Toll样受体在树突状细胞的表达及其功能研究进展

树突状细胞(dendritic cells,DCs)是体内功能最强的抗原提呈细胞,它通过Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)识别病原相关模式分子,在固有免疫应答和适应性免疫应答中起桥梁和纽带作用,并调控免疫应答的强度和质量.文中就近年来TLRs在DCs的表达和功能研究进展作一综述.     

广东汉族人群杀伤免疫球蛋白样受体基因的表达频率

目的检测杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)基因在广东汉族人群中的分布。方法对96例广东汉族以SSP法检测其KIR表型，统计不同KIR基因在人群中的表现频率．并与白种人、北印度人、日本人比较。结果不同KIR的表现表率分别为：2DL1(0．85)、2DL2(0．12)、2DL3(0．58)、2DL4(1)、2DL5(0．24)、3DL1(0．96)、3DL2(1)、3DL3(1)、2DP1(0．97)、2DP2(0．98)、2DS1(0．10)、2DS2(0．30)、2DS3(0．02)、2DS4(0．28)、1D(0．65)、2DS5(0．19)、3DS1(0．23)。比较同-HLA配体相应的KIR，抑制性KIR频率均高于活化性KIR。与白种人和北印度人相比，除K1R2DS4外，广东汉族人群的活化性KIR频率均较低。结论不同KIR基因在广东汉族人中有不同的表达频率。与其他人种比较，KIR基因的分布有着明显的种族差异。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体在子痫前期胎盘组织中的表达及意义

子痫前期是妊娠期特有的疾病,其病因及发病机制不清,大多数学者认为可能与某些遗传因素引发的免疫功能失调,造成滋养细胞侵润障碍,导致胎盘浅着床有关[1]。杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR2DL4）通过识别滋养细胞表面的人类白细胞抗原G（HLA-G）,向自然杀伤（NK）细胞传递抑制性信号,抑制NK细胞对胎儿成分的杀伤作用,其表达异常可能使胎儿和母体之间的免疫平衡失调,引发病理性妊娠[2]。本研究对KIR2DL4基因在胎盘的表达情况进行研究,探讨KIR基因在子痫前期发病中的可能作用,报告如下。     

层粘蛋白及受体在宫颈癌中的表达及意义

目的 探讨层粘蛋白及受体在人宫颈癌中表达及其临床意义。方法 应用SABC免疫组化法检测20例正常宫颈组织,26例宫颈原位癌,21例宫颈浸润癌Ⅰ－Ⅱ级,18例宫颈浸润癌Ⅲ级组织中层粘蛋白及受体的表达。结果 层粘蛋白在正常宫颈组织及原位癌中强表达,在宫颈浸润癌中间断或缺失,二者有显著性差异（P＜0．05）。层粘蛋白受体在正常宫颈组织及原位癌中阴性表达,在宫颈浸润癌中呈强阳性表达。有显著性差异（P＜0．05）。结论 层粘蛋白及受体在人宫颈浸润癌组织中有显著性改变,可为宫颈癌病理诊断及预后判断的标志。     

广东汉族人群杀伤免疫球蛋白样受体基因的表达频率

目的 检测杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)基因在广东汉族人群中的分布。方法 对96例广东汉族以SSP法检测其KIR表型,统计不同KIR基因在人群中的表现频率,并与白种人、北印度人、日本人比较。结果 不同KIR的表现表率分别为:2DL1(0.85)、2DL2(0.12)、2DL3(0.58)、2DL4(1)、2DL5(0.24)、3DL1(0.96)、3DL2(1)、3DL3(1)、2DP1(0.97)、2DP2(0.98)、2DS1(0.10)、2DS2(0.30)、2DS3(0.02)、2DS4(0.28)、1D(0.65)、2DS5(0.19)、3DS1(0.23)。比较同一HLA配体相应的KIR,抑制性KIR频率均高于活化性KIR。与白种人和北印度人相比,除KIR2DS4外,广东汉族人群的活化性KIR频率均较低。结论 不同KIR基因在广东汉族人中有不同的表达频率。与其他人种比较,KIR基因的分布有着明显的种族差异。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体与肿瘤免疫治疗

