mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化

目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U9...     

白细胞介素-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用

 目的　探索白细胞介素（IL）-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用。方法　用TPA诱导白血病细胞系U937和HL-60向单核-巨噬细胞分化后,检测mda-7／IL-24及其选择性剪接体IL-24 delE5的表达。构建IL-24 delE5真核表达载体,稳定转染K562细胞。通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin-Ⅴ／PI检测及动物实验,观察IL-24 delE5对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期、凋亡及体内致瘤性的影响;同时与mda-7／IL-24进行比较。结果　在TPA诱导分化的U937和HL-60细胞中发现IL-24 delE5的表达。稳定转染IL-24 delE5的K562增殖及集落形成明显下降,与空载体相比,G0／G1期细胞比例由（24.46±3.99）%增至（42.69±3.04）%,细胞周期阻滞于G0／G1期,体内实验证实K562细胞移植瘤生长明显被抑制。与mda-7／IL-24相比,上述各实验结果差异均无统计学意义。结论　IL-24 delE5与mda-7／IL-24一样对人类白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用,该作用可能与IL-24 delE5所引起细胞周期G0／G1期阻滞有关。     

人mda-7/IL-24对淋巴瘤细胞Namalwa的抑制作用

目的:研究黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7,又称IL-24)对淋巴瘤细胞系Namalwa细胞的抑制作用。方法:用半定量RT-PCR方法检测10个造血系统恶性肿瘤细胞系(Namalwa、Raji、K562、NB4、U937、Ramous、CEM、KG1a、HL60、J6-1)中mda-7/IL-24的表达情况。用RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆mda-7/IL-24编码区,构建真核表达载体pTarget-IL-24。经测序鉴定后,用脂质体法转染Namalwa细胞,筛选稳定表达细胞株。转染细胞经RT-PCR和Western blotting证实mda-7/IL-24的表达。通过MTF法、集落形成试验、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验来评价mda-7/IL-24对肿瘤细胞增殖、生长特性、集落形成、凋亡情况、体内致瘤能力的作用。结果:10个造血系统恶性肿瘤细胞系中未检测到mda-7/IL-24的表达;转染重组质粒pTarget-IL-24的Namalwa细胞在mRNA与蛋白水平都有mda-7/IL-24的表达;稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞增殖活力以及集落形成能力与转染空载体的对照组相比明显下降(P<0.05);但是两者的凋亡率比较无统计学意义。裸鼠体内移植瘤实验结果显示稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞株的致瘤性明显低于转染空载体的对照组(P<0.05)。结论:mda-7/IL-24对来源于Burkitt淋巴瘤的Namalwa细胞系具有明显的增殖抑制作用,为Burkitt淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路。     

人mda-7/IL-24对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑制作用

摘 要 目的: 探索人黑素瘤分化相关基因-7（melanoma differentiation associated gene7，mda7；又称IL-24）对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑制作用。方法：用RTPCR法检测11个造血系统恶性肿瘤细胞系mda-7受体的转录情况。用脂质体转染法将构建的重组真核表达载体pTargetIL24转染K562细胞。以RTPCR和Western blotting方法检测转染的K562细胞mda7的表达情况；通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、AnnexinⅤ/PI检测mda7/IL24对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期和凋亡的影响；以裸鼠移植瘤模型观察mda-7对K562细胞移植瘤的治疗作用。结果：在11个造血系统恶性肿瘤细胞系（NB4、HL60、CEM、Namalwa、Jurkat、KG1a、U937、K562、Ramos、J61、HEL细胞）中没有检测到完整mda7受体的表达。转染mda7的K562细胞能显著表达mda-7mRNA及其蛋白；其与转染空载体和未转染的K562细胞相比，细胞增殖活力以及集落形成能力明显下降（P＜0.05），细胞周期阻滞于G0/G1期（P＜0.05），但细胞凋亡率没有明显变化。裸鼠体内实验证实了mda7/IL24明显抑制K562细胞移植瘤生长（P＜0.01）。结论：mda-7/IL-24对白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用，该作用与mda7/IL24引起细胞周期G0/G1期阻滞有关。     

