PLC对ADP诱导的兔血小板cAMP的影响

目的　测定磷酯酶C(phospholipaseC,简称PLC,下同)对ADP诱导的兔血小板cAMP的影响,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法　取家兔的PRP,除去红细胞,分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理,以ADP诱导激活,采用三氯醋酸法制备血小板cAMP,再用放射免疫分析法分别测定cAMP含量。结果　家兔血小板经生理盐水处理后的cAMP含量为 ( 20 16±0 91 ) pmol/109platelets,而经生理盐水、ASA668μmol·L-1、5、10、15、20和25UPLC·ml-1各组处理,并以ADP激活的血小板,测得的cAMP含量分别为 13 85±1 14, 16 27±0 36, 18 74±0 55,19 80±0 52, 20 49±0 43, 22 55±0 61和 24 24±0 85(pmol/109 platelets)。以生理盐水作为对照,ASA668μmol·L-1、5、10、15、20和 25UPLC·ml-1剂量组对激活状态下血小板cAMP的含量有增加的作用,增加率 (% )分别为17 47, 35 31, 42 96, 47 94, 62 82, 75 02。结论　PLC使得ADP激活后的兔血小板cAMP水平提高(P<0 01),且呈剂量依赖性,表明PLC具有提高血小板中cAMP水平的作用。这可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一。     

莪术二酮对ADP诱导的兔血小板聚集的抑制作用

莪术为传统的中药，具有行气破血、消积止痛等功效，其主要成分为莪术油和姜黄素类。莪术油具有消炎、止痛、活血化瘀等作用，为莪术的主要活性成分。莪术油主要含有莪术二酮、莪术酮、吉马酮等倍半萜类化合物。从已有的文献报道来看，对莪术油的药理作用研究较多，而对从莪术油中分离单一成分的研究较少。现采用比浊法测定莪术二酮对ADP诱导的免血小板聚集的抑制作用，以阐明莪术在传统的“行气破血”功效中的活性成分，为今后进一步开发新的药物提供试验依据。     

槲皮素一硫酸酯对凝血酶诱导的猪血小板聚集和肌动蛋白聚合的影响

槲皮素一硫酸酯对凝血酶诱导的猪血小板聚集和肌动蛋白聚合的影响＊刘文宋芝娟梁念慈佘戟１莫丽儿１（广东医学院医用生化研究所、１化学教研室，湛江５２４０２３）中国图书分类号Ｒ３３１．１４３；Ｒ９７３．２；Ｒ９７７．２９血小板激动剂如凝血酶、ＡＤＰ等诱导血小...     

磷脂酶C对ADP诱导的兔血小板IP_3水平的影响

目的测定磷酯酶C(PLC)对ADP诱导的兔血小板三磷酸肌醇(IP3)的影响,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法取家兔血除去红细胞制备血小板,血小板计数后分为8个组。第1组用生理盐水处理,第2组用ADP处理,第3组用ASP处理以ADP诱导激活,第4~8组分别用不同剂量的PLC处理并以ADP诱导激活。采用三氯醋酸法制备血小板IP3,再用放射免疫分析法分别测定IP3含量。结果家兔血小板经生理盐水处理后的IP3含量为0.29 pmol/108血小板,而经ADP处理后IP3含量为0.39pmol/108血小板。经ASP 668μmol.L-1、5、10、15、20和25 U PLC.ml-1各组处理,并以ADP激活的血小板,测得的IP3含量分别为0.19、0.08、0.15、0.25、0.04和0.18(pmol/108血小板)。ADP组比生理盐水组IP3有明显的提高,而ASP组、不同的PLC组比ADP组IP3有明显的降低(P<0.05)。结论PLC使得ADP激活后的兔血小板IP3水平下降,且无剂量依赖性,表明PLC具有降低血小板中IP3水平的作用,这可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一。     

小檗胺对人中性粒细胞PAF生成和PAF诱导的兔血小板聚集的抑制作用

本实验研究了双苄基异喹啉类生物碱小檗胺（Berbamine)对人中性粒细胞血小板激活因子（PAF）的产生及PAF引起的兔血小板聚集的影响，并与钙通道阻断剂维拉帕米进行比较，结果表明，小檗胺（50umol/L,100umol/L)和维拉帕米（10umol/L,100umol/L）预处理的人粒细胞，用A－23187攻击后，PAF的产生明显降低，小檗胺和维拉帕米也能抑制PAF（70pmol/L)引起的血小板聚集，其抑制作用呈剂量依赖性，本实验结果提示，小檗胺和维拉帕米对PAF生成及血小板聚集的抑制作用可能与阻断钙离子内流有关。     

