜能（可以分化为骨、软骨、肌肉、脂肪等多种组织），而且具有采集方便、对机体损伤小的特点．是软骨组织工程理想的种子细胞。     

关节软骨缺损修复与组织工程

关节软骨缺损自身修复能力很有限,目前的临床治疗手段无法达到满意修复.组织工程的发展为解决这个问题提供了新思路,使软骨组织缺损的完全再生成为可能.组织工程方法修复关节软骨缺损的最终目的是恢复软骨组织结构的完整性和功能稳定性.在细胞选择方面,软骨细胞主要要解决去分化问题,而间充质干细胞因为自体来源、易扩增、具有软骨细胞分化潜能,受到广泛重视,胚胎干细胞主要用于细胞的分化机制研究.生长因子因为作用效果不同,也趋向于联合应用.在支架材料选择方面,复合支架成为研究的主要方向.应用组织工程方法修复关节软骨缺损的效果存在一定的争议,主要是远期功能观察距离临床应用存在一定差距,在修复组织固位和生物力学影响方面还需要进一步研究.     

组织工程化软骨构建研究进展

本文从生物支架材料、种子细胞的来源、体外培养和调节因子几方面简述了软骨组织工程的进展，并试图提出一些尚待解决的问题。     

软骨组织工程中的细胞来源及其影响因素

关节软骨在受到创伤或退变后 ,不能自我修复。传统的治疗方法不能取得满意的效果 ,运用组织工程方法修复关节软骨缺损展示了令人鼓舞的前景。如何选择和改良种子细胞是构建组织工程软骨的关键 ,本文就该领域的进展作一综述。1　种子细胞来源1.1　软骨细胞自体软骨细胞是最常用的种子细胞。它分离和培养简单 ,同源性好 ,无免疫排斥问题 ,原代单层培养的软骨细胞能够表达Ⅱ型胶原和可聚蛋白多糖等特异性细胞外基质达数日至数周[1] ,在严格的三维条件下可以维持表型稳定达 8个月之久 ,但自体软骨细胞取自人体正常组织 ,来源受限。体外多次传代…     

软骨组织工程种子细胞及其培养方法

关节软骨损伤是临床常见疾病，软骨组织自身修复能力低下，治疗缺乏有效手段，容易导致创伤性关节炎和功能障碍。随着对种子细胞培养方法研究的深入、生物材料学上的进展，组织工程学为关节软骨损伤修复提供了新的方法，有望解决这一难题。本对软骨组织工程中用到的几种种子细胞及其培养方法进行了综述。