骨髓成纤维样基质细胞系对急性髓细胞白血病细胞系增殖与分化影响的研究

目的：以急性髓细胞白血病（acute myeloid leukaemia,AML）细胞系为研究对象,观察正常人骨髓成纤维样细胞系（human bone marrow fibro—blastoid stromal cell line,HFCL）对急性单核细胞白血病细胞系U937、急性粒细胞白血病敏感细胞HL-60和多药耐药细胞HL-60／VCR增殖和分化的影响。方法：建立U937、HL-60和HL-60／VCR细胞与HFCL细胞的共培养模型,实验分对照组、直接接触组和transwell组。采用台盼蓝拒染法测定生长曲线;硝基四氮唑蓝（NBT）确定细胞分化;流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14和CD33细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化;west-ernblot检测增殖细胞核抗原（PCNA）和P-糖蛋白（P-gP）的表达。结果：与HFCL细胞共培养96h后,U937、HL-60和HL-60／VCR细胞的生长受抑,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用大于用tr-answell组,P〈0．01。同时发现AML细胞系与HFCL细胞共培养后,G0／G1期细胞比例均增高,而S期细胞均减少,P〈0．01;尤其是直接接触组CD11b和CD14表达也均增高（P〈0．01）,CD13和CD33变化不大,NBT阳性细胞轻度增高,且差异有统计学意义。Western blot检测结果显示,3种AML细胞系PCNA表达下调;以直接接触组为甚。提示介导着白血病细胞和骨髓基质细胞间的相互作用的整合素p1（VLA-4）和p2（LFA-1）,在HFCL细胞对AML细胞生长作用影响中起着不可忽视的作用。结论：HFCL对3种具有代表性的AML细胞系U937、HL-60和HL-60／VCR有增殖抑制和诱导分化作用,除了能抑制AML细胞的生长,抑制PCNA的表达,出现G0／G1期阻滞外,还能诱导其部分向单核细胞分化。     

MDA-7/IL-24对Burkitt淋巴瘤细胞的诱导分化作用

目的:研究黑色素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene 7,MDA-7)/IL-2对Burkitt淋巴瘤细胞的促分化作用并探讨其作用机制.方法:构建稳定过表达MDA-7/IL-24的人Burkitt淋巴瘤Raji和Daudi细胞株,MTS法检测稳定转染MDA-7/IL-24对Raji和Daudi细胞活力的影响;Transwell小室实验检测转染MDA-7/IL-24对Raji和Daudi细胞侵袭和迁移能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡水平及免疫表型;Western blotting技术检测转染MDA-7/IL-24对Raji和Daudi细胞表达分化相关蛋白Myb、BLIMP1及BCL-6的影响;建立裸鼠Raji细胞移植瘤模型,检测在体内环境中稳定转染MDA-7/IL-24对Raji细胞生物活性的影响.结果:过表达MDA-7/IL-24的Raji和Daudi细胞其增殖(P.＜0.05)、侵袭(P＜0.01)及迁移(P＜0.01)能力均明显下降,但凋亡细胞无明显增加(P＞0.05),表达CD45及CD138的水平均明显增加(P＜0.01),而表达CD10的水平明显下降(P＜0.01).过表达MDA-7/IL-24的Raji和Daudi细胞表达BLIMP1的水平明显增加(P＜0.01),而表达Myb及BCL-6的水平均明显减低(P＜0.01).MDA-7/IL-24过表达组裸鼠模型Raji细胞移植瘤质量明显低于对照组[(1.23±0.21)vs(1.96±0.24)g,P＜0.01].结论:转染MDA-7/IL-24可能通过诱导分化作用抑制Burkitt淋巴瘤细胞的生物活性.     

