紫杉醇对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的观察紫杉醇对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法取对数生长期人肝癌HepG2细胞,分别置入5、10、20 nmol/L紫杉醇共同培养48 h（实验组）,另设阴性对照组。采用MTT法测定细胞增殖活性;Ho-echst33342荧光染色法观察紫杉醇处理后细胞形态的变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带;免疫组织化学法检测细胞中凋亡相关蛋白cFLIP、Survivin、Caspase-3的表达。结果紫杉醇浓度分别为5、10、20 nmol/L时,细胞增殖活性分别为0.51±0.02、0.49±0.05、0.38±0.09,与阴性对照组（0.61±0.07）比较P〈0.05或〈0.01;荧光显微镜观察可见典型的细胞凋亡形态学改变,以20 nmol/L紫杉醇作用最明显;DNA琼脂糖凝胶电泳显示,实验组细胞均可见典型的＂梯状＂条带;与阴性对照组比较,实验组能显著抑制cFLIP、Survivin蛋白的表达,促进Caspase-3蛋白的表达（P〈0.05或〈0.01）。结论紫杉醇可能通过下调cFLIP、Survivin蛋白的表达及上调Caspase-3蛋白的表达诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

不同浓度雌二醇对去卵巢小鼠T淋巴细胞凋亡的影响及作用机制

目的 研究不同浓度雌二醇(E2)对去卵巢小鼠脾脏T淋巴细胞凋亡的影响并探讨其作用机制.方法 分离出小鼠脾脏T淋巴细胞,分为10组,分别为青年组、假手术组、去卵巢对照组、去卵巢+E2(10-11mol/L)组、去卵巢+E2(10-10mol/L)组、去卵巢+E2(10-8mol/L)组、去卵巢+E2(10-6mol/L)组、去卵巢+E2(10-10mol/L)+雌激素受体拮抗剂IC1182 780(10-7mol/L)组、去卵巢+E2(10-10mol/L)+1-甲基-4-苯基-四氢吡啶(MPP,10-6mol/L)组、去卵巢+E2(10-10mol/L)+四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC,10-6mol/L)组.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,Westernblot方法检测各组细胞雌激素受体(ER)α、ERβ、Bax、Bcl-2蛋白表达及细胞核中P65蛋白水平.结果 去卵巢对照组细胞凋亡率为(19.4±2.5)%,高于青年组(14.6±2.4)%和假手术组(14.5±2.3)%,Bcl-2、核内P65蛋白水平分别为0.25±0.05、0.09±0.01,低于青年组(0.40±0.07、0.15±0.02)和假手术组(0.38±0.05、0.15±0.02),均P<0.01;去卵巢+E2(10-10mol/L)组凋亡率为(16.6±1.8)%,低于去卵巢对照组(P<0.05),Bel-2及核内P65蛋白水平高于去卵巢对照组(P<0.01),而去卵巢+E2(10-8mol/L,10-6mol/L)组凋亡率高于去卵巢对照组(分别为P<0.05、P<0.01).去卵巢对照组ERα、ERβ蛋白水平分别为0.23±0.01、0.22±0.03,低于青年组(0.27±0.02、0.29±0.04)和假手术组(0.28±0.03、0.29±0.02),去卵巢+E2(10-11mol/L、10-10mol/L、10-8mol/L)组ERα、ERβ蛋白水平均高于去卵巢对照组,而去卵巢+E2(10-mol/L)组(0.09±0.01、0.14±0.02)低于去卵巢对照组(均P<0.01).去卵巢+E2(10-10mol/L)+IC1182 780组及去卵巢+E2(10-10mol/L)+PDTC组凋亡率与去卵巢对照组差异无统计学意义,去卵巢+E2(10-10mol/L)+MPP组凋亡率与去卵巢+E2(10-10mol/L)组比较,差异无统计学意义.结论 去卵巢小鼠T淋巴细胞凋亡增多,E2对去卵巢小鼠T淋巴细胞的凋亡呈剂量依赖的双相调节作用,生理范围内可部分逆转去卵巢小鼠T淋巴细胞凋亡,而超过生理范围则增加其凋亡.生理剂量E2可能通过ERβ及核因子-kB途径抑制去卵巢小鼠的T淋巴细胞凋亡.     

