碱性成纤维细胞生长因子对大鼠牵张性脊髓损伤后细胞凋亡及基因表达的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对牵张性脊髓损伤后细胞凋亡及相关基因表达的影响,探讨bFGF对脊髓损伤保护作用的分子机制。方法大鼠脊髓T13～L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位(CSEP)监测P1～N1波幅下降至术前波幅70%后,于损伤平面以下经蛛网膜下腔置细导管,治疗组分别于术后即刻1、2、3、4、8、12及24h经细导管注入bFGF溶液20μl(含bFGF20μg),对照组在相同时间注入等量生理盐水,然后于术后6h、1、4、7、14及21d处死取材,采用原位末端标记法(TUNEL)及免疫组织化学观察脊髓细胞凋亡及p53、bax、bcl2表达的变化情况,应用电生理观察大鼠的神经功能情况,并进行对比分析。结果术后4、7、14、21d,治疗组TUNEL法染色阳性细胞数明显低于对照组(P<0.01)。术后4、7、14、21d,治疗组p53、bax的阳性细胞数明显低于对照组,治疗组各时相点bcl2的阳性细胞数明显高于对照组,治疗组大鼠的神经功能恢复与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论bFGF能通过抑制p53、bax蛋白的表达及促进bcl2蛋白表达来抑制牵张性脊髓损伤后细胞凋亡,从而保护损伤的脊髓组织,这可能是bFGF对脊髓损伤具有的保护作用机制之一。     

尾静脉注射bFGF对大鼠脊髓损伤的早期影响

目的:比较不同途径应用碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对大鼠脊髓损伤早期水、钙、镁离子的影响,探讨静脉应用bFGF的可行性。方法:AllenWD(Weightdrop)技术,以10g×25cm致伤力造成大鼠T8急性脊髓不完全损伤,不同途径用药比较。术后2h、6h及24h切取伤区脊髓组织检测水、钙、镁离子变化。结果:受损伤脊髓组织水含量增多,钙离子水平增高,镁离子水平下降,而蛛网膜下腔应用bFGF及尾静脉注射bFGF均能明显改变上述变化。结论:脊髓损伤早期静脉应用bFGF同样对脊髓损伤具有保护作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对牵张性脊髓损伤后一氧化氮合酶活性的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对牵张性脊髓损伤后一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用。方法大鼠脊髓T13~L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位监测P1-N1波幅下降至术前波幅70%后,于损伤平面以下经蛛网膜下腔置细导管,治疗组分别于术后即刻0·5、1、2、3、4h经细导管注入bFGF溶液20μl(含bFGF20μg),对照组在相同时间注入等量生理盐水,采用放射强度测定法测定一氧化氮合酶(NOS)含量。结果正常组NOS活性为3·92±1·31,脊髓损伤后各时相点生理盐水组较正常组NOS活性显著增加,而bFGF治疗组NOS活性明显下降,与生理盐水组比较差异有显著性意义(P<0·01)。结论bFGF能够抑制脊髓损伤后NOS的活性,减轻脊髓继发性损害,从而保护脊髓组织。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠牵张性脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白表达的影响

研究表明，外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）通过机械泵入髓内或鞘内能减轻组织损伤，增加功能恢复。本实验通过牵张性脊髓损伤模型，动态观察碱性成纤维细胞生长因子对脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白表达的影响及脊髓功能恢复情况。     

外源性bFGF对兔下颌骨牵张成骨的影响

目的：研究局部应用外源性碱性成纤维细胞生长因子对兔下颌骨牵张成骨的影响。方法：成年白兔30只,随机分Ⅰ、Ⅱ两组（n=15）,用自制的牵张器延长右侧下颌骨3 mm。牵张部位Ⅰ组给外源性bFGF（0.5ml/天×7天,420U/ml）作为实验组,Ⅱ组给等量生理盐水作对照组,牵张结束后不同时期行X线、定量CT、组织学检查。结果：所有动物右侧下颌骨被成功延长,组织学示：Ⅰ组动物新骨生成的速度和数量优于Ⅱ组;定量CT示：固定早期（2周、4周）Ⅰ组骨密度值明显高于Ⅱ组（P＆lt;0.05）。结论：外源性bFGF早期有促进兔下颌牵张成骨的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养胚胎大鼠脊髓神经元促生长活性的研究

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth facfor,bFGF)对体外培养脊髓神经元的作用。方法：取E14大鼠脊髓神经组织,进行体外原代培养,分别加和不同浓度的bFGF。在相差显微镜下观察细胞生长发育情况,并测定其细胞内琥珀酸脱氢酶的活性。实验结果用t检验分析。结果：bFGF处理组神经元密度明显高于对照组,神经元胞体大而饱满,突起较长。细胞内琥珀酸脱氢酶活性较高,培养20d后神经元存活的数量也明显高于对照组。结论：bFGF能促进脊髓神经元在体外培养早期的存活,增加神经元的胞体直径和突起长度,增强神经元细胞内琥珀酸脱氢酶的活性,并能延缓体外培养脊髓神经元的衰老。     