白细胞介素-24抑制K562细胞生长的机制

 目的　探讨白细胞介素-24（又称黑色素瘤分化相关基因-7,IL-24／mda-7）对白血病细胞系K562的周期阻滞作用机制。方法　利用基因芯片技术初步分析转染IL-24／mda-7与转染空载体的K562细胞之间基因表达差异,并以实时定量PCR验证;以Western blotting方法检测pRb的磷酸化水平。结果　转染IL-24／mda-7可使K562细胞的细胞周期相关基因p21WAF-1、BCCIP上调,cdk6、Smurf2下调,定量PCR证实了上述表达变化;IL-24／mda-7转染还可明显降低K562细胞pRb磷酸化水平。结论　IL-24／mda-7 可能通过调节细胞周期相关蛋白,即上调p21WAF-1、BCCIP,下调cdk6、Smurf2,使K562阻滞于G0／G1期,从而抑制细胞生长。     

人参茎叶总皂甙对人白血病细胞株的诱导分化作用

实验选用人参茎叶总皂甙(GSL)对人单核样白血病细胞株U937，早幼粒白血病细胞株HL-60进行了诱导分化作用的研究，结果表明：GSL对U-937细胞具有较强的诱导分化作用，形态及功能上均出现向单核细胞成熟分化的特征，并表现出分化后的细胞周期动力学的特征性变化。对HL-60细胞也有一定的诱导分化作用，但分化程度低于U-937细胞。     

抑瘤基因mda-7/IL-24 研究进展

 黑色素瘤分化相关基因-7(Melanoma differentiation-associated gene-7,mda-7)是一种肿瘤抑制基因,其定位于染色体的1q32位点,位于一群分泌IL-10,IL-19和IL-20细胞因子的基因群中,基于氨基酸的同源性预测蛋白质的结构、染色体的定位以及细胞因子样特性,mda-7被命名为IL-24 [ 1 ].mda-7 cDNA 编码一个206个氨基酸的蛋白质,分子质量约为23.8 kDa.通过Prosite 数据库分析发现mda-7/IL-24在第85,99和126位点存在N-糖基化,6个磷酸化位点(即位于101, 111和161位点的酪蛋白激酶Ⅱ; 88, 133 和 161位点的蛋白激酶C) 以及开始于101 位点的IL-10信号图形,     

过表达RbAp46基因对白血病细胞系U937增殖与分化的影响

目的 探讨过表达的RbAp46基因对白血病细胞系U937生物学特性的影响。方法 运用电穿孔介导的转基因技术, 在U937中建立稳定表达外源RbAp46基因的细胞株。用锥虫蓝拒染法判定细胞活力,细胞计数判定细胞生长速率。将处在对数生长期U937/RbAp46和U937/CMV各以2×105/ml浓度接种,加入TPA 50ng/ml,同时以培养液作为空白对照,培养72 h后收集细胞,流式细胞术测定细胞表面分化抗原CD11b的表达,RT-PCR分析p21WAF1/CIP1mRNA的表达,流式细胞术检测细胞周期分布情况。结果 转染RbAp46 的U937细胞的生长速率要比对照组低1倍左右。无论TPA诱导与否,RbAp46都能增加U937细胞表面CD11b的表达。相对于对照组,正常条件下,RbAp46转染的细胞p21WAF1/CIP1mRNA水平没有明显增加,细胞在G1期分布增加,但是经TPA诱导后,p21WAF1/CIP1mRNA水平的明显增加,细胞阻滞在G1期。结论 过表达的外源RbAp46基因能抑制U937的增殖,并为细胞分化准备了条件,使细胞更易于启动分化,p21WAF1/CIP1可能参与该过程。     

IL-24基因与肿瘤免疫治疗

白细胞介素-24(IL-24)又称为黑色素瘤分化相关基因-7(MDA-7),它主要由CD3+ T淋巴细胞和单核细胞表达,为分泌蛋白,由206个氨基酸组成,属于IL-10家族成员。IL-24是第1个被报道的具有白介素作用的肿瘤抑制分子,具有选择性的广谱抗肿瘤活性。IL-24基因通过抑制血管形成、激活生长抑制和DNA损伤基因(GADD)等信号传导途径,抑制肿瘤细胞生长和促进肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞无明显影响。INGN241是一种新开发的基因治疗制剂,对多种肿瘤具有抑制和治疗作用。     