白藜芦醇在体外对ADP诱导人血小板聚集的抑制作用及其机制

白藜芦醇(resveratrol，RESV)是一类广泛存在于葡萄、何首乌、花生等多种天然植物中的多酚类化合物。本研究观察RESV在体外对腺苷二磷酸(adenosine diphosphate，ADP)诱导健康志愿者血小板聚集、血小板膜结合纤维蛋白原(platelet membrane-bound fibrinogen，PFig)的抑制作用及其机制。应用血小板聚集仪、流式细胞仪及蛋白印迹技术(Western blotting)，研究RESV和磷脂酶Cβ抑制剂(phospholipase Cβ inhibitor，U73122)对ADP诱导的健康志愿者血小板聚集、PFig及血小板磷酸化磷脂酶Cβ3(phospho-phospholipase Cβ3，P-PLCβ3)和总磷脂酶Cβ3(total-phospholipase Cβ3，T-PLCβ3)蛋白表达的影响。与对照组相比，RESV(终浓度分别为25、50和100 μmol·L^-1)剂量依赖性地抑制ADP诱导的血小板聚集及Pfig、RESV与U73122对血小板聚集及PFig的抑制有叠加作用。RESV(终浓度为50 μmol·L^-1)还降低血小板P-PLCβ3蛋白的表达，降低血小板P-PLCβ3/T-PLCβ3的表达比率。RESV可能通过抑制健康志愿者血小板磷脂酶Cβ(phospholipase Cβ，PLCβ)的活性，降低了ADP诱导的血小板聚集及PFig，提示RESV有明确的抗血小板作用，具有新型抗血栓药物的研究前景。     

杨梅素抗血小板聚集的作用机理研究

杨梅素是一种黄酮类化合物，有抑制血小板聚集、降压等药理作用。杨梅素对胶原、花生四烯酸及PAF诱导的兔血小板聚集有抑制作用，而激动剂（胶原等）刺激血小板所导致的血小板形态的改变，可能与细胞骨架有关。血小板中与细胞骨架有关的蛋白质有多种，其中肌动蛋白含量丰富。血小板中的肌动蛋白以球形的肌动蛋白单体（G）和纤维形肌动蛋白微丝（F）两种形式存在。它们在Triton中不溶解，而F肌动蛋白是由单体G-肌动蛋白聚合而成，本课题利用Triton沉淀法研究杨梅素对活化血小板中F-肌动蛋白的影响，     

烟酰水杨酸对Collagen、ADP、AA诱导的兔血小板聚集的影响

目的观察烟酰水杨酸(NSA)对Collagen、ADP、AA诱导的兔血小板聚集的影响。方法用比浊法测定了NSA体外、体内对兔血小板聚集的影响。结果NSA能明显抑制体外、体内Collagen、ADP诱导的血小板聚集,体外最大抑制率分别为55.7%、61.3%,体内最大抑制率分别为42.2%、74.8%。NSA对AA诱导的兔血小板聚集没有影响。结论NSA具有抑制Collagen、ADP诱导的血小板聚集的作用。其抑制作用具有明显的量效关系。     

槲皮素单硫酸酯钠盐对凝血酶诱导的猪血小板聚集的抑制作用

目的:研究槲皮素单硫酸酯钠盐(SQMS)对凝血酶诱导的猪血小板聚集的抑制作用。方法:用比浊法测定血小板聚集。Fura 2-AM荧光法检测胞浆游离钙浓度([Ca~(2 )]_i)。用组蛋白ⅢS,[γ-~(32)P]ATP与蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)酶液一起温育的方法测定PKC的活性。用SDS-PAGE分离骨架蛋白。结果:SQMS对凝血酶诱导的血小板聚集有抑制作用。SQMS抑制凝血酶诱导的血小板胞外钙内流和胞内钙释放;SQMS也降低静息血小板[Ca~(2 )]_i。SQMS抑制血小板胞浆PKC的活性,但不影响胞膜PKC。SQMS对凝血酶诱导的血小板肌动蛋白聚合有强的抑制作用。结论:SQMS对凝血酶诱导的猪血小板聚集有抑制作用,其分子作用机制可能与其抑制血小板外钙内流,内钙释放,PKC的活性,和肌动蛋白聚合有关。     

