3C蛋白酶及抑制剂研究进展

3C蛋白酶是催化小RNA病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶，对病毒的复制有着重要作用，是当前抗病毒研究的一个重要靶点。本文简要概述了3C蛋白酶的结构、功能和抑制剂的研究进展，对该酶的抑制研究和相关病毒的治疗有积极意义。     

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶及抑制剂研究进展

丙型肝炎病毒(heptitis cvirus,HCV)丝氨酸蛋白酶(serine protease)是催化病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶.对病毒复制和宿主细胞都有重要作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点.本文从丝氨酸蛋白酶结构、功能和抑制剂等三方面,介绍丝氨酸蛋白酶的研究进展,这对该酶抑制研究和丙型肝炎的治疗研究会有积极意义.     

黄病毒多功能酶NS3研究进展

黄病毒非结构蛋白NS3是一个具有多种酶活性的蛋白,其N端为丝氨酸蛋白酶结构域,C端为RNA解旋酶／核苷三磷酸酶／RNA 5’三磷酸酶结构域。NS3在病毒前体蛋白的加工和病毒基因组的复制过程中发挥重要功能。对NS3的研究有助于新型疫苗和抗病毒药物的设计。本文试图对近年来NS3研究的进展情况进行一简要的回顾。     

黄病毒多功能酶NS3研究进展

黄病毒非结构蛋白NS3是一个具有多种酶活性的蛋白,其N端为丝氨酸蛋白酶结构域,C端为RNA解旋酶/核苷三磷酸酶/RNA 5′三磷酸酶结构域。NS3在病毒前体蛋白的加工和病毒基因组的复制过程中发挥重要功能。对NS3的研究有助于新型疫苗和抗病毒药物的设计。本文试图对近年来NS3研究的进展情况进行一简要的回顾。     

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶及抑制剂研究进展

丙型肝炎病毒(heptitis cvirus，HCV)丝氨酸蛋白酶(serine protease)是催化病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶。对病毒复制和宿主细胞都有重要作用，是当前抗病毒研究的一个重要靶点。本文从丝氨酸蛋白酶结构、功能和抑制剂等三方面，介绍丝氨酸蛋白酶的研究进展，这对该酶抑制研究和丙型肝炎的治疗研究会有积极意义。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成,具有丝氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶(NTPase)和螺旋酶(Helicase)的功能,在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用.非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性,是检测HCV感染的主要抗原之一.近年的研究发现NS3内部的裂解产物更具有致癌潜能.此外,NS3蛋白还参与NS5A的超磷酸化修饰过程等.     

HRV 14 3C蛋白酶在大肠杆菌的融合表达及活性检测

目的人鼻病毒3C蛋白酶具有酶切物异性强且在低温下仍保持较强酶活性的特点而被用作工具酶。为大量获得3C蛋白酶,以融合形式在大肠杆菌中高效表达3C蛋白酶。方法将编码HRV143C蛋白酶的cDNA克隆到pGEX4T-1载体,在大肠杆菌B121（DE3）中表达,经一步GST亲和层析纯化获得GST-3C,再通过体外酶切实验对GST-3C和Thrombin的酶切活性进行比较。结果每升培养产物可获得纯度≥90％的重组融合蛋白约50mg,重组GST-3C在4℃低温下具有比Thrombin更高的酶活性。结论GST-3C蛋白酶不仅可以应用于融合蛋白的酶切,而且为引入3C蛋白酶识别位点的串联亲和纯化（TAP）系统提供又一种酶切工具。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3的研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成，具有线氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶（NTPase）和螺旋酶（Helicase）的功能，在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用。非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性，是检测HCV感染的主要抗原之一。近年的研究发现NS3内部的裂解产物更具有致癌潜能。此外，NS53蛋白还参与NS5A的超磷酸化修饰过程等。     

p7蛋白--丙型肝炎病毒潜在抑制靶点

丙型肝炎（hepatitisc）是严重的慢性传染病之一，全世界病毒感染者约1．7～2亿。HCV为单链RNA病毒，一个开放读码框编码了3010个氨基酸的前体蛋白，在细胞和病毒蛋白酶共同作用下，前体蛋白被降解成结构蛋白和非结构蛋白两部分。结构蛋白包括核心蛋白（C）和膜蛋白（E1、E2）以及p7蛋白，非结构蛋白包括NS2、NS3、NS4A、NS4B、NSSA和NSSB。p7蛋白结构、功能仍然了解甚少。最近有研究发现p7蛋白可能是一个重要的病毒抑制靶点。     