IL-24基因与肿瘤免疫治疗

白细胞介素-24（IL-24）又称为黑色素瘤分化相关基因-7（MDA-7），它主要由CD3^＋T淋巴细胞和单核细胞表达，为分泌蛋白，由206个氨基酸组成，属于IL-10家族成员。IL-24是第1个被报道的具有白介素作用的肿瘤抑制分子，具有选择性的广谱抗肿瘤活性。IL-24基因通过抑制血管形成、激活生长抑制和DNA损伤基因（GADD）等信号传导途径，抑制肿瘤细胞生长和促进肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无明显影响。INGN241是一种新开发的基因治疗制剂，对多种肿瘤具有抑制和治疗作用。     

IL-24及其抗肿瘤作用的研究进展

通过消减杂交法从人黑色素瘤细胞中分离出来的黑色素瘤分化相关基因(melonoma differentiation associated gene 7,MDA-7),因其分子生物学特性与IL-10相似,故将其归入IL-10家族,并重新命名为IL-24.IL-24能选择性地促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管形成、增强放疗敏感性和免疫调节作用,而对正常细胞和组织无毒副作用.作为—种具有多种抗肿瘤功能的细胞因子,IL-24将成为肿瘤基因治疗的新武器.全文主要对IL-24抗肿瘤作用机制及在肿瘤治疗中的作用作一综述.     

过表达MDA-7/IL-24蛋白的亚细胞定位

目的了解标签蛋白GFP的位置对过表达的MDA-7/IL-24融合蛋白亚细胞定位的影响。方法分别构建在MDA-7/IL-24 cDNA的5'端和3'端带有GFP-tag的重组表达质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24,瞬时转染猴胚肾Cos7细胞,48h后用Hoechst 33258染核,在荧光显微镜下观察GFP-MDA-7/IL-24融合蛋白在Cos7细胞的亚细胞分布。结果测序表明重组质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24构建正确;分别转染Cos7细胞后,在氨基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光均匀分布于胞浆和胞核,但在羧基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光则分布于核膜外侧和胞浆。结论GFP-tag位置的不同对过表达融合蛋白MDA-7/IL-24的亚细胞定位有显著的影响。     

弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清IL-24及IL-6浓度检测 的临床意义

目的：探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者外周血清IL-24及IL-6的浓度及其临床意义。方法：收集43例DLBCL患者和33例正常对照人群外周血血清,ELISA法检测IL-24及IL-6的浓度,分析血清IL-24及IL-6浓度与患者临床病理指标之间的关系;并计算患者的国际预后指数（IPI）。结果：与正常对照组[IL-24浓度为（58.32±11.81）μg/mL,IL-6为（24.63±7.73）μg/mL]相比,DLBCL患者血清IL-24浓度[（42.18±8.48）μg/mL]明显降低（P<0.01）,而IL-6浓度[（45.29±12.71）μg/mL]明显升高（P<0.01）,且二者浓度呈明显负相关（r=-0.414,P<0.05）;同时血清IL-24及IL-6浓度与患者临床分期、肿瘤细胞侵犯骨髓状态及IPI均密切相关（P<0.01）,而与患者年龄及性别均无明显相关关系（P>0.05）。发生骨髓转移组患者血清中IL-24较正常对照组和未转移组均明显降低（P<0.01）,而IL-6浓度明显升高（P<0.01）;同时随着骨髓转移程度的增加,该趋势更为明显。IPI指数>2的患者,外周血IL-24浓度较IPI指数<2的患者明显降低,而IL-6浓度明显升高（P<0.01）。结论：DLBCL患者血清IL-24浓度较低及IL-6浓度较高可能是患者临床症状较重,预后较差的预测指标。血清IL-24及IL-6浓度测定可作为DLBCL的辅助诊断及监测指标,为临床治疗提供科学依据。     