目的 探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体与肿瘤免疫治疗的关系.方法 选取2011年1月至2011年6月在我院肿瘤科住院治疗的78例肿瘤患者为研究对象.并选择我院常规体检中无血缘关系的随机健康个体78例为正常对照组.进行DNA提取及KIR基因型分析.结果 在所研究的78例肿瘤个体和78例正常个体中共检出了目前已知的18个KIR基因.且肿瘤患者的KIR基因频率与正常个体相比较,有统计学意义.结论 在癌症患者中,KIR的阻滞有可能成为切实可行的治疗选择以促进NK细胞介导的对肿瘤的细胞毒性反应.     

桥本甲状腺炎患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因型分析

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因型在桥本甲状腺炎患者中的分布规律。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR SSP） 的方法,分析100例桥本甲状腺炎(HT)患者和260例正常对照人群(正常对照组)的KIR基因型。结果桥本甲状腺炎患者中2种基因型3DL3,2DS2,2DL3,2DP1,2DL1,2DL4,3DL1,2DS4,3DL2和 3DL3,2DL3,2DP1,2DL1,2DL4,3DL1,3DS1,2DS1,2DS4,3DL2频率高于正常对照组（P＜0.05,P＜0.01）,1种基因型3DL3, 2DL3, 2DP1, 2DL1, 2DL4, 3DL1, 3DS1, 2DL5, 2DS5, 2DS1, 2DS4, 3DL2低于正常对照组（P＜0.05）;HT患者组携带6个以上抑制性KIR基因的基因型总频率明显少于对照组（39% vs 56.2%,P＜0.01）。结论KIR基因型在桥本甲状腺炎患者与正常人群分布的差异可能与桥本甲状腺炎的发病有关。     

白细胞介素2促进宫颈癌细胞系HeLaS3免疫球蛋白G的表达

目的：探讨白细胞介素2(interleukin 2, IL-2)对宫颈癌细胞系HeLaS3表达免疫球蛋白G(immunoglobulin G, IgG)的影响。方法: 用免疫荧光 流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测IL-2刺激后HeLaS3胞膜和胞内IgG表达变化; 用Western blot检测IL-2刺激HeLaS3后IgG的表达变化; 用同时能扩增IgG四个亚类的引物, 以RT-PCR法, 从mRNA水平检测IL-2刺激后, HeLaS3γ链转录水平的变化。结果: 免疫荧光-FCM结果显示, IL-2刺激48 h后HeLaS3胞膜和胞内IgG表达明显上调; Western blot结果显示IL-2刺激48 h后HeLaS3胞内IgG表达水平明显上调; RT-PCR显示IL-2刺激48 h后HeLaS3γ链转录水平有所上升。结论: IL-2能促进HeLaS3 IgG的表达。     

人干细胞因子受体膜外区1～3免疫球蛋白样结构域的表达、纯化及活性

目的在原核和真核细胞中表达人干细胞因子受体(c-Kit)配体结合区膜外N端1~3免疫球蛋白样结构域(c-Kit/Ig1~3),研究其配体结合活性。方法采用重叠延伸PCR定点诱变法合成c-Kit/Ig1~3双突变片段(c-Kit/Ig1~3DM),构建pET16b-c-Kit/Ig1~3DM表达质粒,转化E·coliBL21(DE3)诱导表达,稀释复性,镍柱纯化。将C端添加组氨酸标签的c-Kit/Ig1~3基因克隆入真核表达载体pEAK12中,转染HEK293ET细胞构建c-kit/Ig1~3高效表达细胞株,从细胞培养上清中使用镍金属螯合柱收集纯化蛋白。His-tag pull-down和酶联免疫结合实验检测融合蛋白配体结合活性。结果在大肠杆菌中c-Kit/Ig1~3DM以包涵体形式表达,复性后配体结合活性很低。在HEK293ET细胞中筛选到2个高效表达c-Kit/Ig1~3的细胞株,上清表达量为2μg/ml,融合蛋白相对分子质量为58000;受体配体结合实验显示真核表达的c-Kit/Ig1~3有明显的干细胞因子特异结合活性,解离常数Kd值为9·39nmol/L。结论获得了具有较高配体结合活性的c-Kit/Ig1~3融合蛋白。     

