HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的作用

目的研究HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统作用。方法用5％高氯酸萃取兔胸腺组织,通过反相高效液相色谱进一步分离纯化蛋白,用Tricine-SDS-PAGE、AU-PAGE和Dot-blot进行鉴定。采用凝胶迁移阻滞试验（EMSA）检测HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的结合作用;平板菌落记数法检测TA系统激活或非激活条件下,菌体过表达重组HMGN2和对照组对细菌存活百分率的影响。结果HMGN2可阻滞mazEF基因的泳动速率,且随HMGN2浓度增加,阻滞作用增强。利福平激活TA系统,菌体过表达重组HMGN2后,与对照组比较细菌存活量减少约30％,有统计学差异。而头孢哌酮不能激活TA系统,过表达重组HMGN2组和空质粒组CFU％分别为70．2％、68．9％,两者无明显差异。结论HMGN2可加强mazEF系统介导的细菌程序性死亡;HMGN2对TA系统的作用也可能是其抗大肠埃希氏菌作用的机制之一。     

泌尿道致病性大肠埃希菌Ⅰ型PapG黏附素基因的扩增与分析

目的获得Ⅰ型黏附素代表菌株-泌尿道致病性大肠埃希菌（UPEC）J96 PapG全基因扩增片段并进行克隆子分析.方法设计合成一对可扩增Ⅰ型papG全长基因的PCR引物,采用长片段PCR扩增法获得该基因的扩增片段,以限制性内切酶酶解后克隆pUC18质粒载体.结果限制性酶谱、PCR和序列分析表明,所获得重组质粒pJG29中已带有Ⅰ型papG全长基因片段的克隆.结论所设计合成的引物和建立的PCR扩增法可用于大量获取并分析UPECⅠ型黏附素基因.     

致肾盂肾炎大肠埃希菌黏附素表达载体构建及表达产物抗原性检测

目的 构建致肾盂肾炎大肠埃希菌(UPEC)P菌毛黏附素PapG重组融合蛋白表达载体．检测该重组蛋白的免疫原性。方法 设计并合成一对P菌毛PapG黏附素结构基因的PCR扩增引物；筛选、鉴定重组质粒。以IPTG诱导PapG与GST重组融合蛋白表达．表达产物经亲和层析纯化后用Western blot分析。结果 成功地构建papG结构基因重组表达载体．所表达的重组蛋白相对分子质量约63kD．可为UPECP菌毛多克隆抗体所识别。结论 所获得的PapG-GST重组融合蛋白纯化产物保持了天然抗原性．可用于疫苗研制及其他免疫学研究。     

NS398对宫颈癌Hela细胞bcl-2表达的影响

目的 探讨NS398对宫颈癌Hela细胞生长及bcl-2基因和蛋白表达的影响.方法 用不同浓度的NS398(0、25、50、75和100μmol/L)处理宫颈癌Hela细胞不同时间,采用MTT比色法分析细胞生长抑制卒.用不同浓度NS398处理Hela细胞24h,RT-PCR检测COX-2和bcl-2 mRNA表达的变化,Western blot检测COX-2和bcl-2蛋白表达的变化.结果 随着NS398浓度及处理时间的增加.宫颈癌Hela细胞生长抑制率升高;随着NS398剂量的增加,COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平逐渐减少.结论 NS398可呈剂量和时间依赖性抑制Hela细胞的生长,呈浓度依赖性减少COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达.NS398可能通过抑制COX-2和bcl-2的表达,抑制宫颈癌Hela细胞的生长.     

HMGN2对肺炎克雷伯氏杆菌耐药性的影响

目的探讨HMGN2对肺炎克雷伯氏杆菌耐药性的影响。方法分离、纯化并鉴定兔胸腺组织HMGN2。用质粒提取试剂盒提取耐药肺炎克雷伯杆菌中的质粒pMG252,PCR扩增其耐药基因qnrA;凝胶阻滞实验检测HMGN2与耐药质粒pMG252及qnrA基因结合;用不同浓度的HMGN2刺激培养肺炎克雷伯氏杆菌,然后用试管二倍稀释法测定环丙沙星对其MIC值的改变,微量法测定细菌的生长曲线,检测HMGN2对耐药菌株耐药性的逆转效果;将重组HMGN2及耐药质粒pMG252转化到大肠杆菌DH5α中,检测重组HMGN2对细菌耐药性的影响。结果HMGN2可明显阻滞pMG252质粒及qnrA基因的泳动速率,且随HMGN2浓度增加,qnrA基因的泳动速率逐渐减慢;15μg／ml HMGN2与细菌共孵育后,环丙沙星对耐药肺炎克雷伯氏杆菌的MIC值明显下降,且该耐药株的生长与对照组和低剂量组相比明显的受到抑制;pET-32a-c（＋）-HMGN2重组表达质粒可时环丙沙星对大肠杆菌DH5μ的MIC值明显小于其对照组,下降到其1／16。结论HMGN2能有效逆转含耐药质粒pMG252的肺炎克雷伯氏杆菌等对喹诺酮类抗生素的耐药性。     

