去甲肾上腺素与培育乳鼠心室肌细胞β受体的影响

目的：探讨去甲肾上腺素对心肌细胞β受体影响的细胞内机制。方法：利用β－肾上腺素能受体放射性配基＾３Ｈ－ＤＨＡ和Ｆｕｒａ－２／ＡＭ测定心肌细胞受体和胞内游离钙。结果：（１）去甲肾上腺素可以引起心肌细胞β受体下调和胞内游离钙增高；（２）维拉帕米能抑制去甲肾上腺素诱导的β受体下调和胞内游离钙的增高。结论：去甲肾上腺素诱导心肌细胞内游离钙变化可能参与了心肌细胞β受体的调节。     

去甲肾上腺素对培育乳鼠心室肌细胞β受体的影响

目的：探索去甲肾上腺素对心肌细胞β受体影响的细胞内机制。方法：利用β－肾上腺素能受体放射性配基３Ｈ－ＤＨＡ和Ｆｕｒａ－２／ＡＭ测定心肌细胞受体和胞内游离钙。结果：（１）去甲肾上腺素可以引起心肌细胞β受体下调和胞内游离钙增高；（２）维拉帕米能抑制去甲肾上腺素诱导的β受体下调和胞内游离钙的增高。结论：去甲肾上腺素诱导心肌细胞内游离钙变化可能参与了心肌细胞β受体的调节     

去甲肾上腺素心肌损害模型的研究

实验兔42只分成正常对照组、去甲肾上腺素1组(NE1)、NE2组,用药后分别于12h、24h、48h采血测定各组NE浓度,并处死取心肌做病理组织学检查,半定量分析心肌病理损害的程度。结果发现:NE引起兔心肌明显损害,细胞浸润及血栓形成等,随着NE剂量加大,心肌损害加重,死亡兔子数目增多。结论:NE心肌损害模型以NE1mg/kg,观察时间24h为宜。     

BAPTA对去甲肾上腺素刺激的大鼠心肌细胞蛋白合成及c-fos和β-MHC表达的影响

目的观察去甲肾上腺素（norepinephrine，NE）刺激导致的心肌细胞肥大中，钙信号通路和心肌细胞蛋白合成以及c—fos和β—MHC表达之间的关系。方法去甲。肾上腺素（10^-5mol／L）刺激原代培养的心肌细胞，细胞内钙离子络合剂BAPTA（20μmol／L）阻断钙信号通路，通过^3H—leucine掺入测定蛋白质合成，RT—PCR测定c—fos及β—MHCmRNA的表达．结果NE刺激组的心肌细胞^3H—leucine摄人量、c—fos及β—MHC的表达均显著高于正常对照组（P〈0．01），BAPTA阻断后明显降低（P〈0．01），单纯BAPTA阻断组的^3H—leucine摄入量和β-MHC的表达低于正常对照组（P〈0．01），在正常对照组及单纯BAPTA阻断组未见c—fos明显表达。结论Ca^2＋信号通路不但参与NE刺激引起的心肌细胞蛋白合成增加、c-fos及β—MHC的过度表达，且在正常心肌细胞蛋白质合成及β—MHC表达中也起重要作用。     

三七总皂苷对去甲肾上腺素诱导的心肌肥大的影响

目的:研究三七总皂苷(PN S)对去甲肾上腺素(NE)诱导的新生大鼠心肌肥大的作用,并探讨其作用机制。方法:用NE诱导培养新生大鼠心肌细胞制作心肌肥大模型。经G iem sa染色后用图像分析仪测定细胞表面积,B rad ford法测细胞蛋白质含量,观察0.02、0.1、0.5 g.L-13个浓度的PN S对肥大心肌细胞的影响。结果:肥大组细胞表面积及蛋白质含量比对照组明显增加(P<0.01);PN S中、高剂量组与肥大组比较,细胞表面积及蛋白质含量均显著减少(P<0.01);低剂量PN S对细胞表面积及蛋白质含量无明显影响(P>0.05)。结论:PN S可浓度依赖性地拮抗NE诱导的大鼠心肌细胞的肥大反应。     

去甲肾上腺素性心肌损害超微结构变化的研究

观察去甲肾上腺素性心肌损害超微结构的变化,并探讨其机理。方法：经兔耳静脉滴注超剂量去甲肾上腺素,持续９０ｍｉｎ,用药后２４ｈ处死动物取左室心肌电镜观察。结果：线粒体内出现ｅｍｙｅｌｉｎ样结构,或致密小体,肌原纤维收缩,核染色质变性。     

