特发性血小板减少性紫癜患者T细胞周期和促凋亡蛋白Caspase-3表达的变化

目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血T细胞的细胞周期及其促凋亡蛋白Caspase-3的表达在发病机制中的作用。方法:用流式细胞仪检测38例ITP患者和20例正常人的T细胞的细胞周期的分布比例及30例ITP患者和20例正常人的T细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达水平。结果:ITP患者外周血S期和S+G2/M期的T淋巴细胞比例显著高于对照组(P<0.05);Go/G1的T淋巴细胞比例显著低于对照组(P<0.05);T淋巴细胞Caspase-3的表达率明显低于对照组(P<0.05)。结论:在ITP患者中存在T淋巴细胞过度增殖,细胞以S,G2期为主,同时T淋巴细胞存在凋亡减少,这可能与ITP的发病有关。     

过量胸苷对细胞周期素表达的影响

目的 :探讨过量胸苷干扰细胞周期素细胞周期时相表达的特点 ,为进一步研究细胞周期转化以及细胞周期素与DNA合成的关系奠定基础 .方法 :应用二次过量胸苷阻断法进行新生猪肾小管上皮细胞体外同步化培养 ,采用流式细胞术进行鉴定 ;然后分别进行G1/S,S及G2 期细胞CyclinA ,B ,D1mAb免疫细胞化学染色并进行图像分析 .结果 :二次过量胸苷阻断法可获取G1/S界面细胞为 (99 5± 0 8) % ,S期细胞为(90 5± 0 7) % ,G2 期细胞为 (93 5± 2 2 ) % ,G2 /G1=2 2 0 .G1/S ,S,G2 细胞CyclinA表达特点为G2 期大于G1/S和S期 (目标灰度值 :13 6 3± 2 7,14 5 0± 1 4 ,14 7 5± 1 8,P <0 0 1) ,CyclinB表达特点为G1/S期小于S和G2 期 (目标灰度值 :15 5 6± 1 6,14 8 8± 2 2 ,13 6 6± 2 6,P <0 0 1) ,CyclinD1的表达特点为G2期大于G1/S期 (目标灰度值 :13 2 .6± 1.9,14 6.7± 1.3 ,P <0 .0 1) ,S期小于G1/S期 (目标灰度值 :15 8 8± 1 1,14 6 7± 1 3 ,P<0 0 5 ) .结论 :二次过量胸苷阻断细胞DNA合成可能与细胞周期素表达的改变相关     

从细胞阻滞模型来看流式细胞术中细胞周期分析的误区

目的:探讨流式细胞术中细胞周期常规分析方法的误区和潜在的合理分析方法。方法:设立空白对照,观察MOLT-4细胞经0.1μmol·L-1喜树碱诱导细胞周期阻滞7h后细胞周期变化情况,并从常规DNA直方图分析法(方法一)和本实验意外发现的方法(方法二)进行细胞周期分析,并评价两种方法获得的结果。结果:方法一分析的细胞周期分布结果G0/G1期、S期和G2/M期分别为(65.42±4.73)%、(25.01±2.58)%、(9.57±1.96)%,方法二分析结果分别为(31.51±2.13)%、(59.32±5.92)%、(9.17±1.61)%。两种分析方法获得的结果存在显著差异(n=8,P<0.01)。结论:流式细胞术常规细胞周期分析方法存在严重的误区。一种新的基于细胞周期特异性标志物的定量技术或形态学方法应用于细胞周期的分析较合理。     

干扰AURKA基因表达对人骨肉瘤细胞系U2-OS细胞增殖与细胞周期的影响

目的:探讨AURKA基因表达下调对骨肉瘤细胞增殖和细胞周期分布的影响?方法:脂质体瞬时转染法介导AURKA 小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)处理骨肉瘤U2-OS细胞, 采用实时荧光定量PCR及 Western blot方法检测转染前后AURKA mRNA和蛋白表达,CCK8实验检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞周期分布变化,Western blot检测周期相关蛋白的表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)细胞增殖实验检测细胞增殖情况?结果:AURKA siRNA作用U2-OS细胞后, AURKA mRNA和蛋白的表达水平较正常对照组及阴性对照组显著降低,且差异有统计学意义 (P < 0.05),两对照组间AURKA表达无明显差异;下调AURKA表达后,细胞活力降低,且作用72 h后抑制率最高,约为(36.63 ± 2.38)%;细胞周期中S期细胞比例下降,G2/M期细胞比例增加,与正常对照组及阴性对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05),提示存在G2/M期阻滞,S期细胞增殖率下降(P < 0.05),周期相关蛋白D1(Cyclin D1)表达水平下降(P < 0.05),周期相关蛋白B1(Cyclin B1)表达水平明显增加(P < 0.05)?结论:下调AURKA表达可抑制骨肉瘤细胞U2-OS的增殖, 同时导致细胞阻滞于G2/M期?     