IL-18基因转染人膀胱癌T-24细胞及其表达的研究

目的 :建立表达IL-18基因的人膀胱癌细胞系IL-18/T-24,探讨外源性IL-18基因对T-24细胞生长及其生物学性状的影响。 方法 :将插入IL-18基因的质粒,应用逆转录病毒载体LXSN感染ψ2(ecotropic)和PA317(amphotropic)两种包装细胞,通过药物G418筛选获得表达IL-18蛋白的PA317阳性细胞克隆,用IL-18/PA317培养上清转染T-24细胞,获得表达IL-18的IL-18/T-24细胞。分别用RT-PCR、ELISA和免疫组化染色分析IL-18/T-24细胞表达IL-18的mRNA和蛋白的水平,筛选出高表达IL-18的IL-18/T-24细胞克隆用于下层研究中;用流式细胞仪检测转染前后细胞的周期变化及细胞凋亡情况;用ELISA法检测IL-18/T-24细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN-γ的能力;采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法,测定转染前后细胞增殖及黏附能力的变化。 结果 :外源性IL-18基因转染的人膀胱癌细胞系IL-18/T-24,在mRNA水平和蛋白水平均可获得稳定表达;并且,IL-18/T-24细胞的培养上清可明显促进小鼠脾细胞分泌IFN-γ(P<0.01)。IL-18/T-24细胞与LXSN/T-24和T-24比较,细胞周期及细胞凋亡率无显著性差异(P>0.05),IL-18/T-24细胞的增殖率与LXSN/T-24和T-24细胞相比虽有所降低,但无显著性差异(P>0.05)。 结论 :建立的稳定表达IL-18的IL-18/T-24细胞,既保持了肿瘤细胞原有的免疫原性,又具有分泌IL-18的功能,引起较强的免疫应答反应。IL-18/T-24细胞与LXSN/T-24和T-24细胞相比较,其生物学性状无明显差异,可进一步用于肿瘤相关免疫基因治疗的研究。     

Stabilization of MDA-7/IL-24 for colon cancer therapy

Colon cancer is one of the most commonly diagnosed cancers in the United States. Recombinant MDA-7/IL-24 has showed its selective cytotoxicity against cancer cells, and Ad-mda7 (INGN-241) is currently under clinical investigation for solid tumors. Here, we investigated the expression of MDA-7/IL-24 in colorectal cancer (CRC) tissues from 202 patients. Compared with the adjacent mucosa, CRC tissues displayed significantly lower MDA-7/IL-24 levels. The MDA-7/IL-24 levels in CRC were significantly associated with patients’ survival rate in a 6-year period. These results indicate MDA-7/IL-24 level is both a diagnostic and prognostic biomarker for CRC, and support the role of MDA-7/IL-24 in the treatment of CRC. To elevate MDA-7/IL-24 level for colon cancer treatment, we successfully developed a small-molecule compound SC144 with the ability to up-regulate MDA-7/IL-24 expression via direct binding and stabilizing MDA-7/IL-24 in human colon cancer cells. Among the analogs tested, SC144 exhibited the highest cytotoxicity in a panel of colon cancer cell lines in a p53-independent manner, accompanied by cell cycle arrest in G₀/G₁ with downregulation of Cyclin D1 levels, and apoptosis induction with upregulation of cell surface-bound Fas/CD95. These results combined with our previous studies support the anticancer role of MDA-7/IL-24 as well as the clinical development of SC144 for colon cancer treatment.     

IL-24的生物学特性及其抗肿瘤作用机制

目前研究显示,IL-24是惟一既具有抑制肿瘤细胞生长和血管形成又具有免疫刺激作用的细胞因子.其抑制作用不依赖p53、Rb和p16等抑癌基因,对正常细胞没有影响,现已成为肿瘤治疗研究的新热点.