丙型肝炎病毒抗体联合核酸定量检测对丙型肝炎患者的早期诊断价值研究

目的：探讨在丙型肝炎患者早期诊断中丙型肝炎病毒抗体联合丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）检测的临床价值。方法对116例鼓楼医院住院及门诊丙型肝炎患者采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）测定HCV RNA、酶联免疫吸附试验（ELISA）和金标法测 HCV抗体、速率法测丙氨酸氨基转移酶（ALT ）。结果116例丙型肝炎患者中,ELISA HCV抗体阳性97例（占83．6％）,HCV RNA阳性85例（占73．3％）,HCV 金标阳性77例（占66．4％）,ALT阳性69例（占59．5％）,HCV抗体和 HCV RNA联合检测总阳性率（指任-指标阳性即为阳性）为100．0％。结论 HCV抗体和HCV RNA联合检测扩大了丙型肝炎检测范围,降低了丙型肝炎的漏诊率,有利于丙型肝炎的早期诊断。     

天津市某三甲医院维持性血液透析患者血源性病毒感染情况分析

【摘要】目的了解血液透析患者乙型肝炎病毒（hepatitisBvires,HBV）、丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus,HCV）、人类免疫缺陷病毒humanimmunodeficiencyvirus,HIV）和梅毒螺旋体（treponemapal—lidum,TP）的感染情况。方法应用酶联免疫法检测449例维持性血液透析患者血清中HBV五项、抗-HCV、抗-HIV和TP抗体．应用PCR-荧光探针法检测HBsAg阳性的透析患者血清中HBV—DNA含量及抗-HCV阳性的透析患者血清中HCV—RNA含量,并进行统计学分析。结果449例透析患者HB．sAg、HBsAb、抗-HCV、TP抗体的阳性率分别为2．90％、20．71％、8．69％、1．78％,抗-HIV检测结果均为阴性。其中,HBsAg阳性患者中,HBV-DNA阳性率为46．15％,DNA拷贝数为1．1×104—3．7×10^7 IU／mL;抗-HCV阳性者中,HCV-RNA阳性率为58．97％,RNA拷贝数为8．1×10^3～1．5×10^7IU／mL。≥60岁和〈60岁两组患者HBsAg、抗-HCV阳性率比较,差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论血液透析患者HBV、HCV感染率相对国外较低,但感染现象在各年龄段普遍存在。TP感染情况与国内外报道相似,应加强管理防护。     

维持性血液透析患者丙型肝炎病毒血清学及核酸的检测与评估

目的评估维持性血液透析患者丙型肝炎病毒感染状况，并对其相关影响因素进行初步分析。方法分别采用ELISA、实时荧光定量PCR检测122例维持性血液透析患者血清抗HCV抗体、HCV核心抗原及HCV—RNA，并且采用酶促动力法检测其转氨酶水平。结果维持性血液透析患者中，血清抗HCV抗体阳性率为29．5％（36／122），部分患者出现血清转氨酶升高；HCV核心抗原阳性率为8．2％（10／122）；HCV—RNA阳性率为27．0％（33／122）。其中，6例（4．9％）抗HCV抗体阴性者可检出HCV病毒血症，10例（8．2％）抗HCV抗体阴性者可检出HCV抗原。有输血史者和透析时间较长者的丙型肝炎病毒感染率明显增加。结论HcV感染在维持性血液透析患者中较为普遍，且感染率与输血、透析时间有关。同时检测抗HCV抗体、HCV核心抗原与HCV—RNA（或其中二项）有助于提高HCV感染诊断的敏感度。     

双探针实时荧光定量检测HCV RNA的研究

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,探讨解决HCV RNA定量灵敏度和特异性问题。方法对89例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行检测。结果双探针荧光定量法阳性率分别为91.0%(81例)和2.72%(6例)。两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为82.0%(73例)和0.9%(2例);79.7%(71例)和2.27%(5例)。结论双探针荧光定量提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性。     