碱性成纤维细胞生长因子对脊髓损伤早期保护作用的实验研究

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂ Ｆ Ｇ Ｆ）对脊髓损伤的早期保护作用。方法　选３４ 只 Ｓ Ｄ 大鼠,随机分为正常组、对照组和治疗组,采用 Ａｌｌｅｎ 氏技术,以１０ ｇ×２．５ ｃｍ 致伤力造成大鼠 Ｔ８ 急性脊髓损伤,并于损伤平面以下蛛网膜下腔置入细塑料管,治疗组给予ｂ Ｆ Ｇ Ｆ治疗,对照组同时注入生理盐水。术后切取损伤区脊髓组织进行形态学观察和生化指标测定。结果受损伤段脊髓组织水含量增多,钙离子水平升高,镁离子水平下降,白质内髓鞘结构紊乱,囊性变严重,而ｂ Ｆ Ｇ Ｆ可明显改变上述变化。结论　ｂ Ｆ Ｇ Ｆ对脊髓损伤早期的继发性损害有保护作用。     

bFGF保护脊髓组织、促进神经再生的实验研究

目的　探讨应用外源性碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对脊髓损伤的保护作用以及促进脊髓神经再生的影响。方法　利用Allen氏WD (Weightdrop ,WD)技术 ,以 10 g× 2 5cm致伤力造成SD大白鼠T8脊髓损伤模型 ,并于损伤平面以下蛛网膜下腔置细塑料导管。治疗组分别于术后即刻、 1、 2、 3、 4、 8、 12、 2 4及 48h经导管注入bFGF溶液 2 0 μl (含bFGF10 0 μ) ,以后每周经导管注入 2 0 μlbFGF ;对照组则在同时间注入等量生理盐水 ,术后取伤区脊髓组织进行形态学观察及特殊染色 ,观察神经纤维再生情况。结果　伤区白质内髓鞘结构紊乱 ,囊性变严重 ,应用bFGF可明显改善 ;Gless染色发现bFGF治疗组神经纤维生长情况明显优于生理盐水对照组 ,Fast-blue染色发现bFGF治疗组脊髓变性较轻 ,经统计学分析两组差异有显著性意义 (P <0 0 1)。结论　脊髓损伤后应用外源性bFGF可以保护脊髓神经组织 ,并且对神经纤维有明显的促进作用。     

bFGF长循环脂质体对大鼠脊髓牵张性损伤影响的蛋白质组学研究

目的 从蛋白质组学方面探讨bFGF长循环脂质体对大鼠脊髓牵张性损伤神经保护作用的可能机制。方法 取20只SD大鼠随机分为脊髓牵张性损伤模型组(A组)和bFGF长循环脂质体治疗组(B组),每组10只。术后3周取材行脊髓组织蛋白的提取制备及定量;应用双向凝胶电泳对两组脊髓组织样品进行分离,建立差异表达图谱,通过凝胶成像分析和人工比对,分别确定差异蛋白点,采用超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱(nano ultra-high performance liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry,NanoUPLC-ESI-MS/MS)技术鉴定差异蛋白,检索数据库,对差异蛋白分类。结果 两组间找到完全相同的差异蛋白点,B组与A组相比,得到差异蛋白点10个,其中6个下调,4个上调。采用NanoUPLC-ESI-MS/MS技术鉴定了26个差异蛋白点,共鉴定出18种有意义的蛋白;其中与凋亡相关的蛋白4种,神经传导和信号转导相关的蛋白3种,参与代谢的蛋白7种,1种功能不明,未知蛋白3种。结论bFGF长循环脂质体影响了大鼠牵张性脊髓损伤组织的蛋白质组表达,其对损伤脊髓的保护及修复作用可能是通过神经信号转导、调节细胞凋亡及细胞代谢等途径实现。     

牵张性脊髓损伤脊髓SCEP监护作用的实验研究

目的：探讨脊髓皮层诱发电位对牵张性脊髓损伤的监护作用。方法：选用４０只健康大白兔，随机分成对照组（Ａ组）、体感皮层诱发电位（ＳＣＥＰ）波幅下降３０％组（Ｂ组）、ＳＣＥＰ波幅下降５０％５ｍｉｎ组（Ｃ组）和１０ｍｉｎ组（Ｄ组）。通过对脊髓ＳＣＥＰ监测、动物脊髓功能评定、组织形态学观察以及脊髓微血管铸型扫描电镜观察来研究牵张性脊髓损伤。结果：随着牵开负荷增大和作用时间的延长，脊髓微血管发生充盈缺损、痉挛直至破裂出血；Ｃ组及Ｄ组脊髓功能下降，与Ａ组相比有显著性差异。结论：ＳＣＥＰ波幅变化能较客观地反映脊髓功能状况，波幅下降５０％持续１０ｍｉｎ脊髓将出现不可逆损害     

