六味地黄汤对肾间质纤维化大鼠肾组织中缺氧诱导因子-1α和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的探讨六味地黄汤抗肾间质纤维化的作用机制。方法采用5/6肾切除法复制肾间质纤维化大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、六味地黄汤组和依那普利组。六味地黄汤组予6.25 g/(kg·d)六味地黄汤灌胃,依那普利组予10 mg/(kg·d)马来酸依那普利悬浊液灌胃,假手术组和模型组予10 m L/(kg·d)蒸馏水灌胃,每日1次,连续12周。采用免疫组化法检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Ⅰ、Ⅲ型胶原(CollⅠ、CollⅢ)在肾组织中的表达。结果与假手术组比较,模型组肾组织中HIF-1α、CollⅠ、CollⅢ的表达均明显升高(P0.05);与模型组比较,六味地黄汤组和依那普利组肾组织中HIF-1α和CollⅠ、CollⅢ的表达均降低(P0.05),且六味地黄汤组优于依那普利组(P0.05)。结论六味地黄汤可能通过下调HIF-1α和CollⅠ、CollⅢ的表达,改善肾组织慢性缺氧,发挥抗肾间质纤维化的作用。     

葛根素对成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨葛根素(Pue)对高糖培养的成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原m RNA(CollⅠm RNA)表达的影响,为临床治疗糖尿病骨质疏松症提供实验依据。方法:取出生24 h内的SD大鼠的颅骨,体外分离培养成骨细胞,待细胞形态稳定后,取对数生长期的成骨细胞,随机分为正常组、高糖组(葡萄糖浓度22 mmol/L)、葛根素各浓度组(葛根素浓度分别为10-8 mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)、高糖加葛根素各浓度组,每组设8个复孔,分别培养48 h,隔天换液并加药。测定成骨细胞的增殖能力、细胞内ALP活性以及CollⅠm RNA表达情况。结果:与正常组比较,葛根素各浓度组细胞增殖、细胞ALP活性、细胞CollⅠm RNA表达均显著增高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);高糖组、高糖+葛根素各浓度组明显低于正常组,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与高糖组比较,高糖+葛根素各浓度组细胞增殖、细胞ALP活性、细胞CollⅠm RNA表达均显著增高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:高糖情况下抑制成骨细胞的增殖、分化和Ⅰ型胶原表达,但加入葛根素后能提高成骨细胞的增殖、分化和Ⅰ型胶原表达,说明葛根素对糖尿病骨质疏松症有治疗作用。     

解毒通络方对心肌成纤维细胞Vimentin和α-SMA表达影响

目的:探讨解毒通络方对大鼠心肌成纤维细胞增殖和转分化的影响.方法:以MTT法检测各组培养细胞增殖活力,碱裂解法测定各组培养液羟脯氨酸含量;RT-qPCR法检测培养细胞及Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA表达;Western Blot和RT-qPCR检测Vimentin、α-SMA蛋白及mRNA表达.结果:模型组心肌成纤维细胞...     

扶肾降浊方对系膜增生性肾炎肾小管间质损害大鼠COLⅠ及COLⅢ蛋白和基因表达的影响

目的观察扶肾降浊方对系膜增生性肾炎大鼠肾小管间质细胞外基质Ⅰ、Ⅲ型胶原(COLⅠ及COLⅢ)蛋白和基因的调节作用。方法采用系膜增生性肾炎模型,将大鼠随机分为正常组、模型组、扶肾降浊方中药组、贝那普利西药组。采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法分别检测实验12周、16周和20周末各组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白和基因的表达。结果 12周、16周和20周末的模型组肾脏COLⅠ及COLⅢ蛋白表达呈强阳性(P0.01),COLⅠ及COLⅢ基因表达上调(P0.01),扶肾降浊方中药组和贝那普利组大鼠肾脏COLⅠ及COLⅢ蛋白表达均较模型组降低(P0.01),COLⅠ及COLⅢ基因表达亦均较模型组下调(P0.05);随着造模时间的延长,模型组肾小管COLⅠ及COLⅢ蛋白和基因表达均呈升高趋势,治疗组仍作用明显(P0.05)。结论扶肾降浊方可通过基因和蛋白水平调节COLⅠ和COLⅢ在肾脏的表达,减少COLⅠ和COLⅢ在肾小管间质的积聚以减轻肾间质纤维化,从而对肾小管间质损害起到防治作用。     