抗-HCV IgM、抗-HCV IgG与HCV RNA的相关性及临床意义

[目的]研究丙型肝炎病毒（HCV）抗-HCV IgM、抗-HCV IgG与HCV RNA的相关性。[方法]收集236例HCV患者标本，用酶联免疫吸附法检测抗-HCV IgM、抗-HCV IgG、同时用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HCV RNA。[结果]168例HCV RNA（＋）标本中，抗-HCV IgM阳性率为72．0％（121／168）；抗-HCV IgG阳性率为85．1％（143／168），抗-HCV IgM、抗-HCV IgG与HCV RNA的关联系数均为r=1。抗-HCV IgM、抗-HCV IgG与HCV RNA的检出符合率分别为69．1％（163／236）、75．4％（178／236）。随着抗-HCV IgG抗体光密度值（OD值）的增大，HCV RNA的检出率亦增加（X^2=27.5 P〈0．001）。提示两者间存在相互关联性（r=0．93）。[结论]HCV感染者血清抗-HCV抗体与HCV RNA的阳性检出率呈正相关，血清中抗-HCV的含量越高，HCV RNA的含量越多，其传染性越强。抗-HCV IgM与HCV病毒复制亦密切相关，可以做为HCV复制的补充指标。     

荧光定量两探针法检测HCV RNA的研究

目的 建立荧光定量两探针检测HCV RNA方法.方法 对105例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本,用荧光定量两探针法和2种商品荧光定量试剂进行检测,并对检测结果进行比较.结果 荧光定量两探针法阳性率分别为89.5%（94/105）和2.3%（5/220）.两种商品荧光定量试剂阳性率分别为71.4%（75/105）和0.45%（1/220）;69.5%（73/105）和1.8%（4/220）.结论 荧光定量两探针法检测HCV RNA有较高的敏感性和特异性.     

抗-HCV联合TMA定性检测HCV—RNA在维持性血液透析患者丙型肝炎病毒感染早期诊断中意义的探讨

目的研究维持性血液透析患者丙型肝炎病毒（HCV）感染的血清学诊断方法,探讨抗．HCV联合HCV-RNA检测在维持性血液透析患者HCV感染早期诊断中的意义,以期获得维持性血液透析患者HCV感染早期诊断的可靠方法。方法选择深圳市第二人民医院血液透析中心183例维持性血液透析患者为研究对象,分别使用国产和进口HCV抗体试剂盒检测抗-HCV,使用TMA法定性检测HCV—RNA,荧光定量PCR法定量检测HCV-RNA,比较不同产品及诊断方法对HCV的检出率,评价ALT变化与HCV—RNA载量的关系,评价抗-HCVS／CO值与HCV-RNA载量的关系。结果国产和进口试剂检测抗-HCV的检出率均为7．1％（P=1．000）;TMA法定性检测HCV—RNA的检出率为8。7％,免疫荧光定量PCR法的检出率为5．5％,但两者之间差异有统计学意义（x^2=87．537,P=0．000）;HCV-RNA定性检测比检测抗．HCV的检出率高,两者的差异有统计学意义（x^2=81．531,P=0．000）;联合抗-HCV和HCV-RNA定性检测结果HCV阳性共19例,检出率为10．4％,与单独检测抗．HCV比较差异有统计学意义（P=0．031）,但与单独定性检测HCV—RNA比较差异无统计学意义（P=0．250）。HCV．RNA的载量和ALT的变化无相关性（r=0．189,P=0．536）;抗-HCV初筛的S／CO值与HCV—RNA载量无相关性（r=0．174,P=0．569）。结论HCV．RNA定性检测较抗．HCV检测能缩短维持性血液透析患者HCV感染检出的窗口期,有利于早期诊断。HCV—RNA定性检测能较临床现行的HCV．RNA免疫荧光定量检测显著提高HCV感染的检出率。联合抗-HCV和TMA法定性检测HCV—RNA既能缩短HCV感染的“窗口期”,也能显著提高HCV感染的检出率,可避免漏检处于血清转换期或慢性病毒携带或既往感染的“隐性”患者,值得临床推广应用。ALT的变化和HCV载量无明显相关性,在血液透析患者中辅助早期诊断HCV感染的作用较小。     

HBV和HCV重叠感染患者生化免疫指标变化及临床意义

目的了解HBV和HCV重叠感染情况及其对肝功能及血清病毒载量的影响。方法常规检测3816例临床血清样本中的HBV及HcV血清标志物以及肝功能等指标,实时荧光定量PCR检测病毒载量。结果3816例送检样本中HBsAg阳性率8．9％（341／3816）,抗HCV抗体阳性率1．2％（46／3816）,其中HCVRNA检测阳性15例,现症感染率为0．39%。3816例样本中,HBV／HCV重叠感染15例,单纯HBV感染326例,单纯HCV感染31例。单纯HBV感染患者血清转氨酶（ALT和AST）及总胆红素（TBil）水平均明显高于重叠感染患者和单纯HCV感染患者。HBV／HCV重叠感染组患者HBVDNA栽量低于单纯HBV感染组,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;HBV／HCV重叠感染组患者HCVRNA载量也低于单纯HCV感染组,但两组比较,差异无统计学意义（P〉O．05）。结论重庆地区HBV／HCV感染情况与我国一般人群分布基本一致,重叠感染患者肝功能血清学指标改变低于单纯HBV感染患者。     

抗-HCV、HCV-RNA及ALT检测138例结果分析

目的：探讨丙型肝炎病毒（HCV）RNA与丙型肝炎抗体（抗-HCV）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）之间的关系。方法：采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）测定138例疑似HCV感染者血清HCV RNA,ELISA法检测抗-HCV,全自动生化分析仪测定ALT。结果：138例标本中HCV RNA和抗-HCV均阳性者108例,HCV RNA阳性而抗-HCV阴性者3例,HCV RNA阴性而抗-HCV阳性者27例。ALT水平与HCV RNA含量无显著相关性。结论：同时检测HCVRNA和抗-HCV可提高丙型肝炎患者的检出率;HCV RNA含量不能反映肝脏损伤的程度。     

HCV RNA载量与肝脏组织损伤的关系

目的探讨丙型肝炎病毒（HCV）RNA复制水平与肝功能丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）之间的相互关系。方法收集1182例疑似丙肝病人血清标本,采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测HCV RNA,利用酶动力法测定ALT、AST,采用ELISA测定抗HCV抗体。数据采用SPSS16.0统计软件处理。结果病人血清样本中,HCV RNA阳性801例（64.8%）,其中抗HCV阳性766例（95.6%）;HCV RNA阴性381例（32.2%）,其中抗HCV阳性100例（26.2%）。HCV RNA阳性样本中同时抗-HCV阳性者ALT,AST异常率分别为59.0%和60.8%;抗-HCV阴性者为31.4%和34.2%。HCV RNA阴性样本中同时抗-HCV阳性者ALT,AST异常率分别为24.0%和15.0%,抗-HCV阴性者为13.9%和12.1%。HCV RNA含量与ALT、AST水平明显成正相关,r=0.62,P〈0.05。结论 HCV RNA含量与肝组织损伤程度成正相关。     

丙型肝炎病毒RNA含量与抗-HCV及ALT的关系

目的 了解丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)与丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)的关系.方法 144例在本院住院和门诊同时检测HCV RNA、抗-HCV及ALT的患者,用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)法检测标本中的HCV RNA,同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗-HCV,用全自动生化检测仪测定ALT水平.结果 144例标本中HCV RNA高于上限值34例(23.6%),抗-HCV阳性44例(30.6%),二者有很好的相关性.有46例(31.8%)存在ALT异常,而ALT异常率与HCV RNA含量有一定的比例关系.结论 HCV RNA含量与抗-HCV同时检测可提高临床对丙型肝炎的诊断.HCV RNA是反映HCV复制的可靠指标,结合ALT结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况及肝脏的炎性反应状态.FQ-RT-PCR法检测HCV RNA具有非常好的临床应用价值.     

Enzyme-linked immunosorbent assay for antibodies against the capsid protein of hepatitis C virus with a synthetic oligopeptide

An enzyme-linked immunosorbent assay was developed for the determination of antibodies against the putative capsid protein of hepatitis C virus (HCV). A 36-mer oligopeptide with a sequence of RRGPRLGVRATRKTSERSQPRGRRQPIPKVRRPEGR (CP9) was synthesized; it was selected on the translation product of the presumptive HCV core gene, because of a high local hydrophilicity and excellent conservation by different HCV strains. The synthetic peptide was immobilized on a solid-support to capture antibodies directed to CP9 (anti-CP9) in test sera, which were detected by Fab' fragments of monoclonal anti-human IgG/gamma labeled with horseradish peroxidase. The specificity of anti-CP9 was confirmed by absorption tests. Anti-CP9 was detected in 13 (68%) of 19 patients with sporadic acute non-A, non-B (NANB) hepatitis and in 15 (83%) of 18 patients with post-transfusion acute NANB hepatitis. In 7 cases of acute NANB hepatitis who were followed, anti-CP9 developed earlier than antibodies against HCV (anti-HCV) detectable by a commercial assay kit. Among patients with chronic NANB liver diseases, anti-CP9 was detected in 103 (77%) of 133 with chronic hepatitis, 70 (62%) of 113 with liver cirrhosis and 31 (76%) of 41 with hepatocellular carcinoma. Anti-CP9 and anti-HCV overlapped in 175 (54%) among 324 cases of acute or chronic NANB liver diseases; 58 (18%) were positive only for anti-CP9 while 49 (15%) were positive only for anti-HCV. HCV RNA was detected, by amplifying HCV cDNA with polymerase chain reaction, in 10 of 11 sera positive only for anti-CP9. Among sera from 606 blood donors, 21 were positive only for anti-CP9. HCV RNA was detected in 5 (24%) of them, all of which had A492 values greater than 0.600 in ELISA for anti-CP9. Based on these results, anti-CP9 would complement anti-HCV for the diagnosis of HCV infection and contribute toward further decreasing posttransfusion NANB hepatitis.     

Significance of the signal-to-cutoff ratios of anti-hepatitis C virus enzyme immunoassays in screening of Chinese blood donors

BACKGROUND: The correlation between signal-to-cutoff (S/CO) ratios of a second-generation hepatitis C virus (HCV) enzyme immunoassay (EIA; Abbott) and a third-generation HCV enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA; Ortho) and confirmed HCV infection has been reported. The utility of the values for the Chinese anti-HCV EIA kits, however, has not been studied in evaluating test results in Chinese blood donors. STUDY DESIGN AND METHODS: A total of 156 donor samples repeat reactive for anti-HCV at routine screening from five representative regions of China were retested for anti-HCV by the Ortho third-generation HCV ELISA and six Chinese EIA kits and for HCV RNA by a human immunodeficiency virus-1 and HCV assay (Procleix, Chiron Corp.). The HCV RNA-nonreactive samples were further tested for anti-HCV by a third-generation recombinant immunoblot assay RIBA (Chiron Corp.). The positive result by either nucleic acid amplification test or RIBA was interpreted as confirmed HCV infection. RESULTS: The confirmed HCV prevalence rate in donors in five representative regions obtained in this study was 0.20 percent (77/37,900) in 2004. All seven anti-HCV EIA kits had a significant correlation between S/CO ratios and confirmed HCV infection. The threshold S/CO ratios, which predicted more than 95 percent of confirmed HCV infections for the Ortho, SABC, BGI-GBI, InTec, GWK, KHB, and WANTAI kits, were 3.8, 6.0, 7.0, 8.6, 10.0, 10.0, and 14.0, respectively. CONCLUSIONS: Anti-HCV EIA kits commonly used in Chinese donors screening demonstrate good correlation between S/CO ratios and the confirmed infection. For the Ortho third-generation HCV ELISA, the S/CO ratio of 3.8 determined by the US Centers for Disease Control and Prevention is applicable to Chinese blood donors. The Chinese domestic EIA kits evaluated show a diverse range of threshold S/CO ratios.     

出入境人员丙型肝炎病毒感染者miRNA-122表达变化研究

目的探讨珠海口岸出入境人员丙型肝炎病毒(HCV RNA)感染者外周血miRNA-122表达的变化及其对丙型肝炎患者的临床意义。方法收集96例丙型肝炎IgG抗体初筛阳性患者外周血,定量检测HCV RNA水平。对HCV RNA阳性患者检测miRNA-122、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及检查肝脏超声影像学改变,并进行相关性分析。结果 96例HCV IgG阳性患者检测出49例HCV RNA阳性,占60.9%;两组患者miRNA-122表达水平差异有统计学意义(P0.01);与ALT呈正相关,与HCV RNA无相关性。B超检查发现11例合并轻度脂肪肝,合并脂肪肝患者miRNA-122表达水平高于无脂肪肝患者。结论 HCV阳性患者循环miRNA-122表达可能与病毒复制无关,而是反映肝脏组织活动性损害和病变严重性的指标。     

丙型肝炎患者血清HCV-RNA拷贝数与甲胎蛋白异质体百分比的相关性分析

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)患者HCV-RNA与甲胎蛋白异质体百分比(AFP-L3/AFP)的相关性,分析丙型肝炎引起的肝硬化向肝癌发展的进程中HCV-RNA与AFP-L3/AFP变化特点。方法收集临床已确诊的单纯HCV患者80例,其中44例为肝硬化患者,36例为丙型肝炎肝癌组,肝硬化组进行3、6个月的随访,随访结果分为转移肝癌组及治疗有效组,选取60例健康人群作为对照组,采用病例对照研究。不同组间HCV-RNA及AFP-L3/AFP比较采用t检验。结果肝硬化组平均HCV-RNA、AFP-L3/AFP为7.15×10~3 copy/mL、44.3%,与对照组比较(400copy/mL、1.1%),差异有统计学意义(P0.05)。肝硬化组平均HCV-RNA、AFP-L3/AFP为8.33×10~9 copy/mL、3.35%、与丙型肝炎肝癌组(5.71×10~7 copy/mL、94.33%)比较差异有统计学意义(P0.05)。肝硬化患者3个月随访有4例发展为肝癌,6个月后有8例发展为肝癌。结论对HCV引起的肝硬化患者应联合、动态检测HCV-RNA与AFP-L3/AFP,以便早期及时发现肝癌。     

丙型肝炎病毒感染的献血者12年追踪观察

目的动态追踪观察HCV感染的献血者健康状况、疾病进程和转归。方法选择刚发生HCV感染的献血者,12年中定期抽血检测,观察其HCV RNA、抗-HCV和ALT的动态变化,并按HCV RNA出现的阳性频率和转阴趋势分为两组(第1组阳性率低且趋转阴,第2组则相反),调查这些感染者的健康状况,并进行肝脾B超检查和肝组织病理检查。结果①第1组中的7名受试者血清(血浆)HCV-RNA呈间隙性阳性,阳性率为41.6%(47/113),其血清ALT异常率为14.4%(16/111),其中4名作肝活检后均诊断为轻度慢性肝炎,病理改变程度是:G1、S0和G1、S1各2例;②第2组中的19名受试者血清(血浆)HCV RNA呈持续性阳性,阳性率为88.2%(276/313),其血清ALT异常率为50.3%(159/316),其中6名肝活检也诊断为轻度慢性肝炎,但病理改变明显,G2、S2有2例,G2、S1有4例;③26名受试者一般健康状况尚佳,除部分肝脾B超呈现实质回声增强外,无其他特殊情况发现。结论26名HCV感染的献血者12年间均已发展为轻度慢性丙型肝炎;其中7名受试者病情在恢复,19名受试者病情可能有发展。