丙型肝炎病毒NS4B对肝细胞增殖和细胞周期的影响

摘 要：目的 研究丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝细胞细胞增殖和细胞周期的影响,探讨HCV-NS4B在HCV致病中的可能机制。方法 利用脂质体介导将空白载体PCXN2及重组质粒PCXN2-NS4B转染入 LO2肝细胞,G 418筛选。RT-PCR鉴定质粒成功转染入肝细胞内。MTT法绘制生长曲线,观察NS4B对肝细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期的情况;免疫组化方法观察PCNA、cyclinD1的表达情况。结果 NS4B转染入LO2有表达;绘制生长曲线示NS4B可促进肝细胞生长;细胞周期检测显示转染空载体PCXN2的细胞57.73％±19.73％进入G0/G1期、29.25％±6.95％进入S期、6.80％±4.67％进入G2/M期;转染PCXN2-NS4B的细胞46.89％±5.60％进入G0/G1期、36.31％±4.36％进入S期、16.80％±6.79％进入G2/M期;转染NS4B的细胞PCNA、cyclinD1表达率较转染空白载体组高,两组比较差异有显著性（P<0.01）。结论 HCV-NS4B可能通过调节某些基因转录与表达,促进DNA合成,干扰肝细胞周期,促进肝细胞增殖。     

去甲氧柔红霉素对耐药白血病细胞中Chk1磷酸化水平的影响

目的:观察去甲氧柔红霉素(IDA)对耐药急性白血病细胞中细胞周期检测点激酶1(Chk1)磷酸化水平的影响,探讨Chk1信号通路在去甲氧柔红霉素抗瘤作用中的机制。方法:MTT法检测柔红霉素(DNR)和IDA的IC50,耐药白血病细胞分别与DNR和IDA的IC50共孵育,Western-blot检测细胞内Chk1磷酸化水平(P-Chk1)的表达,流式细胞术检测其细胞周期及细胞凋亡率。结果:DNR的IC50约为0.40μg/ml,IDA约为0.12μg/ml,以此浓度分别与AML细胞共孵育,6h后两组间S期、G2/M期细胞的百分率差异无显著性;24h后,DNR组S期和G2/M期细胞百分率分别为(3.56±1.17)%、(53.66±1.75)%,IDA组为(41.42±1.17)%、(28.45±3.72)%,差异有显著性;P-Chk1在DNR组为1.78±1.10,IDA组为0.56±1.25,两者比较差异有显著性;24h后,DNR组和IDA组的细胞凋亡率分别为(24.53±1.30)%、(66.47±2.61)%,IDA组明显高于DNR组,差异有显著性。结论:IDA可能通过下调P-Chk1水平延迟耐药白血病细胞的S期进程,从而增加自身的药物敏感性。     

p75NTR对乳腺癌耐药细胞MDA-MB-231/ADR耐药及细胞周期的影响

目的 探讨神经营养因子受体(p75NTR)对乳腺癌耐药细胞MDA-MB-231/ADR化疗耐药性及细胞周期的影响.方法 采用CCK-8法检测转染p75NTR及p75NTR-siRNA后乳腺癌耐药细胞系MDA-MB-231/ADR对耐药的影响;FCM检测转染p75NTR及p75NTR-siRNA的乳腺癌及耐药细胞的细胞周期分布及细胞凋亡的影响.结果 过表达p75NTR可有效增强MDA-MB-231/ADR细胞对ADM、GEM和OXA的耐药性(P<0.05);抑制p75NTR的表达可抑制MDA-MB-231/ADR细胞对ADM、GEM和OXA的耐药性(P<0.05).转染pcD-NA3.1-p75NTR后,MDA-MB-231/ADR-p75NTR细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,G0/G1期细胞增至(61.12±1.89)%,S期细胞减至(32.76±0.23)%,凋亡率减至(16.83±1.29)%,差异有统计学意义(P<0.05);转染p75NTR-siRNA后MDA-MB-231/ADR-p75NTRsi1细胞的细胞周期于G0/G1期减至(39.26±1.31)%,S期细胞增至(52.88±1.74)%,凋亡率增至(21.49±1.41)%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 过表达p75NTR能够使乳腺癌耐药细胞MDA-MB-231/ADR细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞存活,抑制其凋亡,降低MDA-MB-231/ADR细胞对化疗药物的敏感性而促进其多药耐药性.     