神经肽Y与去甲肾上腺素促心肌细胞肥大效应

目的 观察神经肽Y（neuropeptide Y，NPY）与去肾上腺素（NE）对心肌细胞生长、细胞内蛋白质合成的影响及二者的相互作用。方法 进行原代乳鼠心肌细胞培养，以^3H-亮氨酸掺入率的变化来反映NPY、NE对心肌细胞内蛋白质合成的影响。结果 （1）NPY组、NE组^3H-亮氨酸掺入率显著高于对照组（P〈0．01）；（2）NPY与NE合用可使心肌细胞^3H-亮氨酸掺入率进一步升高，与二者单独使用组相比差异有非常显著性（P〈0．01）。结论 （1）NPY、NE均可促进心肌细胞内蛋白质的合成；（2）NPY与NE在促进心肌细胞内蛋白质合成过程中有明显的协同效应。     

BAPTA对去甲肾上腺素刺激的大鼠心肌细胞蛋白合成及c-fos和β-MHC表达的影响

目的观察去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)刺激导致的心肌细胞肥大中,钙信号通路和心肌细胞蛋白合成以及c-fos和β-MHC表达之间的关系.方法去甲肾上腺素(10-5mol/L)刺激原代培养的心肌细胞,细胞内钙离子络合剂BAPTA(20 μmol/L)阻断钙信号通路,通过3H-leucine掺入测定蛋白质合成,RT-PCR测定c-fos及β-MHC mRNA的表达.结果NE刺激组的心肌细胞3H-leucine摄入量、c-fos及β-MHC的表达均显著高于正常对照组(P＜0.01),BAPTA阻断后明显降低(P＜0.01),单纯BAPTA阻断组的3H-leucine摄入量和β-MHC的表达低于正常对照组(P＜0.01),在正常对照组及单纯BAPTA阻断组未见c-fos明显表达.结论Ca2 信号通路不但参与NE刺激引起的心肌细胞蛋白合成增加、c-fos及β-MHC的过度表达,且在正常心肌细胞蛋白质合成及β-MHC表达中也起重要作用.     

脂多糖对结核病患者外周血单核细胞Toll样受体4表达及细胞内活性氧产生的影响

目的:探讨脂多糖(LPS)对结核病患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达及细胞内活性氧(ROS)产生的作用。方法:收集健康志愿者外周血标本和结核病患者外周血标本,各13例;取二者肝素抗凝血100μL,荧光探针DHR123或抗人anti-TLR4-PE荧光素标记抗体,全血染色后,流式细胞仪技术检测分析二者外周血单核细胞TLR4表达及细胞内ROS产生水平;再取二者抗凝血100μL于96孔培养板中,按如下分组进行处理:健康志愿者抗凝血为A组,结核病患者抗凝血为B组,结核病患者抗凝血+LPS 100 ng/mL为C组,每组6孔,培养24 h后,流式细胞仪技术检测单核细胞TLR4表达及细胞内ROS产生水平。结果:结核病患者外周血单核细胞TLR4阳性表达率为(17.6±3.6)%,较健康志愿者的(30.0±2.4)%显著降低(P<0.01);结核病患者外周血单核细胞细胞内ROS水平(74.8±11.4)较健康志愿者(109.6±13.2)显著降低(P<0.01)。LPS刺激24 h后,C组单核细胞胞内ROS水平(182.1±11.3)与B组(127.6±14.1)相比差异有统计学意义(P<0.01);C组单核细胞TLR4阳性表达率为(62.1±3.3)%,与B组的(47.6±4.7)%差异有统计学意义(P<0.01)。结论:LPS可促进结核病患者外周血单核细胞TLR4表达及细胞内ROS产生水平。     

内皮素-1促进去甲肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡

目的 探讨内皮素（ET－1）在去甲肾上腺素（NE）诱导的心肌细胞凋亡中的作用。方法 采用无血清培养新生大鼠心肌细胞模型，以免疫组化鉴定心肌细胞；以Hoechst33258与PI双重荧光染色观察ET－1与NE单独或联合作用时心肌细胞凋亡率的变化。结果 ①实验培养的新生大鼠心肌细胞的纯度达90％；②NE呈剂量依赖性诱导心肌细胞凋亡；ET－1对心肌细胞凋亡率无明显影响；ET-1NE联合作用可显著增加心肌细胞的凋亡率。结论 内皮素－1可能促进去甲肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡。     

