姜黄素对人骨肉瘤细胞的生长抑制及对MAPK基因的调控作用研究

目的:研究姜黄素人成骨肉瘤细胞MG-63的生长抑制作用,并检测对骨肉瘤细胞中MAPK基因表达的调控作用,初步明确姜黄素对骨肉瘤细胞的作用机制。方法:以人骨肉瘤细胞株MG-63为研究对象,采用不同剂量姜黄素处理。MTT法检测5,10,15,20,25,30,35,40,50μmol/L姜黄素作用24,48,72 h对细胞的毒性作用;Transwell小室侵袭实验法检测5,10,15μmol/L姜黄素对细胞的侵袭能力,黏附实验法检测对细胞的黏附能力;Western blot法检测5,10,15μmol/L姜黄素作用后MAPK蛋白表达水平的影响,RT-PCR法检测对细胞中MAPK基因m RNA转录水平的影响。结果:姜黄素浓度>15μmol/L,作用时间>24 h时,对细胞的生长抑制呈时间和剂量依懒性(P<0.001),当姜黄素浓度≤15μmol/L,作用时间为24 h时,对细胞无明显毒性作用,细胞存活率>85%;细胞侵袭能力和黏附能力随着姜黄素浓度的增加而逐渐降低,以15μmol/L姜黄素浓度处理效果最明显(P<0.05);姜黄素可明显抑制MAPK基因m RNA转录水平,其抑制作用与剂量呈高度依懒性(P<0.05)。结论:姜黄素可通过抑制MAPK信号通路的活化及此信号通路靶基因MAPK的表达降低人骨肉瘤细胞株MG-63的侵袭性。     

槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及诱导自噬、抑制侵袭的作用

目的 探讨槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及诱导自噬、抑制侵袭的作用。方法 取人骨肉瘤MG-63细胞,分为二甲基亚砜组和槲皮素组,分别给予0.1%二甲基亚砜、200μg/mL槲皮素处理。培养48 h后,使用流式细胞仪检测2组细胞凋亡情况,运用腺病毒双荧光载体mRFP-GFP-LC3转染技术检测2组人骨肉瘤MG-63细胞自噬情况。另取人骨肉瘤MG-63细胞,设空白对照组,采用Transwell侵袭小室试验检测不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)槲皮素处理后的细胞侵袭能力。结果 与二甲基亚砜组比较,槲皮素组MG-63细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均明显增高(P均<0.05),MG-63活细胞率明显降低(P<0.05),MG-63细胞自噬水平明显上调(P<0.05)。25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L槲皮素处理后的穿膜细胞数分别为空白对照组的(86.48±5.02)%,(70.02±4.93)%和(42.87±4.62)%,呈浓度依赖性降低,两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 槲皮素可诱导骨肉瘤MG-...     

鸦胆子苦醇通过CC趋化因子配体2-C-C趋化因子受体2信号通路对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:探讨鸦胆子苦醇(BRU)调节CC趋化因子配体2(CCL2)-C-C趋化因子受体2(CCR2)信号通路对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:将骨肉瘤细胞系MG-63分为MG-63组(未处理的MG-63细胞)、L-BRU组(25 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞)、M-BRU组(50 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞)、H-BRU组(75 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞)、GW0742组(1μmol/L CCL2-CCR2信号通路激活剂GW0742处理MG-63细胞)、H-BRU+GW0742组(1μmol/L GW0742和75 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞),MTT法检测鸦胆子苦醇对正常人成骨细胞系hFOB1.19细胞的毒性，CCK8法检测MG-63细胞增殖，流式细胞仪检测MG-63细胞、CD8+T细胞凋亡，ELISA法检测外周血单个核细胞(PBMC)上清液IFN-γ、TNF-α水平，Western Blot法检测CCL2-CCR2通路蛋白以及凋亡相关蛋白水平。结果:0～500 nmol/L鸦胆子苦醇对hFOB1.19细胞无明...     

千金藤素对骨肉瘤MG-63细胞迁移、侵袭能力影响的体外研究

目的探讨千金藤素对骨肉瘤MG-63细胞迁移和侵袭能力的影响及其相关机制。方法将培养的MG-63细胞分为10μmol/L千金藤素组、40μmol/L千金藤素组和对照组,观察3组划痕迁移试验、Transwell小室侵袭试验骨肉瘤MG-63细胞迁移、侵袭能力,用酶联免疫吸附试验检测3组基质金属蛋白酶-2(MMP-2)浓度。结果 10μmol/L千金藤素组、40μmol/L千金藤素组细胞向划痕处迁移明显减少,且随着千金藤素浓度的增加,细胞向划痕处迁移明显减少。10μmol/L千金藤素组、40μmol/L千金藤素组穿膜细胞数明显少于对照组(P均0.05),且40μmol/L千金藤素组明显少于10μmol/L千金藤素组。骨肉瘤MG-63细胞培养液中MMP-2浓度随着作用时间的延长而降低,10μmol/L千金藤素组、40μmol/L千金藤素组培养24 h、48 h、72 h的MMP-2浓度均明显低于对照组,且40μmol/L千金藤素组均明显低于10μmol/L千金藤素组,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论千金藤素可抑制骨肉瘤MG-63细胞迁移和侵袭能力,这种抑制效应可能是通过抑制肿瘤细胞MMP-2的表达来实现的。     

淫羊藿素联合阿霉素对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用的体外研究

目的探讨体外淫羊藿素联合阿霉素对人骨肉瘤MG-63细胞的抑制作用及分子机制。方法设置对照组及不同浓度梯度的淫羊藿素组(10、20、40、80、160μmol/L)、阿霉素组(1、2、4、8、16μg/m L)、联合组(淫羊藿素+阿霉素:20μmol/L+1μg/m L、20μmol/L+2μg/m L、20μmol/L+4μg/m L、40 mol/L+1μg/m L、40μmol/L+2μg/m L、40μmol/L+4μg/m L、80μmol/L+1μg/m L、80μmol/L+2μg/m L、80μmol/L+4μg/m L),分别培养骨肉瘤MG-63细胞用倒置相差显微镜观察各组药物作用24、48 h后细胞形态;CCK-8法测定各组的细胞增殖抑制率并计算半数抑制浓度;AnnexinⅤ-FITC/PI双染料流式细胞分析技术测定各组的细胞凋亡率;RT-PCR检测bcl-2、caspase-3及p21表达。结果淫羊藿素及阿霉素可明显抑制MG-63细胞增殖,随着淫羊藿素的浓度从10μmol/L逐渐增加至160μmol/L,细胞增殖抑制率也随之从(9.67±3.62)%逐渐增加至(89.18±9.66)%,二者的半数抑制浓度分别为:46.93μmol/L、3.87μg/m L;淫羊藿素与阿霉素可致细胞早期及晚期凋亡,使bcl-2基因表达下调、caspase-3、p21基因表达上调(P0.05);以上改变联合组较淫羊藿素组及阿霉素组更明显(P0.05)。结论淫羊藿素联合阿霉素对抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖具有协同或相加效应,其作用机制可能与调控bcl-2、caspase-3及p21基因有关。     

青蒿琥酯与大蒜素在体外对骨肉瘤细胞株的协同抗癌作用

目的:探讨青蒿琥酯和大蒜素联合作用对人骨肉瘤细胞株MG-63、U20S的体外抑制效果。方法:分别采用25、50、100μmol/L的大蒜素,10、20、40μmol/L的青蒿琥酯分别作用于体外培养的人骨肉瘤细胞株MG-63、U20S于24h。在显微镜下观察肿瘤细胞的凋亡情况,并采取MTT法检测实际的肿瘤抑制效果。以两者联合应用作为对照作用于人骨肉瘤细胞株MG-63、U20S,比较单独用药和联合用药的差异。结果:青蒿琥酯与大蒜素联合应用,对人骨肉瘤细胞株MG-63、U20S增殖有较好的抑制作用,并诱导其凋亡,较单独使用其中一种药物而言,联合用药效果更佳,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:青蒿琥酯与大蒜素在体外对骨肉瘤细胞株的抗癌作用具有协同效应,且两者的作用机理不同,值得深入研究。     

牛蒡子苷元对骨肉瘤细胞增殖和侵袭影响研究

目的:探讨牛蒡子苷元对骨肉瘤细胞增殖和侵袭影响。方法:采用人骨肉瘤MG-63细胞为研究对象,用不同浓度(0、10、20、40、80和100μmol/L)的牛蒡子苷元干预骨肉瘤细胞。采用MTT法测定细胞增殖能力、Transwell法测定细胞侵袭能力和流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:牛蒡子苷元能够抑制骨肉瘤细胞MG-63的增殖,降低肿瘤细胞侵袭性,促进凋亡,随着药物浓度的增加效果持续增加,具有统计学差异(P<0.05)。结论:牛蒡子苷元可抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭,诱导细胞发生凋亡,具有良好的抗肿瘤效果。     

徐长卿丹皮酚联合顺铂对骨肉瘤细胞迁移和凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:探讨徐长卿丹皮酚(Paeonol)联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法:培养骨肉瘤MG-63细胞,分别加入不同浓度的徐长卿丹皮酚(0.3,0.6,1.2 mmol/L)和顺铂(4μmol/L)单独及联合作用,采用CKK-8法检测MG-63细胞增殖抑制率,并计算两药相互作用指数(CDI),评价两药相互作用性质,细胞划痕实验和Transwell实验检测MG-63细胞的迁移和侵袭能力,TUNEL法检测MG-63细胞凋亡情况,Western Blot法检测骨肉瘤MG-63细胞中Akt和mTOR蛋白表达及磷酸化水平。结果:徐长卿丹皮酚和顺铂联合给药可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖,两药存在协同作用,CDI1,其抑制作用与徐长卿丹皮酚浓度及作用时间相关,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);徐长卿丹皮酚不同浓度联合顺铂给药可显著抑制骨肉瘤细胞迁移,并具有一定的浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);徐长卿丹皮酚联合顺铂可以显著抑制骨肉瘤细胞的侵袭能力,并具有一定的浓度依赖性;随着徐长卿丹皮酚浓度的增加,呈红色荧光凋亡细胞有明显增多的趋势,以徐长卿丹皮酚中、高浓度与顺铂联用最明显;徐长卿丹皮酚联合顺铂可显著抑制Akt、mTOR蛋白磷酸化水平,具有一定的浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.01)。结论:徐长卿丹皮酚增强顺铂抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡,可能通过抑制Akt、mTOR蛋白磷酸化,发挥协同抑瘤作用。     

参麦注射液体外诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的机制研究

目的:研究参麦注射液体外对骨肉瘤MG-63细胞生长的影响及作用机制。方法:体外培养MG-63细胞,以不同浓度的参麦注射液作用于细胞,MTT法检测肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞术测细胞凋亡率和细胞周期;ELISA法测凋亡基因Caspase-3、Caspase-9的含量;Bradford法测SOD、MDA含量。结果:参麦注射液能显著抑制MG-63细胞的增殖,呈剂量依赖性;增加MG-63细胞的凋亡率,并诱导出现S细胞周期阻滞;作用MG-63细胞后,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达量增加;升高细胞内SOD的活性,降低MDA的含量。结论:参麦注射液抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖的作用机制与诱导细胞凋亡和将细胞周期阻滞于S期有关,其诱导凋亡的机制与Caspase家族,以及增加机体的抗氧化功能有关。     

槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞体外增殖与凋亡的影响

目的:观察槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度的槲皮素作用于体外培养的MG-63细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测槲皮素对MG-63细胞增殖的抑制能力,流式细胞术(FCM)检测槲皮素对MG-63细胞凋亡的影响。结果:槲皮素可显著抑制MG-63细胞增殖,具有明显剂量和时间依赖性;槲皮素可明显诱导MG-63细胞凋亡。结论:槲皮素能够抑制MG-63细胞增殖,诱导MG-63细胞凋亡。     

莪术醇诱导人骨肉瘤MG63细胞自噬的实验研究

目的观察莪术醇对人骨肉瘤MG-63细胞自噬性凋亡的作用。方法体外人骨肉瘤MG-63细胞单独或和莪术醇共同培养,MTT法检测莪术醇对骨肉瘤细胞系MG-63的增殖抑制作用;FITC-annexinⅤ/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡;PI和hochest33258活细胞染色观察凋亡细胞核形态学变化;EGFP-LC3b细胞转染,荧光显微镜观察细胞自噬;微管相关蛋白1轻链3-β(LC3)蛋白和自噬相关蛋白Beclin-1表达水平用Western blotting方法分析。结果 MTT检测显示莪术醇可抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖,并具有浓度-时间依赖性;流式细胞术检测显示莪术醇可显著诱导MG-63细胞凋亡;活细胞荧光染色显示MG-63细胞核凝聚并碎裂成小体;细胞质内凝集荧光增强;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值,Beclin-1蛋白表达明显增强;自噬抑制剂3-MA可明显逆转上述现象。结论莪术醇能明显抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,其机制主要是通过诱导自噬性凋亡。     