EMCV3C蛋白酶抑制真核细胞蛋白质合成的研究

目的 探讨脑心肌炎病毒（EMCV）的3C蛋白酶对真核细胞转录及翻译机制的影响.方法 构建真核表达载体pcDNA3.1-3C,将表达载体分别与帽样依赖的绿色荧光蛋白（GFP）表达载体pEGFP-N1和萤火虫荧光素酶（Fluc）载体pGL3载体共转染细胞后,检测GFP和Fluc的表达.Western Blot检测EMCV病毒和pcDNA3.1-3C对真核生物翻译起始因子4GI（eIF4GI）及多聚A尾结合蛋白（PABP）的影响.RT-PCR检测pcDNA3.1-3C对GFP mRNA转录水平的影响.结果 EMCV-3C可以抑制帽样依赖的GFP和Fluc的表达.EMCV 3C和EMCV病毒感染均导致细胞内PABP发生切割,而对eIF4GI均无明显作用.EMCV-3C也可导致GFP基因mRNA转录水平下降.结论 EMCV的蛋白酶3C通过mRNA转录水平的抑制和PABP的切割而抑制真核细胞帽样结构依赖途径的蛋白翻译,从而抑制蛋白质的合成.     

SARS感染入侵过程中酶解激活机制研究进展

SARS冠状病毒是重症急性呼吸系统综合征(severeacute respiratory syndromes,SARS)的病原体,在分类学上属于巢式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)的病毒.根据血清学反应,冠状病毒属的成员可分成三个不同的抗原组,即1,2,3组冠状病毒.SARS冠状病毒属于2组冠状病毒,与鼠肝炎病毒(murinehepatitis virus,MHV)同属于2组.1组冠状病毒包括人冠状病毒229E(human coronavirus 229E)等.3组冠状病毒主要为禽类冠状病毒. SARS冠状病毒的感染入侵首先通过病毒的S蛋白与靶细胞受体结合.病毒进入细胞后,从病毒基因组首先翻译出RNA多聚酶,然后进行转录成mRNAs,经翻译后产生S蛋白、M蛋白和E蛋白等结构蛋白.在内质网中进行病毒颗粒的包装,然后移人高尔基复合体中,最终以出芽的方式将包装完整的病毒排出到细胞外.其中,SARS冠状病毒感染致病的第一步是SARS冠状病毒S蛋白(spike protein,S蛋白)介导的病毒感染入侵,在该过程中,需要不同的蛋白酶对S蛋白进行酶解切割激活.近年来,不断有新的蛋白酶被发现对SARS冠状病毒S蛋白在感染入侵过程中有酶解激活作用,从而对病毒的感染产生影响.本文即对SARS冠状病毒感染入侵过程中对S蛋白进行酶解切割激活的机制进行一一讨论.     

含3C蛋白酶切位点的人CD226胞膜外区Ig融合蛋白的真核表达及应用

目的：构建含3C蛋白酶酶切位点的人CD226(PTA1)分子胞膜外区Ig融合蛋白编码基因的真核表达载体，并进行表达和初步鉴定。方法：将人CD226分子的胞膜外区基因，克隆入含3C蛋白酶靶序列的Ig真核表达载体p-3c—Ig中。测序证实后，转染COS7细胞并进行瞬时表达。表达产物经亲和层析件纯化，并通过免疫荧光染色及3C蛋白酶酶切反应进行鉴定结果：经表达和纯化获得CD226胞膜外区的Ig融合蛋白。该融合蛋白可与表达于ECV304细胞表面的CD226配体有效结合。同时，融合蛋白的Fc段亦经3C蛋白酶切除，从而获得CD226胞膜外区的真核表达分子。结论：成功地获得了含有3C蛋白酶酶切位点的人CD226分子胞膜外区Ig真核表达产物，为进一步对CD226分子进行结构和功能研究，以及X线结晶衍射提供了重要条件。     

辛德毕斯病毒nsP2蛋白研究进展

nsP2是辛德毕斯病毒一种重要的非结构蛋白,具有蛋白酶活性、三磷酸激酶活性、RNA解旋酶等活性.nsP2蛋白与该病毒基因组复制、多聚蛋白水解等过程有关,更为重要的是该蛋白在调节宿主细胞对病毒感染反应的过程中起重要作用.本文就辛德毕斯病毒nsP2蛋白的结构、功能及相关进展作一综述.     

HCV NS3/4A介导的逃逸机体固有免疫研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)为单股正链RNA病毒,归类于黄病毒科、肝炎病毒属,有6个基因型.HCV基因组含有约9600个碱基,编码一条约3010个氨基酸的多聚蛋白前体,该多聚蛋白在翻译的同时或之后被宿主和病毒的蛋白酶剪切加工成至少10种成熟蛋白,包括结构蛋白Core、E1、E2和p7,非结构蛋白NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B.其中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶不仅是HCV多聚蛋白前体加工成熟的关键酶,而且还通过调控干扰素调控因子(IRF)-3的表达水平,从而破坏细胞内固有免疫通路,使病毒能够逃避宿主的固有免疫反应,并形成长期的持续性感染[1].     