P53siRNA对肺腺癌细胞A549中HMGN2表达的影响

目的 探讨P53基因调节人肺腺癌细胞A549中HMGN2蛋白表达情况.方法 采用小分子干扰RNA(P53-siRNA)真核细胞转染人肺腺癌细胞株A549作为实验组P53-si,转染无荧光RNA的A549细胞为空白对照组con-si,未转染任何载体的A549细胞为正常对照组con.Western blot检测HMGN2和P53表达的变化.结果转染P53-siRNA的实验组A549细胞株中HMGN2蛋白表达下调,空白对照组和正常对照组A549细胞中HMGN2的表达均无明显变化;相对于正常对照组,HMGN2的表达率分别为:实验组56％,空白对照组88％(P＜0.01).结论 P53基因能下调人肺腺癌细胞中HMGN2的活性,参与调控HMGN2蛋白的表达,从而为P53基因参与调节HMGN2在小鼠发育过程的机制研究提供实验基础.     

蝌蚪提取液对Hela细胞的影响

观察浓度为1:50(V/V)的蝌蚪提取液处理培养的Hela细胞,可抑制Hela细胞生长,集落形成能力下降。随培养时间的延长,细胞内颗粒增多,贴壁能力降低,而对中国地鼠卵巢细胞却有刺激生长作用。提示:蝌蚪提取液是一种较好的抗癌制剂。     

CO2气腹环境对人宫颈癌 Hela细胞生长及卡铂敏感性的影响

①目的探讨体外模拟腹腔镜二氧化碳（ CO2）气腹环境对人宫颈癌Hela细胞生长的影响;CO2气腹环境作用后Hela细胞对卡铂敏感性的影响。②方法将体外培养的处于对数生长期的Hela细胞分为4组,即CO2组、卡铂组、CO2＋卡铂组及对照组。用CCK8法检测各组细胞的增殖活性;通过流式细胞仪PI染色分析细胞周期;Annexin V-FITC检测细胞早期凋亡率。③结果 CO2气体与卡铂间无交互作用（ P ＞0．05）;CO2处理组Hela细胞增殖抑制率明显下降（ P ＜0．01）;卡铂组与对照组、CO2＋卡铂组与CO2组比较,卡铂处理组He-la细胞增殖抑制率上升明显（ P ＜0．01）,并使肿瘤细胞停滞于S期,G1、G2期细胞明显减少,凋亡指数明显增加。④结论 CO2环境能促进人宫颈癌Hela细胞生长：卡铂对人宫颈癌Hela细胞生长有显著抑制作用;CO2环境作用后,人宫颈癌 Hela细胞对卡铂敏感性无明显变化。     

重组人HMGN2多克隆抗体的制备及应用

目的制备人高迁移率非组蛋白N2(HMGN2)多克隆抗体,并用于HMGN2的亚细胞定位分析。方法提取人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)总RNA,应用RT-PCR从其总RNA中分离HMGN2cDNA,以pGEX-1λT为载体,构建HMGN2基因大肠杆菌表达载体。应用GST亲合层析柱分离GST-HMGN2融合蛋白,将此融合蛋白免疫新西兰兔,获得抗血清经正辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化。用ELISA法检测HMGN2抗体,免疫细胞化学染色法分析HMGN2的亚细胞分布。结果经酶切产物电泳分析和DNA序列测定证明成功构建出HMGN2基因重组原核表达载体pGEX-1λT-HMGN2。转化大肠杆菌经异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得相对分子质量约35×103的GST-HMGN2融合蛋白。该融合蛋白免疫所得免疫血清经ELISA检测显示获得滴度为1∶2000的较高效价的兔抗人HMGN2多克隆抗体。并应用此抗体对THP-1细胞进行的免疫细胞化学染色显示,经LPS刺激后除细胞核外,胞浆亦明显着色。而且用ELISA法在细胞培养液亦检测到HMGN2。结论本实验成功制备出HMGN2特异多克隆抗体,免疫细胞化学分析初步证明在LPS刺激下HMGN2不仅分布于单核吞噬细胞核,还分布于细胞浆,并可释放到细胞外。     