补肾复方对压力负荷增加大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的：观察补肾复方对压力负荷增加大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达的影响．探讨补肾复方逆转心肌纤维化的分子机制。方法：采用RT—PCR的方法检测心肌组织α2（Ⅰ）型胶原、α2（Ⅲ）型胶原的基因表达。结果：模型组大鼠左室心肌组织α2（Ⅰ）型胶原、α2（Ⅲ）型胶原mRNA表达较假手术组显著上升,卡托普利组和补肾复方大、小剂量组大鼠左室心肌组织α2（Ⅰ）型胶原、α2（Ⅲ）型胶原mRNA表达较模型组显著下降。结论：补肾复方与卡托普利具有基本一致的逆转-心肌纤维化的作用,该作用可能是通过降低α2（Ⅰ）型胶原和α2（Ⅲ）型胶原基因表达来实现的。     

淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原表达和BGP影响的实验研究

目的:研究淫羊藿甙对体外培养的大鼠成骨细胞功能的影响,探讨淫羊藿甙促进成骨的细胞及分子机制。方法:实验分组将不同浓度的淫羊藿甙加入到其中进行共培养,其对于成骨细胞增殖和分化的影响通过MTT比色实验、BGP含量的放免法检测以及用荧光二抗的免疫组化实验测定Ⅰ型胶原的表达来进行。结果:淫羊藿甙能促进成骨细胞Ⅰ型胶原的表达和BGP的合成。结论:淫羊藿甙具有刺激体外培养成骨细胞增殖、分化和矿化的功能。     

健骨二仙丸含药血清对成骨细胞分化及Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响

目的:在临床研究和动物实验的基础上,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。方法:分离、培养人的原代成骨细胞,采用 PNPP 法、RIA 法、茜素红染色法以及定量 RT-PCR 之法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节形成和Ⅰ型前胶原 mRNA 的表达,从而了解健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。结果:健骨二仙丸中、高剂量能显著增加碱性磷酸酶的活性及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ型前胶原 mRNA 的表达(P<0.01,P<0.05),与雌激素(倍美力)组比较差异无显著性。结论:健骨二仙丸能有效促进成骨细胞的分化。     

温莪术对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1、α-SMA、COLⅠ表达的影响

目的:观察温莪术对肾间质纤维化大鼠肾脏的保护作用及对TGF-β1、α-SMA、COLⅠ表达的影响,探讨温莪术肾脏保护作用的机制.方法:取SPF级雄性3个月龄SD大鼠,采用UUO模型,随机分为4组:假手术组(SO组),模型组(M组),莪术组(E组),氯沙坦组(L组).于术后第7、14、21天时各组随机处死6只大鼠,取左侧肾组织,免疫组织化学法(IHC)检测肾组织中TGF-β1、α-SMA、COL工的表达情况.结果:各时相点模型组、莪术组、氯沙坦组大鼠的肾脏TGF-β1、α-SMA、COL Ⅰ表达均明显增多,而且模型组三者的表达高于莪术组、氯沙坦组(P＜0.05),莪术组与氯沙坦组比较无明显差异.结论:温莪术可以延缓肾间质纤维化的进展,其作用机制是通过抑制TGF-β1表达,下调α-SMA的表达,抑制成纤维细胞活性和COLⅠ的合成,抑制EMT和ECM的积聚.     

瑶药猛老虎提取物对大鼠肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原、MMP-1和TGF-β1表达的影响

目的：观察瑶药猛老虎提取物对大鼠肝星状细胞（HSC）Ⅰ、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶（MMP-1）和转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法：制备猛老虎乙酸乙酯部位分离物药物血清,分离培养大鼠肝HSC,温育HSC,EIJSA法检测上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;MTT检测HSC的生长情况;逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）法观察MMP-1的表达;免疫组化法观察TGF-β1的表达。结果：猛老虎乙酸乙酯部位各分离物和秋水仙碱药物血清对体外培养的HSC细胞增殖无抑制作用。与空白对照血清组比较,无显著性差异（P〉0．05）。分离物E中和高剂量组的药物血清均能明显促进体外培养HSC细胞MMP-1基因表达水平、抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌和TGF-β1表达并呈现剂量依赖关系,与空白对照血清组比较,均具有显著性的统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）,效果与秋水仙碱相当。结论：瑶药猛老虎抗肝纤维化作用不是直接抑制HSC的增殖,而是与其促进HSC细胞MMP-1基因表达水平、抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌和TGF-β1的表达有关。     

和络泄浊方对肾纤维化大鼠肾组织α-SMA、Ⅳ型胶原表达的影响

本实验主要观察和络泄浊方对肾纤维化大鼠肾组织α-SMA、Ⅳ型胶原表达的影响,旨在进一步探讨其抗肾纤维化作用的可能机制。1材料1·1动物健康Wistar大鼠48只,动物许可证号SCXK(鲁)20030010,雌雄各半,6~8周龄,体重180g~220g,平均体重200g,由青岛市动物研究所提供。于室温23℃,用     