磁刺激和碱性成纤维细胞生长因子对脊髓损伤早期的保护作用

目的探讨脊髓损伤后，应用磁刺激和外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对损伤脊髓组织早期的保护作用。方法实验利用Allen WD(weight drop)技术，以致伤力(砝码质量10g，下落高度2．5cm)制成wistar大鼠T8脊髓损伤模型，治疗组分别于术后即刻、1h、2h、4h、24h分别予0．5HZ、70％输出强度的磁刺激，同时经蛛网膜下腔导管注入20ul bFGF，对照组不做处理。术后2h、6h、24h取治疗组、对照组动物损伤区脊髓组织作以下检测：用干湿法测水含量；用原子吸收光谱法测钙、镁离子含量；伤后5d取损伤脊髓组织，电镜观察脊髓结构。结果损伤区脊髓组织水含量增多，钙离子水平升高，镁离子水平下降，白质内髓鞘结构紊乱，囊性变严重；而应用磁刺激和bFGF可改善上述变化。结论脊髓损伤后应用磁刺激和bFGF可减轻脊髓损伤后的离子失衡，从而对继发性脊髓损伤具有保护作用。     

大鼠牵张性脊髓损伤后细胞凋亡及相关基因表达的实验研究

目的观察大鼠牵张性脊髓损伤后细胞凋亡现象,检测脊髓损伤后凋亡相关基因的表达。方法大鼠脊髓T13～L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位(CSEP)监测P1N1波幅下降至术前波幅70%后,分别于术后30min、6h、1、4、7、14、21d处死大鼠,取材(n=4)。应用流式细胞仪、原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术观察脊髓细胞凋亡情况,用免疫组化检测p53、bax和bcl2的表达。结果流式细胞仪及TUNEL法检测显示,损伤组术后6h凋亡细胞开始增多,术后7d细胞凋亡率达高峰,随后开始回落,持续21d,与空白对照组及椎板切除组比较,差异有显著性意义(P<005,001)。TUNEL法染色显示,白质中出现大量胶质细胞凋亡。免疫组化染色显示损伤组术后6h开始,p53、bax和bcl2阳性表达开始增多,p53阳性细胞数术后4d达高峰,bax和bcl2术后7d达高峰,损伤组各时相点的阳性表达与空白对照组与椎板切除组比较差异有显著性意义(P<005,001)。结论牵张性脊髓损伤后存在细胞凋亡现象,从形态上看包括神经元和胶质细胞凋亡,细胞凋亡是牵张性脊髓损伤继发损害中细胞死亡的一种重要形式,也是继发损伤期的重要病理变化。凋亡相关基因p53、bax大量表达,可能在脊髓细胞凋亡过程中起重要作用。     

牵张性脊髓损伤后神经细胞中Caspase-3表达及其作用的实验研究

目的:观察大鼠牵张性脊髓损伤后脊髓神经细胞中半胱氨酸天冬氨酶3(Caspase-3)的表达及其在神经细胞凋亡中的作用。方法:大鼠脊髓T13~L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位监测P1-N1波幅下降至术前波幅70%后维持10m in,分别于术后6h、1、4、7、14、21d处死取材。采用流式细胞仪、原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL法)、免疫组织化学检测等方法观察大鼠脊髓神经细胞中Caspase-3表达变化及神经细胞凋亡情况,测定Caspase-3活性。结果:脊髓损伤后神经细胞凋亡率、TUNEL阳性细胞数、Caspase-3免疫组织化学阳性表达及Caspase-3活性测定均较空白对照组及椎板切除组显著升高(P<0.05或0.01),前三项指标改变趋势大致相同,均为术后7d达高峰,而Caspase-3活性则术后4d达高峰。结论:大鼠牵张性脊髓损伤后神经细胞中Caspase-3表达增高、Caspase-3活性增强,是检测神经细胞凋亡的早期生物学指标,对认识脊髓损伤机制具有一定的意义。     