丙戊酸钠对慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖 和凋亡的影响

 【目的】 探讨丙戊酸钠(VPA)对慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)增殖的影响及其可能机制?【方法】 利用CCK-8法检测药物对细胞生长的影响;利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞凋亡和细胞周期情况?【结果】 VPA对K562细胞生长具有浓度-时间依赖性抑制作用;同时引起细胞凋亡增加(11.47% ± 0.25%),与正常对照组(4.77% ± 0.40%)比差异有统计学意义(P < 0.05);G0/G1期细胞增多(82.30% ± 9.41%),S期细胞减少(12.88% ± 6.99%),细胞被阻滞在在G0/G1期(P < 0.05)?【结论】 VPA能够阻滞K562细胞于G0/G1期,最终抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡?     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及凋亡的影响

目的 研究甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 MTT法测定甜菜碱对HepG2的细胞毒作用;PI染色,流式细胞术观察甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响.结果 甜菜碱对HepG2细胞的IC50为0.5mol/L;甜菜碱使HepG2细胞G2/M期比例下降;甜菜碱作用于HepG2细胞24h后,3个不同剂量组(0.1、0.2、0.4mol/L)诱导细胞凋亡率分别为(7.5±0.9)%、(11.5±1.1)%、(33.9±1.2)%,48h后凋亡率为(13.4±1.9)%、(20.9±1.4)%、(67.8±1.8)%.结论 甜菜碱可抑制人肝癌细胞HepG2的生长,阻滞细胞进入G2/M期进而诱导细胞凋亡.     

大肠癌细胞周期状态与临床病理因素及细胞周期蛋白D1水平的相关性研究

目的研究分析大肠癌细胞周期状态与临床病理因素及细胞周期蛋白D1水平的相关性,总结其临床意义。方法选取我院2009年4月至2011年4月46例大肠癌患者的临床标本,分别采用流式细胞仪对其S、G0/G1、G2/M的细胞周期进行测定,同时检测每例标本细胞周期蛋白(CyclinA、B1、D1、E)的表达水平,通过分析其临床病理因素,进行相关性的统计学分析。结果癌细胞S期的分布比例在2.02%-54.24%,G0/G1期的分布比例在27.95-92.80%、G2/M期的分布比例在1.6%-62.47%,其周期分布情况比较差异明显(P0.05),具有统计学意义。结论大肠癌细胞的周期分布与患者的临床病理各因素间无明显关系,肿瘤细胞的周期蛋白D1水平的调控机制有别于体外培养的肿瘤细胞系。     

幽门螺杆菌在特发性血小板减少性紫癜中的临床意义

目的：研究幽门螺杆菌在特发性血小板减少性紫癜中的临床意义。方法：选择60例特发性血小板减少性紫癜患者为治疗组,选择同时期健康体检者60例为对照组,检测两组的Hp感染率和血小板计数。结果：对照组Hp阳性率为26．7％,观察组治疗后Hp阳性率为33．3％,显著低于观察组治疗前的65．0％;对照组的血小板为（179．4±33．1）×10^9,观察组治疗后的血小板为（136．5±20．4）×10^9,显著高于观察组治疗前的（20．8±9．7）×10^9,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：ITP是一种免疫异常的血小板减少症,其发病与Hp感染关系密切,对初诊的ITP患者,建议在常规治疗基础上,进行正规抗Hp治疗。     

异时相Cyclin B1/CDK1表达有助于正常在体细胞进入细胞分裂周期

目的 研究通常表达于G2/M期的Cyclin B1在G_1期异时相表达的作用机制及意义.方法 用丝裂原刺激因子(PHA)刺激人外周血淋巴细胞使之进入细胞周期,分别在刺激后0、36、48、60 h收集细胞,并分成两部分,一部分用流式Cyclins/DNA多参数技术分析,一部分用Post-sorting Western blot分析.结果 处于G_0期的淋巴细胞经PHA刺激进入细胞周期后,可以观察到Cyclin B1在G_1期有异时相表达,相应的CDK1亦有异时相表达.结论 异时相Cyclin B1/CDK1可能有助于正常在体细胞进入细胞分裂周期.     