肺结核患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性分析

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIRs)基因多态性与肺结核(TB)的关系。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(SSP-PCR),分析109例肺结核患者(TB组)和30例健康者(对照组)中14个KIR基因多态性。TB组又分为30例痰涂片抗酸杆菌阳性(SP组)和79例涂片阴性患者(SN组)。结果与对照组比较,SP组KIR2DL5(P=0.007)、2DS1(P=0.038)、2DS3(P=0.010)、3DS1(P=0.002)阳性率增高,KIR2DS5频率降低(P=0.038);SN组KIR2DL5(P=0.018)、2DS1(P=0.000)、2DS5(P=0.000)、3DS1(P=0.001)阳性率增高;KIR2DS4(P=0.004)和KIR2DS5(P=0.000)频率SP组较SN组升高;患者携带两个及以上活化KIR的频率较对照组明显升高(P=0.013);患者组基因型AJ的频率较对照组显著降低。结论 KIR基因多态性可能与肺结核的易感性有关。     

宫颈癌患者DNA检测的临床意义

目的：探讨宫颈癌患者淋巴结及癌灶中人乳头瘤病毒HPV-DNA检测在宫颈癌诊断中的临床意义。方法：用组织病理学检测方法和PCR检测方法对23例宫颈癌患者的宫颈癌变组织和淋巴组织进行检测。结果：两种检测方法的显示结果不一致。结论：HPV-DNA不仅与宫颈癌的发生有关,而且与肿瘤的转移有关,宫颈癌患者淋巴结的HPV-DNA检查比病理学检查更安全。     

Survivin、VEGF 在年轻宫颈癌中的表达及意义

目的：探讨 Survivin（存活素）、VEGF（血管内皮生长因子）在年轻宫颈鳞癌患者组织中的表达与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化 SP 法检测46例年轻宫颈鳞癌组织、25例正常宫颈组织中 Survivin、VEGF 的表达水平。结果 Survivin、VEGF 在年轻宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为60.9%、65.2%,二者在正常宫颈组织中不表达,差异有统计学意义（P 〈0.05）。 Survivin 表达与临床分期、组织学分级、淋巴结转移有关（P 〈0.05）。 VEGF 表达率与临床分期、淋巴结转移有关（P 〈0.05）,而与组织学分级无关（P 〉0.05）。 Survivin、VEGF 的表达呈正相关（r =0.443,P =0.002）。结论 Survivin、VEGF 表达上调与年轻宫颈鳞癌的发生、发展密切相关,影响患者的预后。     

KLK7 mRNA在子宫颈癌组织的表达及其临床意义

目的探讨激肽释放酶7(KLK7)mRNA在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR技术检测30例宫颈癌组织中KLK7 mRNA的表达,并以10例正常宫颈组织作对照。分析宫颈癌组织中KLK7 mRNA的表达水平与临床特征的相关性。结果宫颈癌组织中KLK7 mRNA的表达水平为1.16±0.33,明显高于正常宫颈组织0.77±0.20,(P<0.05)。分化程度较低的宫颈癌组织KLK7 mRNA的表达水平高于分化程度较高的宫颈癌组织(P<0.05)。伴有淋巴结转移的宫颈癌组织KLK7 mRNA表达水平为1.47±0.22,明显高于淋巴结转移阴性1.10±0.31,(P<0.05)。结论KLK7在宫颈癌的浸润、转移过程中具有一定的作用,将成为宫颈癌诊断和判断预后的有力工具,也可成为基因或免疫治疗的新靶点。     