Creation and anti-cancer potency in HeLa cells of a novel chimeric toxin,HMGNCIDIN, composed of HMGN2 α- helical domain and PE38 KDEL domain Ⅲ

Using targeted toxins is a promising approach for the therapy of cancer and autoimmune diseases, as well as other disorders/The high mobility group chromosomal protein N2 （HMGN2） is one of the most abundant and well-characterized classes of nonhistone nuclear proteins, which seems to function as architectural elements in chromatin.2 Recently our group isolated an antimicrobial polypeptide from human LAK cells and cervical mucus,     

RNA沉默HMGN5基因对肺癌A549细胞增殖的影响及意义

目的 通过RNA干扰技术(RNAi)沉默HMGN5基因,探讨其对肺癌A549细胞增殖的影响.方法 培养人肺癌A549细胞株,HMGN5基因合成慢病毒载体感染A549细胞,RT-PCR和Western blot检测A549细胞中HMGN5沉默率;设阴性对照组及RNA干扰组,MTT法检测A549细胞的增殖能力;Brdu法检测沉默HMGN5的表达;流式细胞仪检测其细胞周期.结果 与对照组比较,RNA干扰组HMGN5基因的mRNA及蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);A549细胞的增殖能力明显下降,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);细胞增殖率为29.70％,较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05);G1期细胞为53.50±0.30,高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用RNAi能够沉默HMGN5基因,人肺癌A549细胞增殖能力显著降低,HMGN5基因可能参与肺癌的发生、发展、增殖过程.     

赖氨匹林对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的研究赖氨匹林(aspisol)对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法取处于对数生长期的Hela细胞,实验分为4组:阴性对照组只加等体积的低糖DMEM培养液Hela细胞;实验组加入不同浓度的aspisol,使其终浓度分别为1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L。采用描计细胞生长曲线法检测细胞增殖状态;HE染色、AO/EB方法进行凋亡细胞形态学的观察。Annexin V-FITC/PI双染检测赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞凋亡情况;流式细胞术分析赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞周期的变化。结果与对照组比较,aspisol(1,5,10 mmol/L)可呈时间、浓度依赖性抑制Hela细胞的增殖;HE染色光镜下见Aspisol组细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。赖氨匹林(1,5,10mmol/L)作用24 h后诱导Hela细胞的早期凋亡率分别为(5.73±0.87)%、(19.11±2.86)%、(33.72±5.06)%,与对照组(0.46±0.69)%比较,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度依赖性。细胞周期检测显示赖氨匹林对Hela细胞有G0/G1期阻滞作用。结论 aspisol对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导其凋亡和改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期。     

重楼对宫颈癌细胞钙信号的影响

为探讨重楼对宫颈癌(Hela)细胞钙信号的影响及其抗癌作用机理。利用荧光染料Fura-2在细胞内能与游离钙结合，在一定波长光的激发下可发出荧光的特性，根据荧光的强度来检测游离钙浓度的变化，结果显示重楼可提高细胞内游离钙的浓度。     

LAK细胞对Hela细胞杀伤作用的初步探讨

IL-2诱导正常人 PBL 后,所产生的 LAK 细胞在体外对 Hcla 细胞的杀伤作用,以90u/ml 的 IL-2诱导 PBL 产生的 LAK 细胞对 Hela 细胞杀伤作用较明显。实验揭示出 LAK 细胞的作用比单独使用 IL-2效果好,而 IL-2与 LAK 细胞的联合作用,其效果更佳。     

JMJD2B、HPIP对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响

目的分析JMJD2B、HPIP对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响。 方法将Hela细胞分为si-NC组、si-JMJD2B组和si-HPIP组。实时荧光定量PCR检测宫颈癌细胞中JMJD2B、HPIP mRNA表达水平。Western blotting检测宫颈癌细胞和人正常宫颈上皮细胞JMJD2B、HPIP蛋白表达水平。CCK-8检测Hela细胞增殖能力。Transwell检测Hela细胞迁移和侵袭能力。 结果JMJD2B、HPIP蛋白在宫颈癌细胞中表达高于人正常宫颈上皮细胞(P＜0.05)。与si-NC组比较,si-JMJD2B组和si-HPIP组JMJD2B、HPIP mRNA和蛋白表达、细胞增殖、迁移细胞数量、侵袭细胞数量均明显减少(P＜0.05)。 结论JMJD2B和HPIP表达可能调节宫颈癌Hela细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为。