一种新型脊柱撑开器的研制及脊髓牵张性损伤动物模型的建立

目的研制一种新型脊柱撑开器并以此建立大鼠脊髓牵张性损伤模型,为脊髓牵张性损伤机制及治疗研究提供可靠的动物模型。方法在既往研究基础上制备一种新型脊柱撑开器。取成年SD大鼠60只,体重250～300 g,随机分为A、B、C、D、E 5组,每组12只。暴露T12～L3脊柱后方结构,咬除T13～L2棘突椎板,显露脊髓。A组仅安放脊柱撑开器,不撑开。B、C、D、E组大鼠,将脊柱撑开器固定于T12～L3椎体横突上,同时行体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)监测,其中B、C组脊髓牵张SEP P1下降50%后分别持续5、10 min,D、E组脊髓牵张SEP P1下降70%后分别持续5、10 min,制备T13～L2脊髓牵张性损伤模型。术后1、7 d各组取6只大鼠采用改良Gale联合评分(ICBS)标准进行行为学评分,然后处死大鼠取脊髓行大体观察及HE、尼氏染色,并计数神经元。结果术后1、7 d,A组ICBS评分均为0分,其余各组与A组比较差异均有统计学意义(P<0.05);D、E组ICBS评分显著高于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后1 d B、C、D、E组脊髓表面见不同程度水肿、充血,正常结构形态破坏;7 d时脊髓表面无光泽,与周围组织有不同程度粘连,在牵拉中心段可见硬膜凹陷,均以E组最明显。术后1、7 d B、C、D、E组部分神经元坏死、溶解,尼氏体溶解或消失;7 d时神经元数量随损伤程度加重而逐渐减少,与A组比较差异均有统计学意义(P<0.05),且B、C、D、E组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 新型脊柱撑开器成功制备了不同损伤程度的大鼠脊髓牵张性损伤模型,脊髓牵张SEP P1下降70%持续10 min更符合脊髓牵张性损伤实验研究的需要。     

银杏叶提取物对实验性脊髓损伤后诱导型一氧化氮合成酶表达的影响

[目的]观察提取物(EGb)对脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响.[方法]SD雄性大鼠(SPF级)30只,体重250～300 g,随机分成2组,对照组(生理盐水组)和EGb组,各分为5个时相点,每个时想点3只大鼠,均采用改良的Allen打击法制成中度急性脊髓损伤模型,术后EGb组给予舒血宁0.75 ml/(kg·d),对照组给予等量生理盐水.分别于术后1、3、5、7、14 d处死动物取材.[结果]显微镜下观察,阳性细胞胞浆棕黄色染色,对照组和治疗组均发现iNOS阳性细胞的表达,均在5 d达到高峰,但EGb治疗组细胞阳性率显著低于对照组(P＜0.05)[结论]EGb能够抑制iNOS的表达;抑制iNOS的表达可能是银杏叶缓解急性脊髓损伤的诸多机制之一.     

胚胎脊髓移植与甲基强的松龙联合应用治疗脊髓损伤的实验研究

目的 :探讨胚胎脊髓移植 (FST)与大剂量甲基强的松龙 (MP)联合应用治疗脊髓损伤的效果。方法 :选用SD大鼠 5 0只 ,随机分为A、B、C、D、E 5组 ,前 4组行T12脊髓半切损伤后为治疗组。A组行大剂量MP与FST联合应用 ;B组行大剂量MP治疗 ;C组为FST治疗 ;D组为单纯半切损伤 ;E组为空白对照。治疗后 2 4h及 8周时行脊髓体感诱发电位检查 ,观察行为变化 ,并对各组损伤区脊髓横断面神经纤维数进行统计学分析。结果 :A组与B、C、D组之间脊髓体感诱发电位及损伤区神经纤维计数均存在明显差异 (P <0 0 5 ) ,行为学无明显改变。结论 :大剂量甲基强的松龙与胚胎脊髓移植联合应用治疗脊髓损伤可起协同促进损伤脊髓修复的作用。     

The effect of duration of compression on lipid peroxidation after experimental spinal cord injury

The present study was performed to evaluate the effect of duration of acute spinal cord compression on tissue lipid peroxidation in rats. A clip compression method (1) was used to produce acute spinal cord injury. Rats were divided into 3 groups, each consisting of 10. At 1 hour after trauma all rats were sacrificed, and MDA content of the injured spinal cord segment was measured. The tissue MDA contents were 3.922 μmolMDA/gww in group 1 (control), 10.192 μmol MDA/gww in group 2 (30 seconds compression), and 12.147 μmolMDA/gww in group 3 (60 seconds compression). These results demonstrate that the length of duration of compression significantly enhances lipid peroxidation. Our study supported the view that persisting compression may cause progression of secondary mechanisms which may irreversibly eliminate any potential for recovery.     

Effect of basic fibroblast growth factor on the expression of glial fibrillary acidic protein after tractive spinal cord injury in rats

Basicfibroblastgrowthfactor(bFGF) isanewneurotrophicfactor(NTF)andhasbeencloselystudiedinrecentyears.1 Itsneurotrophiceffectsincludepromotioninneuronalregenerationandsurvival. StudieshavefoundthatexogenousbFGFpumpedintothemarroworthesheathcandecreasetissu…