萆薢分清颗粒对单侧输尿管梗阻肾纤维化大鼠mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达影响研究

目的 观察萆薢分清颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化相关蛋白雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的影响,探讨萆薢分清颗粒的肾脏保护作用。方法 取60只SPF级雄性SD大鼠,从中随机取10只作为空白组,其余50只大鼠采用单侧输尿管梗阻术构建肾纤维化模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、氯沙坦组及萆薢分清高、中、低剂量组,每组10只,萆薢分清高、中、低剂量组分别给予13.12 mL/(kg·d)、6.56 mL/(kg·d)、3.28 mL/(kg·d)萆薢分清颗粒溶液灌胃,氯沙坦组给予氯沙坦2.62 mL/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均1次/d,连续灌胃4周。末次灌胃结束后检测尿白蛋白与尿肌酐的比值(ACR)、24 h尿蛋白量及血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平,HE染色、Masson染色观察肾脏病理形态,免疫组化法及Western blot法分别检测大鼠肾脏组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ表达情况。结果 与空白组比较,模型组大鼠ACR、24 h尿蛋白量及SCr、BUN水平均明显升高(P均<0.05)...     

肾络通对大鼠系膜细胞外基质分泌及转化生长因子β1表达的影响

目的:探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质(ECM)不同成分的抑制作用及对转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的调节作用.方法:以体外培养大鼠肾小球系膜细胞(MCs)及血清药理学方法为基础,采用酶联免疫吸附试验(ELAIS)检测细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1 mRNA的表达.结果:细胞外基质FN、ColⅣ的含量与TGF-β1 mRNA的表达呈正相关关系,肾络通对二者均有抑制作用.结论:肾络通能够减少细胞外基质的积聚,抑制TGF-β1的分泌与表达,从而进一步明确其防治多种肾小球疾病,延缓肾小球硬化的作用机制.     

肾络通对大鼠系膜细胞外基质分泌及转化生长因子β1表达的影响

目的: 探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质不同成分的抑制作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的调节作用.方法:以体外培养大鼠肾小球系膜细胞及血清药理学方法为基础,采用酶联免疫吸附试验检测细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1 mRNA的表达.结果:细胞外基质FN,ColⅣ的含量与TGF-β1 mRNA的表达呈正相关关系,肾络通对二者均有抑制作用.结论:肾络通能够减少细胞外基质的积聚,抑制TGF-β1的分泌与表达,从而进一步明确了其防治多种肾小球疾病,延缓肾小球硬化的作用机制.     

鳖甲煎丸对人肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质表达的影响

目的:探讨鳖甲煎丸对人肾小球系膜细胞(HMC)增殖及细胞外基质(ECM)不同成分的抑制作用。方法:应用细胞培养技术,进行人HMC培养,采取血清药理学方法,制备鳖甲煎丸药物血清,利用脂多糖(LPS)为刺激因子,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组系膜细胞的增殖情况,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ECM中层黏连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的含量。结果:LPS刺激后MC增殖和系膜基质中LN及Col-Ⅳ的分泌增多,与空白组比较有明显差异(P<0.01)。鳖甲煎丸能抑制正常条件及LPS刺激条件下MC增殖,并对ECM中LN、Col-Ⅳ的表达有抑制作用。结论:鳖甲煎丸能够抑制系膜细胞的增殖,抑制肾小球系膜基质中LN及Col-Ⅳ的表达,减少ECM的积聚,这可能是其防治肾小球疾病,延缓肾小球硬化的部分作用机制。     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF-β_1 mRNA的影响

目的 :探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法 :分离正常大鼠肝星状细胞 ,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养细胞 72h ,提取细胞总RNA ,RT PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF β1mRNA的表达。结果 :抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达。结论 :抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达     

青白散对慢性软组织损伤大鼠骨骼肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的 观察青白散对慢性软组织损伤大鼠骨骼肌中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响以及局部软组织的形态学改变.方法 54只雄性SD大鼠随机分为自然愈合组、云南白药组、青白散组,每组18只.采用慢性软组织损伤动物模型,分别予以生理盐水(10ml/kg)、云南白药(0.18g/kg)和青白散(0.54g/kg)灌胃,每日1次,连续14d.给药后第1周末、第2周末、第3周末,免疫组织化学方法检测大鼠慢性软组织损伤后骨骼肌中ⅠⅢ型胶原蛋白的表达,酶联免疫法检测骨骼肌中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量的动态变化.结果 青白散组肌肉再生速度、愈合质量显著优于自然愈合组,在不同时间点的骨骼肌中TNF-α和IL-6的含量均较自然愈合组显著降低(P＜0.01),Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达均较自然愈合组显著降低(P＜0.01).结论 青白散能阻止胶原纤维的过度生成,降低致炎因子水平,从而有利于损伤组织的修复.     