番茄红素对体外人骨肉瘤细胞增殖及荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的影响

[目的]研究番茄红素(LP)对体外人骨肉瘤MG-63细胞增殖及荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的影响,并初探其机制。[方法]取对数生长期人骨肉瘤MG-63细胞;设空白对照组,LP(5、10、20μg/mL)组和顺铂(40μg/mL)组;给药48 h后,观察细胞形态,检测细胞周期、细胞增值抑制率,观察细胞凋亡状况并测定细胞凋亡率。采用背部皮下注射接种人骨肉瘤细胞的方法建立荷骨肉瘤裸小鼠模型,设模型对照组,LP[5、10、20mg/(kg·d)]和顺铂[2 mg/(kg·d)],各20只;称量瘤体质量并计算抑瘤率,观察肿瘤组织形态结构变化和细胞凋亡状况,检测肿瘤组织凋亡相关蛋白(bcl-2、Bax、caspase-3)表达。[结果]体外实验:空白对照组人骨肉瘤MG-63细胞呈贴壁生长、增殖迅速,LP干预组和顺铂组细胞呈现变圆、脱壁、细胞间接触松散状态;与空白对照组比较,LP组和顺铂组细胞周期G_0/G_1期显著延长,细胞增殖抑制率显著升高,凋亡细胞数量明显增多、凋亡率显著升高,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。体内实验:与模型组比较,LP 10、20 mg/(kg·d)组瘤质量显著减轻、抑瘤率显著升高;LP组肿瘤组织呈片状坏死、瘤细胞皱缩等病理性改变,细胞凋亡指数(AI)显著升高,肿瘤组织bcl-2表达下调、Bax上调而Bax/bcl-2比值显著升高,caspase-3表达显著上调,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。[结论]LP具有抑制体外人骨肉瘤MG-63细胞增殖和荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的药理学作用,其机制可能与LP阻滞细胞周期、调节凋亡相关调控蛋白表达有关。     

补骨脂素对HL60/HT耐药细胞的逆转作用及对细胞内钙离子浓度的影响

目的研究补骨脂素对HL60/HT耐药细胞的逆转作用及对耐药细胞内Ca2 浓度的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法测定补骨脂素对细胞增殖的抑制作用,高效液相色谱法检测细胞内三尖杉酯碱(HT)的量,激光共聚焦显微镜测定细胞内不同时段和不同时间点的Ca2 浓度。结果补骨脂素在1~20μmol/L能不同程度降低HT对HL60/HT细胞的IC50,并不同程度提高细胞内HT的量;1~20μmol/L补骨脂素作用不同时段(24、48、96h),HL60/HT细胞内Ca2 浓度与作用时间成负相关,10和20μmol/L补骨脂素作用HL60/HT不同时间(5、10、15、20、25min),细胞内Ca2 浓度与作用成负相关性。结论补骨脂素能逆转HL60/HT细胞的多药耐药,其作用机制与影响耐药细胞内Ca2 浓度、增加细胞内HT的量有关。     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的机制研究

目的研究冬凌草甲素对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的分子机制。方法以流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测CyclinD1、P21以及凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2和Bax表达的变化;TRAP-PCR-ELISA方法检测MG-63细胞端粒酶活性的变化;Z-IETD-fmk阻断试验检测Caspase-8阻断前后,冬凌草甲素对MG-63细胞凋亡影响的变化。结果冬凌草甲素增加G0/G1期MG-63细胞百分率,降低S期MG-63细胞百分率;浓度依赖性抑制MG-63细胞的CyclinD1、Survivin和Bcl-2蛋白表达,上调P21和Bax蛋白表达;浓度依赖性抑制MG-63细胞端粒酶的活性;Z-IETD-fmk阻断Caspase-8活性后,能部分逆转和减弱冬凌草甲素对MG-63细胞的凋亡诱导作用。结论冬凌草甲素通过影响细胞周期调节蛋白、阻断细胞周期G1/S期"稽查点";抑制Survivin、Bcl-2,上调Bax;抑制端粒酶活性以及活化Caspase-8等途径抑制MG-63细胞增殖及诱导MG-63细胞凋亡。     