PLC对人血小板GPIb的作用

目的 应用竞争性酶联免疫定量检测磷酯酶C(PLC)对人血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)量的变化,探讨用药后抑制血小板粘附作用的机制。方法 用竞争性酶联免疫药盒测定并绘制标准曲线图;取健康人血制备洗涤血小板,将其分为4组:①生理盐水组;②PLC 0.5 U组;③PLC 1.0U组;④PLC 2.0 U组,分别替代药盒中标准IgG(IgG-ST)进行实验,酶标仪上测OD_(492)值,共实验6人次,依据OD_(492)值在标准曲线图和Eocel软件求出GPIb的量及 用t值检测它们之间的相关性。结果 用生理盐水、PLC0.5 U、1.0 U和 2.0 U组的OD_(492)值和GPIb数量(ng)分别为0.768±0.078、1.103±0.118、1.367±0.102、2.055±0.453和134.669±13.144、101.838±9.879、82.632±5.354、73.183±14.740。PLC 1.0 U和2.0 U组与生理盐水组比差异有显著性(P<0.01),而其它各组之间比差异无显著性(P>0.05)。结论 PLC减少GPIb的量,从而抑制血小板粘附性,这也可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一。     

Platelet-released ADP stabilizes PAF-induced rabbit platelet aggregation by stabilizing intracellular calcium

ＰｌａｔｅｌｅｔｒｅｌｅａｓｅｄＡＤＰｓｔａｂｉｌｉｚｅｓＰＡＦｉｎｄｕｃｅｄｒａｂｂｉｔｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｂｙｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍ１ＹＩＦｕＸｉａｎ，ＧＵＯＺｈａｏＧｕｉ２（Ｌａｂ...     

血小板释放的ADP通过稳定细胞内钙浓度而稳定PAF诱导的兔血小板 …

AIM: To examine whether platelet-released adenosine diphosphate (ADP) would contribute to the stabilization of rabbit platelet aggregation induced by platelet activating factor (PAF). METHODS: Rabbit platelet aggregation induced by PAF was measured turbimetrically. ADP release from rabbit platelets stimulated by PAF was determined by HPLC. Intracellular Ca2+ was measured using Ca(2+)-sensitive fluorescent indicator Fura 2-AM. RESULTS: PAF > or = 1 nmol.L-1 induced full platelet aggregation, which did not deaggregate over 5 min after aggregation reached peak. Platelet aggregation was deaggregated in a concentration-dependent manner by subsequent addition of ADP scavenger ATP-diphosphohydrolase (apyrase) at 5-100 mg.L-1. PAF 3 nmol.L-1 stimulated release of ADP (29% vs 6% of control), and elicited a rapid rise in intracellular calcium ([Ca2+]i) which peaked at approximately 15 s. Then the [Ca2+]i gradually decayed from 585 +/- 80 nmol.L-1 within 100 s to a low level (364 +/- 82 nmol.L-1). Apyrase 100 mg.L-1, added 2 min after PAF, reduced [Ca2+]i to a lower level (171 +/- 29 nmol.L-1). CONCLUSION: Platelet-released ADP stabilizes PAF-induced rabbit platelet aggregation by stabilizing [Ca2+]i at elevated level.     

Enhancement of ADP-induced aggregation by 5-HT in rabbit platelets

目的：研究５ＨＴ对ＡＤＰ介导的血小板聚集反应的增强作用．方法：以透光法、图像法和受体结合法评价聚集反应、单细胞内钙和三磷酸肌醇的含量．结果：５ＨＴ（００３－３μｍｏｌ·Ｌ－１）浓度依赖性地引起ＰＲＰ的透光度降低（ＤＬＴ），电镜结果显示血小板变形的同时伴有颗粒中心化，无聚集和释放反应．Ｆｕｒａ２负载后，５ＨＴ升高［Ｃａ２＋］ｉ，９０秒达峰值，ＩＰ３一过性升高．ＡＤＰ同样引起ＤＬＴ，但可被５ＨＴ消除，呈浓度依赖性．ＡＤＰ的聚集反应和［Ｃａ２＋］ｉ动员则由于５ＨＴ预处理而升高．结论：５ＨＴ增强ＡＤＰ的聚集反应与５ＨＴ的细胞内钙动员及ＡＤＰ的外钙内流两者的叠加作用有关．     

Effect of endothelin 1 on the isolated human and rabbit platelet activation

Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ　１　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｈｕｍａｎ　ａｎｄ　ｒａｂｂｉｔ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎＬＩＵＱｕｅ；ＬＵＯＪｉａｎ－Ｋａｉ；ＨＵＷｅｎ－Ｓｈｕ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌ...