曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(tri-chostatin A,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol.L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,Annex-inV/PI双染色体法检测凋亡显示,600 nmol.L-1TSA作用48h后,细胞凋亡率为42.6%。600 nmol.L-1曲古菌素A作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降为1.95±0.25、1.73±0.12和1.52±0.09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论曲古菌素A(trichosta-tin,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性下降,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。     

曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及hTERT的表达并诱导凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A, TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol·L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果 TSA对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,AnnexinV/PI双染色法检测凋亡显示,600 nmol·L-1TSA作用48 h后,细胞凋亡率为42·6%。600 nmol·L-1TSA作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降到1·95 ±0·25、1·73 ±0·12和1·52 ±0·09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论 TSA抑制HL-60细胞中端粒酶活性,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。     

大蒜素对HL-60细胞端粒酶活性的影响

目的 研究大蒜素对人早幼白血病HL-60细胞端粒酶活性的影响。方法 不同浓度的大蒜素作用HL-60细胞后,MTT法测细胞的生长和增殖情况,TRAP-PCR-ELISA法研究细胞端粒酶活性的变化。结果 大蒜素能明显地抑制HL-60细胞的生长,且呈时间、浓度依赖性。不同浓度的大蒜素能下调HL-60细胞的端粒酶活性,且同样呈时间、浓度依赖性。结论 大蒜素可抑制HL-60细胞的端粒酶活性,可能是其诱导HL-60细胞凋亡的重要机制之一。     

维A酸对HL-60细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨维A酸(ATRA)诱导HL-60细胞增殖过程中端粒酶活性的变化.方法:将不同浓度(10-6、10-7及10-8M)的ATRA处理体外培养的HL-60细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定其细胞增殖情况,培养72 h时用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性的变化.结果:维A酸呈时间-剂量依赖方式抑制HL-60细胞增殖,与对照组比较,实验组端粒酶活性均下降,其中10-6M及10-7M两组差异显著(P＜0.05,P＜0.01),而10-8M组无显著差异(P＞0.05).结论:维A酸能够抑制HL-60细胞增殖,该过程可能与其下调细胞端粒酶的活性有关.     

维A酸对HL-60细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨维A酸(ATRA)诱导HL-60细胞增殖过程中端粒酶活性的变化.方法:将不同浓度(10-6、10-7及10-8M)的ATRA处理体外培养的HL-60细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定其细胞增殖情况,培养72 h时用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性的变化.结果:维A酸呈时间-剂量依赖方式抑制HL-60细胞增殖,与对照组比较,实验组端粒酶活性均下降,其中10-6M及10-7M两组差异显著(P＜0.05,P＜0.01),而10-8M组无显著差异(P＞0.05).结论:维A酸能够抑制HL-60细胞增殖,该过程可能与其下调细胞端粒酶的活性有关.     

二乙酰二脱水卫矛醇诱导白血病HL-60细胞凋亡及其机理

目的研究二乙酰二脱水卫矛醇(DADAG)诱导人白血病HL-60细胞凋亡及其机理。方法MTT法观察DADAG的体外抗增殖作用;透射电镜、DNA梯形条带和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡;Western blotting法和caspase-3检测试剂盒分析DADAG诱导HL-60细胞凋亡与Bcl-2家族成员和caspase-3的关系。结果DADAG明显抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞发生凋亡。8 μg·mL^-1 DADAG处理HL-60细胞不同时间后,Bcl-X_L蛋白水平呈时间依赖性地下降,而Bad蛋白水平上调。DADAG处理HL-60细胞24 h后,caspase-3酶活性达峰值。Caspase-3抑制剂z-DEVD.fmk可部分逆转DADAG诱导HL-60细胞凋亡的作用,而caspases广谱抑制剂z-VAD.fmk可完全逆转此作用。结论DADAG诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase-3途径的激活,而caspase-3的激活可能与Bcl-2家族成员密切相关。     

大蒜素对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的通过观察中药大蒜素(allicin)对人髓系白血病细胞株HL-60增殖、凋亡及bcl-2mRNA表达的影响,探讨大蒜素的作用机制。方法采用MTT法绘制细胞生长曲线;TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分析凋亡细胞;RT-PCR法检测大蒜素作用后不同时间段bcl-2mRNA表达水平的变化。结果大蒜素对HL-60细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性,并能抑制HL-60细胞集落形成。较低浓度大蒜素即可抑制HL-60细胞增殖。作用24hTUNEL法检测到凋亡细胞;细胞凋亡率呈药物浓度依赖性且使bcl-2/bax下调。大蒜素作用HL-60细胞后,bcl-2mRNA表达水平有不同程度下调,并呈剂量依赖性。结论大蒜素能够有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡;bcl-2表达水平下调可能参与了该过程。     

槲皮素诱导人白血病HL-60细胞凋亡(英文)

目的:研究槲皮素是否能诱导人白血病HL-60细胞凋亡.方法:应用琼脂糖凝胶电泳法观察DNA碎片;采用流式细胞仪检测DNA断裂;电镜技术观察凋亡的形态学改变,用MTT测定法测定细胞增殖.结果:槲皮素15-120 μmol·L~(-1)诱导HL-60细胞凋亡,电镜观察到典型的形态学改变,电泳显示梯状条带,槲皮素能剂量依赖性地触发DNA降解及抑制细胞增生(IG_(50)和95％可信区间分别为43(30-61)μmol·L~(-1).结论:槲皮素诱导人白血病HL-60细胞凋亡.     

相思子蛋白P2抗肝癌作用及对端粒酶活性影响

目的研究相思子蛋白P2对肝癌细胞生长的抑制作用及机制。方法体外实验:MTT法检测相思子蛋白P2对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。TRAP-SYBR-Green染色法检测相思子蛋白P2作用前后细胞端粒酶活性的改变。体内实验:相思子蛋白P2 50、75、100μg.kg-1连续灌胃给药10 d,观察对小鼠肝癌H22移植性肿瘤的生长抑制作用。小鼠口服给药急性毒性观察。结果相思子蛋白P2可明显抑制HepG2细胞增殖,IC50值为5.172×10-3 mg.L-1。在5×10-5～1×10-3 mg.L-1剂量作用下,可引起HepG2细胞凋亡。相思子蛋白P2主要将细胞周期滞留在S期,从而抑制了肿瘤细胞增殖。同时可使细胞端粒酶活性明显降低,其下调端粒酶活性的作用随药物浓度的增加而明显增强。相思子蛋白P2对小鼠H22肝癌细胞生长有明显抑制作用,100μg.kg-1抑瘤率达62.47%,且对胸腺和脾脏指数的影响较环磷酰胺小。小鼠口服给药LD50值为6.77 mg.kg-1。结论相思子蛋白P2体内外均可明显抑制肝癌细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与下调细胞端粒酶活性、改变细胞周期分布,诱导细胞凋亡有关。     

茶多酚对人肝癌BEL- 7404细胞端粒酶的抑制作用及诱导细胞凋亡的能力(英文)

目的　探讨茶多酚诱导肝癌BEL 740 4细胞凋亡作用和在体外对端粒酶活性的影响。方法　MTT法和活细胞计数法测定茶多酚对人肝癌细胞的生长抑制作用 ,PCR ELISA试剂盒测定细胞的端粒酶活性。细胞形态学变化和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡现象。结果　茶多酚体外对肝癌BEL 740 4细胞有明显的抑制作用 ,且这种抑制作用呈浓度和时间依赖性。采用浓度为 0 2和 0 1g·L- 1 的茶多酚作用 48h后的细胞出现DNA梯度条带和典型的凋亡形态学变化如核固缩、胞膜皱缩、胞核碎裂 ,凋亡小体形成等。茶多酚作用后 ,肝癌BEL 740 4细胞中端粒酶活性明显下降。结论　茶多酚在一定浓度下能诱导肝癌BEL 740 4细胞凋亡 ,其抗癌机制与抑制端粒酶活性有关。     

三萜皂苷混合物ardisiacrispin(A+B)对人白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及机制探讨

目的观察三萜皂苷混合物ardisiacrispin(A+B)对人白血病HL-60细胞增殖的抑制作用,并对其可能的作用机制进行探讨。方法应用MTT法测定增殖抑制作用,采用流式细胞术(FACS)分析阻断细胞周期及诱导凋亡作用,采用PI荧光染色观察凋亡小体的存在,以Western blot分析凋亡相关蛋白表达变化。结果ardisiacrispin(A+B)可明显抑制HL-60细胞的增殖,具有浓度依赖性,作用48h的IC50值为4.2mg·L-1。ardisiacrispin(A+B)可阻断HL-60细胞于S期,在1.0～5.0mg·L-1范围内具有浓度依赖性,3.5mg.L-1ardisiacrispin(A+B)作用6、24和48h时,给药组中S期细胞比例分别为对照组的1.26、1.46和1.71倍。ardisia-crispin(A+B)可诱导HL-60细胞凋亡,在1.0～7.5mg.L-1浓度范围内具有浓度依赖性;此外,ardisiacrispin(A+B)可浓度依赖性地诱导PARP蛋白的裂解,2.5mg.L-1ardisi-acrispin(A+B)作用24h使裂解比例达到27.1%。结论Ardisiacrispin(A+B)可通过阻断细胞于S期、诱导凋亡来抑制HL-60细胞的增殖。     

高三尖杉酯碱对HL-60细胞端粒酶量的抑制效应

目的　研究高三尖杉酯碱 (HHT)对HL 6 0细胞端粒酶活性的影响及诱导凋亡作用。方法　采用端粒重复序列扩增法 (TRAP) 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了HL 6 0细胞的端粒酶量变化 ,用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖凝胶电泳 ,流式细胞术检测和DNA片段原位末端标记 (TUNEL)法检测了细胞凋亡现象。结果　 5～ 5 0 0 μg·L- 1HHT处理HL 6 0细胞 0～ 4 8h ,HL 6 0细胞端粒酶量呈剂量依赖性和时间依赖性下降。同时 ,HL 6 0细胞发生了凋亡。结论　HHT有降低HL 6 0细胞的端粒酶量 ,诱导细胞凋亡作用。     

山楂叶总黄酮对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨山楂叶总黄酮(FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置显微镜观察细胞生长状况和形态变化,琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯状图谱,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体比率及线粒体膜电位的变化。结果与模型组比较FMCL 100、30mg.L-1两组PC12细胞活性增强,贴壁生长数量增多,而圆缩脱落者减少,未见典型DNA梯状图谱,凋亡比率下降,线粒体膜电位回升,且在一定范围内存在剂量依赖关系。结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

Inhibition of telomerase activity and bcl-2 expression in berbamine-induced apoptosis in HL-60 cells

The present study was aimed to investigate the effect of telomerase activity in berbamine-induced apoptosis and the regulation of B cell leukemia/lymphoma 2 ( bcl-2) gene expression in human leukemia HL-60 cells. Apoptosis of HL-60 cells was induced by berbamine (10 microM) for 3, 6, 12 and 24 h. Apoptosis and bcl-2 were determined by flow cytometry analysis. A polymerase chain reaction-based telomeric repeat amplification protocol assay was used to detect the telomerase activity. Berbamine induced growth arrest and apoptotic cell death in HL-60 cells. The telomerase activity was inhibited in a time-dependent manner during the berbamine-induced apoptosis of HL-60 cells, and the expression of bcl-2 was progressively down-regulated by berbamine. Inhibition of the telomerase activity of HL-60 cells was closely related to the berbamine-induced apoptosis. The present results indicate that inhibition of telomerase and reduced bcl-2 gene expression may play a role in the berbamine-induced apoptosis of HL-60 cells.     

喜树碱诱导人白血病HL-60细胞凋亡过程中端粒酶的调控(英文)

目的:研究在喜树碱诱导人白血病HL—60细胞凋亡过程中端粒酶的调节变化规律.方法:用MTT法测定药物对细胞存活率的影响;用琼脂糖电泳及流式细胞术检测和定量凋亡的发生;用以PCR为基础的TRAP法测定端粒酶活力;逆转录PCR检测凋亡过程中bcl-2及端粒酶亚基hTR、hEST2/hTERT和TLPl/TPl的基因表达水平的变化.结果:端粒酶活力伴随喜树碱诱导HL-60细胞凋亡的发生而逐渐降低,在此过程中端粒酶各亚基的mRNA水平无可见性变化,而bcl-2的基因表达水平则相应下调.结论:端粒酶活力的下调和喜树碱诱导的HL-60凋亡密切相关,端粒酶活力的阻断并非发生在其亚基基因转录水平,bcl-2对端粒酶活力的调节也不是通过影响端粒酶亚基的转录水平来实现的.     

三氧化二砷对HL-60细胞凋亡及其端粒酶hTERT-mRNA表达影响的实验研究

目的　探讨不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60细胞端粒酶亚单位hTERT mRNA表达及其诱导凋亡的作用。方法　不同浓度的As2 O3与HL 60细胞株共培养 48h ,流式细胞术鉴定HL 60细胞凋亡 ;RT PCR法检测HL 60细胞端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达。结果　在 0 1、1 0和 5 0 μmol·L-13种浓度的As2 O3作用下 ,HL 60细胞凋亡率分别为 2 2 8%± 0 40 %、2 5 5 %± 0 2 2 %和 47 5 7%± 2 79% ;端粒酶亚单位hTERT mRNA表达的相对值分别为 73 97%、63 70 %和 2 9 0 4%。细胞凋亡率在 5 0 μmol·L-1与 0 1和 1 0μmol·L-1浓度组间差异有显著性 (P <0 0 1) ;端粒酶亚单位表达的差异也有显著性 (P <0 0 5 )。As2 O3诱导HL 60细胞凋亡效应与其抑制端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达相关。结论　As2 O3对HL 60细胞具有凋亡诱导效应 ,且对其端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达具有抑制作用 ,两者均呈现浓度依赖效应。As2 O3可能通过抑制HL 60细胞端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达而诱导肿瘤细胞凋亡     

尼美舒利与阿霉素联合应用对肝癌HepG_2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨尼美舒利(n im esu lide,NIM)联合阿霉素(adriamyc in,ADM)对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法采用MTT比色法检测药物的生长抑制作用,应用金正均法判断两药的相互作用,吖啶橙荧光染色观察细胞的形态学改变,流式细胞仪(flow cytom etry,FCM)检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示NIM(25、50、100μmol.L-1)与ADM(0.156,0.313,0.625 mg.L-1)联合应用对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制均有不同程度的协同作用(q>1.15),联合用药组与ADM各单药组相比差异有显著性(P<0.01)。吖啶橙荧光染色可见典型的凋亡形态学特征。FCM检测凋亡显示NIM 100μmol.L-1和ADM2.5 mg.L-1单独及联合应用48 h后DNA直方图上均出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,联合用药组凋亡率(19.6%)明显高于各单独用药组(2.48%和10.6%)。结论NIM与ADM联合应用具有协同抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖与诱导其凋亡作用。