RAGE在不同宫颈鳞癌细胞中的表达及意义

目的 探讨人宫颈鳞癌细胞中晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced-glycation end products,RAGE）的表达水平及定位,筛选出合适的细胞用于研究RAGE对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响。方法 选取人宫颈鳞癌细胞SiHa、MS751、C33-A及CaSki,采用免疫细胞化学染色检测癌细胞中RAGE蛋白的定位,应用qRT-PCR法检测癌细胞中RAGE mRNA的表达水平。应用免疫印迹法检测癌细胞中RAGE蛋白的表达水平。采用酶联免疫吸附法检测4种人宫颈鳞癌细胞分别培养至12、24、36、48及72h时,上清中分泌型RAGE蛋白的表达水平。结果 RAGE蛋白主要在人宫颈鳞癌细胞的胞质和胞膜中表达,大部分位于胞质。RAGE mRNA的表达量在SiHa细胞中最高,为0.986±0.053,而在MS751细胞中的表达量相对最低,仅0.111±0.008（P<0.05）。RAGE蛋白在SiHa细胞中的表达量相对最高的（0.982±0.096）,而在MS751细胞中的表达量相对最低（0.250±0.056）,差异有统计学意义（P<0.05）。SiHa、MS751、C33-A及CaSki细胞各个时间点均检测到其分泌至上清中的RAGE蛋白,且4种细胞随着培养时间的延长,其分泌型RAGE的表达量逐渐增高。结论 RAGE在4种人宫颈鳞癌细胞中均有表达。C33-A和CaSki细胞适合用做后续RAGE干扰和过表达实验;SiHa细胞可在培养液中加入抗RAGE抗体改变RAGE表达量;用于后续研究RAGE对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响。     

宫颈癌组织中RCAS1的表达及其临床意义

目的：研究RCAS1在宫颈癌组织中的表达及其与宫颈癌的临床病理特征之间的关系。方法选取2008年1月-2011年3月在该院行手术治疗的宫颈癌组织标本和宫颈良性病变组织标本,应用免疫组化法检测RCAS1蛋白的表达表达量,并研究RCAS1蛋白和宫颈癌临床病理特征之间的关系。结果宫颈癌组织中RCAS1阳性表达率(86.15%)显著高于良性宫颈组(19.35%)差异有统计学意义(字2=40.946,P=0.000<0.05)。 RCAS1的表达与组织类型无关,差异无统计学意义(字2=0.700,P=0.403跃0.05),与临床分期无关,差异无统计学意义(字2=1.319,P=0.251跃0.05)。低分化癌组织中RCAS1的表达显著高于高分化癌,差异有统计学意义(字2=10.877,P=0.001<0.05)和中分化癌差异有统计学意义(字2=10.819,P=0.001<0.05)。伴有淋巴结转移者RCAS1的表达率显著高于无淋巴结转移者,差异有统计学意义(字2=8.715,P=0.003<0.05)。结论RCAS1在宫颈癌的发生发展中具有重要意义,RCAS1的表达水平和宫颈癌组织的恶性程度和侵袭力相关。     

端粒酶活性在宫颈癌中的表达及意义

目的：探讨端粒酶活化在宫颈癌发生、发展中的作用。方法：采用端粒重复序列扩增法对40例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤样病变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）、20例正常宫颈组织中端粒酶活性进行检测。结果：端粒酶活性在宫颈癌、CIN、正常宫颈组织中的阳性表达率分别为95.0％、44.0％、10.0％,各组间比较P＜0.01;端粒酶活性阳性率在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ各级病变中分别为22.2％、37.5％、75.0％,CINⅠ、Ⅱ与CINⅢ间比较P＜0.01。结论：端粒活性可能与宫颈癌发生有关,与宫颈病变级别呈正相关。     