NADPH氧化酶4在AGEs诱导内皮细胞活性氧生成中的作用研究

目的 晚期糖基化终末产物(AGEs)能诱发细胞内活性氧(ROS)生成增多而引起内皮细胞损伤,从而促进动脉粥样硬化的发生和发展,本组探讨AGEs刺激下内皮细胞ROS的生成及NADPH氧化酶4(Nox4)的作用.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),观察AGEs刺激下HUVECs细胞Nox4表达和ROS生成情况,应用RNA干扰技术沉默Nox4后,观察细胞内ROS的变化,分析Nox4的作用.结果 AGEs刺激后HUVECs细胞内ROS增加,而Nox4 siRNA转染后能显著降低内皮细胞ROS水平;Nox4 siRNA转染可以使基础水平的ROS减少45.9%,并对AGEs刺激后的ROS增加有明显的抑制作用.结论 Nox4是内皮细胞ROS生成过程中发挥调控作用的关键靶点,阻断Nox4能有效地抑制AGEs诱导的内皮细胞氧化损伤,进而可能阻遏动脉粥样硬化的发生和发展.     

葡萄糖在小鼠胚胎2-细胞晚期诱导活性氧增多抑制胚胎体外发育

目的:测定葡萄糖培养早期胚胎体外发育各阶段的活性氧(ROS)水平,探讨葡萄糖对小鼠早期胚胎体外发育产生阻滞作用的机制。方法:通过在改良的CZB (m-CZB) 培养液中添加不同浓度（分别为0、5、10、15、20、25、30 mmol/L）的葡萄糖培养小鼠早期胚胎,根据其体外发育的不同阶段,用分子探针氢化乙啶(hydroethidine,HE)和紫外分光光度法分别检测小鼠胚胎内、外ROS含量。结果:葡萄糖浓度达到15 mmol/L时囊胚发育率开始出现明显下降(P<0.05),相同浓度培养的小鼠胚胎在2-细胞晚期阶段胚胎内部超氧阴离子(O2-·)和培养液中过氧化氢(H2O2)含量均明显升高(P<0.05),而发育其他阶段胚胎内部的O2-·与对照组(0 mmol/L葡萄糖组)比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:高浓度葡萄糖可能在2-细胞晚期阶段诱导ROS增多,致使小鼠早期胚胎体外发育受阻。     

促卵泡激素通过活性氧途径调控卵巢癌细胞Nrf2蛋白的表达

目的 通过观察促卵泡激素(FSH)、活性氧(ROS)及其特异性抑制剂对卵巢癌细胞中红系衍生的核因子2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor-2,Nrf2)表达的影响,探讨FSH是否通过ROS途径调控卵巢癌细胞Nrf2的表达.方法 (1)采用免疫组织化学方法检测Nrf2在卵巢癌良恶性组织中的表达.(2)用不同浓度的FSH刺激卵巢癌Hey细胞不同时间,采用蛋白质印迹法检测细胞内Nrf2蛋白的表达.(3)采用ROS检测试剂盒检测80 mIU/ml的FSH刺激后不同时间Hey细胞内ROS的生成情况.(4)Hey细胞经不同浓度的H2O2刺激48 h后,或经ROS特异性抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后加入150 mmol/L的H2O2处理48 h,观察细胞内Nrf2的表达.(5)Hey细胞经不同浓度的NAC预处理1h,加入80 mIU/ml的FSH共孵育48 h,观察细胞内Nrf2表达的变化.结果 (1)10例良性卵巢囊肿组织中仅3例有Nrf2蛋白的弱阳性表达,而64例卵巢癌组织中42例(65.6％)有Nrf2蛋白的阳性表达,两组差异有统计学意义(P=0.042).(2)FSH可上调Hey细胞内Nrf2的表达,并呈一定的剂量、时间依赖效应.(3) FSH可促进Hey细胞ROS的产生.(4) H2O2可诱导Hey细胞Nrf2蛋白的表达,且其作用可被NAC阻断.(5)NAC可阻断FSH所诱导的Nrf2蛋白的表达.结论 FSH可促进卵巢癌Hey细胞中ROS产生,上调Nrf2蛋白表达,抑制ROS途径可阻断FSH诱导的Nrf2高表达.提示FSH可能通过ROS途径调控卵巢癌Nrf2的表达,进而促进肿瘤发生.     