当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞周期蛋白D2表达的影响

目的:探讨当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血(AA)小鼠骨髓有核细胞增殖周期及其细胞周期蛋白D2表达的影响。方法:雌性Balb/c小鼠,随机分为3组:①正常对照组:未经特殊处理。②模型对照组:经60Co6Gyγ-射线亚致死量全身照射,4 h内由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺、淋巴结混合细胞,制成AA模型,于制模当天即给予腹腔注射无菌生理盐水,每天10 ml.kg-1,连续12 d。③当归注射液组:每天予当归注射液10 ml.kg-1,腹腔注射,连续12 d。于第12 d每只小鼠称重后,采集尾静脉血测外周血白细胞计数,后断颈处死小鼠,取出双侧尺骨及股骨,冲出骨髓单个核细胞,计数。并行组织学切片,粒单系祖细胞培养及骨髓有核细胞G0/G1期细胞百分率及细胞周期蛋白D2的检测。结果:与正常对照组比较,模型对照组造血细胞明显减少,粒单系祖细胞计数明显减低,骨髓有核细胞G0/G1期细胞百分率明显增加,而细胞周期蛋白D2表达水平明显降低,当归注射液组能增加骨髓单个核细胞计数及粒单系祖细胞计数,明显降低G0/G1期细胞百分率,提高细胞周期蛋白D2的表达水平。结论:当归注射液可能通过刺激细胞周期蛋白D2的表达促进造血细胞的增殖。     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响

目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。     

抑癌基因PTEN对人原代子宫内膜细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:通过人原代子宫内膜细胞实验研究第10号染色体缺失的磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)对子宫内膜异位症发生?发展的作用和意义?方法:利用慢病毒载体分别在人原代子宫内膜细胞中过表达和静默PTEN基因的表达;流式细胞仪检测慢病毒感染之后不同PTEN表达组的细胞周期及凋亡变化情况?结果:PTEN过表达组人原代子宫内膜细胞G0/G1期比例增加,与对照组比较差异具有统计学意义,G2/M期比例逐渐减少,细胞周期阻滞在G0/G1期;空白对照组?PTEN过表达组?PTEN静默组的细胞凋亡率分别是(11.70 ± 0.03)%?(15.80 ± 0.14)%?(5.33 ± 0.08)%?结论:PTEN可显著增加人原代子宫内膜细胞凋亡,抑制细胞周期,对子宫内膜异位症的发生发展有一定抑制作用?     

热化放三联因子对Hela细胞杀伤效应的实验研究

本文以体外培养的宫颈癌Hela细胞系为模型,以细胞克隆形成实验及细胞周期相分布测定为指标,观察了高温、顺铂及放射线对细胞的杀伤效应。结果表明:①从细胞克隆形成实验所得存活分数(SF)证明热化或热放二联因子较热、化、放任何单一因子对细胞的杀伤效应大,且热化优于热放。热化放三联因子应用时,杀伤作用更大。②从流式细胞仪测定的细胞周期时相分布表明,Hela细胞周期时相对热化因子较敏感,剂量小时,S+G_2/M增殖期细胞增加,呈激惹反应;剂量大时,S+G_2/M增殖期细胞减少,呈抑制反应。热放组于24小时无明显改变,96小时S+G_2/M增殖期细胞呈轻度增加现象。     

Fas诱导MML-1凋亡时活化caspase-3表达与细胞周期的关系

目的研究Fas诱导的B淋巴细胞瘤细胞株MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3表达与细胞周期的关系。方法抗Fas抗体孵育MML-1不同时间以诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率并验证MML-1对Fas诱导凋亡的敏感性。采用PI—Triton X和FITC—active caspase-3双染色分析经Fas诱导凋亡的MML—1内活化caspase-3的表达。以细胞周期蛋白cyclin A、B1、E标记Fas诱导凋亡的处于不同增殖周期MML-1（S、G2／M和G1期细胞）,流式细胞术检测细胞内活化caspase-3的表达。结果Fas诱导6h后,MML-1凋亡率达到56％。Fas诱导4h后,活化caspase-3在G1期细胞内表达显著升高,仅有少量S期和G,／M期细胞表达活化caspase-3。Cyclin A、B1阴性而cyclinE阳性MML-1表达活化caspase-3。结论Fas诱导MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3的表达与细胞周期有关。G1后期和S早期的MML-1最先表达活化caspase-3,且对Fas诱导凋亡的敏感性最高。