扶正化瘀319方药物血清对肝星状细胞Ⅰ型胶原及转化生长因子β1表达的影响

目的：探讨扶正化瘀３１９方抗肝纤维化的主要作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用扶正化瘀３１９方给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞。胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率,ＥＬＩＳＡ法测定培养上清的Ⅰ型胶原含量,免疫细胞化学染色、图像分析半定量转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）蛋白表达,ＲＴＰＣＲ法分析Ⅰ型前胶原、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达量。结果：扶正化瘀３１９方药物血清能明显抑制肝星状细胞的细胞内外胶原生成率,抑制细胞的Ⅰ型前胶原基因表达及其胶原分泌,抑制肝星状细胞ＴＧＦβ１与蛋白表达。结论：扶正化瘀３１９方能明显抑制肝星状细胞的活化,对肝星状细胞Ⅰ型前胶原及ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达的抑制可能是该方抗肝纤维化的主要作用机理。     

回回甘松饮含药血清对大鼠肾小球系膜细胞增殖、周期及FN, Col1α1, Col4α1基因表达的影响

目的：探讨回回甘松饮（HGY）含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖、细胞周期、纤维连接蛋白（FN）、Ⅰ型胶原α1多肽链（Col1α1）、Ⅳ型胶原α1多肽链（Col4α1）基因表达的影响。方法：采用中药血清药理学方法制备含药血清,将大鼠随机分为空白对照组（给予蒸馏水10 mL·kg^-1）、格列喹酮（10 mg·kg^-1）组、HGY（10,5 g·kg^-1）组,每组各10只,每日灌胃给药2次,连续3 d后取大鼠血清。选取HBZY-1细胞株进行实验,共分为5组：10%空白血清组、高糖+10%空白血清组、高糖+10%格列喹酮含药血清组（10 mg·kg^-1）、高糖+10%HGY含药血清组（10,5 g·kg^-1）。细胞以2×10⁴/mL接种于96孔细胞培养板上,分别于药物处理后24,48,72 h时,采用CCK-8法检测MCs增殖情况;细胞以2×10⁴/mL接种于25 cm²细胞培养瓶中,于药物干预48 h时收集细胞,分别采用流式细胞术检测细胞周期变化,real-time PCR方法检测FN、Col1α1及Col4α1 mRNA的表达。结果：与10%空白血清组比较,高糖（30 mmol·L^-1）能够诱导MCs增殖（P<0.01）,并能使G₀/G₁期细胞比例减少（P<0.01）,S期比例增加（P<0.01）,能够使MCs中FN,Col1α1,Col4α1 mRNA表达量明显升高（P<0.01）。在上述含药血清干预的48,72 h时,各含药血清组MCs均受到一定程度抑制,发生G₁/S期阻滞,并可降低高糖条件下MCs中FN,Col1α1,Col4α1 mRNA表达量,与高糖+10%空白血清组比较,具有显著性差异（P<0.01或P<0.05）。结论：HGY含药血清可使大鼠MCs在高糖环境下发生G₁/S期阻滞,抑制其增殖,其机制可能与调控FN,Col1α1及Col4α1 mRNA表达有关。     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF—β1mRNA的影响

目的：探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞72h,提取细胞总RNA,RT-PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF-β1mRNA的表达。结果：抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNA的表达。结论：抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-βmRNA的表达。     

红景天苷对DCM大鼠血清中HIF-1α、ET-1、PⅠP、醛固酮的影响

目的 观察红景天苷对糖尿病心肌病(DCM)大鼠血清中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、内皮素-1(ET-1)、Ⅰ型胶原(PⅠP)及醛固酮的影响,并探讨可能的心脏保护机制。方法 取大鼠40只,用链尿佐菌素(STZ)造DCM大鼠模型,成模后随机分为对照组、红景天苷中剂量组(50 mg/kg)、红景天苷高剂量组(100 mg/kg)、曲美他嗪组(2 mg/kg),连续灌胃给药12周,末次给药后禁食12 h,麻醉后腹主动脉取血标本,检测血清中HIF-1α、ET-1、PⅠP、醛固酮含量。结果 对照组血清中HIF-1α、PⅠP含量显著高于红景天苷中、高剂量组及曲美他嗪组(P<0.05);对照组血清中醛固酮、ET-1测值显著高于红景天苷中、高剂量组(P<0.05);且红景天苷高剂量组在降低血清醛固酮含量方面明显优于曲美他嗪组(P<0.05)。结论 红景天苷对DCM大鼠的治疗作用明显,其作用机制可能是通过抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS系统)、抑制心肌纤维化、改善心肌细胞的氧供及血管内皮功能等来实现的。