活性氧介导预处理和后处理心肌保护效应研究的进展

活性氧(ROS)在心肌再灌注损伤机制中发挥重要作用.然而大量的研究证实,ROS为预处理和后处理心肌保护效应相关的氧化还原信号通路的重要组成部分.该文阐述了ROS的定义、来源和检测方法,并就ROS在预处理或后处理心肌保护信号通路中的作用及其对ROS的影响进行了综述.     

活性氧介导预处理和后处理心肌保护效应研究的进展

活性氧（ROS）在心肌再灌注损伤机制中发挥重要作用。然而大量的研究证实,ROS为预处理和后处理心肌保护效应相关的氧化还原信号通路的重要组成部分。该文阐述了ROS的定义、来源和检测方法,并就ROS在预处理或后处理心肌保护信号通路中的作用及其对ROS的影响进行了综述。     

焦化厂接苯工人血清活性氧水平检测

目的：了解苯接触工人血清活性氧（ROS）水平及其影响因素。方法：在苯作业工人工作地进行苯溶物（BSO）采样测定；用Fenton法对78名苯接触工人（精苯工50名，苯回收工28名）和46名对照者血清ROS水平进行测定。结果：精苯工车间及苯回收工车间BSO水平分别为383．5mg／m^3，43.9mg／m^3，均高于国家标准（40mg／m^3）。各时间段苯接触组工人血清ROS水平高于对照组，且随接触工龄增加而升高。结论：苯接触可致体内ROS水平升高，对从事接苯工人应进行定期体检和健康监护。     

线粒体蛋白在缺血性心脏病活性氧生成中的作用

【摘要】 缺血性心脏病（IHD）每年可造成超过700万人死亡,已成为导致死亡的重要原因。缺血性心脏病时冠状动脉堵塞会造成心肌细胞的不可逆损伤甚至死亡。作为调控心肌细胞能量及凋亡的重要细胞器,线粒体在缺血性心脏病中发挥着关键调节作用。缺血损伤可降低心肌ATP产量,导致能量供应不足及活性氧（ROS）过量产生。迄今为止,许多研究表明线粒体蛋白质如电子传递链（ETC）复合物、解偶联蛋白（UCP）、线粒体动态蛋白、线粒体外膜转位酶（Tom）复合物、线粒体通透性转换孔（MPTP）等可直接或间接地影响线粒体ROS的产生,从而决定线粒体功能障碍和心肌损害的程度。本文将对目前缺血性心脏病中线粒体功能蛋白与活性氧生成两者之间关系的相关研究结果作一综述。     

胆固醇对人脐静脉内皮细胞活性氧生成及细胞凋亡的影响

目的：探讨胆固醇对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）活性氧生成及细胞凋亡的影响。方法：分别用12．5,25,50,100 mg／L 的胆固醇与 HUVECs 作用24 h,用50 mg／L 胆固醇与 HUVECs 分别作用6,12,24,48 h,流式细胞术（FCM）检测细胞内活性氧（ROS）的生成量。分别用12．5,25,50,100 mg／L 的胆固醇以及50 mg／L 胆固醇＋N-乙酰半胱氨酸（NAC）与 HUVECs 孵育24 h,MTT 法测定细胞活力,FCM检测细胞凋亡率。结果：12．5,25,50,100 mg／L 胆固醇作用 HUVECs 24 h 后,均可诱导 HUVECs 中 ROS 升高,与对照组（不加胆固醇）比较差异有统计学意义（P ＜0．01）;50 mg／L 范围内组间差异明显（P ＜0．01）,呈剂量依赖性。50 mg／L 胆固醇作用 HUVECs 6,12,24,48 h 后细胞内 ROS 生成量均明显高于对照组（P ＜0．01）;24 h 内组间差异明显（P ＜0．01）,呈时间依赖性。MTT 结果显示,12．5,25,50,100 mg／L 胆固醇作用 HUVECs 24 h 后均能降低细胞的存活率,加入抗氧化剂 NAC 后,细胞存活率明显升高（P ＜0．01）。凋亡率分析结果表明,50,100 mg／L 胆固醇作用 HUVECs 24 h 后,凋亡率比对照组明显上升（P ＜0．01）,加入抗氧化剂 NAC 后凋亡率明显下降（P ＜0．01）。结论：胆固醇可通过诱导 HUVECs 中 ROS 的升高,促进 HUVECs 的凋亡。