宫颈癌组织中c-myc、bcat1的表达及其临床意义

目的 探究c-myc、bcat1表达与宫颈癌发生发展及临床特征的关系。方法 采用免疫组织化学方法半定量检测30例正常宫颈组织、30例宫颈上皮内瘤变（CIN）组织、80例宫颈癌组织（40例宫颈鳞癌、40例宫颈腺癌）中c-myc及bcat1蛋白的表达情况,并进行Spearman秩相关分析,分析两者表达水平与宫颈癌临床病理因素间的关系。结果 c-myc在正常宫颈组织、CIN组织、宫颈癌组织中的阳性表达率分别为16.7%（5/30）、43.3%(13/30)、73.8%(59/80);bcat1阳性表达率分别为10.0%（3/30）、23.3%(7/30)、52.5%(42/80);c-myc与bcat1在宫颈鳞癌及腺癌组织中的秩相关系数r_s分别为0.773（P=0.000）、0.369(P=0.019);c-myc阳性表达率与癌组织病理类型（腺癌/鳞癌）、癌组织分化程度、间质浸润深度、有无脉管浸润有关(P<0.05);bcat1阳性表达率与癌组织分化程度、有无脉管浸润及Ki67指数有关(P<0.05)。结论 c-myc的高表达可能促进宫颈癌的侵袭及转移,bcat1的高表达可能促进宫颈癌的增殖、侵袭与转移,两者可能在宫颈癌致病过程中存在协同作用。     

宫颈癌患者CHFR基因异常甲基化的检测

目的:探讨CHFR(checkpoint with FHA and ring finger)基因启动子异常甲基化在宫颈癌发生发展过程中的作用及其在宫颈癌早期诊断中的价值。方法:用甲基化特异性PCR方法检测42例宫颈癌组织、30例宫颈上皮内瘤样病变组织(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及20例正常宫颈组织中CHFR基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果:宫颈癌组织及CIN中CHFR基因异常甲基化检出率分别为33.3%(14/42)和6.7%(2/30),正常宫颈组织中未检出CHFR基因甲基化;三组间CHFR基因异常甲基化发生率之间比较差异具有统计学意义(χ2=10.69,P=0.005);CHFR基因甲基化发生率与年龄、病理分级、临床分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CHFR基因的异常甲基化参与了宫颈癌的发生和发展过程,其甲基化的检测对宫颈癌的早期诊断有一定的价值。     

Fas和FasL在鼻咽癌患者外周血白细胞中的表达及意义

目的:评价鼻咽癌患者新辅助化疗前后外周血白细胞中的凋亡相关基因Fas及FasL水平变化及意义,探讨其在鼻咽癌发生、发展及治疗中的作用及临床价值。方法:采用流式细胞仪对30例鼻咽癌患者新辅助化疗前后及10例正常人外周血白细胞中的Fas、FasL的水平进行检测。结果:Fas、FasL在正常人外周血白细胞的表达分别是0和(2.65± 0.15)％,在鼻咽癌患者化疗前外周血白细胞的表达平均为(10.25±2.13％)和(6.97±0.27)％,鼻咽癌组显著高于正常对照组(P<0.01,P<0.05)。鼻咽癌患者经新辅助化疗后,Fas、FasL在外周血白细胞的表达平均为(19.66±3.82)％和(7.35±0.42)％,与化疗前比较Fas水平明显增高(P<0.05),而FasL改变不明显(P>0.05)。结论:外周血白细胞Fas水平对鼻咽癌诊断、评价疗效及预后有一定意义,同时对深入探讨化疗药物对鼻咽癌的治疗有一定基础和临床价值;外周血白细胞的FasL在鼻咽癌发生、发展中起作用,而与鼻咽癌治疗关系不大。     

肿瘤错配修复基因PMS2在子宫颈癌细胞中的表达及意义

目的 观察子宫颈癌HeLa细胞中PMS2的表达及化疗药物对其的影响.方法 通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及逆转录基因扩增(RT-PCR)的方法检测化疗药物顺铂(CDDP)对HeLa子宫颈癌细胞株细胞生长的影响,并选择最佳浓度观察其基因表达水平的变化.结果 顺铂对于HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用,并与药物浓度相关,尤其是在10 mg/L的浓度培养24 h后最为明显,细胞生长率为68.2%.在此药物浓度培养下,HeLa细胞生存能力明显下降,同时PMSz基因表达水平明显上调(P<0.01).结论 PMS2可能参与子宫颈癌的发生、发展及转移过程,对于子宫颈癌的早期诊断以及化疗药物疗效及预后的判断有一定的意义.