柯萨奇病毒B组5型非结构蛋白3C表达纯化及多克隆抗体的制备

目的 表达和纯化柯萨奇病毒(CVB5)非结构蛋白3C,免疫雄性大鼠制备多克隆抗体.方法 通过酶切质粒获取3C基因序列,构建到原核表达系统大肠埃希菌中诱导表达重组的3C蛋白,使用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和考马斯亮蓝染色法(BSA)对重组蛋白的纯度与浓度进行分析,重组的3C蛋白作为抗原,免疫雄性SPF级大鼠获得多抗血清,用ELISA测定抗体效价并Western印迹检测抗体特异性,用该抗体检测病毒在细胞内的复制.结果 构建了重组表达载体命名为3C-pET-28a,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达重组3C蛋白.ELISA测定制备的多抗血清效价为1:500 000,Western印迹检测在EV71、CVA16中都有交叉反应,并确定病毒感染细胞后24 h开始复制.结论 实验成功地利用原核表达系统表达柯萨奇病毒非结构蛋白3C,为进一步研究柯萨奇病毒的感染机理以及疫苗制备提供了基础.     

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3 的研究现状

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3(MASP3)是补体凝集素途径的酶成分之一,由MASP1/3 基因编码。既往资料证实,MASP3 不参与凝集素途径活化,对补体蛋白C3、C4 以及C2 均无酶切活性,而近期研究表明MASP3 是参与补体D 因子活化的关键酶,进而可能是联系补体凝集素途径和旁路途径活化的重要成分。此外,人们通过动物疾病模型研究发现MASP3 可能作为补体旁路途径异常相关疾病的新治疗靶点,从而为相关疾病提供新的治疗思路。本文旨在对MASP3 的编码基因、蛋白结构、生物学功能以及其在旁路途径功能异常相关疾病模型中的研究进展进行综述。     

HIV-1整合酶:艾滋病治疗的新靶点

目前,抗逆转录病毒的治疗虽然已经有了显著进展,但寻找价格低廉,活性更强的抗HIV药物仍在继续,以HIV pol基因的两个产物逆转录酶和蛋白酶为靶点,美国食品与药品管理局(FDA)批准了9种逆转录酶抑制剂和5种蛋白酶抑制剂作为临床抗艾滋病药物.目前对HIV的治疗主要是采取逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂合用的联合疗法.但此种方法不能完全清除病毒,停药后产生反跳,病情反复.HIV复制过程中还有另一个重要的酶一整合酶,使病毒基因组整合于宿主细胞染色体,病毒在体内长期潜伏.整合酶是HIV自身特有的酶,也是一个抗HIV药物设计的理想靶点.本文主要介绍HIV-1整合酶的结构,在病毒复制过程中的功能,以及整合酶抑制剂作为抗HIV药物设计靶点的研究进展.     

戊型肝炎病毒ORF3蛋白研究进展

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是戊型肝炎的病原体,是肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的惟一成员,无包膜、正义、单链RNA病毒,病毒基因组全长约7.2 kb,由3个开放阅读框ORF1、ORF2和ORF3组成[1],其中ORF1编码与病毒复制、转录相关的酶等非结构蛋白[2-3],ORF2编码660 aa的病毒衣壳蛋白[4],ORF3编码小分子的磷蛋白.ORF2蛋白是公认的病毒抗原,是病毒的主要结构蛋白,对其研究的比较透彻[5].近年来,科学家们对于ORF3蛋白的研究逐渐增多,发现ORF3是一个多功能蛋白,是病毒感染、释放所必需,并参与细胞内的信号转导调控等生物过程[6].     

HCV NS3丝氨酸蛋白酶及以其为靶位的抗感染研究进展

丙型肝炎病毒感染最显著的特征是慢性化，已经成为严重的社会公共卫生问题。目前治疗方法仅限于干扰素-利巴韦林联合使用，持续疗效有限而且副作用大，因此迫切需要寻找特异有效的抗病毒药物。HCV NS3基因编码的NS3蛋白具有丝氨酸蛋白水解酶、解旋酶和磷酸核苷酶活性，在病毒RNA复制和多聚蛋白前体的加工成熟中有着重要作用。因此，NS3丝氨酸蛋白酶的抑制剂是抗病毒的理想药物。本文就HCV NS3丝氨酸蛋白酶及以其为靶位的抗感染研究综述如下。     

HCV NS3丝氨酸蛋白酶及以其为靶位的抗感染研究进展

丙型肝炎病毒感染最显著的特征是慢性化,已经成为严重的社会公共卫生问题.目前治疗方法仅限于干扰素-利巴韦林联合使用,持续疗效有限而且副作用大,因此迫切需要寻找特异有效的抗病毒药物.HCV NS3基因编码的NS3蛋白具有丝氨酸蛋白水解酶、解旋酶和磷酸核苷酶活性,在病毒RNA复制和多聚蛋白前体的加工成熟中有着重要作用.因此,NS3丝氨酸蛋白酶的抑制剂是抗病毒的理想药物.本文就HCV NS3丝氨酸蛋白酶及以其为靶位的抗感染研究综述如下.