大豆异黄酮对成骨肉瘤细胞株MG-63增殖活性的影响

本实验采用MTT法检测了不同浓度的大豆异黄酮对人成骨肉瘤细胞株MG-63增殖活性的影响。结果表明大豆异黄酮可以抑制MG-63细胞的增殖,具有剂量效应关系。     

miR-124对人成骨肉瘤MG-63细胞生长增殖的影响

目的:探讨miR-124对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响。方法:运用miR-124的模拟物或抑制剂分别转染人成骨肉瘤MG-63细胞,分别为实验组和对照组(脂质体2000),采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖情况。结果:对照组吸光度值(A值)在24h、48h和72h分别为(0.261±0.017)、(0.379±0.021)、(0.414±0.031);miR-124模拟物可抑制MG-63细胞增殖,其A值分别降至(0.149±0.006)、(0.163±0.007)、(0.212±0.009),差异具有显著统计学意义(P<0.01);miR-124抑制剂可促进MG-63细胞增殖,其A值分别增至(0.313±0.016)、(0.542±0.033)、(0.713±0.041),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-124可抑制人成骨肉瘤细胞生长增殖活性,可作为一个抑瘤基因参与成骨肉瘤的发生与发展。     

靶向VEGF—hTERT基因siRNA表达载体抑骨肉瘤生长的实验研究

目的：观察靶向VEGF-hTERT基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞增殖的影响和对裸鼠骨肉瘤生长的影响。方法：构RNA干扰腺病毒载体rA-hTERT和rAd-VEGF,单独和联合转染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞后实时荧光定量PCR检测hTERT和VEGF基因表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;人骨肉瘤细胞系MG-63细胞于裸鼠成瘤后使用siRNA表达载体治疗,观察肿瘤的生长状况及组织病理学改变。结果：①转染后48h,rAd-hTERT对hTERT基因mRNA的抑制率约84%,对VEGF基因表达无明显抑制（P〉0.05）;rAd-VEGF对VEGF基因mRNA的抑制率约82%,对hTERT基因表达无明显抑制（P〉0.05）;rAd-hTERT-VEGF干扰组对hTERT基因表达抑制率约87%,VEGF基因表达抑制率约83%,联合干扰与单基因干扰相比,对hTERT-VEGF基因的表达抑制差异无显著性（P〉0.05）。②干扰组转染后l～6d均能促进细胞凋亡,联合干扰细胞凋亡率与单基因干扰细胞凋亡率相比,差异均有显著性（P〈0.05）。裸鼠实验中,基因组肿瘤的生长均受到明显抑制,且联合干扰组与单基因组比较有显著性差异（P〈0.05）。对骨肉瘤的肺转移联合干扰组有显著的抑制作用。结论：靶向VEGF-hTERT基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞系MG-63细胞和裸鼠骨肉瘤的生长及转移均有明显的抑制作用。     

补骨脂素与丹参酚酸B对高糖条件下人成骨样MG63细胞增殖及凋亡的影响

目的:体外研究补肾与活血中药有效成分补骨脂素与丹参酚酸B配伍对高糖条件下人成骨肉瘤MG63细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用四唑盐(MTT)比色法筛选抑制MG63细胞增殖的最佳葡萄糖浓度及作用较强的时间点,分别比较不同浓度补骨脂素与丹参酚酸B在高糖损伤模型中MG63细胞增殖情况,采用Annexin V-EGFP/PI双染法检测空白对照组、高糖培养液组、高糖培养液+最佳浓度补骨脂素组、高糖培养液+最佳浓度丹参酚酸组、高糖培养液+最佳浓度补骨脂素和丹参酚酸B组MG63细胞凋亡情况。结果:补骨脂素组和丹参酚酸B组MG63早期细胞凋亡率和细胞总死亡率(6.14±0.65%,15.09±1.24%)明显低于高糖培养液组(20.34±1.55%,59.79±3.20%),优于补骨脂素组(15.44±1.23%,35.15±2.78%)及丹参酚酸组(12.65±1.18%,30.09±2.25%)。结论:补骨脂素与丹参酚酸B配伍对体外培养高糖损伤MG63细胞具有促进细胞增殖,并可抑制细胞凋亡的作用。     

印苦楝内酯通过阻滞细胞周期和上调p21蛋白抑制结肠癌细胞HT-29的增殖

印苦楝内酯(nimbolide)是从楝Azadirachta indica A.种子中提取的天然三萜类化合物,作者研究了该化合物对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用。分别进行了细胞生长试验、细胞周期分析、DNA片断分析、Annexin V-PI实验、蛋白质印迹分析和碱性磷酸酶活性检测。结果显示,印苦楝内酯抑制HT-29细胞生长的作用具有浓度和时间相关性,以其(浓度为2.5~10μmol/L)处理细胞12、48h,抑制率分别为35%~68%和57%~89%。用2.5μmol/L的印苦楝内酯处理HT-29细胞12h,停滞在G2/M期的细胞数比对照组增加了6.5倍;且随作用时间的延长,在G2/M期细胞数的增加的…