曲古霉素A对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的作用及机制

目的探讨曲古霉素A（TSA）对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的影响及机制。方法用AnnexinV-FITC和PI进行双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TSA对食管癌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果 1.0μmol/L的TSA诱导EC9706细胞凋亡率增加（P〈0.05）,且呈浓度依赖性;0.5μmol/L的TSA作用48 h后细胞凋亡率增加（P〈0.05）,呈时间依赖性。TSA处理的EC9706细胞Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;TSA诱导EC9706细胞caspase-8及caspase-9裂解活化,且随作用时间延长逐步升高。结论一定量的TSA可以诱导EC9706细胞凋亡,凋亡原因与Bax表达增强、Bcl-2减少以及凋亡细胞中caspase-8及caspase-9介导的caspase-3活化有关。     

siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的研究siRNA干扰β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞（HSC）增殖和凋亡的影响。方法将化学合成的siRNAβ-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照;采用逆转录-聚合酶链反应和Western blotting检测细胞β-Catenin表达;采用Western blotting法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞凋亡。结果以不同浓度的β-Catenin SiRNA转染HSC-T6细胞后,β-Catenin mRNA水平比阴性对照组分别下调了51.3±3.6%、85.7±6.8%和94.5±7.5%（P均〈0.01）,比空白对照组分别下调了50.5±3.4%、86.1±6.2%和93.7±7.2%（P均〈0.01）;β-Catenin蛋白表达被抑制了56.43±2.88%（P〈0.01）;Ⅰ和Ⅲ型胶原表达分别被抑制了46.58±3.46%（P〈0.01）和50.48±3.72%（P〈0.01）;细胞增殖明显被抑制,最大抑制率达到44.8±2.8%（P〈0.01）;细胞凋亡增加达28.6%（P〈0.05）。结论 siRNAβ-Catenin能高效抑制HSC-T6细胞β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路,从而抑制HSC-T6细胞增殖,促进凋亡,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力。     

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢雌激素受体、caspase-3及细胞凋亡率的影响

目的探讨益坤宁对围绝经期大鼠卵巢雌激素受体(ER)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3及细胞凋亡率的影响。方法选取30只13～14月龄雌性Wistar大鼠和10只5月龄且有规律动情周期的雌性Wistar大鼠。将30只13～14月龄雌性大鼠制备围绝经期大鼠模型,并采用随机数字表法分为模型组(10只)、替勃龙片(利维爱)组(10只)、益坤宁组(10只),将5月龄的大鼠纳入对照组(10只)。检测各组大鼠卵巢中的细胞凋亡率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠卵巢中caspase-3、ERα、ERβmRNA的表达,采用蛋白印迹法检测caspase-3、ERα、ERβ蛋白的表达。结果益坤宁组、利维爱组、对照组细胞凋亡率显著低于模型组(P0.05);益坤宁组、利维爱组、对照组细胞凋亡率两两比较差异无统计学意义(P0.05)。益坤宁组、利维爱组、对照组caspase-3 mRNA及蛋白表达显著低于模型组,ERα、ERβmRNA及蛋白表达显著高于模型组(P0.05),益坤宁组、利维爱组caspase-3 mRNA及蛋白表达、ERαmRNA、ERβmRNA均显著高于对照组(P0.05)。结论中药益坤宁能下调caspase-3表达,降低细胞凋亡率,上调ERα、ERβ表达,这可能是其治疗围绝经期综合征的作用机制之一。     

survivin反义寡核苷酸转染肝癌细胞可诱导caspase-3活化

目的:观察survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,AS ODN)诱导肝癌细胞凋亡的可能途径。方法:培养survivin表达阳性的肝癌细胞株SMMC-7721。设计合成特异性靶向survivin的反义寡核苷酸。将SMMC-7721细胞接种于6孔培养板内,分为6组:①空白对照组;②脂质体转染对照组;③正义链转染对照组;④200nmol/L AS ODN转染组;⑤400nmol/L AS ODN转染组;⑥600nmol/L AS ODN转染组。作用20小时后收获各组细胞,并进行后续实验:①倒置显微镜下观察细胞形态变化;②western blot法检测各组细胞survivin蛋白的表达情况;③流式细胞术检测细胞增殖和凋亡指数;④比色法检测各组细胞caspase-3的活性变化。结果:①AS ODN转染组细胞survivin表达减弱,以600nmol/L转染组最为明显,各对照组survivin蛋白表达无明显改变;②AS ODN转染组细胞形态出现变圆、折光增强、漂浮、细胞碎片形成等变化,而各对照组细胞生长良好;③各AS ODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以600nmol/L转染组最为明显,而各对照组间差异无显著性意义(P>0.05);④各AS ODN转染组细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05),以600nmol/L转染组最为明显,而各对照组间差异无显著性意义;⑤在各AS ODN转染组中,可见到不同程度的caspase-3的活化,而对照组细胞内无明显的变化。结论:survivin AS ODN转染能下调survivin蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,其作用途径可能涉及抑制survivin表达,诱导caspase-3活化,启动凋亡信号传导。     

miR-363靶向调控E2F3表达影响HepG2细胞增殖和凋亡研究*

目的 探讨微小RNA-363（miR-363）靶向调控E2F转录因子3（E2F3）的表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养HepG2细胞,采用Lipofectamine法将miR-363抑制剂或其阴性对照转染到HepG2细胞,继续培养48 h,收获细胞,采用四噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖率,使用流式细胞术法检测细胞凋亡率,采用实时荧光RT-PCR法检测HepG2细胞miR-363 mRNA水平,采用Western Blot法检测HepG2细胞E2F3、BAX和Caspase-3蛋白表达水平。结果 对照组HepG2细胞增殖率为（96.4±9.7)%,显著高于抑制剂处理组【（72.3±6.5）%,P<0.05】,凋亡率为（8.2±1.4）%,显著低于抑制剂处理组【（9.7±0.8）%,P<0.05】;对照组HepG2细胞miR-363 mRNA相对水平为（1.0±0.1）,显著高于抑制剂处理组【（0.6±0.2）,P<0.05】,E2F3蛋白表达量为（1.0±0.1）,显著高于抑制剂处理组【（0.6±0.1）,P<0.05】,而对照组HepG2细胞Bax和Caspase-3蛋白表达量分别为（0.4±0.0）和（0.5±0.1）,均显著低于抑制剂处理组【（0.6±0.1）和（0.7±0.0）,P均<0.05】。结论 miR-363可靶向调控E2F3的表达,抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡。本研究结果为肝癌靶向治疗提供了一定的理论依据。     

雌激素受体β过表达对大肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的观察雌激素受体β（ERβ）过表达对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法以脂质体介导的ERβ基因转染SW480细胞,G418筛选阳性克隆（SW480-C1-ERβ）。RT—PCR及WesternBlot鉴定ERβ的过表达。以正常SW480细胞和转染了空质粒的SW480细胞（SW480-pEGFP—C1）作为对照,在无雌激素或有雌激素作用的条件下,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量RT—PCR方法检测凋亡相关基因survivin和Bax表达。结果SW480和SW480-pEGFP—C1细胞中ERβ mRNA和蛋白表达较低,而稳定转染的SW480-C1-ERβ细胞中ERβmRNA和蛋白表达明显增加。在有或无雌激素作用的条件下均可发现,与SW480细胞或SW480-pEGFP—C1细胞比较,SW480-C1-ERβ细胞增殖速度减慢,凋亡率明显增高,survivin表达减低,Bax表达增高;在SW480-C1-ERβ细胞中,有雌激素作用者较无雌激素作用者以上变化更明显。结论ERβ过表达可以同时以配体非依赖性和配体依赖性的方式抑制细胞增殖和增加细胞凋亡,可能与调控凋亡相关基因survivin和Bax表达有关。     

蟾蜍灵联合顺铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨蟾蜍灵联合顺铂对舌鳞状细胞癌（以下简称舌鳞癌）Tca8113细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法 培养人舌鳞癌Tca8113细胞株,取对数期细胞分为对照组、蟾蜍灵组、顺铂组、联合组。对照组加入RPMI 1640培养基;蟾蜍灵组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的蟾蜍灵;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/m L的顺铂;联合组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的蟾蜍灵后按浓度对应加入2.5、5、10、20、40μg/m L的顺铂;MTT法检测各组细胞增殖抑制率,计算抑制细胞增殖50%的药物浓度（IC50）及联合指数（CI）。根据蟾蜍灵与顺铂48 h时的IC50选择三个药物组相应浓度亚组,即蟾蜍灵40 nmol/L组（蟾蜍灵亚组）,顺铂10μg/m L组（顺铂亚组）,蟾蜍灵40 nmol/L、顺铂10μg/m L组（联合亚组）,流式细胞术分析各亚组细胞凋亡情况,Western-Blot法检测各亚组Bax、Bcl-2、Caspase-3、细胞外调节蛋白激酶（Erk）及其磷酸化细胞外调节蛋白激酶状态（P-Erk）的表达。结果 与对照组相比,蟾蜍灵组、顺铂组、联合组细胞增殖受到抑制,且联合组增殖抑制率高于蟾蜍灵组与顺铂组,并呈时间-剂量依赖关系（P均〈0.05）。联合组联合指数（CI）均小于1。联合亚组细胞凋亡率高于蟾蜍灵亚组与顺铂亚组,三组与对照组相比,P均〈0.05。蟾蜍灵亚组、顺铂亚组、联合亚组Bax、Caspase-3蛋白表达高于对照组,其中联合亚组高于蟾蜍灵亚组和顺铂亚组;三个药物亚组P-Erk蛋白表达均低于对照组,其中联合亚组低于蟾蜍灵亚组和顺铂亚组;联合亚组Bcl-2表达低于对照组及蟾蜍灵亚组和顺铂亚组（P均〈0.05）。结论 蟾蜍灵与顺铂单用或联合应用均可抑制Tca8113细胞增殖,促进其凋亡,联用效果更强;其作用机制可能与调节细胞凋亡相关蛋白表达、抑制Erk信号通路有关。     

雌激素抑制内质网应激引起的血管内皮细胞凋亡及机制

目的通过建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内质网应激(ERS)的细胞模型,研究雌激素抑制内质网应激引起的凋亡的信号传导机制,以探讨雌激素对心血管的保护机制。方法分别用10μmol/L的衣霉素(TM)或2 mmol/L的二硫苏糖醇(DTT)诱导HUVEC,建立内质网应激细胞模型,提前给予10-8mol/L的17-β雌二醇(E2)预处理1 h,用Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)判断模型是否建立成功,并探索E2对内质网应激的作用。检测内质网应激的三条主要信号通路蛋白的变化,上调最显著的为内质网应激最主要的信号通路。Western blot检测内质网应激凋亡蛋白C/EBP-同源蛋白(CHOP),Hochest染色检测细胞凋亡率,探索E2对内质网应激凋亡的作用。添加E2受体拮抗剂ICI182780(ERα、ERβ拮抗剂及GPER激动剂)和G15(GPER拮抗剂)后检测内质网应激最主要通路蛋白表达量的变化,探索雌激素受体在其抑制内质网应激中的作用。添加E2受体后信号通路阻断剂,检测雌激素抑制内质网应激的过程中活化其受体后激活的最主要受体后信号通路。结果 TM/DTT组GRP78的表达量显著上调,内质网应激三条信号通路中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)信号通路上调最明显,而TM/DTT+E2组上调显著回复。TM/DTT组CHOP的表达量显著上调且细胞凋亡率显著增加,而TM/DTT+E2组上调明显回复,凋亡细胞减少。E2有显著抑制p-PERK/PERK上调的作用,而E2的保护作用可分别被ICI182780和G15阻断,同时添加ICI182780和G15时阻断作用最显著。分别添加信号通路阻断剂后,E2抑制pPERK/PERK上调的作用均减弱,其中以磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)通路阻断剂的作用最显著。结论 E2可抑制TM/DTT诱导的HUVEC内质网应激。p-PERK/PERK通路可能为TM/DTT诱导的HUVEC内质网应激最主要的信号通路。E2可抑制过度内质网应激引起的细胞凋亡。E2受体在E2抑制内质网应激凋亡的作用中起重要作用。E2受体激活包括PI3K-蛋白激酶B(PKB/Akt)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38-丝裂原活化蛋白激酶(p38-MAPK)在内的信号通路快速起到抑制内质网应激的作用,其中PI3K-Akt通路可能为最主要的通路。雌激素通过抑制PERK信号通路引起的内质网应激凋亡,保护血管内皮细胞,其抑制内质网应激的机制主要为活化的雌激素受体激活PI3K/Akt通路。     

雌激素受体α和β及孕激素受体在胃癌中的表达及意义

运用Picture^TM-PV6000免疫组化技术检测48例胃癌及癌旁组织中雌激素受体α（ERα）和β（ERβ）、孕激素受体（PR）的表达。结果发现ERα和PR阳性染色只在细胞核内，在癌组织中表达阳性率分别为33．3％和29．2％。而癌旁组织均无表达，P〈0．001，ERβ主要表达在细胞核内。在癌组织和癌旁组织表达阳性率分别为70．8％和72．9％，P〈0．05。PR表达与ERα有高度相关性（P〈0．01）。而与ERβ无相关性。ERα和ERβ、PR三者共同表达阳性率18．75％，明显高于ERα、PR共表达（2．08％）或ERβ、PR共表达（6．25％），P〈0．01。Borrmann分型Ⅲ＋Ⅳ型（浸润型癌）者ERα阳性率（42．4％）显著高于BorrmannⅠ＋Ⅱ型（局限型癌）者（13．3％）。P〈0．05；有淋巴和远处转移者阳性率显著高于无转移者（P〈0．05）IERα和孕激素受体在印戒细胞癌、黏液腺癌、低分化腺癌等分化低的胃癌中表达较高，在中、高分化胃癌中表达较低。但无显著差异，与年龄、性别、肿瘤大小、部位和浸润深度无明显相关性。认为ERα、ERβ及PR在胃癌中均有表达，ERβ占优势IERα在胃癌中表达高于癌旁组织。并与胃癌Borrmann分型、淋巴和远处转移相关。ERα、ERβ及PR阳性胃癌是性激素依赖性肿瘤，可行内分泌治疗，并应针对ERα和ERβ的不同表达选择药物。     

雌激素对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的 观察17β-雌二醇(E2)及肿瘤坏死因子(TNFα)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响.方法 将HUVEC分为4组,空白对照组、TNFα(40 μg/L)组、TNFα(40 μg/L)加E2(1 μmol/L)和E2(10 μmol/L)组,各组细胞经维持液培养48 h使细胞生长同步,加入相应药物培养24 h后收获细胞.采用免疫组化方法测定bcl-2蛋白表达及流式细胞仪测定细胞凋亡发生百分率.结果 TNFα诱导的细胞凋亡发生率较正常对照组明显增多(P＜0.001),bcl-2蛋白表达少,DNA直方图上可见高大的凋亡峰,而雌激素干预后凋亡发生率明显降低(P＜0.001),bcl-2蛋白表达增加.结论 E2可增加bcl-2蛋白的表达,抑制TNFα诱导的人内皮细胞细胞凋亡的发生率,维持内皮细胞结构和功能的完整,可能为其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

促红细胞生成素预处理在心肌缺氧复氧损伤中对凋亡相关基因表达影响的研究

目的：观察促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）预处理在大鼠心肌缺氧复氧损伤（hypoxia/reoxygenation,H/R）中的抗凋亡效应以及对凋亡相关基因bcl-2及bax表达的影响。方法：Wistar成年雄性大鼠60只,分为2组,分别为对照组,EPO预处理组（EPO组）,每组30只,EPO组大鼠经腹腔注射5000U/kg重组人促红细胞生成素（Recombinant human erythropoietin,RHuEPO）,对照组注射同体积生理盐水。2组各15只大鼠于给药24h后,检测各项指标,其余15只大鼠置于常压缺氧环境中（O27%）12h后,移至常压常氧环境中2h,予H/R损伤,之后采取心肌标本,DNA末端转移酶标记法（TUNEL法）检测心肌细胞凋亡,免疫组化检测凋亡效应酶胱天蛋白酶-3（caspase-3）、凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2）及B细胞淋巴瘤/白血病相关x蛋白（Bcl-associated x protein,bax）蛋白表达水平,计算bcl-2/bax比值。结果：H/R损伤前2组心肌细胞凋亡率,caspase-3以及bax蛋白表达水平无显著性差异（P〉0.05）,EPO组bcl-2蛋白表达水平、bcl-2/bax比值显著高于对照组（P〈0.01）。H/R损伤后2组心肌细胞凋亡率,caspase-3、bax及bcl-2蛋白表达水平显著高于损伤前（P〈0.01）,而bcl-2/bax比值显著低于损伤前（P〈0.01）,EPO组的心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达水平显著低于对照组（P〈0.05,P〈0.01）,而bcl-2蛋白表达水平以及bcl-2/bax比值显著高于对照组（P〈0.05,P〈0.01）,2组bax蛋白表达水平差异无显著性（P〉0.05）。结论：EPO预处理在心肌H/R损伤中具有显著的抗凋亡效应;这一效应与其上调抗凋亡基因bcl-2的表达有关。     

右美托咪定联合Tol样受体4抑制剂对缺氧复氧心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制

目的探讨右美托咪定(DEX)联合Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242对缺氧复氧(H/R)心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制。方法心肌细胞H9C2分为对照(Con)组、H/R组(H/R损伤)、DEX组(1.0μmol/L DEX,再行H/R损伤)、TAK-242组(30μmol/L TAK-242,再行H/R损伤)和DEX+TAK-242组(30μmol/L TAK-242及1.0μmol/L DEX,再行H/R损伤处理)。各组细胞复氧培养6 h后,采用MTT法、流式细胞仪、试剂盒、酶联免疫吸附法检测细胞增殖、凋亡、乳酸脱氢酶(LDH)释放率、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的caspase-3(cleaved caspase-3)、TLR4和核因子B p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果五组细胞凋亡率、LDH释放率、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平、IL-1β、TNF-α含量比较差异均有统计学意义(F=316.938、330.004、839.933、169.750、378.365、476.535、298.527、99.219、293.498,P<0.05)。与Con组相比,H/R组细胞的凋亡率、LDH释放率、Bax、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平、细胞上清液中IL-1β和TNF-α含量均明显升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(均P<0.05)。与H/R组相比,DEX组、TAK-242组和DEX+TAK-242组的细胞凋亡率、LDH释放率、Bax蛋白、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白、IL-1β、TNF-α的表达水平均明显降低,Bcl-2蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。与DEX组、TAK-242组相比,DEX+TAK-242组的细胞凋亡率、LDH释放率、Bax、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白表达、IL-1β、TNF-α表达水平更低,Bcl-2蛋白的表达更高(均P<0.05)。结论DEX和TAK-242联合可协同抑制H/R引起的心肌细胞凋亡和炎症反应,其作用机制可能与协同抑制TLR4/NF-κB通路有关。     

过表达白血病相关蛋白16基因对前列腺癌ALVA41和DU145细胞增殖的影响

目的探讨过表达白血病相关蛋白16（LRP16）基因对人前列腺癌ALVA41和DU145细胞增殖的影响及其发生机制。方法2004—04～2005—10于解放军总医院用下列方法检测：（1）构建LRP16真核表达载体（peDNA3．1-LRP16）并与对照空载体（pcDNA3．1）分别转染ALYA41和DU145细胞，将G418筛选获得的表达外源LRP16基因以及空载体的4组细胞（A16、A3．1、D16、D3．1）继续传代培养。（2）用四氮唑蓝染色（MTT）法测定并比较各组细胞的生长曲线。（3）提取两种细胞的总RNA，通过RT—PCR方法测定雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）和雄激素受体（AR）在两种细胞中的表达。结果（1）LRP16过表达促进DU145细胞的生长，D16组在24、48、72、96和120h的细胞生长倍数分别是对照组（D3．1）的1．03倍（P〉0．05）、1．10倍（P〈0．05）、1．13倍（P〈0.01）、1．63倍（P〈0．01）和1．55倍（P〈0．01）。（2）LRP16过表达对ALVA41细胞的生长无影响，A16组在24、48、72、96和120h的细胞生长倍数分别是对照组（A3．1）的0．998、1．040、0．944、1．018和1．036倍（P值均〉0．05）。（3）ERα和ERβ在ALVA41、DU145两种细胞中均有表达。AR在ALVA41细胞中有表达，而在DU145细胞中无表达。结论过表达LRP16基因促进前列腺癌DU145细胞生长，但是其机制可能不是直接通过AR发挥作用。     

PCa组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡观察

目的 观察前列腺癌（PCa）组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡情况。方法 体外培养人PCa细胞株（PC3细胞和DU145细胞），分别转染Mfn2过表达质粒、空白载体质粒及不转染质粒，PC3细胞分别记为A、B、C组，DU145细胞分别记为D、E、F组。CCK-8实验检测各组细胞OD值，细胞集落形成实验测算各组细胞集落数目，以OD值和细胞集落数目表示细胞增殖能力。细胞划痕实验测算各组细胞迁移率，以细胞迁移率表示细胞迁移能力。Transwell实验测算各组细胞侵袭数目，以细胞侵袭数目数表示细胞侵袭能力。流式细胞术测算各组细胞凋亡率，Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、caspase-3及PI3K/AKT通路相关蛋白（p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT）。结果 PCa、癌旁组织Mfn2 mRNA相对表达量分别为0.36±0.32、0.72±0.35，两者比较，P<0.05。与同组24 h比较，A、B、C组48和72 h的OD值增加（P均<0.05）；与同组48 ...     

去甲肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞转化生长因子β1表达的影响

目的探讨去甲肾上腺素对人THP-1源性巨噬细胞转化生长因子β1表达的影响。方法不同浓度的去甲肾上腺素（10pmol/L～10μmol/L）作用THP-1源性巨噬细胞24h,运用逆转录多聚酶链反应检测转化生长因子β1mRNA的表达,酶联免疫吸附试验检测转化生长因子β1蛋白的表达。结果100nmol/L、1μmol/L及10μmol/L去甲肾上腺素引起巨噬细胞中转化生长因子β1mRNA水平分别下降9.3%（P〈0.05）、39.5%（P〈0.01）和47.8%（P〈0.01）,1μmol/L及10μmol/L的去甲肾上腺素作用于THP-1巨噬细胞其细胞上清中转化生长因子β1蛋白含量分别下降24.7%（P〈0.01）和32.8%（P〈0.01）。结论应激浓度的去甲肾上腺素能降低THP-1源性巨噬细胞转化生长因子β1基因的表达。     

腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的实验研究

背景：X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）是新近鉴定的肿瘤抑制基因,在许多人类恶性肿瘤中低表达甚至不表达。目的：研究Ad5/F35腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的作用及其可能机制。方法：构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,分别按不同感染复数（MOI）在同一作用时间点感染人肝癌细胞株SMMC7721。以荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测XAF1mRNA和蛋白表达;以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞增殖率;以Annexin V-FITC/PI双染法和原位末端标记TUNEL法检测细胞凋亡率;以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达。结果：Ad5/F35-EGFP感染48h,MOI为2.0时,92%以上的SMMC7721细胞表达绿色荧光蛋白。Ad5/F35-XAF1感染48h后,SMMC7721细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达增高,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡剂量依赖性地增多,并伴随凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的裂解。结论：重组腺病毒Ad5/F35-XAF1在人肝癌细胞株SMMC7721中具有很强的感染效率,可促进XAF1基因表达,且能明显抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡,此作用可能与XAF1激活了内、外源性凋亡通路有关。     

雌激素和他莫昔芬对大鼠动脉血管平滑肌细胞雌激素受体及表型蛋白的影响

目的 探讨雌激素(E2)和他莫昔芬(TAM)对血管平滑肌细胞(VSMC)雌激素受体(ERs)及表型蛋白的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,应用浓度为10-9、10-8和10-7 mmol/L的17β-雌二醇和浓度为10-8、10-7和10-6 mmol/L的TAM作用于VSMC 24 h.RT-PCR法检测实验后VSMC ERα、ERβ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN) mRNA表达情况.     

辛伐他汀调控klotho蛋白改善高糖诱导的大鼠海马神经元细胞损伤的研究

目的 探讨高糖环境下辛伐他汀对大鼠海马神经元细胞的影响，klotho蛋白表达变化及相关机制。方法 大鼠海马神经元细胞持续培养6 d后，分为正常对照组（Con）、辛伐他汀组（Sim）、高糖组（HG）、HG+Sim组。Con组采用25 mmol/L葡萄糖培养，Sim组采用25 mmol/L葡萄糖及10 nmol/L辛伐他汀培养，HG组采用50 mmol/L葡萄糖培养，HG+Sim组采用50 mmol/L葡萄糖及10 nmol/L辛伐他汀培养，培养48 h后检测活性氧簇（ROS）、超氧化酶歧化物（SOD）、丙二醛（MDA）、klotho及半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白。结果 与Con、Sim组比较，HG、HG+Sim组ROS、MDA、caspase-3蛋白表达升高，SOD、klotho蛋白表达降低（P<0.05）。与HG组比较，HG+Sim组ROS、MDA、caspase-3蛋白表达降低，SOD、klotho蛋白表达升高（P<0.05）。结论 10 nmol/L辛伐他汀延缓高糖诱导的大鼠海马神经元细胞氧化应激及细胞凋亡，可能与klotho蛋白表达升高相关。